CN105586303B - 一株韩国假单胞菌及其应用 - Google Patents

一株韩国假单胞菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105586303B
CN105586303B CN201610181839.9A CN201610181839A CN105586303B CN 105586303 B CN105586303 B CN 105586303B CN 201610181839 A CN201610181839 A CN 201610181839A CN 105586303 B CN105586303 B CN 105586303B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonad
south korea
radix pseudostellariae
culture
plant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201610181839.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105586303A (zh
Inventor
陈军
吴林坤
林文雄
林翰
黄珊瑜
吴艳红
林生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujian Agriculture and Forestry University
Original Assignee
Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fujian Agriculture and Forestry University filed Critical Fujian Agriculture and Forestry University
Priority to CN201610181839.9A priority Critical patent/CN105586303B/zh
Publication of CN105586303A publication Critical patent/CN105586303A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105586303B publication Critical patent/CN105586303B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供一株韩国假单胞菌及其应用，经鉴定为韩国假单胞菌CJ‑361，保藏号为CGMCC NO.12122。该发明公开的假单胞菌CJ‑361是采用假单胞菌选择性培养基从太子参根际土壤中分离获得，并通过平板对峙培养方法对分离至太子参根部病变部位的尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌进行拮抗实验，发现该菌对这两种致病菌均具有强拮抗作用。同时本发明提供了该拮抗菌生长的最适培养基，最佳配方为1/4 LB+1/20 MS(不含铁盐)+0.1wt.%红糖，发酵菌液具有明显的拮抗效应。该发明提供的拮抗菌株及其微生物菌剂可有效防治太子参的根腐病病害，为克服或缓解太子参的再植病害提供一种环保、生态、安全的生物防治潜力菌株。

Description

一株韩国假单胞菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株细菌菌株，特别涉及一株韩国假单胞菌及其应用，可用于克服或缓解连作太子参土传病害问题，属于微生物和生物防治技术领域。
背景技术
太子参（Pseudostellaria heterophylla）别名童参、孩儿参、米参，为石竹科多年生草本植物，以根部入药，具有益气健脾，生津润肺等功效，其用药历史悠久、临床疗效确切，目前已被卫生部确定列入“可用于保健食品的中药材名单”。太子参主产于福建、贵州、安徽等地，其中以福建省柘荣县栽培历史最为悠久，品质最优，素有“中国太子参之乡”美誉。太子参在栽培种植过程中存在严重的连作障碍问题，连作太子参植株生长不良，地下部不能正常膨大（如图1所示），收获后须隔2~4年后方可再种。连作障碍问题还导致一系列的下游不良问题，如太子参道地产区和规模正逐年缩小，甚至出现产区外移，道地性失真等现象。因此，连作障碍问题研究是当前药用植物资源生态学亟待解决的重要内容，成为国内外同行研究的热点。课题组前期研究发现，尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌（如图2所示）是导致太子参连作障碍的两类重要病原菌，其含量均随太子参连作年限增加而不断增加。而利用拮抗菌进行植物病害的生物防治被认为是一种科学、合理、高效、环境友好型的措施。本发明针对太子参专化型尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌，分离筛选到一株高效拮抗这两类病原真菌的拮抗细菌，经鉴定为韩国假单胞菌，命名为Pseudomonas koreensis CJ-361。
发明内容
本发明的目的是提供一株韩国假单胞菌及其应用，用于生物防治太子参连续种植过程中常见的根腐病问题，为克服或缓解太子参连作障碍问题提供生防菌株。
本发明的技术方案如下：
本发明所提供的拮抗细菌为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361，该菌株已于2016年1月28日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 12122。
