CN102187811A

CN102187811A - 一种番茄培养基和番茄栽培方法

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Publication number: CN102187811A
Application number: CN 201110069183
Authority: CN
Inventors: 张文珠; 林炳英; 林德钦; 童庆宣; 郑国华
Original assignee: XIAMEN OVERSEAS CHINESE SUBTROPICAL PLANT INTRODUCTION GARDEN
Current assignee: XIAMEN OVERSEAS CHINESE SUBTROPICAL PLANT INTRODUCTION GARDEN
Priority date: 2011-03-21
Filing date: 2011-03-21
Publication date: 2011-09-21
Anticipated expiration: 2031-03-21
Also published as: CN102187811B

Abstract

一种番茄培养基和番茄栽培方法，涉及植物的组织培养技术。提供番茄开花结果诱导培养基和番茄芽增殖培养基；将经过处理的番茄种子播种到番茄培养基中，于番茄生长条件下进行培养，得番茄种子无菌苗；将番茄种子无菌苗的子叶剪接成小叶片，接种于诱导愈伤组织和不定芽形成的诱导培养基中进行诱导培养，获得番茄不定芽；将番茄不定芽接种到开花结果的诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。通过番茄种子无菌播种，切取子叶和胚轴为外植体，诱导愈伤组织和不定芽形成，进行芽增殖培养，并在试管内开花结果。番茄组织培养及试管内开花结果的培育周期短，不受季节影响，番茄开花诱导率达45％～60％，番茄结果诱导率达30％～45％。

Description

一种番茄培养基和番茄栽培方法

技术领域

本发明涉及植物的组织培养技术，特别涉及一种番茄培养基和番茄栽培方法。

背景技术

Micro-Tom是一个番茄矮化品种，属有限生长型，极矮生，植株高仅10～20cm，由FloridaBasket和Ohio 4013-3杂交而成(1、Scott JW，Harbaugh BK.Micro-Tom-a miniature dwarftomato.Florida Agric Exp Station Circ，1989，370：1-6)。Micro-Tom番茄的根系发达，茎蔓非常紧凑，叶色深绿，果实味道甜美，是一种深受大众欢迎的盆栽观果植物。近年来，随着人们生活水平的提高，作为观赏价值高、管理简易、不受季节影响、携带方便的新型室内观赏花卉，Micro-Tom番茄备受人们的欢迎。通过组织培养的方法，诱导Micro-Tom番茄在试管内开花结果，这种研究具有潜在的实际应用和广阔的市场前景。果实是植物有性生殖最后阶段形成的器官，也是植物个体发育最后阶段所分化的器官。通过组织培养的方法诱导Micro-Tom番茄在试管内开花结果，在探讨器官分化机理以及全能性的表达方面也具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种番茄开花结果诱导培养基。

本发明的第二目的在于提供一种番茄芽增殖培养基。

本发明的第三目的在于提供一种番茄栽培方法。

所述番茄开花结果诱导培养基的配方为：6-苄基嘌呤0.1～0.3mg/L或玉米素0.1～0.3mg/L，3-吲哚乙酸0.02～0.05mg/L，蔗糖20～40g/L和琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，pH值为5.5～5.9。

所述番茄芽增殖培养基的配方为：玉米素0.1～0.3mg/L，蔗糖20～40g/L和琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，pH值为5.5～5.9。

所述一种番茄栽培方法包括以下步骤：

1)番茄种子的无菌播种：将经过处理的番茄种子播种到番茄培养基中，于番茄生长条件下进行培养，得番茄种子无菌苗；

2)番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成：将番茄种子无菌苗的子叶剪接成小叶片，接种于诱导愈伤组织和不定芽形成的诱导培养基中进行诱导培养，获得番茄不定芽；

3)番茄试管内开花结果：将番茄不定芽接种到开花结果的诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。

在步骤1)中，所述处理的具体方法为：将番茄种子用清水浸泡10～60min后催芽，再用含体积百分比为0.1％～0.2％的洗洁精的水浸泡1～3h，浸泡后的番茄种子用水冲洗30～60min，移入超净台，依次用乙醇和HgCl₂溶液消毒，然后用无菌水冲洗3～6次；所述番茄培养基的配方可为：蔗糖20～40g/L，琼脂粉6.0～8.0g/L，余为1/2MS培养基(即所含大量元素减半后的MS培养基)，调节pH值为5.5～5.9；所述番茄生长条件可为：温度为25℃±2℃，光照强度为1500～3500lux，光周期为16h光照/8h暗。

