CN105543124A - 链霉菌lc-7菌株及其产生的抗生素在防治烟草青枯病中的应用 - Google Patents

链霉菌lc-7菌株及其产生的抗生素在防治烟草青枯病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株生防放线菌：链霉菌LC-7，以及其制备抗烟草青枯病菌剂方面的应用，本发明通过在恩施州健康烟田中取土样、筛选、分析、培养后得到一株生防链霉菌LC-7，该菌株可产生氨基糖苷类抗生素，该抗生素分子量为364，并通过田间实验验证：链霉菌LC-7防治烟草青枯病效果好，针对性强，无污染，制成菌剂后可长期保存，方便于田间应用，进一步丰富了放线菌生防菌研究领域的成果，对烟草青枯病的防治具有指导意义。

Description

链霉菌LC-7菌株及其产生的抗生素在防治烟草青枯病中的应用
技术领域
本发明具体涉及一种生防链霉菌LC-7和该菌株产生的氨基糖苷类抗生素，以及在制备抗烟草青枯病菌剂中的应用，属于农业微生物学技术及生物防治技术领域。
背景技术
能有效控制植物病害的放线菌主要是链霉菌属(Streptomyces)(魏艳2000)。放线菌的孢子具有极强的抗逆性，可产生多种抗生素(梁亚萍等2007)。放线菌一般通过两种途径对致病菌发挥生防作用，一方面能够在寄主植物组织内诱发抑菌物质的产生或者产生抗性影响病原菌的生长、繁殖，最后导致致病菌死亡，同时放线菌的某些代谢物质还可促进植物生长，从而有效的错开了致病菌对寄主植物的最适侵染时期而达到防病效果(姜钰等2005)。另一方面可以通过抗生作用(Manulisetal1998)、竞争作用(祈碧菽等2000)降低病原菌的致病性、侵染效率以及接种菌体密度，导致病原菌群体密度以及致病性下降，从而达到防治的效果。
用放线菌菌体制成的粉剂具有环境友好、不伤害非靶标物质、效果持久等优点。在我国应用最早也最广泛的抗生菌剂为“5406”，该菌剂主要成分为细黄链霉菌(Streptomycesmicroflavus)(尹莘耘1983)，可以分泌多种抗生素和激素，不仅能够抑制植物病原菌生长，还能分泌激素促进植物生长。将“5406”活菌制剂施入土壤中，能够促进植物细胞分裂，有效增强植物的防病能力，达到增产、增收的效果，在防治土传病害方面十分有效(峥嵘2006)。从健康烟田土壤分离出娄彻氏链霉菌(Streptomycesrochei)，当其与其他生防菌剂连同有机肥一起施用于田间时，娄彻氏链霉菌可以通过控制土壤微生物区系的结构来控制烟草青枯病(Liuetal2013)。
抗生素是指在低微浓度下能抑制或影响活的有机体生命过程的次生代谢产物。其产生菌有放线菌、真菌和细菌，其中大多数为放线菌。放线菌产生了数量和品种最多的抗生素(约6000种)，其中，链霉菌属就能够产生1000多种抗生素。形成孢子的杆菌和假单胞菌也产生1000余种抗生素。这些抗生素在工业、医学领域有着广泛的应用，在农业生物防治中也起着至关重要的作用。
较早运用于农业生物防治的抗生素有链霉素、土霉素等，之后又相继开发出抗菌素A、灭瘟素、稻纹散、米多霉素、春日霉素、多氧霉素等多种农用抗生素(蒋细良和谢德龄1994)。我国也有诸如井冈霉素、春雷霉素、多抗霉素和武夷霉素等多种高效杀菌农用抗生素被大量研制开发，对我国粮食生产具有重要意义(沈寅初1996，朱昌雄2002)。农用硫酸链霉素是应用较为广泛的防治植物细菌性病害的抗生素。
抗生素要表现出活性，必须能被适当地摄入生物体内或粘附于体表物理性地结合于细胞结构(靶分子)，在分子水平上干扰某一基本代谢过程，并抑制细胞生长。现将研究的比较清楚的抗生素作用机理阐述如下：作用于病原菌细胞壁，如多氧霉素；作用于菌体细胞膜，如匹马霉素等多烯类抗生素；作用于蛋白质合成系统，如链霉素；作用于能量代谢系统，如井冈霉素；抑制核酸合成，如灰黄霉素；作用于神经系统，如阿维菌素；作用于呼吸代谢途径，如万隆霉素；通过提高植物的抗病力而防病治病，如宁南霉素(陈敏纯2011)。
