CN105548384A - 一种口鼻清喷雾剂的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了口鼻清喷雾剂的检测方法，该检测方法由性状、鉴别、检查、含量测定组成。其中鉴别是对甘草、山银花等进行薄层鉴别，对艾片进行气相色谱鉴别；含量测定是照高效液相色谱法对西南黄芩中的黄芩苷进行测定。与现有技术相比，本发明建立了口鼻清喷雾剂的检测方法，所采用的方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制口鼻清喷雾剂的质量，能更好地确保该制剂的临床疗效及安全性。

Description

一种口鼻清喷雾剂的检测方法
技术领域
本发明涉及口鼻清喷雾剂的检测方法，尤其是一种利用薄层色谱法鉴别甘草、山银花以及利用气相色谱法鉴别艾片的方法。
背景技术
口鼻清喷雾剂收载于国家中成药地方标准上升国家标准部分内科肺系一分册，标准号为WS-10856(ZD-0856)-2002-2012Z，是一种治疗外感风热、鼻塞流涕、咽喉肿痛的中成药，由山银花200g、鹅不食草200g、西南黄芩100g、野菊花100g连翘100g、薄荷10g、艾片2g、甘草50g制成。现有质量标准中，在对甘草进行薄层鉴别时，所得斑点分离度差、荧光斑点之间存在互相干扰现象；对艾片进行薄层鉴别也存在专属性差的缺点，且阴性样品在龙脑对照品的相应位置检出相同颜色的斑点；另外原标准中缺乏对山银花的鉴定项目。因此导致对该药品的质量控制不够全面和准确，从而造成隐患。
风寒感冒颗粒质量标准的研究(中成药，2006.11.28)公开了甘草的鉴别方法，利用甘草对照药材作为对照、醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)作为展开剂对甘草进行薄层鉴别；中国药典2010年版一部公开了艾片的鉴别方法，是用龙脑对照品作为对照、石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(4:1)作为展开剂对艾片进行薄层鉴别，以聚乙二醇20000(PEG-20M)为固定相对艾片进行含量测定；项凌飞等在毛细管气相色谱法对百树真油中多种成分的含量测定(药物分析杂志，2009，29(7))一文中，公开了采用PEG-20M为固定相对百树真油中桉油精、薄荷脑、龙脑等进行含量测定；胡玉良等在金菊五花茶颗粒的质量标准研究(今日药学，2008年17卷第1期)一文中，公开了山银花对照药材作为对照、正丁醇-三乙胺-甲醇-水(10:5:3:5)作为展开剂对山银花进行薄层鉴别；杨白玉等在复方金银花颗粒质量标准的研究(人参研究，2013年第4期)一文中，公开了灰毡毛忍冬皂苷乙对照品作为对照、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)作为展开剂对山银花进行检查。以上文献虽然报道了甘草、艾片和山银花的鉴别方法，但是这些药材作为药物组成的一部分，还需要考虑不同药品中不同药材的相互干扰，因此对口鼻腔喷雾剂的鉴别或含量测定按照上述方法进行操作，出现或阴性干扰，或分离较差，或专属性不强等现象，因此对口鼻腔喷雾剂的检测不能满足要求。
发明内容
为了克服现有检测技术的不足，本发明的目的在于提供一种口鼻清喷雾剂的检测方法，包括性状、鉴别、检测和含量测定；该方法能全面有效的控制口鼻清喷雾剂的质量，从而确保该药品用药安全性。
为了实现上述的发明目的，本发明提供以下技术方案：
口鼻清喷雾剂的检测方法，由性状、鉴别、检查、含量测定组成，其特征在于：所述鉴别是以绿原酸对照品作对照、以二乙酸丁酯：甲酸：水＝5-9：2-3：2-3的上层溶液为展开剂对该处方所含抗炎成份绿原酸进行薄层鉴别，以甘草对照药材作对照、以乙酸乙酯:冰醋酸:甲醇：水＝10-20:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3为展开剂对甘草进行薄层鉴别，以山银花对照药材作对照、以甲醇:三氯甲烷:正丁醇：甲酸＝2-6:2-4:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂对山银花进行薄层鉴别，以龙脑对照品作对照、以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相对艾片进行气相色谱鉴别；含量测定是照中国药典高效液相色谱法，以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相，对西南黄芩中的黄芩苷进行测定。
上述口鼻清喷雾剂的检测方法，其中鉴别是这样的：
甘草的鉴别：
取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取2-4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加40-60％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用40-60％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取25-35分钟，用乙酸乙酯提取2-4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝10-20:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选地，甘草的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加50％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用50％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝15:1:1:2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
艾片的鉴别：
色谱条件：
a、固定相为聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；
b、柱温为程序升温，初始温度为55-65℃，维持2-3分钟，以8℃/min速率升温至170℃，维持5-10分钟；
c、进样方式为分流，分流比为50:1；
对照品溶液的制备：取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
进一步地，所述气相色谱的进样口温度为200～205℃，检测器温度为250～255℃，气相色谱的载气为氮气，流速为2ml/min。
优选地，艾片的鉴别方法如下：
色谱条件：
a、固定相为聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；
b、柱温为程序升温，初始温度为60℃，维持2分钟，以8℃/min速率升温至170℃，维持5分钟；
c、进样方式为分流，分流比为50:1；
对照品溶液的制备：取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
山银花的鉴别：
