CN102657084B - 一种明日叶快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种明日叶快速繁殖方法，其在添加激素的MS培养基上，诱导明日叶的叶片和叶柄产生愈伤组织，并且进一步形成体细胞胚，该体细胞胚经萌发长出新植株，最后将该新植株在生根培养基上生根，所述添加激素的MS培养基的组分为：0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培养基。本发明克服了现有明日叶组织培养繁殖方法的缺陷，实现了明日叶的快速繁殖，具有培养周期短，再生植株生根容易、成苗率高的优点，可用于明日叶的高效繁殖。

Description

一种明日叶快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物的繁殖方法，具体涉及一种明日叶的快速繁殖方法，属于生物技术领域。
背景技术
明日叶(Angelica keiskei koidzmi)，别名八丈草、海峰人参、长寿菜，生命力旺盛，今日摘了明日又长出芽，其命名就是出于这种强韧生命力的特性和日本八丈岛的原产地。明日叶的学名是Angdica Uterus，属名是拉丁语天使的由来，种名是有用的意思，蕴含着药效卓著之意。明日叶属水芹科多年生草本植物，其喜好温暖多湿的气候，产地以伊豆七岛为中心，延伸至伊豆半岛前端、三浦半岛和纪伊半岛等地。有机会造访伊豆七岛或伊豆半岛的话，可以看到，明日叶在路旁或庭院中像杂草一样终年茂盛，似乎与无药效的植物一样没有什么特别，在大自然中生长着。之前当地人就懂得利用此药草，如用以作料理。
明日叶含有的天然有机锗高于名贵人参、灵芝，也高于大枣和大蒜。有机锗具有净化血液、使细胞活化的功效，并能溶解附着于血管壁的胆固醇，从而防止血管老化，促进细胞新陈代谢，维持血压正常。明日叶还含有一般植物很少有的维生素B12，以及丰富的叶绿素、十多种矿物元素、十六种人体所需的氨基酸和黄酮、泛酸、胆碱等物质。日本医学《大和本草》《重订本草纲目启蒙》(1844)以及中国的《本草纲目》等文献都有关于明日叶强身健体的重要记载，相关研究发现长期食用和饮用明日叶，对肝炎、糖尿病、高血压等疾病有良好的疗效，尤其在癌症防治及控制方面具有神奇的功效，并且没有副作用。
我国栽培明日叶起始于20多年前，但是至今栽培面积并不大，如此有价值的食药两用植物却没有很好地得以推广和种植，其中的一个主要原因是明日叶的繁殖问题。明日叶是多年生草本植物，种子繁殖的植株要2-4年才能结实，种子发芽率也较低，市场上明日叶壮苗每盆卖到80-100元。因此迫切需要一种新的明日叶繁殖方法来满足生产和开发的需求。目前有关明日叶组织培养和快速繁殖的报道较少，南京大学李佳等在论文《明日叶的组织培养与快速繁殖》(李佳，张智俊，周长芳，《植物生理学通讯》2006(06))中披露，在添加6-BA和NAA的MS培养基上诱导明日叶的带芽茎段、叶片及叶柄，其中带芽茎段产生愈伤组织及丛生芽，而叶片和叶柄经3个月培养未见分化。论文《明日叶的愈伤组织诱导和快速繁殖》(郭治友，罗应，钱绍方《广东农业科学》2010(7))提出，以叶片、叶柄为外植体在N6培养基上添加6-BA和NAA，诱导近60天得到丛生芽。然而上述方法都是由丛生芽得到再生植株，其具有再生植株生根难、成苗率低、培养周期长的缺点。经检索，尚未见有从愈伤组织分化出体细胞胚并再生出植株的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有明日叶常规繁殖方法的缺陷，提供一种明日叶快速繁殖方法，通过分化出体细胞胚并萌发再生植株的无性繁殖方法，实现明日叶的快速繁殖。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种明日叶快速繁殖方法，其特征是，在添加激素的MS培养基上，诱导明日叶的叶片和叶柄产生愈伤组织，并且进一步形成体细胞胚，该体细胞胚经萌发长出新植株，最后将该新植株在生根培养基上生根。
