CN105530919A - 哌嗪化合物的纳米颗粒组合物和制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及哌嗪化合物的储存稳定的纳米颗粒组合物。还描述了包含所述纳米颗粒组合物的药物组合物，其可用于治疗和预防增殖性疾病，包括癌症。

Description

哌嗪化合物的纳米颗粒组合物和制剂
技术领域
本发明涉及其中活性剂为哌嗪化合物的纳米颗粒组合物和包含所述纳米颗粒组合物的药物组合物。更具体地，本发明为包含1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的纳米颗粒组合物。所述组合物和制剂可用于治疗和预防增殖性疾病，包括癌症。
背景技术
在美国专利No.8,314,100中描述了1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪和相关化合物及衍生物，其通过引用整体并入本文。这样的化合物已显示出具有显著的抗肿瘤活性，但在水中的溶解性非常差。
在例如均关于″MethodofGrindingPharmaceuticalSubstances″的美国专利No.5,518,187和No.5,862,999、关于″ContinuousMethodofGrindingPharmaceuticalSubstances″的美国专利No.5,718,388、以及关于″ProcessofPreparingTherapeuticCompositionsContainingNanoparticles″的美国专利No.5,510,118中描述了制备纳米微粒组合物的方法。
发明概述
本发明涉及作为活性剂的哌嗪化合物和至少一种表面稳定剂的纳米颗粒组合物，所述哌嗪化合物例如1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪或如本文中别处所述的相关化合物及衍生物。
本发明还涉及制备本发明的纳米颗粒组合物的方法。这样的方法包括在足以提供纳米颗粒组合物的条件下使哌嗪化合物的颗粒大小减小一定时间以及使该化合物与至少一种表面稳定剂接触。一种或更多种表面稳定剂可以与所述哌嗪在哌嗪颗粒大小减小之前、期间或者之后接触。
本发明还涉及本发明纳米颗粒组合物和可药用载体以及任何可药用赋形剂的药物组合物。
本发明还涉及使用本发明药物组合物来治疗病症的方法，所述病症例如增殖性疾病或者与持续血管发生相关或由其触发的疾病。
在一些特定的实施方案中，本发明为稳定的组合物，其包含：
(a)式(1)化合物或其可药用盐的纳米颗粒，
其中
X和Y独立地为N或C-R7；
对于变量R1和R2的组合：
R1为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素并且R2为F；或者
R1为F并且R2为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素；
R3为C1-C3烷基；并且
R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6
卤代烷基、C1-C6烷基羰基、氰基、硝基或卤素；和
(b)至少一种表面稳定剂，其中所述纳米颗粒的有效中值颗粒大小(effectivemedianparticlesize，D50)小于约1,000nm。式(1)化合物可以是1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。所述至少一种表面稳定剂可以是至少一种聚环氧烷，例如聚环氧乙烷与聚环氧丙烷的嵌段共聚物。在一些实施方案中，所述至少一种表面稳定剂为泊洛沙姆(poloxamer)，例如泊洛沙姆407或泊洛沙姆338。在一些实施方案中，所述组合物为液体混悬液的形式。在另一些实施方案中，所述组合物为干燥固体的形式。在一些实施方案中，所述组合物在储存至少四周之后是稳定的。在另一些实施方案中，特别是以粉末形式的那些，所述组合物在储存至少6个月之后是稳定的。在一些实施方案中，所述有效中值颗粒大小小于约500nm。在所述组合物中式(1)化合物与表面稳定剂的比例(wt/wt)可以是约100∶1至约5∶1。
在另一个方面中，本发明为通过如下来制备如上所述组合物的方法：制备式(1)化合物或其可药用盐(例如，1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪)的颗粒和(b)至少一种表面稳定剂的混合物，并且在足以提供有效中值颗粒大小小于约1,000nm的纳米颗粒混悬液的条件下减小式(1)化合物的颗粒大小，以形成稳定的组合物。所述方法还可包括对纳米颗粒混悬液进行干燥以形成粉末的步骤，例如通过对冻结的混悬液进行冻干。所述方法还可以在所述混合物中包含水。所述混合物可以包含约5％至约50％的式(1)化合物和约0.1％至约5％的表面稳定剂，或者通常为固体形式的约75％至约90％的式(1)化合物和约10％至约25％的表面稳定剂。式(1)化合物与表面稳定剂的比例可以是约100∶1至约5∶1。可以通过研磨、均质化或沉淀来实现减小颗粒的大小，例如通过湿研磨。研磨可以是任何适合于提供期望大小的时间量，例如为约600分钟或约360分钟或其间的任何时间段。在减小所述颗粒的大小之后可以用溶剂(例如水)来稀释所述混悬液。也可以在减小所述颗粒的大小之后将泊洛沙姆溶液添加到所述混合物中。
在另一个方面中，本发明为包含如上所述的纳米颗粒组合物和至少一种可药用赋形剂的药物组合物。所述至少一种可药用赋形剂可以是例如水或羟丙基甲基纤维素。所述组合物可以是经口剂型或肠胃外剂型，并且可以包含例如约0.01mg至约250mg的式(1)化合物，并且可以包含例如约0.001％至约99.5％的式(1)化合物。
本发明还包括通过向有此需要的动物施用如上所述的组合物或药物组合物来治疗肿瘤的方法。
进一步的目标和优点以及优选实施方案的结构和功能将通过对说明书、附图和实施例的考虑而变得明显。
附图详述
图1：在400倍放大率下的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。
图2：在偏振光、400倍放大率下的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。
图3：1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的热重分析。
图4：1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的差示扫描量热法热图。
发明详述
以下详细讨论了本发明的实施方案。在描述一些实施方案时，为了清楚起见采用了特定的术语。然而，本发明并不旨在限于如此选择的特定术语。虽然对一些具体的示例性实施方案进行了讨论，但是应当理解，这样做仅是为了举例说明的目的。相关领域技术人员将认识到，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以使用其他组分和配置。本文中引用的所有参考文献通都过引用并入，如同每个已单独地并入。