在步骤2)中，所述小叶片的长度最好为0.5～1.0cm。所述诱导培养基配方可为：6-苄基嘌呤1.0～2.0mg/L或玉米素1.0～2.0mg/L，3-吲哚乙酸0.2～0.5mg/L，蔗糖20～40g/L，琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，调pH值为5.5～5.9；所述诱导培养的条件为：温度25℃±2℃，光照强度1500～2000lux，每天16h光照/8h暗的光周期下培养，每15d更换一次新鲜诱导培养基。

在步骤3)中，所述番茄不定芽可预先接种到芽增殖培养基中培养，获得番茄幼苗后再接种到开花结果的诱导培养基中进行培养；所述培养的条件为：25℃±2℃、光照强度1500～3200lux，每天16h光照/8h暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基。

本发明通过番茄种子无菌播种，切取子叶和胚轴为外植体，诱导愈伤组织和不定芽形成，进行芽增殖培养，并在试管内开花结果。本发明中的番茄组织培养及试管内开花结果的培育周期短，不受季节影响，番茄开花诱导率可达45％～60％，番茄结果诱导率可达30％～45％。本发明所用的MS培养基为国际通用的植物组织培养基，其成分和配制方法可参考文献(2、H.S.乔拉.植物生物技术导论(影印版)[M].北京：科学出版社，2004：20)。

具体实施方式

实施例1

一、番茄种子的无菌播种

1)将番茄种子用清水浸泡10min，50℃温水中催芽30min，然后将番茄种子用含0.1％(v/v)洗洁精的水中浸泡1h。

2)浸泡后的番茄种子用流水冲洗30min，移入超净台，75％乙醇消毒0.5min，0.1％HgCl₂溶液消毒5min，无菌水冲洗3次后将种子播种到1/2MS培养基上培养。

3)在25℃±2℃、光照强度1500lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养。

所用培养基含蔗糖20g/L，琼脂粉6g/L，pH 5.5～5.9；培养5d后种子陆续发芽，培养10d后，种子发芽率95％，种子消毒成功率100％。

二、番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成

将番茄种子无菌播种10d后，在超净台上将充分展开的番茄无菌苗的子叶剪成0.5cm长、下胚轴0.5cm长的小段，接种于设计好的诱导愈伤组织和不定芽形成的培养基中，25℃±2℃、光照强度1500lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每15d更换一次新鲜培养基。

所用培养基含有：6-苄基嘌呤1.0mg/L或玉米素1.0mg/L，3-吲哚乙酸0.2mg/L，蔗糖20g/L和琼脂粉6.0g/L，其余为MS培养基，pH 5.5～5.9。

培养3d后番茄叶片出现皱缩，5d左右番茄子叶明显加厚，切口卷曲，叶片切口上靠近主脉部分出现深绿色斑块，胚轴变粗，两端切口膨大、外翻，有大量愈伤组织形成，7d左右深绿色斑块处开始出现圆形突起，随着培养时间延长，突起逐渐增多。统计数据表明：子叶的出愈率为97％～100％，芽分化率85.6％～98.5％；胚轴的出愈率为90％～95％，芽分化率为43.5％～57％。

三、番茄芽增殖培养

将步骤二诱导获得的番茄不定芽，单芽切下接种到芽增殖培养基中培养，25℃±2℃、光照强度1500～2000lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每20d更换一次新鲜培养基。

所用培养基含有：玉米素0.1mg/L，蔗糖20g/L和琼脂粉6.0g/L，其余为MS培养基，pH5.5～5.9；培养20d后芽增殖倍数为5～8倍，继续5代后仍然保持增殖率。

四、番茄试管苗的试管内开花结果

将苗高2～3cm，2～4片番茄叶，切下并接种到开花结果的诱导培养基中，25℃±2℃、光照强度1500～3200lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基，

所用培养基含有：6-苄基嘌呤0.1～0.3mg/L或玉米素0.1～0.3mg/L，3-吲哚乙酸0.02～0.05mg/L，蔗糖20g/L和琼脂粉6.0g/L，其余为MS培养基，pH 5.5～5.9；培养20d后，番茄植株出现第一个花苞，35d后开第一朵花，45d后结第一个果，最后统计开花率为45％～60％，结果率为30％～45％，结果株上结1～2果/株，结果30d后果实陆续转为红色。

实施例2

一、番茄种子的无菌播种

1)将番茄种子用清水浸泡60min，50℃温水中催芽45min，然后将番茄种子用含0.2％(v/v)洗洁精的水中浸泡3h。

2)浸泡后的番茄种子用流水冲洗60min，移入超净台，75％乙醇消毒5min，0.1％HgCl₂溶液消毒20min，无菌水冲洗6次后将种子播种到1/2MS培养基上培养。

