CN103404435A - 一种长寿菜的组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种长寿菜的组织培养方法，包括以下步骤：（1）Ms培养基的配制；（2）采用明日草的带芽茎段作为外植体，经消毒后进行接种培养，获得愈伤组织，诱导出丛生状芽；（3）通过丛生芽在培养基里的增殖，将其增殖约3倍；（4）将增殖所得的丛生芽切割，移接到生根培养基中促其生根，获得完整的再生植株；将再生植株移栽到营养土中，得到明日草的移栽苗；本发明采用先进的MS培养基，对各阶段采用不同培养基，严格要求控制培养室条件，本发明对明日草进行繁殖，可以大大提高其繁殖系数，有一定的潜在性应用前景。

Description

一种长寿菜的组织培养方法
技术领域
本发明涉及一种长寿菜的组织培养方法。
背景技术
长寿菜，属伞形科当归属2年生或多年生草本植物，是一种药食兼用的蔬菜，此种植物含有高浓度的天然有机锗和一般植物性食物很少有的维生素B12，以及丰富的叶绿素，同时还含有人体所需要的20多种矿质元素和特殊物质，具有增强免疫力、补血、抗菌、促进成长、增进食欲和防癌等功效，明日叶的果实是双悬果，其种子发芽率较低，不易栽培，组织培养技术可以大大提高其繁殖系数，有一定的潜在性应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种长寿菜的组织培养方法，本发明对明日草进行繁殖，可以大大提高其繁殖系数，有一定的潜在性应用前景。
本发明采用如下技术方案：
长寿菜的组织培养方法，包括以下步骤：
（1）MS培养基的制作：以MS 为基本培养基，各阶段的培养基配方如下：
a：芽诱导培养基：MS+6-BA 2 mg·L-1 +NAA 0.5 mg·L-1；
b：芽增殖培养基：MS+6-BA 1 mg·L-1；
c：生根培养基：MS+NAA 1 mg·L-1。
以上培养基均含3%蔗糖、1%琼脂，培养基配制完成后，需在灭菌锅中成功灭菌后使用；
（2）组织培养阶段：灭菌后的 MS培养基需放置在无菌的环境中，温度25℃左右，时间7天左右，经过观察污染情况后方可投入使用；
a：材料类别，带芽茎段；
明日草的组织培养材料为带芽茎段，明日草的叶片和叶柄均不适合；
b：取材与消毒；
取明日草长约2cm的带芽茎段，用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡10s，再用0.1% HgCl2 灭菌10 min左右，并不断搅拌，最后用无菌水冲洗5～8 次，用无菌滤纸吸干材料上的水分，将带芽茎段接种在芽诱导培养基上进行培养，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1；带芽茎段在芽诱导培养基上，30d左右便形成白色愈伤组织，并长出绿色芽点，继续培养后可诱导出丛生状芽；
c：增殖培养；
将丛生状芽分离，再接到芽增殖培养基中，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1，20 d 左右芽增殖，增殖倍数约为3，通过反复切割，在较短时间里可得到大量丛生芽；
d：生根与移栽；
将丛生芽切割后接到生根培养基中，约40d 后，开始出现根，长出根后继续培养20d，根可达1～1.5cm，生根率约95%，苗高4～5cm后即可出苗，移栽入营养土中，早晚各喷水1次，10d 后，移栽苗成活率90%以上。
控制培养室的光照时间16h·d-1，光照强度40 mmol·m-2·s-1，空气湿度在60-75%之间，培养室温度25℃。
本发明的优点：
本发明采用先进的MS培养基，对各阶段采用不同培养基，严格要求控制培养室条件，本发明对明日草进行繁殖，可以大大提高其繁殖系数，有一定的潜在性应用前景。
具体实施方式
实施例：长寿菜的组织培养方法，包括以下步骤：
（1）MS培养基的制作：以MS 为基本培养基，各阶段的培养基配方如下：
a：芽诱导培养基：MS+6-BA 2 mg·L-1 +NAA 0.5 mg·L-1；
b：芽增殖培养基：MS+6-BA 1 mg·L-1；
c：生根培养基：MS+NAA 1 mg·L-1。
以上培养基均含3%蔗糖、1%琼脂，培养基配制完成后，需在灭菌锅中成功灭菌后使用；
（2）组织培养阶段：灭菌后的 MS培养基需放置在无菌的环境中，温度25℃左右，时间7天左右，经过观察污染情况后方可投入使用；
a：材料类别，带芽茎段；
明日草的组织培养材料为带芽茎段，明日草的叶片和叶柄均不适合；
b：取材与消毒；
取明日草长约2cm的带芽茎段，用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡10s，再用0.1% HgCl2 灭菌10 min左右，并不断搅拌，最后用无菌水冲洗5～8 次，用无菌滤纸吸干材料上的水分，将带芽茎段接种在芽诱导培养基上进行培养，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1；带芽茎段在芽诱导培养基上，30d左右便形成白色愈伤组织，并长出绿色芽点，继续培养后可诱导出丛生状芽；
c：增殖培养；
将丛生状芽分离，再接到芽增殖培养基中，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1，20 d 左右芽增殖，增殖倍数约为3，通过反复切割，在较短时间里可得到大量丛生芽；
d：生根与移栽；
将丛生芽切割后接到生根培养基中，约40d 后，开始出现根，长出根后继续培养20d，根可达1～1.5cm，生根率约95%，苗高4～5cm后即可出苗，移栽入营养土中，早晚各喷水1次，10d 后，移栽苗成活率90%以上。
控制培养室的光照时间16h·d-1，光照强度40 mmol·m-2·s-1，空气湿度在60-75%之间，培养室温度25℃。