式(1)的哌嗪化合物已表现出可用于治疗过度增殖性疾病，
其中
X和Y独立地为N或C-R7；
对于变量R1和R2的组合：
R1为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素并且R2为F；或者
R1为F并且R2为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素；
R3为C1-C3烷基；并且
R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基羰基、氰基、硝基或卤素；
例如，这样的化合物可用于治疗肿瘤，特别是肿瘤(或癌症和/或任何转移)。可使用式(1)化合物治疗的肿瘤包括以下肿瘤：乳腺癌、肺癌、胃肠癌(包括食管癌、胃癌、小肠癌、大肠癌和直肠癌)、胶质瘤、肉瘤(例如涉及骨、软骨、软组织、肌肉、血管和淋巴管的那些)、卵巢癌、骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、子宫颈癌、子宫内膜癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、输尿管癌、膀胱癌和尿道癌、结肠癌、结肠直肠癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和黑素瘤。使用式(1)化合物的有效治疗需要可将所述化合物递送至肿瘤的组合物。已经在体外针对癌细胞系对本发明的化合物进行了测试，并且所述化合物在癌细胞生长的抑制中表现出活性。例如，美国专利No.8,314,100描述了本发明的化合物对以下的活性：来自美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)(Manassas，VA)的人OVCAR-3(卵巢)、MCF-7(乳腺，激素依赖性)、MDA-MB-231(乳腺)、PC3(前列腺)、HepG2(肝)、A549(肺)、Caki-1(肾)、HT-29(结肠)、HCT116(结肠)和PANC-1(胰腺)；来自DSMZ(德国)的MKN-45(胃)；来自美国国家癌症研究所(Bethesda，MD)的UMRC2(肾)；来自韩国细胞系库(Seoul，韩国)的Huvec(人脐静脉内皮细胞)、HEK293(人胚肾)和SK-OV-3(卵巢)。
式(1)化合物的一个实例是1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪(化合物A)：
化合物A在水中的溶解性非常差，小于0.1μg/mL。在水中的溶解性差使得式(1)化合物及相关化合物难以递送并且限制了临床开发，因而产生了用于开发适用于临床使用之制剂的需要。本发明以获得适当的制剂(可在约100mg/mL的浓度下提供所述化合物的稳定混悬液)或者干燥制剂(可以经口递送或用于制备稳定混悬液)为目标进行了开发。尽管本发明主要针对1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪进行了描述和示例，但应当理解，本发明也适用于其他式(1)化合物。
为了提高生物利用度，本发明制剂以获得所述哌嗪化合物在混悬液中的亚微米颗粒大小分布为构思进行了开发，使用了通常认为是安全的(GRAS)最小量的赋形剂以减少在研究期间潜在的毒性干扰。原型制剂的测试制品将通过在最佳清洁条件下的放大过程来制成。此外，剩余的混悬液旨在用作未来工作(开发例如1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的固体剂型制剂)的基础。
本文中使用的“活性剂”、“药物”、“活性药物成分(ActivePharmaceuticalIngredient)”或者“API”是指式(1)化合物，
其中
X和Y独立地为N或C-R7；
对于变量R1和R2的组合：
R1为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素并且R2为F；或者
R1为F并且R2为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素；
R3为C1-C3烷基；并且
R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基羰基、氰基、硝基或卤素。式(1)化合物的示例性实施方案包括以下：
化合物 R1 R2 R3 R4 R5 R6 X Y
化合物A F H Me OMe H OMe C-H C-H
化合物B F H Me Me H Me C-H C-H
化合物C F H Me H H H C-OMe C-H
化合物D F H Me OMe H H C-H C-H
化合物E F H Me Me H H C-H C-H
化合物F F H Me Cl H H C-H C-H
所述活性剂可以是游离形式、或者可药用盐的形式、其可能的对映体、非对映体和相关的混合物、多晶型形式、无定形形式、部分无定形形式、溶剂化物(包括水合物)、其活性代谢物和前药。
本文中使用的“水溶性差”具有所属技术领域中通常的含义。例如，水溶性差可以意指在20℃下在水中的溶解度小于1％，例如，0.01％重量/体积，即如在Remington：TheScienceandPracticeofPharmacy，第19版，A.R，GennaroEd.，MackPublishingCompany，US，Vol.1，p.195(1995)中所描述的“微溶至极微溶的药物”。该术语涵盖了其他类似的普遍认可的定义。
通过“小于约1,000nm的有效中值颗粒大小”意指至少50％所述纳米颗粒活性剂颗粒的颗粒大小小于约1,000nm，如基于通过本领域技术人员公知的常规颗粒大小测量技术测量的重均颗粒大小所确定的。这样的技术包括光散射法、显微术以及其他常规技术，例如沉降场流动分级法、光子相关光谱法、光散射法和圆盘离心法。如将认识到的，涉及其他有效颗粒大小的类似术语具有类似的定义。平均值或平均颗粒大小可类似地确定。本领域技术人员将理解颗粒大小的名称和颗粒大小的其他描述。例如，中值D50描述了具有纳米颗粒活性剂颗粒群体的组合物，其中群体的一半的直径低于该值。类似地，D90描述了这样的群体，其中90％的直径分布具有较小颗粒大小并且10％具有较大颗粒大小。D10描述了这样的群体，其中10％的颗粒直径小于所述值并且90％的颗粒大于所述值。
本文中提供的纳米颗粒制剂或组合物的术语“有效量”或者“药物有效量”是指无毒的但是对于提供所期望的响应和相应治疗效果的纳米颗粒制剂或组合物的足够量，其量足以对对象产生治疗。如以下将要指出的，所需的确切量将随对象而变化，取决于物种、年龄和对象的一般状况、待治疗病症的严重程度、施用方式等。在任何个体病例中适当的“有效”量可以通过本领域普通技术人员使用常规实验来确定。
术语“可药用的”或“药理学上可接受的”是指不是在生物学上或其他方面不期望的材料，即，所述材料可以随纳米颗粒制剂或组合物施用于个体，而不引起任何不期望的生物学作用或者以有害的方式与包含在所述组合物中的任何组分相互作用的材料。
