CN101132768A - 纳米颗粒他克莫司制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及纳米颗粒他克莫司组合物。该组合物含有有效平均颗粒大小小于约2000纳米的他克莫司颗粒和至少一种表面稳定剂。

Description

纳米颗粒他克莫司制剂

技术领域

本发明涉及含有他克莫司的纳米颗粒组合物。在本发明的两个示例性的实施方案中，描述的是可注射的纳米颗粒他克莫司组合物和肠溶口服纳米颗粒他克莫司组合物，及其制备和使用方法。

背景技术

关于纳米颗粒活性剂组合物的背景

纳米颗粒组合物最早见于美国专利5,145,684(684专利)，是由溶解性差的治疗或诊断剂的颗粒组成，在其表面上有吸附的或结合的一种非交联的表面稳定剂。该684专利还描述了制备这种纳米颗粒组合物的方法，但是没有提到含有纳米颗粒形式的他克莫司的组合物。在题为“Method of Grinding Pharmaceutical Substances”的美国专利5,518,187和5,862,999，题为“Continuous Method of Grinding PharmaceuticalSubstances”的美国专利5,718,388，和题为“Process of PreparingTherapeutic Compositions Containing Nanoparticles”的美国专利5,510,118中，描述了制造纳米颗粒组合物的方法。

纳米颗粒组合物还描述于例如以下专利中：

美国专利5,298,262″Use of Ionic Cloud Point Modifiers to Prevent ParticleAggregation During Sterilization；″美国专利5,302,401″Method toReduce Particle Size Growth During Lyophilization；″美国专利5,318,767″X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging；″美国专利5,326,552″Novel Formulation For Nanoparticulate X-Ray Blood PoolContrast Agents Using High Molecular Weight Non-ionic Surfactants；″美国专利5,328,404for″Method of X-Ray Imaging Using Iodinated AromaticPropanedioates；″美国专利5,336,507″Use of Charged Phospholipids toReduce Nanoparticle Aggregation；″美国专利5,340,564″FormulationsComprising Olin 10-G to Prevent Particle Aggregation and Increase Stability；″美国专利5,346,702″Use of Non-Ionic Cloud Point Modifiers toMinimize Nanoparticulate Aggregation During Sterilization；″美国专利5,349,957″Preparation and Magnetic Properties of Very Small Magnetic-Dextran Particles；″美国专利5,352,459″Use of Purified SurfaceModifiers to Prevent Particle Aggregation During Sterilization；″美国专利5,399,363和5,494,683，″Sufface Modified Anticancer Nanoparticles；″美国专利5,401,492″Water Insoluble Non-Magnetic Manganese Particlesas Magnetic Resonance Enhancement Agents；″美国专利5,429,824″Useof Tyloxapol as a Nanoparticulate Stabilizer；″美国专利5,447,710″Method for Making Nanoparticulate X-Ray Blood Pool Contrast Agents UsingHigh Molecular Weight Non-ionic Surfactants；″美国专利5,451,393″X-Ray Contrast Compositions Useful in Medical Imaging；″美国专利5,466,440″Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray Contrast Agents inCombination with Pharmaceutically Acceptable Clays；″美国专利5,470,583″Method of Preparing Nanoparticle Compositions Containing ChargedPhospholipids to Reduce Aggregation；″美国专利5,472,683″Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbamic Anhydrides as X-Ray ContrastAgents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging；″美国专利5,500,204″Nanoparticulate Diagnostic Dimers as X-Ray Contrast Agents for BloodPool and Lymphatic System Imaging；″美国专利5,518,738″Nanoparticulate NSAID Formulations；″美国专利5,521,218″Nanoparticulate Iododipamide Derivatives for Use as X-Ray Contrast Agents；″美国专利5,525,328″Nanoparticulate Diagnostic Diatrizoxy Ester X-RayContrast Agents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging；″美国专利5,543,133″Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions ContainingNanoparticles；″美国专利5,552,160″Surface Modified NSAIDNanoparticles；″美国专利5,560,931″Formulations of Compounds asNanoparticulate Dispersions in Digestible Oils or Fatty Acids；″美国专利5,565,188″Polyalkylene Block Copolymers as Surface Modifiers forNanoparticles；″美国专利5,569,448″Sulfated Non-ionic BlockCopolymer Surfactant as Stabilizer Coatings for Nanoparticle Compositions；″美国专利5,571,536″Formulations of Compounds as NanoparticulateDispersions in Digestible Oils or Fatty Acids；″美国专利5,573,749″Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carboxylic Anydrides as X-Ray ContrastAgents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging；″美国专利5,573,750″Diagnostic Imaging X-Ray Contrast Agents；″美国专利5,573,783″Redispersible Nanoparticulate Film Matrices With Protective Overcoats；″美国专利5,580,579″Site-specific Adhesion Within the GI Tract UsingNanoparticles Stabilized by High Molecular Weight,Linear Poly(ethylene Oxide)Polymers；″美国专利5,585,108″Formulations of Oral GastrointestinalTherapeutic Agents in Combination with Pharmaceutically Acceptable Clays；″美国专利5,587,143″Butylene Oxide-Ethylene Oxide Block CopolymersSurfactants as Stabilizer Coatings for Nanoparticulate Compositions；″美国专利5,591,456″Milled Naproxen with Hydroxypropyl Cellulose as DispersionStabilizer；″美国专利5,593,657″Novel Barium Salt FormulationsStabilized by Non-ionic and Anionic Stabilizers；″美国专利5,622,938″Sugar Based Surfactant for Nanocrystals；″美国专利5,628,981″Improved Formulations of Oral Gastrointestinal Diagnostic X-Ray ContrastAgents and Oral Gastrointestinal Therapeutic Agents；″美国专利5,643,552″Nanoparticulate Diagnostic Mixed Carbonic Anhydrides as X-Ray ContrastAgents for Blood Pool and Lymphatic System Imaging；″美国专利5,718,388″Continuous Method of Grinding Pharmaceutical Substances；″美国专利5,718,919″Nanoparticles Containing the R(-)Enantiomer of Ibuprofen；″美国专利5,747,001″Aerosols Containing Beclomethasone NanoparticleDispersions；″美国专利5,834,025″Reduction of IntravenouslyAdministered Nanoparticulate Formulation Induced Adverse PhysiologicalReactions；″美国专利6,045,829″Nanocrystalline Formulations of HumanImmunodeficiency Virus(HIV)Protease Inhibitors Using Cellulosic SurfaceStabilizers；″美国专利6,068,858″Methods of Making NanocrystallineFormulations of Human Immunodeficiency Virus(HIV)Protease InhibitorsUsing Cellulosic Surface Stabilizers；″美国专利6,153,225″InjectableFormulations of Nanoparticulate Naproxen；″美国专利6,165,506″NewSolid Dose Form of Nanoparticulate Naproxen；″美国专利6,221,400″Methods of Treating Mammals Using Nanocrystalline Formulations of HumanImmunodeficiency Virus(HIV)Protease Inhibitors；″美国专利6,264,922″Nebuulized Aerosols Containing Nanoparticle Dispersio；″美国专利6,267,989″Methods for Preventing Crystal Growth and Particle Aggregationin Nanoparticle Compositions；″美国专利6,270,806″Use of PEG-Derivatized Lipids as Surface Stabilizers for Nanoparticulate Compositions；″美国专利6,316,029″Rapidly Disintegrating Solid Oral Dosage Form，″美国专利6,375,986″Solid Dose Nanoparticulate CompositionsComprising a Synergistic Combination of a Polymeric Surface Stabilizer andDioctyl Sodium Sulfosuccinate；″美国专利6,428,814″BioadhesiveNanoparticulate Compositions Having Cationic Surface Stabilizers；″美国专利6,431,478″Small Scale Mill；″美国专利6,432,381″Methods forTargeting Drug Delivery to the Upper and/or Lower Gastrointestinal Tract；″美国专利6,582,285″Apparatus for Sanitary Wet Milling；″和美国专利6,592,903″Nanoparticulate Dispersions Comprising a SynergisticCombination of a Polymeric Surface Stabilizer and Dioctyl SodiumSulfosuccinate；″美国专利6,656,504“Nanoparticulate Compositions ComprisingAmorphous Cyclosporine；”美国专利6,742,734“System and Method for MillingMaterials；”美国专利6,745,962“Small Scale Mill and Method Thereof；”美国专利6,811,767“Liquid droplet aerosols of nanoparticulate drugs；”和美国专利6,908,626“Compositions having a combination of immediate release and controlled releasecharacteristics；”