农用链霉素容易被植物吸收，从而产生抑菌效果，因此被大量应用。目前市场上出现了许多不同种类的农用链霉素，其室内毒力测定对青枯雷尔氏菌的抑制效果较好，但在田间防治效果不甚理想(蒋承耿等2013)。究其原因抗生素类物质易吸附但是不稳定，于田间使用达到一定温度时抗生素容易降解而失效。因此，链霉素与其他制剂一起混用，互补长短，可能效果会更好(叶建如等2013)。而单一抗生素类物质的长期使用，易导致青枯雷尔氏菌产生耐药性，防治效果逐渐丧失(陈志敏等2012)。这些都是无法避免的问题，但可以通过与其他菌剂的间隔使用尽量缓解。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有化学杀菌剂效率低、针对性弱、污染大等缺陷，提供一株生防放线菌：链霉菌LC-7，以及其在制备抗烟草青枯病菌剂方面的应用。
本发明提供一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于：所述链霉菌的分类命名为链霉菌Streptomycessp.LC-7，保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNO：M2015593；所述的链霉菌LC-7菌株基因序列为：
TATTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTTCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATAATACTCCTGCCTGCATGGGCGGGAGTTGAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGGCCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGGCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCACACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAAAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCATAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGAGGCTTAACCTCGGGTCTGCATTCGATACGGGCTAGCTAGAGTGTGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCACATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCATTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGTGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTACACGTTGGGAACTAGGTGTTGGTGACATTCCACGTCGTCGGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCACCTGTGGAGTACGGCCGCAAGGCTACAACTCAAATGAATAAACGGGGGCCCGCGCAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTGGATGCAACGCGAAGAACCTTATCAAGGCTTGACATATACCCGAAAGCATTAGAGATAGTGCCCCCCTTGTGGTCGTTATACACATGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGTGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGCGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCCCA
本发明一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于在制备抗烟草青枯病菌剂中的应用。
本发明一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于链霉菌LC-7菌株的青枯病防治使用方法：将链霉菌LC-7培养后，获得的发酵液，对烟草苗进行茎基部喷淋，单株烟草苗所喷淋的发酵液含有的链霉菌LC-7数量大于等于107CFU/ml。
所述链霉菌LC-7的保藏日期为2015年10月9日，保藏单位地址为湖北省武汉市洪山区八一路武汉大学中国典型培养物保藏中心。