研究了作为用于实体瘤的抗癌治疗的活性药物成分(API)1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪以及本文中所述的相关化合物，所述活性药物成分在体外测试时具有很好地被肠道吸收的潜力并且在动物模型研究中表现出良好的经口生物利用度。由于1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪较差的水溶性，所以需要开发亚微米混悬剂的生产作为可行的经口递送选项，以避免施用大量1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪溶液从而实现预期的剂量水平的需要。
在一些示例性实施方案中，本发明是式(1)化合物的稳定纳米颗粒组合物的制剂，例如有效中值颗粒大小(D50)小于约1,000nm的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪(化合物A)和优选地至少一种表面稳定剂。所述组合物可以是通常在水中的混悬液的形式，或者可以是干燥粉末。在本发明的示例性实施方案中为干燥形式，所述纳米颗粒组合物可以再分散使得经再分散的式(1)化合物的有效中值颗粒大小小于约1,000nm。这在允许所述纳米颗粒化合物再分散到充分小的颗粒大小以提供与具有类似纳米颗粒大小的混悬液类似的益处方面很有意义。
在一些示例性实施方案中，无论是作为最初制备的、作为再分散的固体、或以固体形式，混悬液中的颗粒的有效中值颗粒大小可以是小于约1,000nm、小于500nm、小于约250nm或小于约100nm。在一些示例性实施方案中，无论是最初制备的或者作为再分散的固体、或以固体形式，混悬液中的颗粒的有效中值颗粒大小可以是小于约1000nm、小于500nm、小于约250nm或小于约100nm。在一些示例性实施方案中，中值或平均颗粒大小可以是例如约100nm至约1,000nm、约100nm至约500nm、约200nm至约1,000nm、约200nm至约500nm、约100nm至约200nm或者约250nm至约500nm。在一些示例性实施方案中，无论是作为最初制备的、作为再分散的固体、或以固体形式，混悬液中的颗粒的有效中值或平均颗粒大小可以是大于约100nm、大于约250nm或者大于约500nm的颗粒大小。
根据本发明，所述活性剂的存在量可以是所述组合物或制剂的干燥重量的按重量计约0.001％至约99.5％、约0.1％至约95％。在一些实施方案中，所述活性剂的存在量为所述组合物或制剂的干燥重量的约0.5％至约90％。在一些实施方案中，所述活性剂的存在量可以是约5％至约50％，例如约5％至约40％、约10％至约30％或约10％至约40％。在本发明的混悬液形式的一些实施方案中，所述活性剂的存在量可以是约5％至约50％，例如约5％至约40％、约10％至约30％或约10％至约40％。在另一些示例性实施方案中，所述活性剂的存在量可以是约75％至约99％，例如约75％至约90％、约80％至约99％或约90％至约99％。在干燥形式的组合物的另一些示例性实施方案中，所述活性剂的存在量可以是约75％至约99％，例如约75％至约90％、约80％至约99％或约90％至约99％。在干燥形式的组合物的另一些示例性实施方案中，所述活性剂的存在量可以是约75％、约80％、约90％、约95％或约99％。
包括不仅光学方法还有热方法的表征API的方法，与所有的研磨方法(包括相对低能量的那些)一样，可以产生颗粒水平的局部加热。热数据可用于确定在研磨应力下活性剂是否表现出对颗粒大小减小有害的任何热转变。
作为最简单和最实用的大小减小方法，选择介质研磨来启始本研究。在介质研磨中，所述API与研磨助剂(通常为表面活性剂)混合，并使用研磨介质(坚硬、惰性材料的球形珠)制成浆料。通过搅拌浆料经机械摩擦使颗粒破碎，或者通过低能量的方法例如使其在辊磨机上的容器内滚动，或者通过高能量的方法例如用旋转式搅拌器将其混合(称为轴式研磨)。
选择多个GRAS研磨助剂(因其经口剂型的适宜性)，并且测试其在不同浓度下使用不同水平的API的研磨效力。从这些开发样品中选择潜在的备选物，然后随时间监测颗粒大小的稳定性。按比例提高这些中的首要备选物并且用以处理批量的API用于在GLP最佳清洁条件下的毒性研究。
大小减小的其他方法(例如微流化和成核作用或者沉淀)被认为是经证明不成功的介质研磨的替代者并且可以在本发明的一些实施方案中使用。微流化包括在高压(高至25,000psi)下强制API的混悬液经过狭窄的孔口，使用这样产生的剪切力使颗粒破碎。为了通过沉淀减小颗粒大小，将所述API溶解在适当的溶剂中然后与可混溶的抗溶剂(其使溶液不稳定)组合，从而引起所述API沉淀。溶剂/抗溶剂组合的比率变化以及分离剂的添加和高能量的破坏可产生大小减小的颗粒。
在本发明中，选择辊式研磨来处理式(1)化合物(化合物A作为一个实例)，因为它是用于颗粒大小减小的不复杂的过程，其不仅导致高生产率(即使以小测试份量)，而且表现出人员接触到高度有效的API的最小可能性。使用无菌注射剂用水(SWFI)代替纯水以减少潜在的微生物污染。
表面稳定剂
可在本发明中使用的表面稳定剂包括但不限于已知的有机和无机药物赋形剂。这样的赋形剂包括多种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。表面稳定剂包括非离子型、阳离子型、阴离子型和两性离子型表面活性剂。非离子表面稳定剂的实例包括：乙氧基化脂族醇、聚氧乙烯表面活性剂、羧酸酯、聚乙二醇酯、脱水山梨醇酯及其乙氧基化衍生物、脂肪酸的二醇酯、羧酸酰胺、单烷醇胺缩合物和聚氧乙烯脂肪酸酰胺。阳离子表面稳定剂的实例包括：季铵盐、具有酰胺键的胺、聚氧乙烯烷基和脂环胺、N，N，N′，N′四取代的乙二胺和2-烷基-1-羟乙基2-咪唑啉。阴离子表面稳定剂的实例包括：羧酸盐、磺酸盐、石油磺酸盐、烷基苯磺酸盐、萘磺酸盐、烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐、硫酸盐、硫酸化天然油和硫酸化脂肪、硫酸化酯、硫酸化烷醇酰胺以及乙氧基化和硫酸化烷基酚。两性离子表面稳定剂的实例包括：N-椰油3-氨基丙酸/钠盐、N-牛油3-亚氨基二丙酸盐二钠盐、N-羧甲基-N-二甲基-N-9-十八烯基铵氢氧化物和N-椰油酰胺基乙基-N-羟基乙基甘氨酸钠盐。
表面稳定剂的代表性实例包括：泊洛沙姆(其为环氧乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物)、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、右旋糖酐、阿拉伯树胶、胆固醇、西黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇乳化蜡(cetomacrogolemulsifyingwax)、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚(例如，聚乙二醇醚如聚西托醇1000)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如，市售例如和(ICISpecialtyChemical))；聚乙二醇(例如，和(UnionCarbide))、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚聚合物与环氧乙烷和甲醛(也称为泰洛沙泊(tyloxapol)、superione和Triton)；以及泊洛沙胺(poloxamine)。