取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取2-3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2-3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30-40min，放冷、离心处理3-8min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2-3次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝2-6:2-4:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30-40分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选地，山银花的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30min，放冷、离心处理5min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明利用气相色谱法对艾片进行鉴别，此方法专属性强，重现性良好，阴性对照无干扰，可以作为口鼻清喷雾剂艾片鉴别质量控制依据；通过对甘草的鉴别项目的改进，展开剂展开之后斑点完全分开，显色明显，鉴别效果更加明显；增加的山银花的鉴别项目，可以更好的控制该品种质量，可以有效的监督生产，保证产品质量的稳定，患者用药更加安全。
为了研究口鼻腔喷雾剂的检测方法，申请人进行了大量的实验以筛选最佳方案，具体如下：
1、甘草鉴别方法研究
1.1提取方法研究
现有技术中，甘草鉴别一般用乙酸乙酯提取，但样品背景色太深，会影响观察，拟采用中性氧化铝再次吸附去除背景色。所以选择下列提取方法：
取口鼻清喷雾剂20ml，加入乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加50％乙醇2ml溶解后过中性氧化铝柱(氧化铝6g，柱子内径15mm)，用50％乙醇溶液30ml洗涤，收集洗涤液，蒸干。残渣加甲醇1ml使溶解得到供试品溶液。
对照品溶液：参考口鼻清喷雾剂的制法，药材先水煮再提取，即：取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取30min，自前述“用乙酸乙酯提取3次起”同法制成对照药材溶液。
1.2展开剂选择
展开剂1——乙酸乙酯-冰醋酸-甲醇-水＝15∶1∶1∶2；展开剂2——石油醚(30-60℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸＝10∶20∶7:2(原标准)；展开剂3——醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水＝15:1:1:2；展开剂4——三氯甲烷-甲醇-冰醋酸＝5∶1∶1。结果显示，除展开剂1以外，其余系统结果显示斑点不清晰、斑点Rf值较低，或荧光斑点之间互相干扰。
对展开剂1进行进一步的考察，发现乙酸乙酯:冰醋酸:甲醇：水＝10-20:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3范围内，斑点分离度较好，较清晰，其中乙酸乙酯:冰醋酸:甲醇：水＝15:1:1:2斑点分离度最好，显色清晰，且斑点较多。
通过上述方法比较，以乙酸乙酯:冰醋酸:甲醇：水＝15:1:1:2为展开剂；选择供试品溶液过中性氧化铝去除背景干扰后用2、4-二硝基苯肼显色，方法简单，节约成本，易点样，斑点清晰，故选用。
1.3鉴别方法验证：
对修改后的甘草进行方法学验证，从专属性、耐用性(薄层板、温度、湿度)方面进行考察，结果显示斑点分离好，阴性无干扰。
2、艾片鉴别方法研究
2.1仪器与试药
主要仪器：安捷伦7890A气相色谱仪。
色谱柱：中汇达PEG-20M(交联)，规格30m*0.32mm*0.5μm。
主要试剂与试药：龙脑对照品(110881-200706，来源中国样品生物制品鉴定所)；所有样品均为贵州神奇药业有限公司自制产品(规格10ml)；环己烷：批号0910104，分析纯，天津富宇精细化工有限公司。
2.2色谱条件与系统适用性试验
以聚乙二醇20000(PEG-20M)为固定液；初始温度为60℃，维持2分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持5分钟；进样口温度200℃，检测器温度250℃；载气为氮气，流速为2ml/min；分流进样，分流比50:1。进样1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。
2.3溶液制备
2.3.1对照品溶液的制备
称取龙脑对照品(110881-200706，含量99.2％)12.61mg，精密称定，置25ml量瓶中，加环己烷溶解制成1ml含0.5004mg的溶液，作为对照品溶液；
2.3.2供试品溶液及阴性样品的制备
取本品5ml，置分液漏斗中，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液。按供试品溶液的制备方法同法制得阴性样品溶液。
2.4专属性试验
取溶剂、阴性样品、供试品及对照品溶液，按上述色谱条件进行检测，环己烷溶剂对检测无干扰；阴性样品未见艾片峰干扰；测定样品中艾片峰的保留时间，与对照品中艾片峰的保留时间一致，且艾片与相邻杂质峰分离度符合规定，见表1。
表1各组分保留时间及分离度测定结果
2.5耐用性试验
2.5.1色谱柱固定液的选择
参照《中国药典》2010年版一部82页艾片含测项下方法，以聚乙二醇20000(PEG-20M)为固定液。
2.5.2提取溶剂的选择：
本品为复方制剂，考虑阴性干扰及样品相邻杂质峰的分离度，故用溶剂提取分离方法，对比乙酸乙酯和环己烷溶液。结果：以乙酸乙酯为溶剂，阴性在对照品保留时间的相应位置有干扰峰，样品杂质峰较多；以环己烷为溶剂，阴性在对照品保留时间的相应位置无峰，样品杂质峰较少，可以减少对色谱柱及检测器的污染。所以选择环己烷为提取溶剂。
2.5.3色谱条件的选择
本品为复方制剂，考虑用分流进样的方式，用毛细管柱程序升温的方法进行分析。
2.5.3.1分流比
将分流比分别设置为4∶1，10∶1，50∶1三个参数。
结果：分流比4∶1和10∶1时阴性样品在对照品的相应位置检出峰，增大分流比50∶1时，阴性样品在对照品的相应位置未检出峰，故选择分流比为50∶1进行试验，见表2。
表2分流比对比试验
2.5.3.2初始温度的选择
对比60℃、80℃、100℃。初始温度保持2分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持5分钟。
结果：阴性样品均无干扰，初始温度60℃时，艾片峰的理论塔板数最高，故选择起始温度60℃，见表3。
表3初始温度的对比试验
2.5.3.3：升温速率的对比
每分钟5℃、8℃。初始温度60℃，维持2分钟，然后以不同的速率升温至170℃，维持5分钟。
结果：阴性样品均无干扰，升温速率每分钟8℃时，艾片峰的理论塔板数较高，而且能缩短分析时间，故选择每分钟8℃，见表4。
表4升温速率的对比试验
2.5.3.4对比不同厂牌及规格的柱子
使用中汇达、中科安泰两个厂牌的不同规格的柱子进行试验，阴性样品均无干扰，分离度均符合规定。结果表明：该方法耐用性试验良好。具体数据如下：见表5。
表5对比不同厂牌不同规格的柱子
2.6样品艾片鉴别测定结果
取口鼻清喷雾剂样品，批号：150501、150502、150503、150701、150702、150703，按修订方法测定，结果：阴性样品无干扰，在供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
上述各项试验结果表明，此方法重现性良好，阴性对照无干扰，故拟将此方法列入口鼻清喷雾剂质量标准，作为口鼻清喷雾剂艾片鉴别质量控制提供依据。
2.7鉴别方法验证：
对修改后的艾片进行方法学验证，从专属性、耐用性(薄层板、温度、湿度)方面进行考察，结果显示斑点分离好，阴性无干扰。
3、山银花鉴别方法研究