这些专利都特地引用作为参考。另外，美国专利申请20020012675 A1(2002年1月31日公布)“Controlled Release NanoparticulateCompositions”和WO 02/098565“System and Method for MillingMaterials”描述了纳米颗粒组合物，也被特地引用作为参考。

无定形的小颗粒组合物描述于例如

美国专利4,783,484″Particulate Composition and Use Thereof as″Antimicrobial Agent；″美国专利4,826,689″Method for MakingUniformly Sized Particles from Water-Insoluble Organic Compounds；″美国专利No.4,997,454″Method for Making Uniformly-Sized Particles From Insoluble″Compounds；″美国专利″5,741,522″Ultrasmall，Non-aggregated Porous″Particles of Uniform Size for Entrapping Gas Bubbles Within and Methods；″和美国专利5,776,496，″Ultrasmall Porous Particles for EnhancingUltrasound Back Scatter″

中，它们都特地在本文中引用作为参考。

关于他克莫司的背景材料

他克莫司，或FK-506，是一种大环内酯免疫抑制剂，据称比孢菌素的效力高100倍。它由链霉菌的一种单型物种苏库巴链霉菌发酵制得。美国专利4,894,366和EPO出版物No.0184162描述了他克莫司，在这里全文引用作为参考。

他克莫司以PROGRAF^(可由Fujisawa USA，Inc.得到)的商品名称销售，它抑制某些体液免疫，而且在更大程度上抑制细胞介导的反应，例如异体移植物排斥，迟发型超敏反应，胶原诱发的关节炎，实验性变应性脑脊髓炎和移植物抗宿主病。因此，他克莫司延长了肝、肾、心脏、骨髓、小肠和胰腺、肺和气管、皮肤、角膜和四肢的动物移植模型中宿主和移植物的存活期。

更具体地说，实验证据表明，他克莫司与胞内蛋白FKBP-12相结合。然后形成他克莫司-FKBP-12、钙、钙调蛋白和钙调磷酸酶的复合物，钙调磷酸酶的磷酸酶活性被抑制。这一作用可以防止活化T细胞核因子(NF-AT)的去磷酸化和转运，NF-AT被认为是引发形成淋巴因子(例如白介素-2，γ-干扰素)所需的基因转录的一种核组分。其总结果是抑制T-淋巴细胞的活化(即，免疫抑制作用)。

他克莫司的经验式C₄₄H₆₉NO₁₂·H₂O，化学式量为822.05。他克莫司为白色晶体或晶状粉末，几乎不溶于水，在乙醇中自由溶解，在甲醇和氯仿中高度可溶。他克莫司的化学结构如下：

(参见The Merck Index，第12版，9200，Merck & Co.，Inc.，Rahway，NJ，1996)。

他克莫司在口服后于胃肠道内的吸收是不完全和变化不定的。他克莫司在成年肾移植患者(N＝26)中的绝对生物利用度为17±10％，在成年肝移植患者(N＝17)中为22±6％，在健康的志愿者中为18±5％(N＝16)。

在32名健康的志愿者中进行的单剂量研究确定了1mg和5mg胶囊的生物等效性。另一项在32名健康志愿者中进行的单剂量研究确定了0.5mg和1mg胶囊的生物等效性。他克莫司最大血液浓度(C_max)和曲线下面积(AUC)在接受3mg、7mg和10mg单次口服剂量的18名禁食的健康志愿者中像是以正比于剂量的方式增加。

在18名肾移植患者中，在服药10-12小时后测得的他克莫司谷浓度3-30mg/mL与AUC的相关性很好(相关系数0.93)。在浓度范围为10-60mg的24名肝移植患者中，相关系数为0.94。

关于食物的影响，他克莫司的吸收速度和程度在禁食条件下最大。当对15名健康志愿者用药时，食物的存在和成分减小他克莫司的吸收速度和程度。高脂膳食(848卡，46脂肪)的这一影响最显著，平均AUC和C_max分别降低37％和77％，T_max延长了5倍。高碳水化合物膳食(668卡，85％碳水化合物)将平均AUC和平均C_max分别降低28％和65％。

在健康的志愿者中(N＝16)，用餐时间也影响他克莫司的生物利用度。当用餐后立即服药时，与禁食条件相比，平均C_max下降71％，平均AUC下降39％。当进餐1.5小时后服药时，与禁食条件相比，平均C_max下降63％，平均AUC下降39％。