示例性表面稳定剂包括例如，泊洛沙姆105 泊洛沙姆108泊洛沙姆124泊洛沙姆184泊洛沙姆188泊洛沙姆237泊洛沙姆238泊洛沙姆338泊洛沙姆401泊洛沙姆407以及其他泊洛沙姆产品；例如，Tetronic904、Tetronic908、Tetronic1107和Tetronic90R4，其为来自向乙二胺的依次添加环氧丙烷和环氧乙烷的四官能嵌段共聚物(BASFWyandotteCorporation，Parsippany，N.J.)；Tetronic15080(T-1508)(BASFWyandotteCorporation)、TritonsX-2000，其为烷基芳基聚醚磺酸酯(RohmandHaas)；其为蔗糖硬脂酸酯与蔗糖二硬脂酸酯的混合物(CrodaInc.)；对异壬基苯氧基聚-(缩水甘油)，也称作或Surfactant10-Go(OlinChemicals，Stamford，Conn.)；CrodestasSL-400(Croda，Inc.)；以及SA90HCO，其为C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(EastmanKodakCo.)；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺，正癸基-β-D-吡喃葡糖苷，正癸基-β-D-吡喃麦芽糖苷，正十二烷基-β-D-吡喃葡糖苷，正十二烷基-β-D-麦芽糖苷，庚酰基-N-甲基葡糖酰胺，正庚基-β-D-吡喃葡糖苷，正庚基-β-D-硫葡糖苷，正己基-β-D-吡喃葡糖苷，壬酰基-N-甲基葡糖酰胺，正壬基-β-D-吡喃葡糖苷，辛酰基-N-甲基葡糖酰胺，正辛基-β-D-吡喃葡糖苷，辛基-β-D-硫代吡喃葡糖苷；PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌酶、乙烯基吡咯烷酮与乙酸乙烯酯的无规共聚物等。
可用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于：聚合物、生物聚合物、多糖、纤维素、藻酸盐、磷脂以及非聚合物化合物，例如两性离子稳定剂、聚-n-甲基吡啶、蒽基吡啶氯化物(anthryulpyridiniumchloride)、阳离子磷脂、壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯基咪唑、聚凝胺(polybrene)、聚甲基丙烯酸甲酯三甲基溴化铵(PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化铵(HDMAB)和聚乙烯吡咯烷酮-2-甲基丙烯酸二甲氨基乙酯硫酸二甲酯。在J.CrossandE.Singer，CationicSurfactants：AnalyticalandBiologicalEvaluation，MarcelDekker(1994)；P.andD.RubinghEd.，CationicSurfactants：PhysicalChemistry，MarcelDekker(1991)；和J.Richmond，CationicSurfactants：OrganicChemistry，MarcelDekker(1990)中描述了这样的示例性阳离子表面稳定剂和其他可用的阳离子表面稳定剂。
这些表面稳定剂中的大多数为已知的药物赋形剂并且在HandbookofPharmaceuticalExcipients中详细描述，该书由AmericanPharmaceuticalAssociation和ThePharmaceuticalSocietyofGreatBritain(ThePharmaceuticalPress，2000)联合出版，其通过引用明确地并入本文。所述表面稳定剂为市售的和/或可通过本领域已知的技术来制备。
在本发明中可使用多于一种的表面稳定剂的组合。示例性主要表面稳定剂包括但不限于：泊洛沙姆、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯基吡咯烷酮与乙酸乙烯酯的无规共聚物或者其组合。示例性次要表面稳定剂包括但不限于：月桂基硫酸钠和二辛基磺基琥珀酸盐。
在一些示例性实施方案中，所述至少一种表面稳定剂为泊洛沙姆。可用于本发明的示例性泊洛沙姆的分子量可以是约9,000至约20,000。在本发明中可以使用的具体示例性泊洛沙姆包括泊洛沙姆407和泊洛沙姆338或者等同材料，例如对应的Pluronics。
所述至少一种表面稳定剂的浓度可以是按重量计约0.5％至约99.999％、约5.0％至约99.9％、约1.0％至约99.0％或约10％至约99.5％，基于所述活性剂与至少一种表面稳定剂组合(不包括其他赋形剂)的总组合干重。如果在所述组合物中采用了两种或更多种表面稳定剂的组合，那么至少一种主要表面稳定剂的浓度可以是按重量计约0.01％至约99.5％、约0.1％至约95％或约0.5％至约90％，基于活性剂(不包括其他赋形剂)的总组合干重。
在一些实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约0.1％至约5％，例如约0.1％至约2.5％、约0.1％至约1％或约0.25％至约1％。在本发明的混悬液形式的一些实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约0.1％至约5％，例如约0.1％至约2.5％、约0.1％至约1％或约0.25％至约1％。在本发明的混悬液形式的一些实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约0.1％、约0.025％、约1％、约2％或约2.5％。在另一些示例性实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约1％至约20％，例如从约10％至约25％、约1％至约20％或约1％至约10％的量。在另一些干燥形式的组合物的示例性实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约1％至约20％，例如约10％至约25％、约1％至约20％或约1％至约10％。在另一些干燥形式的组合物的示例性实施方案中，所述表面稳定剂的存在量可以是约25％、约20％、约10％、约5％或约1％。
本发明的一些实施方案可包括在约100∶1至约5∶1的范围内的活性剂与表面稳定剂的比例。在一些实施方案中，所述活性剂与表面稳定剂的比例为约200∶1至约1∶1、约100∶1至约10∶1、约20∶1至约5∶1或约15∶1至约10∶1。在一些示例性实施方案中，所述活性剂与表面稳定剂的比例为约100∶1、约50∶1、约25∶1、约10∶1、约12.5∶1、约5∶1。