本发明所述的韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis CJ-361）对太子参专化型病原菌—尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌均具有很强的拮抗作用。
所述韩国假单胞菌的生长培养基为1/4LB培养基+1/20不含铁盐MS培养基+0.1wt.%红糖。
所述的不含铁盐MS培养基其配方为：1）大量元素：1900 mg/L KNO3、1650 mg/LNH4NO3、370 mg/L MgSO4•7H2O、170 mg/L KH2PO4、440 mg/L CaCl2•2H2O；2）微量元素：22.3mg/L MnSO4•4H2O、8.6 mg/L ZnSO4•7H2O、6.2 mg/L H3BO3、0.83 mg/L KI、0.25 mg/LNa2MoO4•7H2O、0.025 mg/L CuSO4•5H2O、0.025 mg/L CoCl2•6H2O；3）有机物：2.0 mg/L 甘氨酸、0.5 mg/L 盐酸吡哆醇、0.1 mg/L盐酸硫铵素、0.5 mg/L烟酸、100 mg/L 肌酸；所述的LB培养基为：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 10 g/L。
本发明所述的有益拮抗菌具有以下几个优点：
（1）本发明所述的拮抗菌—韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361是通过大量的筛选工作筛选到的，是从1600株土壤细菌中筛选得到的，对太子参专化型尖孢镰刀菌以及串珠镰刀菌均具有很强的拮抗效果（如图3所示）。
（2）本发明所述的拮抗菌—韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361具有较强的纤维素降解能力和解磷能力（如图4所示）。
（3）本发明所述的拮抗菌—韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361来源于连作太子参根际土壤中，并非源自其他生境，根际定殖效果较好并且安全可靠，对太子参及后茬其他作物（如水稻、大豆、玉米、蔬菜等太子参道地产区常种作物）均无致病侵染能力。
（4）本发明所述的拮抗菌—韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361的培养温度范围优选为4℃～45℃，pH范围为5～9.5，适合生长的温度和pH范围较广，适应性强。
附图说明
图1为正茬、重茬太子参地下部块根生长情况。
图2为太子参植株病害根部分离到的病原菌（尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌）的菌落形态. A，B：分别表示尖孢镰刀菌菌落正面和反面；C，D：分别表示串珠镰刀菌菌落的正面和反面。
图3为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361与病原真菌的对峙培养照片. 左侧平板为对照组（仅接种病原菌），右侧平板中心接种各类病原真菌，其中A：尖孢镰刀菌（来源太子参）；B：串珠镰刀菌（来源太子参）。
图4为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361的纤维素降解能力（A）和解磷能力（B）评价。A：CK表示阴性对照，为荧光假单胞菌，不具有纤维素降解能力。
图5为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361最适培养基优化。
图6为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361防控尖孢镰刀菌侵染太子参组培苗. Fox：仅接尖孢镰刀菌；361-Fox：同时接拮抗菌CJ-361和尖孢镰刀菌；Gm：仅接串珠镰刀菌；361-Gm：同时接拮抗菌CJ-361和串珠镰刀菌。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案进行详细的描述。以下实施例仅仅用于说明和解释本发明，而不构成对本发明技术方案的限制。
实施例1 拮抗菌韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361的筛选及其鉴定
1、拮抗菌韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361的筛选
本发明所述的拮抗菌韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361从连作太子参根际土壤中筛选得到。
1.1 假单胞菌培养基配制
假单胞菌选择性培养基（pseudomonas selective isolation agar，PSIA）配制方法如下：称取20 g大豆-酪蛋白消化物琼脂培养基（soybean casein digest agar，SCD）（BD, USA），加495.5 mL双蒸水加热搅拌，充分溶解后，再加入1 mL 0.1%（wt/vol）结晶紫储备液，121°C 高温高压灭菌15 min，冷却至大约50°C时，往培养基中再添加3.5 mL 5%（wt/vol）呋喃咀啶储备液，充分混匀后，迅速倒板，冷却凝固后即制得假单胞菌选择性培养基平板。
其中，0.1%（wt/vol）结晶紫储备液的配制方法为：称取0.1 g结晶紫（Sangon，上海），溶于100 mL双蒸水中，室温保存备用；呋喃咀啶储备液的配制方法为：称取5 g呋喃妥因（Sangon，上海），加入到90 mL N,N-二甲基甲酰胺（Sangon，上海）中充分溶解，再定容至100 mL，室温避光保存备用。
1.2假单胞菌培养