3.1提取方法研究
方法一：取本品10ml加入乙酸乙酯振摇提取2次每次15ml。弃去乙酸乙酯层，水层用水饱和正丁醇振摇提取2次每次15ml。合并正丁醇溶液用30ml氨试液洗涤，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
方法二：方法同上，其中提取溶剂为甲醇，提取后用氨试液洗涤；
方法三：方法同上，其中提取溶剂为三氯甲烷，提取后用氨试液洗涤。
结果表明，采用方法一对口鼻清喷雾剂进行提取，有效成分得到充分有效的溶出，故选择方法一。
3.2展开剂选择
展开剂1——甲醇—三氯甲烷—正丁醇—甲酸＝4:3:1:1；展开剂2——正丁醇-三乙胺-甲醇-水＝10:5:3:5；展开剂3——三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水＝15:40：22:10；展开剂4——三氯甲烷-甲醇-水＝15∶25∶10。结果显示，除展开剂1以外，其余系统结果显示显色不清晰、斑点Rf值较低，或阴性有干扰。
对展开剂1进行进一步的考察，发现甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝2-6:2-4:0.5-1.5:0.5-1.5范围内，斑点分离度较好，较清晰，其中甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1斑点分离度最好，显色清晰。
通过上述方法比较，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1为展开剂；口鼻清10ml加入乙酸乙酯振摇提取2次每次15ml，弃去乙酸乙酯层，水层用水饱和正丁醇振摇提取2次每次15ml；合并正丁醇溶液用30ml氨试液洗涤，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，方法合理，易点样，斑点清晰，故选用。
3.3鉴别可行性考察
3.3.1温度对薄层色谱的影响试验
按照实施例中山银花鉴别的操作方法在58％的相同湿度条件，0℃、23℃、40℃不同温度条件下的展开，计算所得的薄层色谱比移值(Rf)分别为0.4210、0.4159、0.5195。在不同温度条件下主斑点分离良好，Rf值差别不大，所以温度对该展开系统的影响很小。
3.3.2湿度对薄层色谱的影响试验
按照实施例中山银花鉴别的操作方法在23℃的相同温度条件，18％、58％、88％不同湿度条件下的展开，计算所得的薄层色谱比移值(Rf)分别为0.3590、0.4156、0.5263。当18％、58％的湿度时，主斑点分离良好，88％的湿度时，拖尾严重，痕迹为长条型，各斑点无法分开，所以在进行该方法操作时，尽量将湿度控制在18-58％之间。
3.3.3点样量对薄层色谱的影响试验
按照实施例中山银花鉴别操作方法的基础上，将对照品溶液的点样量分别设定为1μl、3μl、5μl、10μl；将供试品溶液的点样量分别设定为5μl、10μl、15μl、20μl；所得的展开结果可以看出，当点样量为5μl时，主斑点清晰度和分离度效果最好。
3.3.4点样后的薄层板板预饱和对薄层色谱的影响试验
按照实施例中山银花鉴别操作方法的基础上，将薄层板的预饱和时间分别设置为0min、30min，所得的展开结果可以看出，相同条件下预饱和后的色谱图分离度更好，不经过预饱和的色谱图各斑点之间互相干扰，无法进行鉴别。
具体实施方式
下面进一步描述本发明的技术方案，但要求保护的范围并不局限于所述。下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述。
实施例1
口鼻清喷雾剂的检测方法，步骤如下：
性状：本品为橙红色的液体，味微苦；
鉴别：(1)取本品10ml，浓缩至2ml，加甲醇5ml，振摇，放置12小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯：甲酸：水＝7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品20ml，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加50％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用50％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝15:1:1:2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取本品5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；另取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录气相色谱法试验，以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度为60℃，维持2分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持5分钟；分流进样，分流比50:1；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定；供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；
(4)取本品10ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30min，放冷、离心处理5min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：喷射试验：每瓶每揿喷射量为0.1g～0.5g；
其他符合中国药典一部喷雾剂项下有关的各项规定；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相；检测波长为278nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2600；
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密量取本品2.5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2
口鼻清喷雾剂的检测方法，步骤如下：
性状：本品为橙红色的液体，味微苦；
鉴别：(1)取口鼻清喷雾剂10ml，浓缩至2ml，加甲醇5ml，振摇，放置12小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯：甲酸：水＝7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加60％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用60％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取25分钟，用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝10:0.5:0.5:1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；另取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录气相色谱法试验，以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度为55℃，维持3分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持8分钟；分流进样，分流比50:1；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定；供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；
