CN105580734B - 一种黄精离体根茎的高效诱导方法 - Google Patents

一种黄精离体根茎的高效诱导方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种黄精离体根茎的高效诱导方法，主要包括以下步骤：(1)选用黄精带芽根茎、嫩叶或叶柄作为外植体，(2)不定芽的诱导培养，(3)不定芽的增殖培养，(4)离体根茎的诱导培养，(5)离体根茎直接移栽或储藏。本发明实现了在瓶内能直接诱导成离体根茎，工艺简单，诱导率高，增殖力强，离体根茎移栽成活率高，不需要生根培养和特殊驯化即可直接移栽大田或储藏，能在短时间内生产出大量优质黄精种苗。

Description

一种黄精离体根茎的高效诱导方法
技术领域
本发明涉及一种中药材组织培养方法，尤其涉及一种黄精离体根茎的高效诱导方法。
背景技术
黄精是百合科多年生草本植物黄精(Polygonatum sibiricumRed)、滇黄精(P.kingianum Coll.eHtemsl.)或多花黄精(P.cyrtonemaHua)的根茎,具有润肺滋阴,补中益气,益肾填精的作用。近代研究表明,黄精含有烟酸、醒类、豁液质、淀粉、二氨基丁酸、黄精多糖及低聚糖等成分,有麻醉及降低动物血压的作用,对肾上腺素引起的血糖过高有抑制作用,对防止动脉粥样硬化及肝脏脂肪浸润、对改善肾脏功能也有较好功效。黄精还是一味抗菌良药,对伤寒杆菌、结核杆菌、金黄色葡萄球菌及皮肤癣菌等均有一定抑制作用。近年来,本品已广泛应用于冠心病、高血压、糖尿病、肺结核、再生障碍性贫血,以及预防放疗、化疗引起的副作用等,取得了较好的疗效。随着市场需求量不断增加和野生资源不断减少,黄精人工栽培已成为市场供求之主体。黄精繁殖方式主要是有性繁殖(种子)和无性繁殖(根茎)两种方式。由于黄精种子难收集,种子发芽率低,而且种子繁殖,育苗时间又长,这样就大大增加了黄精的栽培成本,不利于黄精的人工大面积种植。所以在当前的人工栽培中,繁殖主要依靠根茎的无性繁殖,但该方法繁殖系数低,种根茎用量大,既不经济,又限制了黄精的产量潜力,不便栽植管理推广。因此,黄精种苗问题成了人工大面积种植的瓶颈。而现有黄精栽培基地的黄精品种也迫切需要对其进行提纯复壮,以培育高产抗病脱毒的种苗。
发明内容
为了解决根茎高效诱导方法上述技术问题，本发明采用了一种黄精离体高效诱导方法，解决了现有技术中黄精组培生产过程繁琐复杂的程序，不适合大规模生产的问题，既保证不定芽的诱导率，又促使离体根茎的高效诱导，最终解决黄精资源保护和市场需求矛盾的问题。
一种黄精离体根茎的高效诱导方法，主要包括以下步骤：
(1)外植体的选择：
选择黄精带芽根茎、嫩叶或叶柄作为外植体；
(2)不定芽的诱导培养：
不定芽诱导培养基为：MS+6-BA 1.0～4.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；
将步骤(1)所得外植体接种在不定芽诱导培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养35～40天；
(3)不定芽的增殖培养：
不定芽增殖培养基为：MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；
将步骤(2)所得分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小，接种在不定芽增殖培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养30～35天；
(4)离体根茎的诱导培养：
离体根茎诱导培养基：1/2MS+6-BA 0.3～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+白糖3％，pH5.8～6.0；
将步骤(3)所得不定芽接种于离体根茎诱导培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养45～50天，在瓶内直接将带不定芽块茎诱导形成离体根茎；
(5)离体根茎的移栽或储藏：
将步骤(4)所得离体根茎取出，洗净粘附的培养基，阴干表面水分，直接进行大田移栽，或储藏起来。
所述步骤(1)中的外植体优选带芽根茎。
所述步骤(1)中的外植体在切断之前经过灭菌处理。
所述步骤(2)、(3)、(4)中的培养基经过湿热灭菌处理15～30min。
与现有技术相比较，本发明达到的有益效果为：本发明实现了将外植体诱导发生大量不定芽，并在瓶内能直接将带不定芽块茎诱导形成离体根茎，工艺简单，诱导率高，增殖力强，离体根茎移栽成活率高，不需要生根培养和特殊驯化即可直接移栽大田或储藏，能在短时间内生产出大量优质黄精种苗，具有较大的生产应用价值。本发明以两种常用的植物生长调节剂进行不同浓度配比，经过固液培养，实现了高效的不定芽诱导和离体根茎的直接形成，不需要愈伤组织诱导、生根培养和驯化等常规繁琐处理，就可将离体根茎直接进行大田移栽。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面结合实施案例对本发明进一步描述，该实施案例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。本领域技术人员在本发明基础上做出的修改或改进，均应属于本发明要求保护的范围。
本发明实施例所用的试验材料为贵州贵阳野生黄精。
实施例1
取带芽根茎洗净，用75％乙醇擦洗表面,再用自来水冲洗干净，75％乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗两次2.5％次氯酸钠5min灭菌，灭菌去离子水涮洗2次，再用2.5％次氯酸钠5min灭菌，去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份，将材料切成直径0.5cm的带芽块茎接于不定芽诱导培养基(MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.1mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养35d后，90％外植体都分化出不定芽；将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于不定芽增培养基(MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D 0.1mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx,光照12h/d条件下培养30d后，将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于离体根茎诱导培养基(1/2MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L+市售白糖3％，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养50d后，将粘附再诱导出来的离体根茎洗净，阴干表面水分，直接移栽大田，在28℃下，10d左右就开始发芽，发芽率达90％以上。
实施例2
取带芽根茎洗净，用75％乙醇擦洗表面,再用自来水冲洗干净，75％乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗两次2.5％次氯酸钠5min灭菌，灭菌去离子水涮洗2次，再用2.5％次氯酸钠5min灭菌，去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份，将材料切成直径0.5cm的带芽块茎接于不定芽诱导培养基(MS+6-BA 1.5mg/L+2,4-D 0.2mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养35d后，90％外植体都分化出不定芽；将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于不定芽增培养基(MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D 0.2mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx,光照12h/d条件下培养30d后，将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于离体根茎诱导培养基(1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+市售白糖3％，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养50d后，将粘附再诱导出来的离体根茎洗净，阴干表面水分，直接移栽大田，在28℃下，10d左右就开始发芽，发芽率达90％以上。
实施例3
取带芽根茎洗净，用75％乙醇擦洗表面,再用自来水冲洗干净，75％乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗两次2.5％次氯酸钠5min灭菌，灭菌去离子水涮洗2次，再用2.5％次氯酸钠5min灭菌，去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份，将材料切成直径0.5cm的带芽块茎接于不定芽诱导培养基(MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养35d后，90％外植体都分化出不定芽；将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于不定芽增培养基(MS+6-BA1.5mg/L+2,4-D 0.2mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx,光照12h/d条件下培养30d后，将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于离体根茎诱导培养基(1/2MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L+市售白糖3％，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养50d后，将粘附再诱导出来的离体根茎洗净，阴干表面水分，直接移栽大田，在28℃下，10d左右就开始发芽，发芽率达90％以上。
实施例4
取带芽根茎洗净，用75％乙醇擦洗表面,再用自来水冲洗干净，75％乙醇浸泡30s，灭菌去离子水涮洗两次2.5％次氯酸钠5min灭菌，灭菌去离子水涮洗2次，再用2.5％次氯酸钠5min灭菌，去离子水涮洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水份，将材料切成直径0.5cm的带芽块茎接于不定芽诱导培养基(MS+6-BA 4.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养35d后，90％外植体都分化出不定芽；将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于不定芽增培养基(MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+市售白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx,光照12h/d条件下培养30d后，将分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小接于离体根茎诱导培养基(1/2MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+市售白糖3％，pH 5.8～6.0)，25～27℃，光照1600Lx，光照12h/d条件下培养50d后，将粘附再诱导出来的离体根茎洗净，阴干表面水分，直接移栽大田，在28℃下，10d左右就开始发芽，发芽率达90％以上。