用于制备纳米颗粒组合物的方法
本发明的纳米颗粒组合物可使用例如研磨、均质化或沉淀技术来制造。
API的形态可通过光学显微术(例如具有ClemexJS-2000控制器的OlympusBX51显微镜)进行表征。差示扫描量热法(例如，Mettler-ToledoDSC1)和热重分析(例如，Mettler-ToledoTGA/DSC1)可用于测量材料的热特性。颗粒大小的测量可以通过将材料分散(当所述测试样品中存在表面活性剂时将材料分散于水中或者当没有其他分散剂存在时将材料分散于泊洛沙姆的稀溶液中)经由例如激光衍射(例如HoribaLA-950V2)来进行。
在辊式研磨机(U.S.Stoneware)上的玻璃样品瓶中使用0.5mm直径的经氧化钇稳定的氧化锆陶瓷研磨介质(来自例如Tosoh)的浆料处理原型制剂(prototype)。在2L的1型硼硅酸盐玻璃的介质瓶中完成GLP研磨。在“最佳清洁”条件下完成测试制品材料的制备，在所述最佳清洁条件下，所有接触的材料和设备通过70％应用异丙醇或通过高压灭菌而消毒。使用无菌技术在经消毒层流罩(Airclean600)中进行所有这些准备。
研磨所述活性剂以获得纳米颗粒分散体包括使所述活性剂的颗粒分散在液体分散介质(其中活性剂是难溶的)中，随后在研磨介质的存在下应用机械方法以使活性剂的颗粒大小减小至期望的有效平均颗粒大小。所述分散介质可以是例如水、乙醇、叔丁醇、甘油、聚乙二醇(PEG)、己烷或乙二醇。
在一些实施方案中，所述活性剂的水性纳米研磨在表面稳定剂的亲水性稳定剂的存在下进行。例如，可以在所述至少一种表面稳定剂的存在下使所述活性剂颗粒的大小减小。或者，可以在研磨之后使所述活性剂颗粒与一种或更多种表面稳定剂接触。其他化合物(如稀释剂)可以在大小缩小过程之前、期间或之后添加到所述活性剂/表面稳定剂组合物中。分散体可以按连续方式或分批方式来生产。
在另一些实施方案中，所述纳米颗粒组合物通过微量沉淀来制备。这是制备难溶活性剂的稳定分散体的方法，该方法在一种或更多种表面稳定剂和一种或更多种胶体稳定性增强表面活性剂的存在下，不含任何痕量有毒溶剂或溶解的重金属杂质。这样的方法包括，例如，(1)在适当的溶剂中溶解所述活性剂；(2)向包含至少一种表面稳定剂的溶液添加来自步骤(1)的制剂；以及(3)使用适当的非溶剂或抗溶剂使来自步骤(2)的制剂沉淀。该方法随后可以通过常规方式经透析或渗滤和分散体的浓缩除去任何所形成的盐(如果存在的话)。
在再一个实施方案中，所述纳米颗粒组合物通过均质化方法来制备。这样的方法包括以下步骤：使活性剂颗粒分散在液体分散介质中，随后对该分散体进行均质化以使活性剂的颗粒大小减小至期望的有效平均颗粒大小。可以在至少一种表面稳定剂的存在下使活性剂颗粒的大小减小。或者，可以使所述活性剂颗粒与一种或更多种表面稳定剂在研磨之前或之后接触。其他化合物(如稀释剂)可以在大小减小处理之前、期间或之后添加到所述活性剂/表面稳定剂组合物中。分散体可以按连续方式或分批方式来制造。
根据本发明的组合物可以按混悬液或作为干燥粉末二者之一的形式来制备。对于混悬液的制备，使用前述技术中的一种使活性剂的大小减小。可以单独使用活性剂来实现所述大小的减小，将活性剂分散在溶剂(例如水或如上所提到的其他溶剂)中，所述活性剂与该表面稳定剂组合或者所述活性剂、溶剂与表面稳定剂组合。连续进行大小减小直至达到所期望的活性剂的颗粒大小。可以添加额外的表面稳定剂以达到最终所期望的浓度。此外，如果期望的话，可以使用适当溶剂稀释混悬液以达到所期望的活性剂的浓度。如果在大小减小期间存在溶剂，那么可以通过添加与大小减小期间所使用的溶剂相同或不同的额外的溶剂来完成稀释。本文中使用的术语溶剂包括单一溶剂或溶剂的混合物。如上所述，额外的组分可以在大小减小处理期间存在或可以根据需要在后添加。
在一个示例性实施方案中，通过如下制备混悬液：在适当的容器中将表面活性剂(例如泊洛沙姆如泊洛沙姆407或泊洛沙姆338)溶解在大约1/3的最终量的溶剂(例如纯化水)中。所述活性剂(例如1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪)混悬在所述表面活性剂的溶液中。向容器中添加研磨介质。对所述混悬液进行大小减小直至达到所期望的颗粒大小。例如，将混悬液研磨直至颗粒大小分布的D50或D90(通过例如激光衍射测量)低于1,000nm。然后从研磨介质移出混悬液。用溶剂润洗介质并稀释混悬液以达到所期望的活性剂的最终浓度，例如10％。制备之后，可以测定该混悬液以确认颗粒大小和浓度在所期望的水平。
可以通过从混悬液中去除溶剂来获得干燥的制剂。可以对大小减小之后直接获得的混悬液或者对进一步稀释后的混悬液进行溶剂去除。可以使用产生稳定制剂的任何合适的干燥方法。示例性的干燥方法包括喷雾干燥、超临界干燥、滚筒干燥(drumdrying)、高频干燥、自然风干、折射窗干燥(RefractanceWindowTMdrying)、红外区干燥(InfraredZoneDryingTM)和冷冻干燥(冻干)。在一个示例性干燥方法中，通过使用液氮预冷冻对混悬液进行冷冻干燥并在预冷架上进行整体冻干以产生干燥粉末。
稳定性
根据本发明的制剂和组合物是稳定的，并且特别是在储存时是稳定的。在本文中，稳定的制剂或组合物是这样的制剂或组合物，其中活性剂在储存时不降解或分解并且其中的颗粒大小分布不显著改变。如果在储存后中值颗粒大小不提高至大于1000nm，那么颗粒大小不显著改变。在一些示例性实施方案中，在储存时中值颗粒大小不提高至大于900nm、大于800nm、大于700nm、大于600nm或大于500nm。如果在储存之后，剩余了最初存在的活性剂的至少95％，那么本文所使用的活性剂在储存后不降解或分解。在一些示例性实施方案中，在储存之后存在至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的初始量的活性剂。
用于稳定性测试的储存条件可以变化并且可以在典型储存条件或在加速储存条件下完成测试。本文中所使用的在储存条件下稳定或者“储存稳定”是指在5℃下储存一周时该组合物是稳定的。本发明的一些实施方案对于储存甚至更长的时间是稳定的，例如，在5℃下储存两周、三周或四周。包含所述干燥制剂的胶囊可以在更长的时间稳定，例如长达一个月、长达两个月、长达三个月、长达四个月、长达五个月、长达六两个月、或甚至更长的时间。
药物组合物和治疗方法
本发明的药物组合物还包含一种或更多种赋形剂。赋形剂包括生理学上可接受的载体、辅料或载剂，统称为载体。所述组合物可配制成固体或液体形式等用于经口施用。