称取10 g太子参根际土壤，溶于90 mL无菌水中，充分振荡摇匀，得10-1稀释液。取10 mL 10-1稀释度的土壤悬浮液至另一瓶90 mL冷却的无菌水中，充分振荡摇匀，得10-2稀释液。依次稀释得10-3稀释液，吸取60 μL的土壤稀释液，涂布到假单胞菌培养基上后置于30℃恒温培养箱中避光培养30 h。挑选培养基上清晰可辨且生长均匀的单菌落，转接至新的假单胞菌培养基30℃继续培养30 h左右，置于4℃冰箱中短暂保存备用。
1.3拮抗菌筛选
马铃薯葡萄糖培养基（PDA），配制如下：马铃薯200 g，用打浆机打成土豆泥后，加适量水煮沸后计时25 min，待其冷却至不烫手后过四层纱布过滤。将滤液收集好后加入葡萄糖30 g、琼脂15 g，加热搅拌混匀并加水定容至1000 mL后分装。115℃高压灭菌15min后保存备用。
使用时，将已高温高压灭菌过的培养基重新加热溶解，待培养基温度降到55℃左右（不烫手）时快速倒平板。待培养皿充分凝固后在其底部画十字架，在距离圆心约2.5 cm处接种经活化培养的细菌，置于28℃恒温培养箱中避光培养48 h后，在培养皿的中心位置接种太子参专化型串珠镰刀菌，置于28℃恒温培养箱中避光对峙培养数天，实时观察抑菌圈的有无及大小。对峙培养4天后，通过观察抑菌圈大小筛选出一株对太子参专化型串珠镰刀菌和尖孢镰刀菌具有强拮抗效应的细菌（如图3所示），对该菌株进行了保藏，保藏编号为CGMCC NO. 12122。将筛选到的强拮抗菌株进行纯化培养，并斜面保存备用。
2、拮抗菌的鉴定
2.1本发明所述的拮抗菌（保藏编号为：CGMCC NO. 12122）经显微观察可以看到该菌为短棒状，革兰氏阴性菌。在LB固体培养基上为隆起、波状、湿润的菌落。同时，该拮抗菌的生理生化特性为：能分解蔗糖、果糖、甘露醇、丙三醇、乙醇、葡萄糖、精氨酸、丙氨酸以及肌醇，但不分解乳糖、木糖和柠檬酸。可分解氯化铵、硫酸铵、硝酸钾、硝酸铵以及尿素，但是不能分解谷氨酸。能水解淀粉，能液化明胶。正常生长的pH范围为5～9.5。具有较强的纤维素降解能力和解磷能力（如图4所示）。
2.2 分子鉴定
将筛选出的强拮抗菌株（保藏编号为：CGMCC NO. 12122）转接至5ml LB液体培养基进行扩大培养后（28℃，180 rpm）提取DNA。PCR扩增16s rRNA基因，用于细菌分子鉴定。细菌基因组DNA提取方法如下：取1 mL摇过夜的假单胞菌菌液（28°C，180 rpm），10000 rpm 离心5 min，去上清，往沉淀菌体中加入950 μL TE缓冲液悬浮沉淀，并加50 μL 10% SDS溶液和5 μL 蛋白酶K（20mg/mL），混匀，37°C水浴1 h，再加入150 μL 5 mol/mL NaCl溶液和150μL CTAB/NaCl溶液（10% CTAB，4.1% NaCl），混匀，65°C水浴20 min，加等体积的酚︰氯仿︰异戊醇（体积比25︰24︰1）溶液进行抽提，12000 rpm离心10 min，将上清液用等体积的氯仿/异戊醇（24/1）再抽提一次，上清液用等体积异丙醇室温沉淀30 min，12000 rpm离心10 min，弃上清，DNA沉淀用70%乙醇进行清洗，自然风干后用50 μL无菌水进行溶解。
采用16s rRNA基因PCR扩增技术对分离筛选的拮抗菌进行分子鉴定。鉴定引物序列为：27f（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和1522r（5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'）。PCR扩增体系（50 μL）为：25 μL Taq PCR Master Mix (2×)（TransGen，北京），1.0 μL 上下游引物（10 μM），1 μL DNA模板（20 ng），22 μL 无菌水。PCR扩增程序为：94℃预变性5 min，94℃变性1 min，56℃退火 1 min，72℃延伸 90 sec，35个循环，继续72℃延伸10 min。扩增的基因片段用1%琼脂糖凝胶电泳检测，并用Universal DNA Purification Kit胶回收试剂盒（TIANGEN，北京）纯化回收目的条带，并送上海生工测序部进行测序。测序序列采用BLAST工具与NCBI数据库（Nucleotide collection（nr/nt））进行比对分析，序列如SEQ ID NO.3所示。分子生物学鉴定该拮抗菌为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis CJ-361），保藏编号为：CGMCC NO. 12122。
实施例2 拮抗菌的抑菌效果检测
用PDA培养基，在距离圆心2.5 cm处接种经活化培养的韩国假单胞菌CJ-361，置于28℃恒温培养箱中避光培养48 h后，在培养皿的中心位置接种病原真菌（如太子参专化型尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌），置于28°C恒温培养箱中避光对峙培养数天，实时观察抑菌圈的形成。培养5天发现，韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis CJ-361）能够高效拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌的菌丝生长（如图3所示）。
实施例3韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis CJ-361）最适培养基优化
配制以下培养基对韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis CJ-361）的最适生长培养基进行优化，培养基如下： 1）全LB溶液；2）1/4 LB溶液；3）1/4LB+1/20MS；4）1/4LB+1/40MS；5）1/4LB+1/80MS；6）1/4LB+1/20MS +0.1wt.%红糖；7）1/4LB+1/40MS+0.1wt.%红糖；8）1/4LB+1/80MS+0.1wt.%红糖。
