CN105594595B - 一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法 - Google Patents
一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及组织培养技术领域，特别涉及一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法。该组培培养基包括增殖培养基和生根培养基；增殖培养基组分包括WPM、6‑苄基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂；生根培养基组分包括1/2WPM、萘乙酸、3‑吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭。本发明提供的组培培养基可有效提高红光玫瑰小檗的出芽率、成活率，可有效缩短生长周期，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养技术领域，特别涉及一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法。
背景技术
红光玫瑰小檗是小檗科小檗属日本小檗的栽培品种，是近几年从国外引进的品种。红光玫瑰小檗为落叶丛生灌木，多分枝，分枝粗壮，节上有枝刺。树高2m，幼枝条红色，老枝红褐色。叶倒卵形或匙形，叶色玫瑰红色，叶片比其他小檗品种都大，叶长2～4cm，宽1.3～3cm。树冠下见不到日光的叶片绿色，老叶暗红色，有白色斑点，叶柄短，叶平展，叶脉在背面突起。花期4～5月，幼叶形成同时，从短枝上2～5朵成簇生状伞形花序，花黄色，果期10～11月，浆果长椭圆形，鲜红色。因叶色艳丽，色泽醒目，是优良的庭院观叶植物，色块和绿篱植物，其适应范围：4～9区，北可到北京、大连，最适宜我国北方地区的园林彩化，在北京、天津、河北、河南、重庆、四川、贵州和云南等地区都可适应。
红光玫瑰小檗常规用半硬枝扦插法繁殖，具体方法为：
采穗：剪取当年生半木质化枝条，同时保持母本冠形平整。采穗于9月底至10月初进行。采穗的关键是穗条的保鲜，要在早上或傍晚进行，剪下的枝条要用浸湿的无纺布覆盖，洒水保鲜。保留母本高度，母本一年生保留15cm，二年生保留20cm，三年生至五年生保留25cm。剪穗条长度3cm，保留叶片4片。
基质：基质配方为蛭石∶泥炭∶珍珠岩＝4∶5∶1，干容重0.20，总孔隙度87.05％，大孔隙度26.05％，小孔隙度61.00％，最大持水率4.15。pH值6.87，EC值0.85，全氮0.90％，全磷526.24mg/kg，全钾5632.47mg/kg，钙1845.25mg/kg，镁2456.25mg/kg。床面铺地布用高锰酸钾500倍液消毒24小时，用薄膜覆盖。扦插工序完成后，喷多菌灵1000倍液消毒。生根剂采用“森生1号”，浓度1500ml/g，速蘸2秒。
扦插：穴盘每个孔(或每个网袋)扦插一根穗条，扦插深度1.5cm，直立扦插。穴盘或网袋的基质，提前一天浇透水。扦插当天，每条苗床插完后立即浇透水，待叶面水分蒸发后，立即喷药消毒防病。然后搭架小拱棚，盖上薄膜，四周密封，保持棚内空气相对湿度在95％以上。
光照、水分和温度管理：先在苗床上方架设遮阳网，5～6月，盖1层，7～8月盖2层。当日最高温30℃以下时可全部揭除遮阳网，全光照管理。在小拱棚内挂一支棒状温度计，当小拱棚内气温在38℃时，要采取喷雾降温措施，特别是晴天高温时，从上午10点到下午4点，每隔半小时喷雾一次，降至38℃以下。经常检查一次基质湿度，在傍晚或清早时分，每隔7～10天浇一次水。
施肥：扦插当天，浇水之后结合喷药，喷洒叶面肥。以后结合浇水，喷洒叶面肥。叶面肥用绿芬葳粉剂1000倍液喷雾，也可用0.2％尿素喷雾。
炼苗：扦插30天后，有90％以上穗条发根，即可开始炼苗。揭除薄膜，先两头通风两天，然后全部揭除，选择傍晚时进行。揭除薄膜后，实行全光照管理，及时浇水和喷洒叶面肥。12月至翌年1月，只需及时浇水，保持基质湿度。2月开始，每隔10天浇水一次，同时喷洒叶面肥，培养穴盘苗和网袋苗。成苗时间：9月底或10月初扦插，发根后即落叶，不包括休眠期(落叶期)，培育时间3个半月，苗高5cm，成品率90％。
培育色块苗：采用13cm×10cm(深)的容器，用3株穴盘苗或网袋苗移栽到一个容器中。经6个月的培育，成苗规格为苗高30cm，冠幅30cm。
培育矮篱苗：采用16cm×14cm(深)的容器，用3株穴盘苗或网袋苗移栽到一个容器中。经8个月的培育，其成苗规格为苗高50cm，冠幅30cm。
但采用半硬枝扦插法繁殖速度很慢，且受季节限制，严重阻碍了它的大规模推广和应用。通过组织培养可以迅速解决红光玫瑰小檗繁殖中存在的上述问题。目前有关红光玫瑰小檗组织培养的研究几乎没有，一旦体系建立，通过该技术能在短期内获得大量优质种苗，对推动红光玫瑰小檗的园林应用，丰富我国彩叶彩化树种有一定积极意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法。该培养基可有效的提高红光玫瑰小檗的出芽率、成活率，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种红光玫瑰小檗组培培养基，包括增殖培养基和生根培养基；
增殖培养基组分包括WPM、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂；