赋形剂可以包括一种或更多种黏合剂、填充剂、润滑剂、助悬剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、缓冲剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂和其他赋形剂。这样的赋形剂是本领域已知的。填充剂的实例包括乳糖一水合物、无水乳糖、微晶纤维素(例如和)、微晶纤维素和硅化微晶纤维素以及多种淀粉；黏合剂的实例为多种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮。包括作用于待压制粉末之流动性的试剂的适当润滑剂，包括胶体二氧化硅，例如滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和硅胶。甜味剂可以是任何天然甜味剂或人造甜味剂，例如蔗糖、木糖醇、糖精钠、甜蜜素(cyclamate)、阿司帕坦、三氯蔗糖(sucralose)、麦芽糖醇和安赛蜜(acsulfame)。矫味剂的实例包括(商标为MAFCO)、泡泡糖香料和水果香料等。防腐剂的实例包括山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸及其盐、对羟基苯甲酸的其他酯(如对羟基苯甲酸丁酯)；醇类，例如乙醇或苄醇。适当的稀释剂包括可药用的惰性填充剂，例如微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或任意前述的混合物。稀释剂的实例包括微晶纤维素，例如和乳糖，如乳糖一水合物、无水乳糖和磷酸氢钙，如甘露醇；淀粉；山梨糖醇；蔗糖；和葡萄糖。适当的崩解剂包括轻度交联的聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉和改性淀粉、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羟基乙酸淀粉钠及其混合物。泡腾剂的实例为泡腾剂对(effervescentcouple)，例如有机酸和碳酸盐或碳酸氢盐。适当的有机酸包括例如柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、己二酸、琥珀酸和藻酸及酸酐和酸式盐。适当的碳酸盐和碳酸氢盐包括例如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、甘氨酸碳酸钠、L-赖氨酸碳酸盐和精氨酸碳酸盐。或者，可以仅存在泡腾剂对的碳酸氢钠组分。
本发明的纳米颗粒组合物可通过任何常规方法(包括经口和肠胃外)适用于对象。本文所使用的术语“对象”用于指动物，优选哺乳动物，包括人类或非人类。术语患者和对象可互换使用。
用于经口施用的固体剂型包括但不限于：胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，本发明纳米颗粒组合物可与以下中的至少一种相混合：(a)一种或更多种惰性赋形剂(或载体)，例如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(d)湿润剂，例如甘油；(e)崩解剂，例如交联淀粉、聚乙烯吡咯烷酮XL、琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液阻滞剂，例如石蜡；(g)吸收促进剂，例如季铵化合物；(h)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(i)吸附剂，例如高岭土和膨润土；以及(j)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或其混合物。对于胶囊、片剂和丸剂，所述剂型还可包含缓冲剂。
用于经口施用的液体纳米颗粒剂型包括可药用的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了本发明纳米颗粒组合物，液体剂型还可包含赋形剂，例如本领域中通常使用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、潜溶剂、增溶剂和乳化剂。溶剂和潜溶剂的非限制性实例包括乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(例如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇和异山梨醇二甲醚、聚乙二醇、脱水山梨醇的脂肪酸酯、或者这些物质的混合物等。所述组合物还可包含辅料，例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。
剂量单位组合物可包含可用于构成每日剂量的这样的因数的这样的量。在用于经口递送的药物组合物中可以存在任何剂量。例如，用于经口递送的固体剂型可以包含例如约0.1mg至约500mg活性剂、约1mg至约500mg活性剂、约10mg至约250mg的活性剂或者任何其他适当的或期望的量。用于经口和肠胃外递送的溶液剂或混悬剂形式可以包含例如约1％至约50％活性剂、约5％至约30％活性剂、约10％至约20％活性剂或者任何其他适当或期望量的溶液剂或混悬剂。然而，应当理解，对于任何特定的患者，具体的剂量水平将取决于多种因素：待达到的细胞或生理学响应的类型和程度；所使用的具体试剂或组合物的活性；所使用的具体试剂或组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；施用时间、施用途径和试剂的排泄速率；治疗的持续时间；与特定试剂组合或同时使用的药物；以及医学领域中公知的类似因素。
本发明的药物组合物可用于治疗增殖性疾病或者与持续血管发生相关或由其触发的疾病。增殖性疾病主要为肿瘤疾病(或癌症)(和/或任何转移)。本发明的组合物特别地可用于治疗肿瘤，其为乳腺癌、肺癌、胃肠癌(包括食管癌、胃癌、小肠癌、大肠癌和直肠癌)、胶质瘤、肉瘤(例如涉及骨、软骨、软组织、肌肉、血管和淋巴管的那些)、卵巢癌、骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、女性子宫颈癌、子宫内膜癌、头颈癌、间皮瘤、肾癌、输尿管癌、膀胱癌和尿道癌、结肠癌、结肠直肠癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和黑素瘤。本发明的化合物已经对卵巢癌、乳腺癌(包括激素依赖性乳腺癌)、前列腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌和内皮癌特别地表现出有效性。本发明的药物组合物可与其他化学治疗剂组合以治疗肿瘤或可用于治疗由于多药耐药性而用其他化学疗剂难以治疗的肿瘤。
以下非限制性实施例用来举例说明本发明。然而，应当理解，本发明并不限定于这些实施例中描述的具体条件或细节。
实施例
实施例1-1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的经典制剂
1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪在水中的溶解性很差，小于0.1μg/ml，并且在多种潜溶剂中测试了其溶解度。在大多数情况下，在稀释过程中最初的澄清溶液在不同的点表现出沉淀量的变化。因此，尽管这些经典制剂可以以一些有限的目的用于临床前研究中，其不可用于临床用途。