本发明一种链霉菌LC-7菌株，链霉菌LC-7产生的氨基糖苷类抗生素及其在制备抗烟草青枯病药剂中的应用。
本发明的有益效果：提供了一株生防放线菌：链霉菌LC-7以及其在防治烟草青枯病方面的应用，本发明通过在恩施州健康烟田中取土样、筛选、分析、培养后得到一株链霉菌LC-7，并通过田间实验验证：上述链霉菌使用时，防治烟草青枯病效果好，针对性强，无污染，方便于田间应用，进一步丰富了放线菌生防菌研究领域的成果，对以后烟草青枯病的防治具有指导意义。
本发明一种链霉菌LC-7菌株与现有技术相比，本发明具有以下优点：随着抗生素研究的发展，新的抗生素和基于原有抗生素进行结构改造产生的衍生物是目前抗生素研究的主要方向，氨基糖苷类抗生素近年发展形势较好，前有链霉素、卡那霉素、庆大霉素等，后有西索米星等。本发明的抗生素是一类新型氨基糖苷类抗生素，其对青枯雷尔氏菌具有较强的抑制作用，能够应用于烟叶生产，为烟草青枯病的生物防治提供新的药剂。
附图说明
图1为健康烟田土样中筛选的放线菌菌株照片。
图2为链霉菌LC-7形态。A：菌落形态；B：菌丝形态；C：孢子形态。
图3为链霉菌LC-7菌株抑制青枯雷尔氏菌的生长。
图4为抗生素的捷克八溶剂系统图谱。
图5为抗生素的晶体。
图6为抗生素的质谱图。
图7为抗生素的热稳定分析。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。
本发明实施例所述技术方案，如未特别说明，均为常规技术，所用试剂如未特别说明，均来源于商业化渠道。
实施例1制备一种放线菌LC-7
1、放线菌的筛选
从恩施州健康烟田中采集烟草根际土壤，称取5克土样放于含15-20个小玻璃珠无菌150ml三角瓶中，加入45ml无菌水后将三角瓶在室温下摇振20min，所得土壤悬液即为10-1稀释梯度的土壤浸液。再用1ml灭菌移液枪吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液，取100μl浓度为10-2-10-4的土壤浸液，用涂布棒分别均匀地涂于含有50μg/ml重铬酸钾的高氏一号培养基平板上。放置20min后将培养皿翻转，28℃下培养5d。挑取平板上的单菌落保存，分离的放线菌见图1(图中GF-7、H1、GF-8、FP1-10、GF-10、LC-7是从健康烟田土样中筛选的放线菌菌株)。
2.青枯雷尔氏菌拮抗放线菌的筛选
采用平板喷雾法筛选对青枯雷尔氏菌具有拮抗效果的放线菌。将之前土壤浸液涂布平板获得的放线菌单菌落点接至PDA平板中央，倒置放入28℃培养箱3d。然后将培养至对数期的青枯雷尔氏菌喷雾至放线菌长好的平板上。倒置放入28℃培养箱，24h后观察抑菌圈直径大小。抑菌圈越大抗菌效果越好，LC-7菌株对青枯雷尔氏菌的抗性最强，抑菌圈直径为60mm(图2)。
3.放线菌鉴定
对检测到显著抗菌活性的放线菌进行16SrRNA和形态鉴定。以高氏一号液体培养基培养48h分离到的放线菌，用常规方法提取放线菌的基因组DNA，以16SrRNA的通用引物(primerF：AAGGAGGTGATCCAGCCGCA；primerR：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG，由北京奥科生物技术有限公司合成)进行PCR，PCR反应体系为：双蒸水19μl，10×PCR缓冲液2.5μl，正反引物，dNTP各1μl，Taq酶0.5μl。反应程序：94℃3min，再30循环的94℃30s，55℃30s，72℃2min，再72℃10min。0.8％琼脂糖电泳检测成功扩增到大小约为1.5kb的DNA片段，并由北京奥科生物技术有限公司进行序列测定后在NCBI中经Blast比较分析确定为链霉菌(Streptomycessp.)。链霉菌LC-7(Streptomycessp.LC-7)的菌学特征：链霉菌LC-7生长初期为白色，孢子产生后呈淡紫色(图2A)。采用插片法观察链霉菌自然生长状态，可见链霉菌LC-7的气生菌丝和基内菌丝(图2B)。气生菌丝较粗，颜色较深，基内菌丝较细，颜色较浅。孢子丝的形状为直形，孢子是杆状，其表面为褶皱状(图2C)。
实施例2链霉菌LC-7发酵液中抗菌物质的纯化