所述的添加激素的MS培养基的组分为：0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培养基。
所述的添加激素的MS培养基的ph值为5.6-6.0。
所述的叶柄没有芽点。
所述的叶片和叶柄经过灭菌。
所述的叶片和叶柄的灭菌方法为，将切下的明日叶的带柄叶片分为叶片和叶柄两部分，经流水冲洗3-5次，用添加洗衣粉的自来水冲洗2次，在75％酒精中灭菌10s，之后将叶片和叶柄经1％次氯酸钠分别消毒3min和5min，然后用无菌水冲洗3-5次，置于无菌滤纸上吸干。
所述的新植株是指，经体细胞胚萌发的再生植株长到0.2cm以上。
所述的在生根培养基上生根是指，将新植株在1/2MS培养基或MS基本培养基上生根。
所述的1/2MS培养基是指：MS大量、MS微量、MS有机和铁盐均为MS基本培养基含量的一半，余量为蒸馏水。
与现有技术相比较，本发明最大的特点在于：不同于现有明日叶采用由丛生芽得到再生植株的繁殖方法，而是首次采用了通过体细胞胚发生途径再生植株的无性繁殖方法，以叶片、叶柄为外植体，在MS基础培养基中添加一定浓度的玉米素及NAA，诱导分化出体细胞胚，并且经萌发得到大量再生植株，从而克服了常规明日叶培育繁殖方法中愈伤组织不易分化的不足以及解决了由丛生芽得到再生植株生根难、成苗率低的问题。采用本发明所述方法繁殖明日叶培养周期为20-25d，大大缩短了通过组织培养得到再生植株的时间，实现了明日叶的快速繁殖。本发明具有再生植株生根容易、成苗率高以及培养周期短的优点，对于明日叶快速市场化有极大的推动潜力。
具体实施方式
本发明所述的明日叶快速繁殖方法在添加激素的MS培养基上，诱导明日叶的叶片和没有芽点的叶柄产生愈伤组织，并且进一步形成体细胞胚，该体细胞胚经萌发长出0.2cm以上的再生新植株，最后将该新植株在生根培养基上生根。
所述的添加激素的MS培养基的组分为：0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培养基，其ph值为5.6-6.0。
所述的叶片和叶柄经过灭菌，其灭菌方法为，将切下的明日叶的带柄叶片分为叶片和叶柄两部分，经流水冲洗3-5次，用添加洗衣粉的自来水冲洗2次，在75％酒精中灭菌10s，之后将叶片和叶柄经1％次氯酸钠分别消毒3min和5min，然后用无菌水冲洗3-5次，置于无菌滤纸上吸干。
所述的在生根培养基上生根是指，将新植株在1/2MS培养基或MS基本培养基上生根，该1/2MS培养基是指：MS大量、MS微量、MS有机和铁盐均为MS基本培养基含量的一半，余量为蒸馏水。
下面结合实施例对本发明的技术方案作具体详细说明，下列实施例以本发明技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
具体方案是：取明日叶带柄的叶片，将其分成叶片和叶柄两部分，该叶柄没有芽点，在流水中冲洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自来水中冲洗2次，用75％的酒精消毒10s，叶片和叶柄经1％次氯酸钠分别灭菌3min和5min后，用无菌水洗3-5次，之后置于无菌滤纸上吸干。将叶片切成0.5cm*0.5cm大小，叶柄切成0.5cm大小后，转到添加了0.5mg/L的玉米素和0.5mg/L的NAA、ph值为5.6的MS基本培养基，即添加激素的MS培养基上诱导愈伤组织的产生，培养温度25℃，光照时间12h，20-25天从愈伤组织分化出体细胞胚，经萌发长出再生的新植株。将0.2cm以上的再生新植株转移到生根培养基上生根。该生根培养基是指1/2MS培养基，该1/2MS培养基是指：MS大量、MS微量、MS有机和铁盐均为MS基本培养基含量的一半，余量为蒸馏水。最后待新植株长出壮根后，驯化移栽到花盆中。