Claims (3)

1.一种黄精离体根茎的高效诱导方法，其特征在于：主要包括以下步骤：
(1)外植体的选择：
选择黄精带芽根茎作为外植体；
(2)不定芽的诱导培养：
不定芽诱导培养基为：MS+6-BA 1.0～4.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；
将步骤(1)所得外植体接种在不定芽诱导培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养35～40天；
(3)不定芽的增殖培养：
不定芽增殖培养基为：MS+6-BA 0.5～2.0mg/L+2,4-D 0.1～0.5mg/L+白糖3％+琼脂粉5g/L，pH 5.8～6.0；
将步骤(2)所得分化有不定芽的块茎切成直径0.5cm大小，接种在不定芽增殖培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养30～35天；
(4)离体根茎的诱导培养：
离体根茎诱导培养基：1/2MS+6-BA 0.3～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+白糖3％，pH5.8～6.0；
将步骤(3)所得不定芽接种于离体根茎诱导培养基中，25～27℃、光照1200Lx、12h/d条件下培养45～50天,在瓶内直接将带不定芽块茎诱导形成离体根茎；
(5)离体根茎的移栽或储藏：
将步骤(4)所得离体根茎取出，洗净粘附的培养基，阴干表面水分，直接进行大田移栽，或储藏起来。
2.根据权利要求1所述的黄精离体根茎的高效诱导方法，其特征在于：所述步骤(1)中的外植体在切断之前经过灭菌处理。
3.根据权利要求1所述的黄精离体根茎的高效诱导方法，其特征在于：所述步骤(2)、(3)、(4)中的培养基经过湿热灭菌处理15～30min。
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