其中，MS培养基（均不含铁盐）配方为：1）大量元素：1900 mg/L KNO3、1650 mg/LNH4NO3、370 mg/L MgSO4•7H2O、170 mg/L KH2PO4、440 mg/L CaCl2•2H2O；2）微量元素：22.3mg/L MnSO4•4H2O、8.6 mg/L ZnSO4•7H2O、6.2 mg/L H3BO3、0.83 mg/L KI、0.25 mg/LNa2MoO4•7H2O、0.025 mg/L CuSO4•5H2O、0.025 mg/L CoCl2•6H2O；3）有机物：2.0 mg/L 甘氨酸、0.5 mg/L 盐酸吡哆醇、0.1 mg/L盐酸硫铵素、0.5 mg/L烟酸、100 mg/L 肌酸；LB培养基配方为：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 10 g/L。
具体操作步骤如下：5mL以上各培养基分别接入等量（10 μL）已活化的拮抗菌菌液，置于30℃、180 rpm摇床上震荡培养10 h，之后取出培养试管，菌液充分摇匀后于600 nm波长下迅速测定吸光值（0D600）。结果显示：“1/4LB+1/20MS+0.1wt.%红糖”这一配方的培养基最适合该拮抗菌的生长（如图5所示）。
实施例4 拮抗菌防控镰刀菌侵害太子参组培苗效果评价
配制太子参组培苗MS培养基（MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.3 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖 + 7 g/L 琼脂 + 8 g/L 马铃薯淀粉，pH=6.5），每个组培瓶添加35 mL培养基，经高温高压灭菌，待冷却凝固后，用镊子在培养基表面烫出一条小沟，在小沟一侧接种太子参幼苗2株，置于25℃恒温组培室中培养40天后，在小沟中添加以最适培养基（1/4LB+1/20MS+0.1wt.%红糖）培养过夜的拮抗菌菌液300 μL，对照组添加等量LB培养基代替，在小沟的另一侧接种尖孢镰刀菌或者串珠镰刀菌，期间持续往小沟内添加韩国假单胞菌CJ-361菌液，观察侵染情况。结果显示，病原菌与组培苗间添加有拮抗菌的试验组中，尖孢镰刀菌或串珠镰刀菌的生长均被抑制，仅在小沟外侧范围内生长，而添加等量LB培养基的对照组中，尖孢镰刀菌或串珠镰刀菌的生长快速，能够越过小沟，侵染太子参组培苗植株，造成组培苗茎腐烂，叶片发黄枯萎，最终死亡（如图6所示）。
综上可见，本发明筛选出的一株拮抗菌（保藏号为：CGMCC NO. 12122）对太子参病原菌具有很强的拮抗作用，能够有效防控尖孢镰刀菌以及串珠镰刀菌病原菌对太子参的侵害，在该领域具有广阔的应用前景。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建农林大学
<120> 一株韩国假单胞菌及其应用
<130> 3
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
aaggaggtga tccagccgca 20
<210> 3
<211> 1433
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acttccccca gtcatgaatc acaccgtggt aaccgtcctc ccgaaggtta gactagctac 60
ttctggtgca acccactccc atggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat 120
tcaccgcgac attctgattc gcgattacta gcgattccga cttcacgcag tcgagttgca 180
gactgcgatc cggactacga tcggttttat gggattagct ccacctcgcg gcttggcaac 240
cctttgtacc gaccattgta gcacgtgtgt agcccaggcc gtaagggcca tgatgacttg 300
acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca ccggcagtct ccttagagtg cccaccataa 360
cgtgctggta actaaggaca agggttgcgc tcgttacggg acttaaccca acatctcacg 420
acacgagctg acgacagcca tgcagcacct gtctcaatgt tcccgaaggc accaatccat 480
ctctggaaag ttcattggat gtcaaggcct ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa 540
accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattca tttgagtttt aaccttgcgg 600
ccgtactccc caggcggtca acttaatgcg ttagctgcgc cactaagagc tcaaggctcc 660
caacggctag ttgacatcgt ttacggcgtg gactaccagg gtatctaatc ctgtttgctc 720
cccacgcttt cgcacctcag tgtcagtatc agtccaggtg gtcgccttcg ccactggtgt 780
tccttcctat atctacgcat ttcaccgcta cacaggaaat tccaccaccc tctaccatac 840