在11名肝移植患者中，在高脂(400千卡，34％脂肪)早餐15分钟后服用他克莫司，与禁食条件相比，造成AUC(27±18％)和C_max(50±19％)减小。

他克莫司的血浆蛋白结合约为99％，并且在5-50ng/ml的范围内与浓度无关。他克莫司主要与白蛋白和α-1-酸性糖蛋白结合，并与红细胞高度结合。他克莫司在全血和血浆之间的分布取决于几个因素，例如血细胞比容、血浆分离时的温度、药物浓度和血浆蛋白浓度。在美国的一项研究中，全血浓度与血浆浓度之比平均为35(范围从12至67)。

对不能口服PROGRAF^胶囊的患者，可以用PROGRAF^注射剂开始治疗。当考虑使用PROGRAF^注射剂时，应当注意用含蓖麻油衍生物的他克莫司注射物曾发生过敏反应。因此，对HCO-60(聚氧乙烯(60)化氢化蓖麻油)过敏的患者禁用PROGRAF^注射剂。PROGRAF^的初始用药应当不早于移植后6小时。建议的PROGRAF^注射剂的初始剂量为0.03-0.05mg/kg/天，连续静脉内输注。成年患者接受的剂量应为该剂量范围的下限。建议在移植后的早期同时进行肾上腺皮质类固醇治疗。连续静脉内(IV)输注PROGRAF^注射剂应当只进行到患者可以耐受口服PROGRAF^胶囊为止。

PROGRAF^注射剂使用前必须用0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释，直至浓度为0.004-0.02mg/mL。稀释的输注液应当储存在玻璃或聚乙烯容器中，并应在24小时后丢弃。稀释的输注液不应储存在PVC容器中，因为稳定性会降低，而且有萃取出苯二甲酸酯的可能性。在使用更稀的溶液的情形(例如儿科用药等)，同样应当使用无PVC的管子，以减小大量药物吸附在管道上的可能性。每当溶液和容器充许，肠外药物产品在用药之前应当目测检查颗粒物和变色情况。由于PROGRAF^在碱性介质中的化学不稳定性，PROGRAF^注射剂不应当与pH9或更高的溶液(例如更昔洛韦或阿昔洛韦)混合或者共输注。

如果必须IV治疗，建议在能够耐受口服治疗时立即从IV转换成口服他克莫司。在接受IV输注的患者中，首次口服治疗用药应当在停止IV输注8-12小时后进行。建议的他克莫司胶囊起始口服剂量为每天0.10-0.15mg/kg，分成两个均分剂量每12小时给药。共服柚子汁已报道会提高肝移植患者的他克莫司血液谷浓度。剂量应当根据排斥和耐受性的临床评估来确定。

当前需要稳定性提高的他克莫司制剂，它本身又在对患者施用时提高了生物利用度，并且降低了进食/禁食吸收的变化性。本发明通过提供含有纳米颗粒他克莫司制剂的制备方法和组合物满足了这些需要。这些制剂包括不需要使用聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油(HCO-60)作为稳定剂的可注射的他克莫司纳米颗粒制剂，以及包肠溶衣的他克莫司纳米颗粒制剂。纳米颗粒他克莫司组合物是理想的，因为随着颗粒尺寸减小和因此表面积的增加，组合物在服用后迅速溶解和被吸收。

发明概要

本发明涉及含有有效平均颗粒大小小于约2000nm的纳米颗粒状他克莫司和至少一种表面稳定剂的他克莫司制剂。

在本发明的一项实施方案中，提供了一种可注射的纳米颗粒他克莫司制剂，其中含有有效平均粒子大小小于约600nm的他克莫司颗粒和至少一种表面稳定剂。在其他实施方案中，可注射的制剂可以含有有效平均颗粒大小小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm的他克莫司。在一项实施方案中，该表面稳定剂是聚维酮聚合物。

本发明的可注射的纳米颗粒他克莫司制剂不需要使用聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油(HCO-60)作为稳定剂。这是有利的，因为在含有聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油作为稳定剂的常规的非纳米颗粒的可注射他克莫司制剂中，这种稳定剂的存在会导致过敏性休克(即，严重的变态反应)和死亡。此外，本发明的可注射的纳米颗粒他克莫司制剂提供了在小的注射体积中含高浓度他克莫司的制剂，同时在施用时药物溶解快。

本发明还描述了含有包肠溶衣的他克莫司的药物组合物。这类制剂含有颗粒大小于约2000nm的纳米颗粒他克莫司和至少一种表面稳定剂。本发明的包肠溶衣的剂型可以形成在对患者用药时显示出各种不同的释放型式的制剂，例如，立即释放(IR)剂型，可以每天服用一次(或其它的时间周期，例如每周一次或每月一次)的控释(CR)剂型，以及IR和CR剂型的结合。因为本发明的CR剂型可以每天只需用药一次，所以该剂型具有提高患者的方便性和顺从性的好处。在CR剂型中采用的控释机制可以通过各式各样的方式实现，包括但不限于，使用可侵蚀的制剂、扩散控制的制剂和渗透控制的制剂。

在本发明的另一方面，提供了一种制备本发明的纳米颗粒他克莫司制剂的方法。该方法包括：(1)将他克莫司分散在一种液体分散介质中；和(2)以机械方式将他克莫司的颗粒大小降低至所希望的有效平均颗粒大小，例如，对于可注射的组合物小于约600nm，或者对于非注射的或包肠溶衣的组合物，小于约2000nm。可以在他克莫司的颗粒粉碎之前、之中或之后，向分散介质中加入至少一种表面稳定剂。在一项用于可注射的组合物的实施方案中，表面稳定剂是分子量小于约40,000道尔顿的聚维酮聚合物。优选该液体分散介质在粉碎过程中保持生理pH，例如，在约3至约8之间。

本发明还涉及利用本发明的纳米颗粒他克莫司制剂治疗哺乳动物(包括人)的方法，用于预防器官排斥，特别是接受异基因肝或肾移植的患者中的器官排斥。这种方法包括向治疗对象施用有效数量的本发明纳米颗粒他克莫司制剂，例如但不限于，可注射的或包肠溶衣的纳米颗粒他克莫司制剂。

本发明的纳米颗粒他克莫司制剂可任选地包含一种或多种可药用的赋形剂，例如无毒的生理上可接受的液体载体，pH调节剂或防腐剂。

以上的一般性说明和以下的详细描述都是示例和解释性的，目的是对提出权利要求的本发明提供进一步的说明。对于本领域的技术人员，根据以下的本发明的详述，其他的目的、优点和新特色将是显而易见的。

附图简述

图1.未研磨的他克莫司的相差光学显微镜的100倍照片。

图2.含有2％(w/w)聚乙烯吡咯烷(PVP)K29/32和0.05(w/w)磺化琥珀酸二辛酯(DOSS)的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜的100倍照片。