将链霉菌LC-7菌株发酵液抽滤，去除菌体，得到上清液，将上清液通过氯仿和正丁醇萃取，通过捷克八溶剂系统分析，初步判定该次级代谢产物属于碱性水溶性抗生素。这类抗生素纯化方法主要采用阳、阴离子交换。通过732型阳离子交换树脂，能够进一步纯化抗菌活性物质，去除带正电荷的杂质。通过201×4阴离子交换树脂，能够去除发酵液中的色素，使发酵液由初始的淡黄色变为无色。以薄层层析对抗菌物质进一步的纯化和分析，选择氯仿、甲醇和水的混合物(氯仿:甲醇:水＝6:4:1)为展开剂，用茚三酮显色法显色有紫红色斑点，表明该活性物质为氨基糖苷类抗生素。
以上所述的制备步骤，具体如下：
(1)发酵液的萃取
使用高氏一号培养基培养链霉菌LC-7菌株，发酵完毕后过滤去除发酵液中的杂质和菌体。将发酵液分别用三氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯等体积萃取3次，并将萃取相与萃余相分别在50℃条件下，旋转蒸发，待蒸干后分别加纯水溶解。将发酵液经真空旋转蒸发仪蒸干，得到的干物质以甲醇浸泡提取，甲醇的提取液再经真空蒸干，获得的固体物质以纯水溶解。
(2)捷克八溶剂系统纸层析
采用Doskochilova溶剂系统(周德庆1997)：(1)水饱和的正丁醇；(2)水饱和的正丁醇，内含2％对甲苯磺酸；(3)正丁醇:乙酸:水＝2:1:1；(4)水饱和的正丁醇，内含2％六氢吡啶；(5)以正丁醇饱和的0.5mol/L，pH7的磷酸缓冲液；(6)正丁醇饱和的水，内含2％对甲苯磺酸；(7)苯:甲醇＝4:1，本系统所用滤纸先用0.5mol/LpH7的磷缓冲液处理后晾干；(8)甲醇:水＝3:1，水内含3％NaCl，本系统所用滤纸先用5％Na2SO4处理晾干后使用。方法：层析实验是在层析用玻璃试管(0.25cm×20cm)中进行的，采用上行展层，点样量5μl。待溶剂接触滤纸(Whatman3MM色谱层析滤纸)后，即沿着滤纸带动样品向上移动，待溶剂到达前沿划线处时，取出晾干。用生物学显迹法把晾干后的层析纸条依次贴于琼脂平板上，使纸上相应部位的抗生素扩散渗入到培养基中，编号后用喉头喷雾器将青枯雷尔氏菌均匀喷洒至平板上，放置在28℃培养24h后取出，观察结果并测Rf值，重复3次。通过捷克八溶剂系统确定抗生素为氨基糖糖苷类(图4)。
(3)阳离子交换柱层析
732阳离子树脂用水浸泡2h后，减压抽去气泡，倾去水，再用大量无离子水洗至澄清，去水后加4倍体积2mol/L的HCl，搅拌4h，除去酸液，水洗至中性，再加4倍体积2mol/LNaOH，搅拌4h，除去碱液，水洗至中性，用4倍体积的2mol/LNaOH浸泡2h，转为Na+型装柱。采用湿法填充，排走柱中的空气，将树脂边搅拌边连续倒入柱中；待树脂自然沉降，打开柱下端的出口，使液体慢慢流出，柱上端徐徐下降至需要的高度；树脂表面平整，使其一直浸没在液体中，防止气泡的产生；装好层析柱后，用蠕动泵将去离子水压入层析柱，使其达到平衡，保持固定相高度恒定。上样：经过平衡的层析柱，当液体流到与柱床表面一致时再关闭出口管后上样。上样时用胶头滴管缓慢沿壁加入样品，样品为经过氯仿和正丁醇等体积萃取3次后的萃余相，打开出口管，待测样品的液面流到与树脂表面相平时，用滴管加入少量蒸馏水，当蒸馏水再次流到与树脂表面相平时再用滴管加满蒸馏水，开始洗脱。洗脱：用2-6％氨水梯度洗脱，分段收集洗脱液。将洗脱液50℃蒸干，纯水重溶。用滤纸片法检测各段洗脱液的抗菌活性。
(4)阴离子交换柱层析
用水浸泡，使201×4阴离子交换树脂充分膨胀并倾斜除去细小颗粒，用lmol/LNaOH浸泡8h，用水洗去碱液至中性；用lmol/LHCI浸泡4h，用水洗去酸液至中性；用0.5mol/L的NaOH处理成OH-型，然后用蒸馏水洗至中性。装柱时注意边搅拌边倒入层析柱中，待树脂缓慢沉降，打开柱下端出口，待柱内液面与树脂面平齐时，关闭柱下端出口管。上样：样品为上述阳离子交换树脂纯化浓缩后的样品，上样时注意不要冲动到树脂表面，打开出口管，待样品的液面流到与树脂表面相平时加去离子水洗脱，收集洗脱液。将洗脱液50℃真空旋转蒸干，纯水重溶。
(5)结晶
将1ml上述经过离子交换纯化后的样品用2mol/LH2SO4调pH值至8.5左右，然后按体积比1:1的比例加入无水乙醇，震荡混匀后置于4℃冰箱静置1h，醇沉。取出醇沉的样品，12000rpm/min，离心5min，收集上清液体置于干净的离心管中，而沉淀中则加入95％的乙醇洗涤1次；12000rpm/min，离心5min，再次收集上清，沉淀加中入75％的乙醇洗涤1次；12000rpm/min，离心5min，收集上清。将收集的上清液共10ml混匀以后，室温静置15min，可以发现有晶体析出。弃上清，将晶体和沉淀晾干，加入100μl纯水重溶。使用滤纸片法验证晶体和沉淀的活性，以青枯雷尔氏菌为检定菌。所得晶体(图5)即为氨基糖苷类抗生素。