生根培养基组分包括1/2WPM、萘乙酸、3-吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭。
采用本发明增殖培养基及培养方式，红光玫瑰小檗在增殖阶段表现为7天左右腋芽开始萌发，35天左右平均芽的增殖系数为5.8；红光玫瑰小檗在生根阶段表现为10天左右有愈伤组织出现，12～14天左右愈伤组织开始生根，每株平均根数在7～9根，20天左右根长在3cm以上。本发明采用特定的组培配方，从而有效用于红光玫瑰小檗的组织培养，有效的提高红光玫瑰小檗的出芽率、成活率，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
作为优选，增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤1.3～2.0mg/L，萘乙酸0.05～0.1mg/L，蔗糖20～30g/L，琼脂5.5～6.5g/L，WPM补足；增殖培养基的pH值为5.5～6.5。
优选地，增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤1.3～2.0mg/L，萘乙酸0.05～0.1mg/L，蔗糖20～30g/L，琼脂6.0g/L，WPM补足；增殖培养基的pH值为5.8。
在本发明提供的一些实施例中，增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤1.5mg/L，萘乙酸0.05mg/L，蔗糖25g/L，琼脂6g/L，WPM补足；增殖培养基的pH值为5.8。
在本发明提供的另一些实施例中，增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤1.3mg/L，萘乙酸0.01mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L，WPM补足；增殖培养基的pH值为5.8。
在本发明提供的另一些实施例中，增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，萘乙酸0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，WPM补足；增殖培养基的pH值为5.8。
作为优选，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.2～0.5mg/L，3-吲哚丁酸0.2～0.4mg/L，蔗糖15～25g/L，琼脂5.5～6.5g/L，活性炭0.15～0.25mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为5.5～6.0。
优选地，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.2mg/L，3-吲哚丁酸0.3mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，活性炭0.2mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为5.8。
优选地，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.2mg/L，3-吲哚丁酸0.4mg/L，蔗糖15g/L，琼脂6.5g/L，活性炭0.15mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为5.5。
优选地，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.3mg/L，3-吲哚丁酸0.2mg/L，蔗糖25g/L，琼脂5.5g/L，活性炭0.25mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为6.0。
优选地，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.4mg/L，3-吲哚丁酸0.2mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，活性炭0.15mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为5.8。
优选地，生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.5mg/L，3-吲哚丁酸0.2mg/L，蔗糖25g/L，琼脂5.5g/L，活性炭0.25mg/L，1/2WPM补足；生根培养基的pH值为5.5。
本发明还提供了一种红光玫瑰小檗的组织培养方法，包括如下步骤：
增殖培养：取红光玫瑰小檗茎段，采用增殖培养基进行增殖培养，获得丛生芽；
生根培养：将丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，获得红光玫瑰小檗组培苗。
作为优选，增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～3000Lx，光照时间10～14h/d，培养时间35～40天。
优选地，增殖培养的条件为：温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d，培养时间为35天。