＊DMAC：N，N-二甲基乙酰胺
实施例2-纳米制剂的制备
2.11-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的表征
1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪为几乎不溶于水的自由流动的灰白色粉末。颗粒是结晶的并且为不规则形状。图1示出在400倍放大倍率下的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪颗粒。图2示出了在偏振光下在400倍放大倍率下的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。
根据化学结构，预测1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪的折射率为1.637。对于颗粒大小测量，测定折射率的虚分量(imaginarycomponent)或i值(激光衍射算法所使用的用于说明颗粒对光之吸收的无量纲因数)为0.1。未研磨的1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪容易地分散在(AerosolOT)的水溶液中。经测量中值颗粒大小(D50)为13μm。
热重分析(参见图3)示出了在105℃的起始温度时5.8％的质量损失，与水分的损失一致。220℃之后的质量损失可能是由于热降解。
差示扫描量热法(参见图4)证实了涉及在108℃时初始质量损失的吸热。1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪在163℃开始熔化，并且直至223℃都没有显示出分解迹象，证实了TGA分析中逐渐的质量损失。
这些数据表明，该物质是热稳定的。通过这些结果，没有确定可能对研磨过程产生不利影响的热现象。
2.2颗粒大小减小的评价
为大小减小试验选择的研磨助剂为泊洛沙姆407、泊洛沙姆338、月桂基硫酸钠和羧甲基纤维素钠。各自均在以重量计0.25％和1％二者下进行测试。这些试验溶液中的每个均以重量计12.5％和25％用于研磨1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪(API)。间隔地对样品进行滚动和测试，其取决于所观察到的颗粒大小减小的进展。数据示于表1中。泊洛沙姆看来在较高浓度和较少API下进行得更好，而月桂基硫酸钠在较低浓度和较多API下的短时间研磨(120分钟)中进行得更好，但是在较少API下较长时间研磨(240分钟和300分钟)中，羧甲基纤维素钠并没有显示出对API是有效的研磨助剂。研磨360分钟之后，两个最有希望的候选物为1％泊洛沙姆407和12.5％API以及1％泊洛沙姆338和12.5％API。所有其他的样品在效果方面显示出衰减，没有明显的效力，或者颗粒大小提高(无论是由于过度研磨引起的团聚还是熟化所致)。(如本领域中所理解的，当小晶体或颗粒溶解并且再沉积到较大的晶体或颗粒上时发生熟化。)所述两种泊洛沙姆制剂都保持在环境条件下和5℃下，作为其颗粒大小稳定性的非正式评估。如表2所示，测量值在四周中几乎保持不变。
表1：初始分散剂选择数据
表2：12.5％API试验用制剂的颗粒大小稳定性
在测试条件下，在0.25％月桂基硫酸钠(SLS)中的25％API的混悬液显示了初始的希望，但结果是在研磨期间颗粒大小的最终提高(例如，通过熟化)。为了排除由过度研磨引起的颗粒融合的可能性，第二制剂通过研磨仅总计120分钟而制成，然后监测颗粒大小。一周之后，该制剂显示出熟化的迹象，如表3所示：
表3：SLS再制备的颗粒大小稳定性
2.3原型制剂制造
鉴于这两种泊洛沙姆相当的作为研磨剂的性能，但泊洛沙姆407因更有利的毒性特征而代替泊洛沙姆338被选择用于原型制剂。为了便于研磨研究所必需的测试品的量，以30％API和成比例提高至2.4％的泊洛沙姆407制成测试批次。通过额外的研磨时间成功地将中值颗粒大小减少至亚微米范围。
表4.浓缩混悬液的颗粒大小减小
研磨时间(分钟) 中值颗粒大小(D50)
300 1.2μm
360 0.8μm
480 0.7μm
540 0.5μm
600 0.1μm
用去离子水将浓缩的混悬液稀释至10％API的目标浓度并且在环境条件下监测该稀释液的稳定性。颗粒大小分布在四周内是稳定的：
表5：经稀释浓缩物的颗粒大小稳定性
时间 中值
初始 0.1μm
1周 0.2μm
2周 0.2μm
4周 0.2μm
根据这些数据，如下制备了用于1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪纳米混悬液的原型制剂：
1.在适当的研磨容器中约1/3的纯化水中溶解泊洛沙姆407。
2.使1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪混悬在泊洛沙姆407溶液中。
3.添加充足的研磨介质以填充容器约一半。
4.在辊磨机上滚转容器直至颗粒大小分布的D90(通过激光衍射测量)低于1微米(折射率1.637/i值0.1)。
5.从研磨介质中提取混悬液。
6.用一部分剩余的水润洗介质，将润洗液转移至所提取的混悬液中。
7.测定混悬液。
8.基于所测量的测定值，用剩余的水稀释最终的混悬液至10％的浓度。
9.测定混悬液以进行确认。
更具体地，将API以300mg/g混悬在无菌水中的2.4％w/w的泊洛沙姆407溶液中。添加0.5mmYTZ陶瓷研磨介质(来自NikkatoCorporation的经氧化钇稳定的氧化锆介质)，并且使用辊磨机研磨混悬液直至颗粒大小(D90)(通过激光衍射测量)不超过2微米并且中值颗粒大小(D50)不超过500nm。研磨之后，用无菌水稀释混悬液至100mg/gAPI。
表6：原型纳米混悬液制剂
2.4用于GLP研究的原型制造
详细地，在三个单独批次中以各自30％浓度添加472.9克API。用部分剩余的水从每个批次中提取研磨介质并且将所有提取液合并。过程中的混悬液所测量的测定值为201mg/g(20.1％)。基于该值，使用无菌注射用水将混悬液稀释至最终10％浓度的药物物质以及额外的泊洛沙姆407以使总泊洛沙姆浓度为2.05％。最终混悬液的净产率为4,528克；在103mg/g的测定值下，总的API产率为466.4克，或者API原始量的98.6％。
实施例3-药物产品
使用液氮对纳米混悬液进行预冷冻并且在预冷架上进行整体冻干以产生干燥粉末。将干燥粉末手工称重至称重漏斗内然后放入羟丙基甲基纤维素胶囊壳(0号)并且以每30ml高密度聚乙烯塑料瓶(具有5g干燥剂包)10粒的量进行包装。制备了包含60mg活性药物成分的胶囊。每个胶囊填充60mg的API冻干粉末具有以下组成(表7)和批次配方(表8)。
表7.组成
组分 每个胶囊的量
API 50mg
泊洛沙姆407 10.25mg
表8.批次配方
实施例4-药物产品的稳定性
将在0号羟丙基甲基纤维素胶囊中60mg的冻干粉末API(以递送50mgAPI)储存在具有干燥剂包的琥珀色瓶中并且进行密封。将胶囊储存在5℃或25℃/60％相对湿度(RH)下并且对胶囊中API和水的含量、API的颗粒大小进行了分析。数据示于表9中。
