CN105567422A - 一种磁性固定化磷脂酶c和磁性固定化磷脂酶a2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法 - Google Patents

一种磁性固定化磷脂酶c和磁性固定化磷脂酶a2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法 Download PDF

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于殿宇
王立琦
江连洲
刘天一
张旭
张青
王文华
刘欣
齐晓芬
李中宾
王玉琦
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    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
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Abstract

本发明是一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法。利用PLC水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，酶解大豆毛油中的PC及PE，生成DAG及磷酸类产物，提高油脂得率，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA2特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少的特点脱除非水化磷脂。考察PLC和PLA2的加入时间，加入量以及反应的温度和pH等。在最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为8.9mg/kg。

Description

一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法
技术领域
本发明涉及一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法。
背景技术
植物油精炼一般包括脱胶、脱酸、脱色、脱蜡和脱臭等工序。脱胶是毛油精炼的第一工序,用于从毛油除去磷脂和粘液物质。毛油中的磷脂分为水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂具有亲水性，非水化磷脂含量较高的毛油适合生物酶法脱胶。酶法有反应专一,反应条件温和和较少的环境污染等优点,使其更具有竞争力。与传统的水化脱胶工艺相比,酶法脱胶可大大节约化学物质的消耗量，几乎不产生废水，在环保、经济、质量等方面具有潜在的优势。游离的磷脂酶对环境要求高，效率低，反应后油脂中游离脂肪酸含量升高，酶解效率不高。磁性固定化酶的使用解决了这一问题，酶经磁性固定后便于在反应结束后进行分离，并可以提高其使用的次数。
磷脂酶C(PLC)水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，主要酶解大豆毛油中的卵磷脂(PC)及脑磷脂(PE)，生成甘油二酯(DAG)及磷酸类产物，将磷脂转化成DAG，甘油二酯溶于油中成为食用油的一部分，不需要脱胶过程，从而提高了毛油脱胶的精炼率。磷脂酶A2(PLA2)是一种能够特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少，避免了酸价的升高。因此，采用PLC和PLA2脱胶，可提高脱胶油的得率。
发明内容
本发明公开了一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用对大豆毛油进行脱胶的方法，利用PLC水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，酶解大豆毛油中的PC及PE，生成DAG及磷酸类产物，提高油脂得率，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA2特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少的特点脱除非水化磷脂。用磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2来进行脱胶的方法通过以下步骤实现：一、PLC和PLA2的磁性固定化；二、磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶；三、测定脱胶油中的磷含量。
具体实施方式
具体实施方式一：一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：
步骤一：PLC和PLA2的磁性固定化：首先将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC。将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存。将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLA2。将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存。
步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来。然后加入一定量的磁性固定化PLA2，PLA2在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0～8.0反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA2分离出来。
步骤三：测定脱胶油中的磷含量。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h，其它步骤与具体实施方法一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磁性固定化PLA2添加量0.08～0.12g/kg，PLA2反应体系的pH值为6.5～7.5，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h，其它步骤与具体实施方法一相同。

Claims (3)

1.一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：
步骤一：PLC和PLA2的磁性固定化：首先将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLA2，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；
步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来；然后加入一定量的磁性固定化PLA2，PLA2在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0～8.0反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA2分离出来；
步骤三：测定脱胶油中的磷含量。
2.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h。
3.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磷磁性固定化PLA2添加量0.08～0.12g/kg，PLA2反应体系的pH值为6.5～7.5，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h。
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