作为优选，生根培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～3000Lx，光照时间10～14h/d，培养时间为12～25天。
优选地，生根培养的条件为：温度为25℃，光照2500Lx，光照时间12h/d，培养时间为12天。
作为优选，茎段为顶芽或腋芽茎段。
在本发明提供的一些实施例中，红光玫瑰小檗茎段的制备方法为：采集红光玫瑰小檗嫩枝，清洗，消毒，切成带芽茎段。
在本发明提供的一些实施例中，红光玫瑰小檗茎段的具体制备方法为：采集当年生的红光玫瑰小檗的嫩枝，先用洗涤剂溶液浸泡15～25min，刷洗腋芽部位后放在流水下冲洗1～2h；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理20～40s，用无菌水清洗3～7次，再用0.1％的升汞处理8～12min，再用无菌水清洗5～7次，晾干得培养材料；将所得培养材料在无菌操作台上切取为0.5～1.0cm带芽小段。
本发明提供了一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法。该组培培养基包括增殖培养基和生根培养基；增殖培养基组分包括WPM、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖和琼脂；生根培养基组分包括1/2WPM、萘乙酸、3-吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和活性炭。本发明的有益效果为：
本发明提供的增殖培养基和生根培养基可有效提高红光玫瑰小檗的出芽率、成活率，可有效缩短生长周期，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。采用本发明增殖培养基，红光玫瑰小檗在增殖阶段表现为7天左右腋芽开始萌发，35天左右平均芽的增殖系数为4.1～5.8；采用本发明生根培养基，红光玫瑰小檗在生根阶段表现为10天左右有愈伤组织出现，12～14天左右愈伤组织开始生根，每株平均根数在7～9根，20天左右根长在3cm以上，生根率达69％～96％。
附图说明
图1示红光玫瑰小檗增殖培养18天后组织情况；
图2示红光玫瑰小檗生根培养25天后组织情况。
具体实施方式
本发明公开了一种红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的红光玫瑰小檗组培培养基及其培养方法中所用培养基组分均可由市场购得。
本发明中WPM培养基指现有植物组培领域中常规使用的培养基WPM组分；1/2WPM即指常规使用的培养基WPM组分，大量元素减半，其余成份保持不变。
增殖系数是单个外植体再生形成的芽的平均数。
生根率＝生根的组培苗数/全部的组培苗数。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1红光玫瑰小檗的增殖培养
(1)采集当年生的红光玫瑰小檗嫩枝的植物组织(顶芽或腋芽茎段)，先用洗涤剂溶液浸泡15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下冲洗1-2h；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理20-30s，用无菌水清洗，清洗次数为5-7次，再用0.1％的升汞处理8-12min，再用无菌水清洗，清洗次数为5-7次，晾干得培养材料。将健康、无菌腋芽，切成1cm的带芽茎段，作为备用材料；
(2)将试验材料进行增殖培养。将所得芽依次接种到本实施例试验组1～3和对照组1～5增殖培养基上，各组培养基配方见表1。每组接种20瓶，设3次重复，每个培养瓶接1棵带芽茎段；
表1增殖培养基组成
(3)将接种好的试验材料放在光照2500Lx，温度25±2℃，光照时间12h/d的培养条件下，进行常规培养；
(4)每7天对芽的增殖情况进行一次统计，试验周期为35天；图1为试验组1红光玫瑰小檗增殖培养接种18天后组织情况。
(5)对试验数据进行处理与分析。试验结果见下表：
表2增殖培养后的增殖情况
| 组别 | 增殖系数 | 长势 |
| 试验组1 | 5.8±0.11 | 健壮，愈伤较大 |
| 试验组2 | 4.5±0.20 | 健壮，愈伤较大 |
| 试验组3 | 4.1±0.25 | 健壮，愈伤过大 |
| 对照组1 | 1.8±0.13 | 一般，愈伤较小 |
| 对照组2 | 1.7±0.22 | 较壮，愈伤小 |
| 对照组3 | 2.8±0.30 | 一般，愈伤较大 |
| 对照组4 | 3.1±0.21 | 一般，愈伤小 |
| 对照组5 | 3.8±0.35 | 一般，愈伤较大 |
由试验数据可知，本发明提供的增殖培养基可有效促进红光玫瑰小檗培养材料的增殖，尤其是试验组1增殖培养基(即WPM+1.5mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH5.8)对红光玫瑰小檗增殖效果最好，且芽粗壮。
实施例2红光玫瑰小檗生根培养
(1)将实施例1中试验组1增殖培养所得丛生芽，分离成单株(单芽株高至少在1cm以上)，作为备用材料；
(2)将试验材料接种到试验组和对照组生根培养基上。各组生根培养基配方见表3。每组接种20瓶，设3次重复，每个培养瓶接1棵单芽；
表3生根培养基组成
(3)将接种好的试验材料放在光照2500Lx，温度25±2℃，光照时间12h/d的培养条件下，进行常规培养；