(6)抗生素的质谱鉴定与分析
将结晶后的样品用1ml纯净水重溶，使用安捷伦公司HPLC-Q-TOFMS1260/G6540A正离子模式进行检测，离子源参数为气体温度350℃，气体流速9L/min，雾化器压力为0.2756MPa，参比m/z为121.0509和922.0098，质谱检测范围100-1700m/z，采集速率1.5spectra/sec。HPLC使用安捷伦C18反相柱(RR2.1×100mm3.5-Micron)，进样量1μl，流动相为5％乙腈，流速为0.3ml/min。将样品直接进行质谱分析，其分子量为364(图6)。
实施例3活性物质的热稳定性分析
将链霉菌LC-7发酵液于8000rpm/min，离心5min，过滤除菌。取10ml发酵液分别在40℃、50℃、60℃、80℃，水浴加热0.5h、1h、2h、3h、4h、5h。待自然冷却后各取10μl，用滤纸片法检测其对青枯雷尔氏菌的抗菌生物活性，以原始发酵液为对照，重复3次。
结果如图7所示，同一处理时间，随着温度的升高，LC-7的次级代谢产物的活性降低，温度越高活性降得越快。同一温度，随着处理时间的加长，次级代谢产物的活性降低。40-60℃处理后，抗菌活性略有下降；而在80℃及以上温度处理时，LC-7抗菌物质的活性下降显著。因此在进行旋转蒸发浓缩发酵液或抗菌活性物质时，以最大程度减小活性损失为原则，同时兼顾蒸发效率，选择于50℃进行蒸发。
实施例4活性物质MIC值的测定
MIC值即为活性物质的最小抑制浓度。将纯化的样品放置冷冻干燥机中冻干，取出后将冻干的样品进行定量，配制10mg/ml的样品母液，将母液依次进行稀释，稀释至浓度为10μg/ml、8μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.1μg/ml，采用滤纸片法检验各个浓度的活性，以青枯雷尔氏菌为检定菌，重复3次。
LC-7产生的碱性水溶性抗生素在浓度为10μg/ml、8μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml时都有抗菌生物活性，能够抑制青枯病原菌的生长，滤纸片周围能够产生可见的抑菌透明圈；当该抗菌物质浓度为1μg/ml以下时，则在平板上无法观测到明显的透明圈，说明抗菌物质浓度过低，抑菌活性较低。因此，在实验浓度范围内，对活性物质定性分析，经过纯化的样品其MIC值为2.5μg/ml。
试验例
2015年在宣恩县椒园镇凉风村开展田间试验。该试验地历年种植烟草，青枯病发生严重，土壤属黄棕壤，肥力中等，地势平坦，光照条件较好，海拔850m。供试品种为云烟87。将链霉菌LC-7挑取到PDA培养基中28℃，180rpm/min摇床培养120h，获得发酵液。对烟草苗进行茎基部喷淋，每棵烟草苗使用200mL发酵液。
试验共设置3个处理，即：处理1：72％硫酸链霉素稀释1000倍(河北三农农用化工有限公司)；处理2：链霉菌LC-7发酵液稀释50倍；处理3：CK(灌清水)；以上处理在烟苗移栽后10天、移栽后30天和50天进行根部灌淋。
在移栽后60天，调查各处理青枯病的发病情况，并计算发病率、病情指数、相对防效。结果见表1。
表12015年田间试验烟草青枯病发病率及生防菌的防效结果
烟草青枯病及其他病害的调查标准均参照中华人民共和国国家标准GB/T3222—2008。烟草青枯病病情分级标准(以株为单位)：
0级：全株无病；
1级：茎部偶有褪绿斑，或病侧二分之一以下叶片凋萎；
3级：茎部有黑色条斑，但不超过二分之一，或病侧二分之一至三分之二叶片凋萎；
5级：茎部黑色条斑超过二分之一，但未到达茎顶部，或病侧三分之二以上叶片凋萎；
7级：茎部黑色条斑到达茎顶部，或病株叶片全部凋萎：
9级：病株基本枯死。
序列表
<110>湖北省烟草公司恩施州公司，华中农业大学
<120>链霉菌LC-7菌株及其产生的抗生素在防治烟草青枯病中的应用
<130>
<141>2015-06-01
<160>2
<170>
<210>1
<211>1043
<212>DNA