图3.含2％(w/w)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K29/32和0.05(w/w)磺化琥珀酸二辛酯(DOSS)的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)在冷冻贮存一周后的相差光学显微镜100倍照片。

图4.含2％(w/w)PVP K12和0.15(w/w)脱氧胆酸钠的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图5.含3％(w/w)PlasdoneS630(乙烯基吡咯烷酮和醋酸乙烯酯的比例为60∶40的无规共聚物)的20％(w/w)纳米颗粒他克莫司(CamidaLLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图6.含3％(w/w)PlasdoneS630(乙烯基吡咯烷酮和醋酸乙烯酯的比例为60∶40的无规共聚物)的20％(w/w)纳米颗粒他克莫司(CamidaLLC)水分散体在冷冻贮存一周后的相差光学显微镜100倍照片。

图7.含2％(w/w)羟丙基纤维素(HPC-SL)和0.1％(w/w)DOSS的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图8.含1％(w/w)HPC-SL和0.15％(w/w)DOSS的5％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图9.含1％(w/w)HPC-SL和0.15％(w/w)DOSS的5％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体在冷冻贮存12天后的相差光学显微镜100倍照片。

图10.含1％(w/w)HPC-SL和0.1％(w/w)脱氧胆酸钠的5％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图11.含1％(w/w)HPC-SL和0.1％(w/w)脱氧胆酸钠的5％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体在冷冻贮存12天后的相差光学显微镜100倍照片。

图12.含2％(w/w)羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.05％(w/w)DOSS的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图13.含2％(w/w)羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.05％(w/w)DOSS的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体在冷冻贮存一周后的相差光学显微镜100倍照片。

图14.含2％PluronicF108的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图15.含2％PluronicF108的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(Camida LLC)水分散体在冷冻贮存一周后的相差光学显微镜100倍照片。

图16.含2％Tween80的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(CamidaLLC)水分散体的相差光学显微镜100倍照片。

图17.含2％Tween80的10％(w/w)纳米颗粒他克莫司(CamidaLLC)水分散体在冷冻贮存一周后的相差光学显微镜100倍照片。

发明详述

A.引言

本发明涉及含有他克莫司纳米颗粒制剂的组合物及其制备和使用方法。该组合物含有有效平均颗粒大小小于约2000nm的他克莫司和至少一种表面稳定剂。

两种纳米颗粒他克莫司剂型的实例是可注射的纳米颗粒他克莫司剂型和包肠溶衣的纳米颗粒他克莫司剂型，但也可以使用任何可药用的剂型。包肠溶衣的剂型实例包括但不限于：固体分散体或液体填充的他克莫司胶囊。

本发明的剂型可以提供成在对患者施用时显示各种不同释放型式的制剂形式，包括例如，IR制剂，可以每天服用一次的CR制剂，以及IR和CR制剂的结合。因为本发明的CR形式可以每天只需用药一次(或者每个合适的时间间隔用药一次，例如每周或每月一次)，所以这类剂型具有提高患者方便性和顺从性的好处。这对于免疫抑制剂特别有利，因为患者对用药方案的不顺从性会造成器官排斥。在CR形式中采用的控释机制可以用各式各样的方式实现，包括但不限于，使用可侵蚀的制剂、扩散控制的制剂以及渗透控制的制剂。

这里所述的组合物包含纳米颗粒他克莫司和至少一种表面稳定剂。对于可注射的组合物，纳米颗粒他克莫司优选具有小于约600nm的有效平均颗粒大小。对于包肠溶衣的组合物，纳米颗粒他克莫司的有效平均颗粒大小小于约2000nm。

与常规形式的他克莫司(例如，非纳米颗粒形式或溶解的剂型)相比，本发明的纳米颗粒他克莫司制剂的优点包括但不限于：(1)增加了水溶解度；(2)提高了生物利用度；(3)由于提高了生物利用度从而剂型尺寸较小；(4)由于提高了生物利用度从而治疗剂量较低；(5)由于剂量低，不良副作用的危险减小；(6)提高了患者的方便性和顺从性；和(7)在器官移植手术后更有效地预防器官排斥。与常规形式的可注射的他克莫司相比，本发明的可注射的纳米颗粒他克莫司制剂的另一优点是不需要使用聚氧乙烯(60)氢他蓖麻油(HCO-60)作为稳定剂。包肠溶衣的纳米颗粒他克莫司的进一步的优点是由于肠溶衣而降低了不良副作用的危险。

本发明还包括伴有一种或多种无毒的生理上可接受的载体、辅剂或赋形剂(统称为载体)的纳米颗粒他克莫司组合物。这些组合物可以配制成用于肠道外注射(例如，静脉内、肌肉或皮下)，以固体、液体或气溶胶形式口服，阴道、鼻、直肠、眼、局部(粉、膏或滴剂)、含服、脑池内、腹膜内或表面施药等。

B.定义

如同下面和整篇申请中所述，本文中使用几个定义来描述本发明。

本文使用的术语“小于约2000nm的有效平均颗粒大小”，意味着当用例如沉降场流动分级、光子相关谱、光散射、盘式离心和本领域技术人员已知的其它技术测定时，至少50％的他克莫司的重均大小小于约2000nm。

当在本文中使用时，“约”应该被本领域普通技术人员理解，并将随其所用之处的上下文而有一定程度的变化。如果本领域普通技术人员不清楚在给定的上下文中使用的术语，“约”意味着最高达该具体名词的加或减10％。

当在本文中提到稳定的他克莫司颗粒时，是指但不限于以下一个或多个特性：(1)他克莫司颗粒不因颗粒间吸引力而显著絮凝或团聚，或颗粒大小随时间有显著增大；(2)他克莫司颗粒的物理结构不随时间改变，例如从无定形相转变为晶相；(3)他克莫司颗粒是化学稳定的；和/或(4)在本发明的纳米颗粒制备中，他克莫司未曾在他克莫司的熔点或更高温度下加热。

术语“常规的”或“非纳米颗粒的”活性剂或他克莫司是指溶解的或者有效平均颗粒大小大于约2000nm的活性剂，例如他克莫司。本文中定义的纳米颗粒活性剂的有效平均颗粒大小小于约2000nm。

这里使用的短语“水溶性差的药物”，是指水中溶解度小于约30mg/mL，优选小于约20mg/mL，优选小于约10mg/mL，或优选小于约1mg/mL的药物。

这里使用的短语“治疗有效量”，是指对显著性数目需要治疗的对象施用药物时能提供特定的药理响应的药物剂量。应该强调，在特定情形下对特定对象施用治疗有效量的药物，即使该剂量确实是本领域技术人员认为的治疗有效剂量，也不总是在治疗所述症状/疾病方面有效。