所述气相色谱的进样口温度为200～205℃，检测器温度为250～255℃，气相色谱的载气为氮气，流速为2ml/min；
(4)取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流40min，放冷、离心处理3min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝2:4:0.5:1.5为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：喷射试验：每瓶每揿喷射量为0.1g～0.5g；
其他符合中国药典一部喷雾剂项下有关的各项规定；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相；检测波长为278nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2600；
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密量取本品2.5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例3
口鼻清喷雾剂的检测方法，步骤如下：
性状：本品为橙红色的液体，味微苦；
鉴别：(1)取口鼻清喷雾剂10ml，浓缩至2ml，加甲醇5ml，振摇，放置12小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯：甲酸：水＝7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加40％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用40％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取35分钟，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝20:1.5:1.5:3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；另取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录气相色谱法试验，以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度为65℃，维持2分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持10分钟；分流进样，分流比50:1；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定；供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；
所述气相色谱的进样口温度为200～205℃，检测器温度为250～255℃，气相色谱的载气为氮气，流速为2ml/min；
(4)取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30min，放冷、离心处理8min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取3次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝6:2:1.5:0.5为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡40分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：喷射试验：每瓶每揿喷射量为0.1g～0.5g；
其他符合中国药典一部喷雾剂项下有关的各项规定；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相；检测波长为278nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2600；
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密量取本品2.5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例4
取批号为150703的样品，按照实施例1-3的方法进行检测，结果如下表6。
表6样品质量测定结果
与现有技术相比，本发明所采用的方法科学合理，准确度高，重现性好，易于鉴别的测定，能全面有效地控制口鼻清喷雾剂的质量，能更好的确保该制剂的临床疗效及安全性。

Claims (10)

1.口鼻清喷雾剂的检测方法，由性状、鉴别、检查、含量测定组成，其特征在于：所述鉴别是以绿原酸对照品作对照、以二乙酸丁酯：甲酸：水＝5-9：2-3：2-3的上层溶液为展开剂对该处方所含抗炎成份绿原酸进行薄层鉴别，以甘草对照药材作对照、以乙酸乙酯:冰醋酸:甲醇：水＝10-20:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3为展开剂对甘草进行薄层鉴别，以山银花对照药材作对照、以甲醇:三氯甲烷:正丁醇：甲酸＝2-6:2-4:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂对山银花进行薄层鉴别，以龙脑对照品作对照、以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相对艾片进行气相色谱鉴别；含量测定是照中国药典高效液相色谱法，以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相，对西南黄芩中的黄芩苷进行测定。
2.根据权利要求1所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：甘草的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取2-4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加40-60％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用40-60％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取25-35分钟，用乙酸乙酯提取2-4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝10-20:0.5-1.5:0.5-1.5:1-3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求2所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：甘草的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加50％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用50％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝15:1:1:2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：艾片的鉴别方法如下：