<213>链霉菌(Streptomycessp.)
<220>
<221>gene
<222>(1)..(1043)
<223>
<220>
<221>rRNA
<222>(1)..(1043)
<223>
<400>
TATTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTTCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATAATACTCCTGCCTGCATGGGCGGGAGTTGAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGGCCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGGCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCACACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAAAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCATAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGAGGCTTAACCTCGGGTCTGCATTCGATACGGGCTAGCTAGAGTGTGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCACATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCATTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGTGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTACACGTTGGGAACTAGGTGTTGGTGACATTCCACGTCGTCGGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCACCTGTGGAGTACGGCCGCAAGGCTACAACTCAAATGAATAAACGGGGGCCCGCGCAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTGGATGCAACGCGAAGAACCTTATCAAGGCTTGACATATACCCGAAAGCATTAGAGATAGTGCCCCCCTTGTGGTCGTTATACACATGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGTGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGCGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCCCA

Claims (4)

1.一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于：所述链霉菌的分类命名为链霉菌Streptomycessp.LC-7，保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCCNO：M2015593。
2.按照权利要求1所述的一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于在制备抗烟草青枯病菌剂中的应用。
3.按照权利要求2所述的一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于链霉菌LC-7菌株的青枯病防治使用方法：将链霉菌LC-7培养后，获得的发酵液，对烟草苗进行茎基部喷淋，单株烟草苗所喷淋的发酵液含有的链霉菌LC-7数量大于等于107CFU/ml。
4.按照权利要求1所述的一种链霉菌LC-7菌株，其特征在于链霉菌LC-7产生的氨基糖苷类抗生素及其在制备抗烟草青枯病药剂中的应用。
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