这里使用的“颗粒”一词是指以存在分离的粒子、丸粒、珠粒或团粒为特征为物质的一种形态，不管其大小、形状或形貌如何。这里所用的“多颗粒”是指多个分离的，或聚集的粒子、丸粒、珠粒、团粒或其混合物，而不管其大小、形状或形貌如何。

这里涉及本发明组合物或包衣或包衣材料所用的或在任何其它上下文中使用的“改性释放”一词，意味着不是立即释放，而是包括受控释放，持续释放和延迟释放。

这里使用的术语“时间延迟”是指从服用组合物到从特定组分中释放出他克莫司这段时间。

这里使用的“滞后时间”一词，是指从一种组分中释放出活性成分到随后从另一组分中释放出他克莫司所经过的时间。

C.纳米颗粒他克莫司组合物的特点

本发明的纳米颗粒他克莫司组合物有很多被增强的药理特性。

1.提高的生物利用度

本发明的他克莫司制剂，与先前的常规他克莫司制剂相比，在相同的他克莫司的相同剂量下，显示出提高的生物利用度，并且需要的剂量较小。因此，如果对禁食状态的患者施用纳米颗粒他克莫司片剂，与在禁食状态下施用常规的微晶他克莫司片剂，不是生物等效的。

这种非生物等效性是有意义的，因为它意味着纳米颗粒他克莫司剂型显示出大得多的药物吸收。而且为了纳米颗粒他克莫司剂型与常规的微晶他克莫司剂型是生物等效的，纳米颗粒他克莫司剂型必须包含少得多的药物。因此，纳米他克莫司剂型显著提高了该药物的生物利用度。

另外，纳米颗粒他克莫司剂型需要较少的药物就可得到用常规的微晶他克莫司剂型(例如PROGRAF^)观察到的同样的药理作用。因此，纳米颗粒他克莫司剂型与常规的微晶他克莫司剂型相比，生物利用度提高。

2.本发明的他克莫司组合物的药物动力学型式不受摄入该组合物的治疗对象的进食或禁食状态的影响。

本发明的组合物中包含他克莫司，其中他克莫司的药物动力学型式基本上不受摄入组合物的治疗对象的进食或禁食状态的影响。这意味着当纳米颗粒他克莫司组合物被服用时，进食与禁食状态下的药物吸收量或药物吸收速率只有很小或者没有明显的差别。

基本上消除食物影响的剂型的好处，包括治疗治疗对象方便性提高，从而提高了治疗对象的顺从性，因为该对象不需要保证他们要在进食或不进食下用药。这是有意义的，因为当治疗对象对他克莫司的顺从性差时，可能会观察到该药物用来治疗的医学症状增强，即，患者可能遭受器官排斥。

本发明还优选提供了当哺乳动物治疗对象服用后具有理想的药物动力学型式的他克莫司组合物。他克莫司组合物的理想的药物动力学型式包括但不限于：(1)当在服药后的哺乳动物治疗对象的血浆中测定时，他克莫司的C_max优选大于非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)按同一剂量服用时的C_max；和(2)当在服药后的哺乳动物治疗对象的血浆中测定时，他克莫司的AUC优选大于非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)按同一剂量服用时的AUC；和/或(3)当在服药后的哺乳动物治疗对象的血浆中测定时，他克莫司的T_max优选小于非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)按同一剂量服用时的T_max。这里所说的理想的药物动力学型式，是在他克莫司初始用药后测定的药物动力学型式。

在一项实施方案中，优选的他克莫司组合物在与非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)对比的药物动力学试验中，按相同的剂量给药，其T_max不超过非纳米颗粒他克莫司制剂的T_max的约90％，不超过约80％，不超过约70％，不超过约60％，不超过约50％，不超过约30％，不超过约25％，不超过约20％，不超过约15％，不超过约10％，不超过约5％。

在另一实施方案中，本发明的他克莫司组合物在与按相同剂量服用的非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF^)的对比药物动力学试验中，显示出的C_max比该非纳米颗粒他克莫司制剂高至少约50％，至少约100％，至少约200％，至少约300％，至少约400％，至少约500％，至少约600％，至少约700％，至少约800％，至少约900％，至少约1000％，至少约1100％，至少约1200％，至少约1300％，至少约1400％，至少约1500％，至少约1600％，至少约1700％，至少约1800％，或至少约1900％。

在又一实施方案中，本发明的他克莫司组合物在一项与非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)对比的药物动力学试验中，按相同剂量用药，其AUC比非纳米颗粒他克莫司制剂(例如PROGRAF)显示的AUC大至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约100％，至少约125％，至少约150％，至少约175％，至少约200％，至少约225％，至少约250％，至少约275％，至少约300％，至少约350％，至少约400％，至少约450％，至少约500％，至少约550％，至少约600％，至少约650％，至少约700％，至少约750％，至少约800％，至少约850％，至少约900％，至少约950％，至少约1000％，至少约1050％，至少约1100％，至少约1150％，或至少约1200％。

3.本发明的他克莫司组合物在进食与禁食条件下服用时的生物等效性

本发明还包括一种含纳米颗粒他克莫司的组合物，其中向禁食状态的治疗对象施用该组合物与向进食状态的治疗对象施用该组合物是生物等效的。

当在进食和禁食状态下服用含纳米颗粒他克莫司的组合物时，吸收的差别优选小于约35％，小于约30％，小于约25％，小于约20％，小于约15％，小于约10％，小于约5％，或小于约3％。

在本发明的一项实施方案中，本发明包括纳米颗粒他克莫司，其中向禁食状态的治疗对象施用该组合物与向进食状态的治疗对象施用该组合物是生物等效的，特别是按照由美国食品和药物管理局和欧洲的相应管理机构(EMEA)制定的C_max和AUC标准的规定。根据美国FDA标准，如果AUC和C_max的90％置信区间处在0.80至1.25之间(就管理目的而言，T_max测定与生物等效性不相关)，则两种产品或方法是生物等效的。要表明两种化合物或用药条件之间具有符合欧洲的EMEA标准的生物等效性，AUC的90％置信区间(CI)必须在0.8至1.25之间，并且对于C_max，90％CI必须在0.70至1.43之间。

4.本发明的他克莫司组合物的溶解情况

本发明的他克莫司组合物出乎意料地具有令人惊奇的溶解型式。所服用的活性药物优选快速溶解，因为较快溶解一般会导致更快地发生作用和更大的生物利用度。为了改进他克莫司的溶解型式和生物利用度，提高药物的溶解性能使其能达到接近100％的水平是有用的。