(4)每7天对生根情况进行一次统计，试验周期为35天；图2为试验组1红光玫瑰小檗生根培养接种21天后组织情况。
(5)对试验数据进行处理与分析。试验结果见下表所示：
表4生根培养情况
由上述试验数据可知，本发明提供的生根培养基可促进红光玫瑰小檗组织的生根，尤其是试验组1的生根培养基(即1/2WPM+0.2mg/L NAA+0.3mg/L IBA+20g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.20mg/L活性炭，pH值为5.8)，生根率最高，且生长周期短，平均根数与根长比较均匀一致。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种红光玫瑰小檗组培培养基，其特征在于，包括增殖培养基和生根培养基；
所述增殖培养基组分由WPM、1.3～2.0mg/L 6-苄基腺嘌呤、0.05～0.1mg/L萘乙酸、20～30g/L蔗糖和5.5～6.5g/L琼脂组成；
所述生根培养基组分由1/2WPM、0.2～0.5mg/L萘乙酸、0.2～0.4mg/L 3-吲哚丁酸、15～25g/L蔗糖、5.5～6.5g/L琼脂和0.15～0.25mg/L活性炭组成。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.5。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述生根培养基的pH值为5.5～6.0。
4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述增殖培养基中各组分用量为：6-苄基腺嘌呤1.5mg/L，萘乙酸0.05mg/L，蔗糖25g/L，琼脂6g/L，WPM补足；所述增殖培养基的pH值为5.8。
5.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述生根培养基中各组分用量为：萘乙酸0.2mg/L，3-吲哚丁酸0.3mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L，活性炭0.2mg/L，1/2WPM补足；所述生根培养基的pH值为5.8。
6.一种使用权利要求1至5中任一项培养基培养红光玫瑰小檗的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
增殖培养：取红光玫瑰小檗茎段，采用增殖培养基进行增殖培养，获得丛生芽；
生根培养：将所述丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，获得红光玫瑰小檗组培苗。
7.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～3000Lx，光照时间10～14h/d，培养时间30～40天。
8.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～3000Lx，光照时间10～14h/d，培养时间为12～25天。
9.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述茎段为顶芽或腋芽茎段。
10.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述红光玫瑰小檗茎段的制备方法为：采集红光玫瑰小檗嫩枝，清洗，消毒，切成带芽茎段。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Gang Inventor after: Zhang Qian Inventor after: Tian Dongmei Inventor after: Yu Jinlian Inventor after: Yang Liangbin Inventor before: Yu Jinlian |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. Address before: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee before: SICHUAN QICAI FORESTRY INDUSTRY DEVELOPMENT CO., LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 635600 Tissue Culture Workshop Building of Rare and Colorful Leaf Plant Varieties in Guangwu Mountain, Sanshe, Changtan Village, Zhengzheng Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. Address before: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee before: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. |
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| CP02 | Change in the address of a patent holder |