tctagctcgc cagttttgga tgcagttccc aggttgagcc cggggatttc acatccaact 900
taacgaacca cctacgcgcg ctttacgccc agtaattccg attaacgctt gcaccctctg 960
tattaccgcg gctgctggca cagagttagc cggtgcttat tctgtcggta acgtcaaaat 1020
tgcagagtat taatctacaa cccttcctcc caacttaaag tgctttacaa tccgaagacc 1080
ttcttcacac acgcggcatg gctggatcag gctttcgccc attgtccaat attccccact 1140
gctgcctccc gtaggagtct ggaccgtgtc tcagttccag tgtgactgat catcctctca 1200
gaccagttac ggatcgtcgc cttggtgagc cattacctca ccaactagct aatccgacct 1260
aggctcatct gatagcgcaa ggcccgaagg tcccctgctt tctcccgtag gacgtatgcg 1320
gtattagcgt tcctttcgaa acgttgtccc ccactaccag gcagattcct aggcattact 1380
cacccgtccg ccgctgaatc caggagcaag ctcccttcat ccgctcgact gca 1433

Claims (4)

1.一株韩国假单胞菌，其特征在于：所述菌株为韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis）CJ-361，已于2016年1月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC NO. 12122。
2.一种如权利要求1所述韩国假单胞菌的生长培养基，其特征在于：其生长培养基为1/4LB培养基+1/20不含铁盐MS培养基+0.1wt.%红糖。
3. 根据权利要求2所述一株韩国假单胞菌的生长培养基，其特征在于：所述的不含铁盐MS培养基其配方为：1）大量元素：1900 mg/L KNO3、1650 mg/L NH4NO3、370 mg/L MgSO4•7H2O、170 mg/L KH2PO4、440 mg/L CaCl2•2H2O；2）微量元素：22.3 mg/L MnSO4•4H2O、8.6mg/L ZnSO4•7H2O、6.2 mg/L H3BO3、0.83 mg/L KI、0.25 mg/L Na2MoO4•7H2O、0.025 mg/LCuSO4•5H2O、0.025 mg/L CoCl2•6H2O；3）有机物：2.0 mg/L 甘氨酸、0.5 mg/L 盐酸吡哆醇、0.1 mg/L盐酸硫铵素、0.5 mg/L烟酸、100 mg/L 肌酸；所述的LB培养基为：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 10 g/L。
4.一种如权利要求1所述的韩国假单胞菌在防治药用植物太子参再植病害和土传病害上的应用。
CN201610181839.9A 2016-03-28 2016-03-28 一株韩国假单胞菌及其应用 Expired - Fee Related CN105586303B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610181839.9A CN105586303B (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一株韩国假单胞菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610181839.9A CN105586303B (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一株韩国假单胞菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105586303A CN105586303A (zh) 2016-05-18
CN105586303B true CN105586303B (zh) 2019-03-12

Family

ID=55926211

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610181839.9A Expired - Fee Related CN105586303B (zh) 2016-03-28 2016-03-28 一株韩国假单胞菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105586303B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021101937A1 (en) * 2019-11-20 2021-05-27 Novozymes Bioag A/S Pseudomonas isolates and uses thereof

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106916764B (zh) * 2017-02-15 2019-08-23 中国农业科学院烟草研究所 一株耐酸性的韩国假单胞菌clp-7及其应用
EP3456730B1 (en) * 2017-09-19 2022-03-02 BRAIN Biotech AG A new species of the genus pseudomonas