本发明的他克莫司组合物优选具有这样的溶解型式，其中在约5分钟内至少约20％的组合物被溶解。在本发明的其他实施方案中，至少约30％或约40％的他克莫司组合物在约5分钟内溶解。在另一些本发明实施方案中，优选至少约40％，约50％，约60％，约70％，或约80％的他克莫司组合物在约10分钟内溶解。最后，在本发明的另一实施方案中，优选至少约70％，约80％，约90％，或约100％的他克莫司组合物在约20分钟内溶解。

溶解优选在形成区别的介质中测定。这样一种溶解介质将对两种在胃液中具有很不同的溶解型式的产品产生很不相同的溶解曲线，即，该溶解介质预测组合物的体内溶解情况。一种示例性的溶解介质是含有0.025M表面活性剂十二烷基硫酸钠的水基介质。测定溶解量可以用光度法进行。旋动叶片法(欧洲药典)可用来测定溶解情况。

5.本发明的他克莫司组合物的再分散性

本发明的他克莫司组合物的另一特点是组合物重新分散，从而使再分散的他克莫司颗粒的有效平均颗粒大小小于约2微米。这是有意义的，因为如果在服用时本发明的纳米颗粒他克莫司组合物不重新分散成纳米颗粒大小，则该剂型可能丧失由于将他克莫司配制成纳米颗粒大小而获得的好处。适合本发明的纳米颗粒大小是有效平均颗粒大小小于约2000nm。在另一实施方案中，适合本发明的纳米颗粒大小是有效平均颗粒大小小于约600nm。

确实，本发明的纳米颗粒活性剂组合物从活性剂的小颗粒尺寸获得好处；如果活性剂在服用时不重新分散成小颗粒尺寸，由于纳米颗粒体系的极高的表面自由能和实现总自由能降低的热力学驱动力，则会形成“团块”或团聚的活性剂颗粒。随着这种团聚的颗粒的形成，剂型的生物利用度可能会降至远低于用纳米颗粒活性剂的液体分散体形式观察到的数值。

另外，本发明的纳米颗粒他克莫司组合物在对哺乳动物(例如人或动物)施用时，如同在生物相关性水介质中通过再构成/再分散所证实的，显示出令人惊奇的纳米颗粒他克莫司颗粒的重新分散，从而使再分散的他克莫司颗粒的有效平均颗粒大小小于约2微米。这种生物相关性水介质可以是显示所要求的离子强度和pH的任何水介质，所述的离子强度和pH构成了介质生物相关性的基础。所要求的pH和离子强度是在人体中发现的典型的生理条件的数值。这种生物相关性水介质可以是例如显示所要求的pH值和离子强度的电解质水溶液或任何盐、酸或碱的水溶液，或是它们的组合。

生物相关的pH是本领域众所周知的。例如，在胃中，pH范围是从略小于2(但一般大于1)直至4或5。在小肠中pH范围为4-6，在结肠中可以是6-8。生物相关的离子强度也是本领域众所周知的。禁食状态的胃液的离子强度为为约0.1M，而禁食状态肠液的离子强度为约0.14。见Lindahl等，“Characterization of Fluids from the Stomach andProximal Jejunum in Men and Wen”，Pharm.Res.，14(4)：497-502(1997)。

据信试验溶液的pH和离子强度比具体的化学内容物更为关键。因此，合适的pH和离子强度值可以通过强酸、强碱、盐、单共轭或多共轭的酸-碱对(即，弱酸和该酸的相应盐)、单质子和多质子电解质等的许多种组合得到。

代表性的电解质溶液可以是但不限于：浓度从约0.001M至约0.1M的HCl溶液，和浓度从约0.001M至约0.1M的NaCl溶液，以及它们的混合物。例如，电解质溶液可以是但不限于：约0.1M或更稀的HCl，约0.01M或更稀的HCl，约0.001M或更稀的HCl，约0.1M或更稀的NaCl，约0.01M或更稀的NaCl，约0.001M或更稀的NaCl，以及它们的混合物。在这些电解质溶液中，0.01M HCl和/或0.1M NaCl是最典型的禁食人体生理条件，因其接近胃肠道的pH和离子强度条件。

0.001M HCl、0.01M HCl和0.1M HCl的电解质浓度分别相应于pH3、pH2和pH1。例如，0.01M HCl溶液模拟在胃中发现的典型的酸性条件。0.1M的NaCl溶液提供了对整个人体中发现的离子强度条件的合理近似，包括胃肠道流体，虽然高于0.1M的浓度可以用来模拟人的胃肠道内的进食条件。

显示出所要求的pH值和离子强度的盐、酸、碱或其组合的溶液实例，包括但不限于，磷酸/磷酸盐+氯化钠、钾和钙盐，乙酸/乙酸盐+氯化钠、钾和钙盐，碳酸/碳酸氢盐+氯化钠、钾和钙盐，和柠檬酸/柠檬酸盐+氯化钠、钾和钙盐。

在本发明的其它实施方案中，本发明的重新分散的他克莫司颗粒(重新分散在水基、生物相关的或其他任何合适的介质之中)具有的有效平均颗粒大小，当用光散射方法、显微镜法，或其它合适的方法测定时，小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，或小于约50nm。这些适合测定有效平均颗粒大小的方法是本领域普通技术人员已知的。

再分散性可以用本领域已知的任何合适的方法试验。参见例如美国专利6,375,986“Solid Dose Nanoparticulate Compositions Comprising aSynergistic Composition of a Polymeric Surface Stabilizer and DioctylSodium Sulfosuccinate”的实施例部分。

6.与其它活性剂联合使用的他克莫司组合物

本发明的他克莫司组合物可以另外含有一种或多种可用于预防器官排斥的化合物。本发明的组合物可以与这些其它活性药物共同配制，或是本发明组合物可以与其它这些活性药物一起同时服用或顺序服用。可以与他克莫司同时服用或者共同配制的药物的实例，包括但不限于，环孢菌素、麦考酚酸、雷帕霉素(也称作西洛莫司)、阿仑单抗、麦考酚酸吗乙酯、皮质类固醇、糖皮质类固醇、多西环素、干扰素β-1b丙二腈酰胺FK778、硫唑嘌呤、Campath-1H、巴利昔单抗和甲氨蝶呤。

D.组合物

本发明提供了含有纳米颗粒他克莫司和至少一种表面稳定剂的组合物。表面稳定剂优选被吸附或结合在他克莫司颗粒的表面上。适用的表面稳定剂不与他克莫司颗粒或者自身发生化学反应。最好是表面稳定剂的各个分子基本上没有分子间交联。在另一实施方案中，本发明的组合物可以含两种或多种表面稳定剂。

