CN105602718A - 一种磁性固定化磷脂酶c和磁性固定化磷脂酶a1连用对大豆毛油进行脱胶的方法 - Google Patents

一种磁性固定化磷脂酶c和磁性固定化磷脂酶a1连用对大豆毛油进行脱胶的方法 Download PDF

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王立琦
江连洲
刘天一
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Abstract

本发明是一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油进行脱胶的方法。利用PLC能特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键，生成甘油二酯并且可以提高油脂得率这一特点，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA1去除毛油中的非水化磷脂。考察PLC和PLA1的加入时间，加入量以及反应温度、pH等。在最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为8.3mg/kg。

Description

一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油进行脱胶的方法
技术领域
本发明涉及一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油进行脱胶的方法。
背景技术
植物油精炼一般包括脱胶、脱酸、脱色、脱蜡和脱臭等工序。毛油中存在一定含量的磷脂，脱除磷脂是植物油脂精炼过程中十分重要的一道工序，而油脂精炼的效率及产品的质量也直接受到脱胶油质量的影响。磷脂分为水化磷脂和非水化磷脂，酶法脱胶可以脱除毛油中的水化脱胶不能去除的非水化磷脂。与传统的水化脱胶工艺相比,酶法脱胶减少大量的酸和碱的使用,减少精炼过程中产生的废水,提高产品质量和降低操作成本。游离的磷脂酶对环境要求高，效率低，反应后油脂中游离脂肪酸含量升高，酶解效率不高。磁性固定化酶的使用解决了这一问题，不仅拓展了酶的应用范围，更便于在反应结束后进行分离，并可以提高其使用的次数。
传统的酶法脱胶是水解磷脂的脂肪酸链而生成溶血性磷脂，可以通过水化的方法除去。因此，磷脂酶脱胶是油脂脱胶的一种新方法，同传统的脱胶方法相比，酶法脱胶可大大节约化学物质的消耗量，几乎不产生废水，在环保、经济、质量等方面具有潜在的优势。磷脂酶C(PLC)能特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键，生成甘油二酯，甘油二酯溶于油中成为食用油的一部分，提高毛油的精炼率。磷脂酶A1(PLA1)适用于磷脂乳化液的改性和植物油的脱胶,PLA1特定水解磷脂生成Sn-1溶血磷脂，具有比一般磷脂更好的亲水性，在油脂水化过程中可以快速的吸水膨胀，从而使非水化磷脂从油脂中脱除。因此，采用PLC和PLA1脱胶，可提高脱胶油的得率。
发明内容
本发明公开了一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1连用对大豆毛油进行脱胶的方法，利用PLC能特异性水解磷酸基与甘油基之间的磷氧键，生成甘油二酯并且可以提高油脂得率这一特点，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA1去除毛油中的非水化磷脂。用磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1来进行脱胶的方法通过以下步骤实现：一、PLC和PLA1的磁性固定化；二、磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1连用脱胶；三、磷含量测定。
具体实施方式
具体实施方式一：一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1连用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：
步骤一：PLC和PLA1的磁性固定化：首先将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)复合粒子置于50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC。将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存。将lg的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLA1。将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存。
步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应2.0～2.8h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来。然后加入一定量的磁性固定化PLA1，PLA1在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为5.5～7.5反应温度至40～60℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA1分离出来。
步骤三：磷含量测定。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反应温度为50～60℃，反应时间2.4～2.6h，其它步骤与具体实施方法一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磁性固定化PLA1添加量0.08～0.10g/kg，PLA1反应体系的pH值为6.0～7.0，反应温度为45～55℃，反应时间2.0～3.0h，其它步骤与具体实施方法一相同。

Claims (3)

1.一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：
步骤一：PLC和PLA1的磁性固定化：首先将1g的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)复合粒子置于50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；将1g的Fe3O4/SiOx-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLA1，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；
步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA1连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应2.0～2.8h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来；然后加入一定量的磁性固定化PLA1，PLA1在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为5.5～7.5反应温度至40～60℃，酶解反应1.5～3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA1分离出来；
步骤三：磷含量测定。
2.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反应温度为50～60℃，反应时间2.4～2.6h。
3.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A1连用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磁性固定化PLA1添加量0.08～0.10g/kg，PLA1反应体系的pH值为6.0～7.0，反应温度为45～55℃，反应时间2.0～3.0h。
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