3)在25℃±2℃、光照强度3500lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养。

所用培养基含蔗糖40g/L，琼脂粉8.0g/L，pH 5.5～5.9；培养5d后种子陆续发芽，培养10d后，种子发芽率96％，种子消毒成功率100％。

二、番茄愈伤组织的诱导和不定芽的形成

将番茄种子无菌播种10d后，在超净台上将充分展开的番茄无菌苗的子叶剪成0.5～1.0cm长、下胚轴0.5～1.0cm长的小段，接种于设计好的诱导愈伤组织和不定芽形成的培养基中，25℃±2℃、光照强度1500～2000lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每15d更换一次新鲜培养基。

所用培养基含有：6-苄基嘌呤2.0mg/L或玉米素2.0mg/L，3-吲哚乙酸0.5mg/L，蔗糖40g/L和琼脂粉8.0g/L，其余为MS培养基，pH 5.5～5.9。

培养3d后番茄叶片出现皱缩，5d左右番茄子叶明显加厚，切口卷曲，叶片切口上靠近主脉部分出现深绿色斑块，胚轴变粗，两端切口膨大、外翻，有大量愈伤组织形成，7d左右深绿色斑块处开始出现圆形突起，随着培养时间延长，突起逐渐增多。统计数据表明：子叶的出愈率为96％～100％，芽分化率86.6％～98.5％；胚轴的出愈率为90％～96％，芽分化率为43.5％～58％。

三、番茄芽增殖培养

将步骤二诱导获得的番茄不定芽，单芽切下接种到芽增殖培养基中培养，25℃±2℃、光照强度2000lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每20d更换一次新鲜培养基。

所用培养基含有：玉米素0.3mg/L，蔗糖40g/L和琼脂粉8.0g/L，其余为MS培养基，pH 5.5～5.9；培养20d后芽增殖倍数为5～8倍，继续5代后仍然保持增殖率。

四、番茄试管苗的试管内开花结果

将苗高2～3cm，2～4片番茄叶，切下并接种到开花结果的诱导培养基中，25℃±2℃、光照强度3200lux，每天16h光/8h暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基。

所用培养基含有：6-苄基嘌呤0.3mg/L或玉米素0.3mg/L，3-吲哚乙酸0.05mg/L，蔗糖40g/L和琼脂粉8.0g/L，其余为MS培养基，pH 5.5～5.9；培养20d后，番茄植株出现第一个花苞，36d后开第一朵花，47d后结第一个果，最后统计开花率为48％～60％，结果率为33％～45％，结果株上结1～2果/株，结果30d后果实陆续转为红色。

Claims

1.番茄开花结果诱导培养基，其特征在于其配方为：6-苄基嘌呤0.1～0.3mg/L或玉米素0.1～0.3mg/L，3-吲哚乙酸0.02～0.05mg/L，蔗糖20～40g/L和琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，pH值为5.5～5.9。

2.番茄芽增殖培养基，其特征在于其配方为：玉米素0.1～0.3mg/L，蔗糖20～40g/L和琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，pH值为5.5～5.9。

3.一种番茄栽培方法，其特征在于包括以下步骤：

3)番茄试管内开花结果：将番茄不定芽接种到如权利要求1所述番茄开花结果诱导培养基中进行培养，番茄植株长出花苞并结果。

4.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述处理的具体方法为：将番茄种子用清水浸泡10～60min后催芽，再用含体积百分比为0.1％～0.2％的洗洁精的水浸泡1～3h，浸泡后的番茄种子用水冲洗30～60min，移入超净台，依次用乙醇和HgCl2溶液消毒，然后用无菌水冲洗3～6次。

5.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述番茄培养基的配方为：蔗糖20～40g/L，琼脂粉6.0～8.0g/L，余为1/2MS培养基，调节pH值为5.5～5.9。

6.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤1)中，所述番茄生长条件为：温度为25℃±2℃，光照强度为1500～3500lux，光周期为16h光照/8h暗。

7.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤2)中，所述小叶片的长度为0.5～1.0cm；所述诱导培养基配方为：6-苄基嘌呤1.0～2.0mg/L或玉米素1.0～2.0mg/L，3-吲哚乙酸0.2～0.5mg/L，蔗糖20～40g/L，琼脂粉6.0～8.0g/L，其余为MS培养基，调pH值为5.5～5.9。

8.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤2)中，所述诱导培养的条件为：温度25℃±2℃，光照强度1500～2000lux，每天16h光照/8h暗的光周期下培养，每15d更换一次新鲜诱导培养基。

9.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤3)中，所述将番茄不定芽接种到如权利要求1所述番茄开花结果诱导培养基中进行培养之前，番茄不定芽预先接种到如权利要求2所述芽增殖培养基中培养。

10.如权利要求3所述的一种番茄栽培方法，其特征在于在步骤3)中，所述培养的条件为：25℃±2℃、光照强度1500～3200lux，每天16h光照/8h暗的光周期下培养，每30d更换一次新鲜培养基。