本发明还包括纳米颗粒他克莫司组合物以及一种或多种无毒的生理上可接受的载体、辅剂或赋形剂(统称载体)。组合物可被配制成用于肠道外注射(例如静脉内、肌内或皮下注射)，以固体、液体或气溶胶形式口服，阴道、鼻、直肠、眼、局部(粉剂、膏剂或滴剂)、含服、脑池内、腹膜内或表面给药等。在本发明的某些实施方案中，纳米颗粒他克莫司制剂是可注射的形式或包肠溶衣的口服形式。

1.他克莫司

他克莫司，也称作FK-506或富士霉素，是一种23元的大环内酯。这里使用的“他克莫司”一词包括其类似物和盐，并且可以是结晶相、无定形相、半结晶相、半无定形相或它们的混合物。本发明中的他克莫司，在合适的情况下，可以以基本上旋光纯的对映体形式，或以对映体的混合物，外消旋物或其它形式存在。

2.表面稳定剂

在本发明的可注射的他克莫司制剂中可以使用一种以上表面稳定剂的组合。合适的表面稳定剂包括但不限于已知的有机或无机药物赋形剂。这些赋形剂包括各种聚合物，低分子量的低聚物，天然产物和表面活性剂。表面稳定剂包括非离子型、阴离子型、阳离子型、离子型和两性离子型表面活性剂。一种优选的用于可注射纳米颗粒他克莫司制剂的表面稳定剂是聚维酮聚合物。

表面稳定剂的代表性实例包括羟丙基甲基纤维素(现在称为羟丙甲纤维素)、羟丙基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，十二烷基硫酸钠，磺化琥珀酸二辛酯，明胶，酪蛋白，卵磷脂(磷脂)，葡聚糖，阿拉伯胶，胆固醇，黄蓍胶，硬脂酸，苯扎氯铵，硬脂酸钙，甘油单硬脂酸酯，十六醇十八醇混合物，聚乙二醇单鲸蜡基醚乳化蜡，失水山梨醇酯，聚氧乙烯烷基酯(例如，聚乙二醇醚，如聚西托醇1000)，聚氧乙烯蓖麻油衍生物，聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(例如市售的Tween，如Tween 20和Tween 80(ICI Speciality Chemicals))聚乙二醇(例如Cavbo waxes 3550和934(Union Carbide))，聚氧乙烯硬脂酸酯，胶体二氧化硅，磷酸盐，羧甲基纤维素钙，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟乙基纤维素，邻苯二甲酸羟丙基纤维素，非晶纤维素，硅酸铝镁，三乙醇胺，聚乙烯醇(PVA)，4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称作泰洛沙泊，四丁酚醛和triton)，泊洛沙姆(例如，Pluronics F68和F108，它们是环氧乙烷与环氧丙烷的嵌段共聚物)；Poloxamines(例如，Tetonic 908，也称为Poloxamine 908，它是由环氧丙烷和环氧乙烷顺序加成到乙二胺上衍生形成的四官能嵌段共聚物(BASF Wyandotte Corporation，Parsippany，N.J.))；Tetronic 1508(T-1508)(BASF WyandotteCorporation)，Triton X-200(一种烷基芳基聚醚磺酸盐，Rohn andHaas)；Crodestas F-110(蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物，Croda Inc.)；对异壬基苯氧基聚(缩水甘油)，也称作Olin-lOG或Surfactant 10-G(Olin Chemicals，Stamford，CT)；Crodestas SL-40(Croda，Inc.)；和SA9OHCO(C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHH)4(CH2OH)2，Eastman Kodak Co.)；癸酰-N-甲基葡糖胺；正癸基-D-吡喃葡糖苷；正癸基-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基-D-吡喃葡糖苷；正十二烷基-D-麦芽糖苷；庚酰-N-甲基葡糖胺；正庚基-D-吡喃蓟糖苷；正庚基-D-硫葡糖苷；正己基-D-吡喃葡糖苷；壬酰-N-甲基葡糖胺；正壬酰-D-吡喃葡糖苷；辛酰-N-甲基葡糖胺；正辛基-D-吡喃葡糖苷；辛基-D-硫吡喃葡糖苷；PEG-磷脂，PEG-胆固醇，PEG-胆固醇衍生物；PEG-维生素A，PEG-维生素E，溶菌酶，乙烯基吡咯烷酮和醋酸乙烯酯的无规共聚物等。如果需要，本发明的纳米颗粒他克莫司制剂也可以配制成不含磷脂。

适用的阳离子表面稳定剂包括但不限于：聚合物，生物高分子，多糖化合物，纤维素，藻酸盐，磷脂，和非聚合的化合物，例如两性离子型稳定剂，聚-N-甲基吡啶，氯化蒽基吡啶，阳离子型磷脂，甲壳糖，聚赖氨酸，聚乙烯基咪唑，溴化己二甲胺聚甲基丙烯酸甲酯溴化三甲铵溴化物(PMMTMABr)，溴化己基二苯乙酮基三甲基铵(HDMAB)，和聚乙烯吡咯烷酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸盐。其它可用的阳离子型稳定剂包括但不限于：阳离子类脂，硫，，和季铵化合物，例如氯化硬脂基三甲铵，溴化苄基二(2-氯乙基)乙基铵，氯化或溴化椰子基三甲铵，氯化或溴化椰子基甲基二羟乙基铵，氯化癸基三乙铵，氯化或溴化癸基二甲基羟乙基铵，氯化或溴化C12-15二甲基羟乙基铵，氯化或溴化椰子基二甲基羧乙基铵，甲基硫酸化十四烷基三甲铵，氯化或溴化十二烷基二甲基苄基铵，氯化或溴化十二烷基二甲基(EO)4铵，氯化N-烷基(C12-18)二甲基苄基铵，氯化N-烷基(C14-18)二甲基苄基铵，氯化N-十四烷基二甲基苄基铵一水合物，氯化二甲基二癸基铵，氯化N-烷基(C12-14)二甲基1-萘甲基铵，卤化三甲铵，烷基三甲铵盐和二烷基二甲基铵盐，氯化十二烷基三甲铵，乙氧基化烷基酰胺基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基化三烷基铵盐，氯化二烷基苯二烷基铵，氯化N-二癸基二甲基铵，氯化N-十四烷基二甲基苄基铵一水合物，氯化N-烷基(C12-14)二甲基1-萘甲基铵和氯化十二烷基二甲基苄基铵，氯化二烷基苯烷基铵，氯化十二烷基三甲铵，氯化烷基苄基甲基铵，溴化烷基苄基二甲胺，溴化C12、15、C17三甲基铵，氯化十二烷基苄基三乙铵，氯化聚二烯丙基二甲基铵(DADMAC)，氯化二甲铵，卤化烷基二甲基铵，氯化十三烷基甲基铵，溴化癸基三甲基铵，溴化十二烷基三乙基铵，溴化十四烷基三甲基铵，氯化甲基三辛基铵(ALIQUAT 336)，POLYQUAT，溴化四丁铵，溴化苄基三甲铵，胆碱脂(例如脂肪酸的胆碱酯)，苯扎氯铵，氯化硬脂基二甲基苄基铵化合物(例如氯化硬脂基三甲基铵和氯化二硬脂基二甲基铵)，溴化或氯化十六烷基吡啶，季铵化聚氧乙基烷基胺，MIRAPOL和ALKAQUAT(Alkaril Chemical Company)，烷基吡啶盐；胺，例如烷基胺、二烷基胺、链烷醇胺、聚乙烯多胺，N，N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶；胺盐，例如十二烷乙酸盐、十八胺乙酸盐、烷基吡啶盐和烷基咪唑盐，以及氧化胺类；咪唑盐；质子化的季型丙烯酰胺；甲基化的季型聚合物，例如聚[二烯丙基二甲基氯化铵]和聚[N-甲基乙烯基氯化吡啶]；以及阳离子型瓜尔胶。