Claims (1)

1.一种长寿菜的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）MS培养基的制作：以MS 为基本培养基，各阶段的培养基配方如下：
a：芽诱导培养基：MS+6-BA 2 mg·L-1 +NAA 0.5 mg·L-1；
b：芽增殖培养基：MS+6-BA 1 mg·L-1；
c：生根培养基：MS+NAA 1 mg·L-1；
以上培养基均含3%蔗糖、1%琼脂，培养基配制完成后，需在灭菌锅中成功灭菌后使用；
（2）组织培养阶段：灭菌后的 MS培养基需放置在无菌的环境中，温度25℃左右，时间7天左右，经过观察污染情况后方可投入使用；
a：材料类别，带芽茎段；
明日草的组织培养材料为带芽茎段，明日草的叶片和叶柄均不适合；
b：取材与消毒；
取明日草长约2cm的带芽茎段，用流水冲洗干净，然后在超净工作台上用75%酒精浸泡10s，再用0.1% HgCl2 灭菌10 min左右，并不断搅拌，最后用无菌水冲洗5～8 次，用无菌滤纸吸干材料上的水分，将带芽茎段接种在芽诱导培养基上进行培养，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1；带芽茎段在芽诱导培养基上，30d左右便形成白色愈伤组织，并长出绿色芽点，继续培养后可诱导出丛生状芽；
c：增殖培养；
将丛生状芽分离，再接到芽增殖培养基中，培养温度(24±2)℃，光强40 mmol·m-2·s-1左右，光照时间16 h·d-1，20 d 左右芽增殖，增殖倍数约为3，通过反复切割，在较短时间里可得到大量丛生芽；
d：生根与移栽；
将丛生芽切割后接到生根培养基中，约40d 后，开始出现根，长出根后继续培养20d，根可达1～1.5cm，生根率约95%，苗高4～5cm后即可出苗，移栽入营养土中，早晚各喷水1次，10d 后，移栽苗成活率90%以上；
控制培养室的光照时间16 h·d-1，光照强度40 mmol·m-2·s-1，空气湿度在60-75%之间，培养室温度25℃。
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