表9.药物产品的稳定性
PSD＝颗粒大小分布
如表9中所示，药物产品在25℃/60％RH下储存6个月导致颗粒大小的提高和API含量的降低。在5℃下储存6个月没有表现出颗粒大小提高和API含量降低。鉴于表9中的稳定性数据，选择5℃用于药物产品的储存。
实施例的结论
发现辊式研磨是由其来减小API颗粒大小的简单、有效的方式。当用泊洛沙姆作为研磨助剂进行处理时，即使在浓度高达30％API时也没有观察到熔化、熟化、变色或其他有害的物理现象。而月桂基硫酸钠在非常低的浓度下表现出颗粒大小减小，引起熟化，可能是由于与API潜溶性作用。通过过程中测定的浓缩混悬液的使用允许多个批次的处理、组合和稀释至用于毒性研究所期望的浓度。这使得使用实验室规模的设备处理回收近99％的超过470克API成为可能。
在本说明书中举例说明和讨论的一些实施方案仅旨在以本发明人已知的制造和使用本发明的最佳方式来教导本领域技术人员。本说明书中任何内容都不应被认为是限制本发明的范围。示出的所有实施例是代表性和非限制性的。如本领域技术人员根据上述教导所理解的，在不背离本发明的情况下，可以修改或改变本发明的上述一些实施方案。因此，应该理解，在权利要求书及其等同物的范围内，可不同于如已具体描述的那样来实施本发明。

Claims (34)

1.稳定的组合物，其包含：
(a)式(1)化合物或其可药用盐的纳米颗粒，
其中
X和Y独立地为N或C-R7；
对于变量R1和R2的组合：
R1为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素并且R2为F；或者
R1为F并且R2为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素；
R3为C1-C3烷基；并且
R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基羰基、氰基、硝基或卤素；以及
(b)至少一种表面稳定剂，其中所述纳米颗粒的有效中值颗粒大小(D50)小于约1,000nm。
2.权利要求1所述的组合物，其中所述式1化合物为1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。
3.权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种表面稳定剂包含至少一种聚环氧烷。
4.权利要求3所述的组合物，其中所述至少一种表面稳定剂包含聚环氧乙烷与聚环氧丙烷的嵌段共聚物。
5.权利要求4所述的组合物，其中所述至少一种表面稳定剂包含泊洛沙姆。
6.权利要求5所述的组合物，其中所述至少一种表面稳定剂包含泊洛沙姆407或泊洛沙姆338。
7.权利要求1至6中任一项所述的组合物，其为液体混悬液的形式。
8.权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述组合物在储存至少四周之后是稳定的。
9.权利要求1至8中任一项所述的组合物，其为干燥粉末的形式。
10.权利要求9中任一项所述的组合物，其中所述组合物在储存至少6个月之后是稳定的。
11.权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述有效中值颗粒大小小于约500nm。
12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述式(1)化合物与表面稳定剂的比例(wt/wt)为约100∶1至约5∶1。
13.制备储存稳定的组合物的方法，其包括：制备(a)式(1)化合物或其可药用盐的颗粒与(b)至少一种表面稳定剂的混合物，
其中
X和Y独立地为N或C-R7；
对于变量R1和R2的组合：
R1为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素并且R2为F；或者
R1为F并且R2为氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或卤素；
R3为C1-C3烷基；并且
R4、R5、R6和R7独立地为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基羰基、氰基、硝基或卤素；以及
在足以提供有效中值颗粒大小小于约1,000nm的纳米颗粒混悬液的条件下减小式(1)化合物之颗粒的大小，所述组合物是稳定的。
14.权利要求13所述的方法，其还包括干燥所述纳米颗粒混悬液以形成粉末，例如通过冻干来进行。
15.权利要求13或14所述的方法，其中所述混合物还包含水。
16.权利要求13或14所述的方法，其中所述混合物包含约5％至约50％的所述式1化合物和约0.1％至约5％的所述表面稳定剂。
17.权利要求14所述的方法，其中所述粉末包含约75％至约90％的所述式1化合物和约10％至约25％的所述表面稳定剂。
18.权利要求13或14所述的方法，其中所述式(1)化合物与表面稳定剂的比例为约100∶1至约5∶1。
19.权利要求13或14所述的方法，其中所述减小包括研磨、均质化或沉淀。
20.权利要求19所述的方法，其中所述减小包括湿研磨。
21.权利要求19所述的方法，其中所述减小包括研磨约600分钟。
22.权利要求19所述的方法，其中所述减小包括研磨约360分钟。
23.权利要求13或14所述的方法，其还包括在减小所述颗粒的大小之后用溶剂稀释。
24.权利要求13或14所述的方法，其中所述式1化合物为1-(3，5-二甲氧基苯基)-4-[(6-氟-2-甲氧基喹喔啉-3-基)氨基羰基]哌嗪。
25.权利要求13或14所述的方法，其还包括在减小所述颗粒的大小之后向所述混合物中添加水。
26.权利要求13或14所述的方法，其还包括在减小所述颗粒的大小之后向所述混合物中添加泊洛沙姆溶液。
27.药物组合物，其包含权利要求1所述的组合物和至少一种可药用赋形剂。
28.权利要求27所述的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含水。
29.权利要求27所述的药物组合物，其中所述至少一种可药用赋形剂包含羟丙基甲基纤维素。
30.权利要求27至29中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物为经口剂型。
31.权利要求27至29中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物为肠胃外剂型。
32.权利要求27至29中任一项所述的药物组合物，其包含约0.01至约250mg的所述式(1)化合物。
33.权利要求27至29中任一项所述的药物组合物，其包含约0.001％至约99.5％的所述式(1)化合物。
34.治疗肿瘤的方法，其包括向有此需要的动物施用根据权利要求1或27所述的组合物。
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