CN109517770B (zh) * 2019-01-25 2021-12-21 黑龙江大学 一株好氧型兼性自养反硝化细菌及其应用
CN111057666B (zh) * 2019-12-20 2022-03-01 辽宁省微生物科学研究院 一株韩国假单胞菌及其筛选方法与应用
CN111057670B (zh) * 2019-12-31 2022-12-13 哈尔滨工业大学 一种降解污水中磺胺类抗生素的混合菌剂及其制备方法和应用
CN112063558B (zh) * 2020-09-17 2022-02-15 湖南农业大学 一种假单胞菌属菌株及其应用
CN114426937A (zh) * 2021-12-31 2022-05-03 华南农业大学 一株具有解磷功能的根瘤内生菌s43及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104031863A (zh) * 2014-06-14 2014-09-10 福建农林大学 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的枯草芽孢杆菌
CN104164383A (zh) * 2014-06-14 2014-11-26 福建农林大学 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的解淀粉芽孢杆菌

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104031863A (zh) * 2014-06-14 2014-09-10 福建农林大学 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的枯草芽孢杆菌
CN104164383A (zh) * 2014-06-14 2014-11-26 福建农林大学 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的解淀粉芽孢杆菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
不同菌肥处理对太子参根际微生物群落的影响;陈军 等;《福建农业学报》;20151231;第30卷(第12期);全文 *
太子参连作障碍及其根际土壤尖孢镰刀菌数量变化;林茂兹 等;《云南农业大学学报》;20121231;第27卷(第5期);全文 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021101937A1 (en) * 2019-11-20 2021-05-27 Novozymes Bioag A/S Pseudomonas isolates and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN105586303A (zh) 2016-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105586303B (zh) 一株韩国假单胞菌及其应用
CN105695364B (zh) 一株新洋葱伯克霍尔德菌及应用
CN104877943B (zh) 一株防治地黄根腐病的拮抗菌及其应用
CN106434493B (zh) 一株生防链霉菌及其应用
CN104531559B (zh) 解淀粉芽孢杆菌Lh‑1及其应用
CN103215210B (zh) 一种西姆芽孢杆菌及其在制备微生物海藻肥料中的应用
CN102533617B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN104403978B (zh) 沼泽红假单胞菌菌株、菌剂及菌剂的制备方法、胞外蛋白及其提取方法和应用
CN104560827B (zh) 一种防治烟草青枯病的生防放线菌菌株及其应用
CN101352177B (zh) 棉花专用复合抗重茬微生态制剂及其专用菌株与应用
CN109207404A (zh) 暹罗芽孢杆菌yj15及其应用
CN105746503B (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用
CN109468243A (zh) 一株暹罗芽孢杆菌及其应用
CN106676049A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN110358710A (zh) 一株侧孢芽孢杆菌及在制备抗病耐盐碱功能微生物制剂中的应用
CN102108339B (zh) 一株具诱导大豆抗逆的巨大芽孢杆菌及应用
CN106701623A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用
CN106520566B (zh) 一株防治苦瓜枯萎病的拮抗真菌及其应用
CN101565686B (zh) 一种融合菌株及其应用
CN106434490A (zh) 人参防病促生细菌ty15‑2及其应用
CN113862156A (zh) 尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)K2018-1418及其应用
CN105779341B (zh) 一株太子参根腐病的拮抗菌及应用
CN109628341A (zh) 深红紫链霉菌及其生物防治菌剂和制备方法
CN108085259A (zh) 生防植物内生真菌及其在防治经济作物灰霉病中的应用
CN107325980A (zh) 一种耐辐射类芽孢杆菌kh9及其在生物抗蒸腾剂中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20190312