实施例2
具体方案是：取明日叶带柄的叶片，将其分成叶片和叶柄两部分，该叶柄没有芽点，在流水中冲洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自来水中冲洗2次，用75％的酒精消毒10s，叶片和叶柄经1％次氯酸钠分别灭菌3min和5min后，用无菌水洗3-5次，之后置于无菌滤纸上吸干。将叶片切成0.5cm*0.5cm大小，叶柄切成0.5cm大小后，转到添加了3mg/L的玉米素和0.7mg/L的NAA、ph值为5.8的MS基本培养基，即添加激素的MS培养基上诱导愈伤组织的产生，培养温度25℃，光照时间12h，20-25天从愈伤组织分化出体细胞胚，经萌发长出再生的新植株。将0.2cm以上的再生新植株转移到生根培养基上生根。该生根培养基是指1/2MS培养基，该1/2MS培养基是指：MS大量、MS微量、MS有机和铁盐均为MS基本培养基含量的一半，余量为蒸馏水。最后待新植株长出壮根后，驯化移栽到花盆中。
实施例3
具体方案是：取明日叶带柄的叶片，将其分成叶片和叶柄两部分，该叶柄没有芽点，在流水中冲洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自来水中冲洗2次，用75％的酒精消毒10s，叶片和叶柄经1％次氯酸钠分别灭菌3min和5min后，用无菌水洗3-5次，之后置于无菌滤纸上吸干。将叶片切成0.5cm*0.5cm大小，叶柄切成0.5cm大小后，转到添加了5mg/L的玉米素和1mg/L的NAA、ph值为6.0的MS基本培养基，即添加激素的MS培养基上诱导愈伤组织的产生，培养温度25℃，光照时间12h，20-25天从愈伤组织分化出体细胞胚，经萌发长出再生的新植株。将0.2cm以上的再生新植株转移到生根培养基上生根。该生根培养基是指MS基本培养基。最后待新植株长出壮根后，驯化移栽到花盆中。
本发明首次建立了明日叶通过体细胞胚发生途径再生植株的无性繁殖方法，通过添加不同的激素对明日叶的叶片及叶柄进行愈伤组织诱导，产生体细胞胚，胚萌发后得到大量的再生植株，从而实现了明日叶的高效快速繁殖。本发明克服了明日叶常规组织培养愈伤组织不易分化，以及由丛生芽得到再生植株生根难、成苗率低的问题，大大缩短了通过组织培养得到再生植株的时间，因而具有非常可观的潜在市场价值。

Claims (1)

1.一种明日叶快速繁殖方法，其特征是，在添加激素的MS培养基上，诱导明日叶的叶片和叶柄产生愈伤组织，并且进一步形成体细胞胚，该体细胞胚经萌发长出新植株，最后将该新植株在生根培养基上生根；
所述的添加激素的MS培养基的组分为：0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培养基，该添加激素的MS培养基的ph值为5.6-6.0；
所述的叶柄没有芽点；
所述的叶片和叶柄经过灭菌，其灭菌方法为，将切下的明日叶的带柄叶片分为叶片和叶柄两部分，经流水冲洗3-5次，用添加洗衣粉的自来水冲洗2次，在75%酒精中灭菌10s，之后将叶片和叶柄经1%次氯酸钠分别消毒3min和5min，然后用无菌水冲洗3-5次，置于无菌滤纸上吸干；
所述的新植株是指，经体细胞胚萌发的再生植株长到0.2cm以上；
所述的在生根培养基上生根是指，将新植株在1/2MS培养基或MS基本培养基上生根，该1/2MS培养基是指：MS大量、MS微量、MS有机和铁盐均为MS基本培养基含量的一半，余量为蒸馏水。
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