色谱条件：
a、固定相为聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；
b、柱温为程序升温，初始温度为55-65℃，维持2-3分钟，以8℃/min速率升温至170℃，维持5-10分钟；
c、进样方式为分流，分流比为50:1；
对照品溶液的制备：取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱的进样口温度为200～205℃，检测器温度为250～255℃，气相色谱的载气为氮气，流速为2ml/min。
6.根据权利要求4或5所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：艾片的鉴别方法如下：
色谱条件：
a、固定相为聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；
b、柱温为程序升温，初始温度为60℃，维持2分钟，以8℃/min速率升温至170℃，维持5分钟；
c、进样方式为分流，分流比为50:1；
对照品溶液的制备：取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的对照品溶液；
供试品溶液的制备：取口鼻清喷雾剂5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。
7.根据权利要求1所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：山银花的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取2-3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2-3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30-40min，放冷、离心处理3-8min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2-3次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝2-6:2-4:0.5-1.5:0.5-1.5为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30-40分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.根据权利要求7所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：山银花的鉴别方法如下：
取口鼻清喷雾剂10ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30min，放冷、离心处理5min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9.根据权利要求1-8任一项所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：检测方法如下：
性状：本品为橙红色的液体，味微苦；
鉴别：(1)取本品10ml，浓缩至2ml，加甲醇5ml，振摇，放置12小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯：甲酸：水＝7∶2.5∶2.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品20ml，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，加50％乙醇2ml溶解后过氧化铝6g、柱子内径15mm的中性氧化铝柱，用50％乙醇溶液30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，加水20ml加热回流提取30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：冰醋酸：甲醇：水＝15:1:1:2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干；喷以2,4-二硝基苯肼乙醇溶液，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)取本品5ml，用环己烷20ml振摇提取，静置，分取环己烷溶液作为供试品溶液；另取龙脑对照品，加环己烷制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典一部附录气相色谱法试验，以聚乙二醇20000即PEG-20M为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温：初始温度为60℃，维持2分钟，然后以每分钟8℃的速率升温至170℃，维持5分钟；分流进样，分流比50:1；分别吸取对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定；供试品色谱中，应呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；
(4)取本品10ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水液用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取山银花对照药材1g，加水50ml回流30min，放冷、离心处理5min，分取上清液，自“用乙酸乙酯振摇提取2次”起同法制成对照药材溶液；照中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以甲醇：三氯甲烷：正丁醇：甲酸＝4:3:1:1为展开剂，将点样后的薄层板放在双槽展开箱一侧，把展开剂加入另一侧，密闭，展开前将薄层板与展开箱同时预平衡30分钟后，展开，取出，晾干；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：喷射试验：每瓶每揿喷射量为0.1g～0.5g；
其他符合中国药典一部喷雾剂项下有关的各项规定；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％磷酸＝50∶50为流动相；检测波长为278nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2600；
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：精密量取本品2.5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.根据权利要求9所述的口鼻清喷雾剂的检测方法，其特征在于：所述含量测定中，口鼻清喷雾剂每1ml含西南黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不少于0.20mg。
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