这些示例性的阳离子型表面稳定剂和其它有用的阳离子型表面稳定剂描述于以下文献中：J.Cross and E.Singer，Cationic Surfactants：Analytical and Biological Evaluation(Marcel Dekker，1994)；P.and D.Rubingh(Editot)，Cationic Surfactants：Physical Chemistry(MarcelDekker，1991)；和J.Richmond，Cationic Surfactants：OrganicChemistry，(Marcel Dekker，1990)。

非聚合的表面稳定剂是任何非聚合的化合物，例如苯扎氯胺、碳化合物、磷化合物、氧化合物、卤化合物、阳离子型有机金属化合物、季磷化合物、吡啶化合物、苯胺化合物、铵化合物、羟基铵化合物、伯胺化合物、仲铵化合物、叔铵化合物、式NR1R2R3R4(+)的季铵化合物。对于式NR1R2R3R4(+)的化合物：

(1)R1-R4都不是CH3；

(2)R1-R4中的一个是CH3；

(3)R1-R4中的3个是CH3；

(4)R1-R4都是CH3；

(5)R1-R4中的2个是CH3，一个是C6H5CH2，一个是7个或更少碳原子的烷基链；

(6)R1-R4中的2个是CH3，一个是C6H5CH2，一个是19个或更多碳原子的烷基链；

(7)R1-R4中的2个是CH3，一个是基团C6H5(CH2)n，其中n＞1；

(8)R1-R4中的2个是CH3，一个是C6H5CH2，一个含至少一个杂原子；

(9)R1-R4中的2个是CH3，一个是C6H5CH2，一个含至少一个卤原子；

(10)R1-R4中的2个是CH3，一个是C6H5CH2，一个含至少一个环状片段；

(11)R1-R4中的2个是CH3，一个是苯基环，或

(12)R1-R4中的2个是CH3，另2个是纯的脂族片段。

这些化合物包括但不限于：二十二烷基苄基二甲基氯化铵，异辛基苯氧基乙氧基乙基苄基二甲基氯化铵，氯化十六烷基吡啶，氯化二十二烷基三甲基铵，氯化十二烷基苄基二甲基铵，氯化十六烷基苄基二甲基铵，溴化十六烷基三甲基铵，氯化十六烷基三甲基铵，氢氟化十六烷基胺，氯化氯烯丙基六亚甲基四胺(Quaternium-15)，氯化二硬脂基二甲基铵(Quaternium-5)，氯化十二烷基二甲基乙基苄基铵(Quaternium-14)，Quaternium-22，Quaternium-26，Quaternium-18锂蒙脱石，氯乙基二甲基胺盐酸盐，半胱氨酸盐酸盐，二乙醇铵POE(10)油基醚磷酸盐，二乙醇铵POE(3)油基醚磷酸盐，牛油基苄基二甲基氯化铵，二甲基二(十八烷基)铵膨润土，氯化十八烷基苄基二甲基铵，杜灭芬，2，6-二甲基苯基氨基氧乙基二乙基苄基苯甲酸铵，氯化十四烷基苄基二甲基铵，氯化十二烷基三甲基铵，乙二胺二盐酸盐，盐酸胍，盐酸吡哆醇，盐酸碘非他胺，盐酸葡甲胺，甲苄索氯铵，溴化十四烷基三甲铵，氯化油基三甲铵，Polyquaternium-1，盐酸普鲁卡因，椰油基甜菜碱，硬脂基苄基二甲基铵膨润土，硬脂基苄基二甲基锂蒙脱石，硬脂基三羧乙基丙二胺二氢氟酸盐，氯化牛油基三甲铵和溴化十六烷基三甲铵。

这些表面稳定剂的大多数是已知的药物赋形剂，在美国药物联合会和英国药物学会联合出版的Hhandbook of PharmaceuticalExcipients(The Pharmaceutical Press，2000)中有详细说明，在这里专门引用作为参考。

聚维酮聚合物

聚维酮聚合物是用于配制可注射的纳米颗粒他克莫司制剂的优选的表面稳定剂。聚维酮聚合物，也称为聚维酮，聚乙烯吡咯酮，PVP和聚乙烯吡咯烷酮，以Kollidon^(BASF Corp.)和Plasdone^(ISPTechnologies，Inc.)的商品名称销售。它们是多分散的大分子，化学名称1-乙烯基-2-吡咯烷酮聚合物。聚维酮聚合物在工业上被制备成平均分子量从约10,000到约700,000道尔顿的一系列产品。要适合作为施用给哺乳动物的药物化合物的表面修饰剂，聚维酮聚合物的分子量必须小于约40,000道尔顿，因为大于40,000的分子量将难以从体内清除。

聚维酮聚合物用例如Reppe方法制备，包括：(1)利用Reppe丁二烯合成法，由乙炔和甲醛得到1，4-丁二醇；(2)在200℃将1，4-丁二醇于铜上脱氢，形成γ-丁内酯；(3)γ-酯与氨反应，生成吡咯烷酮。随后用乙炔处理，得到乙烯基吡咯烷酮单体。聚合反应在H₂O和NH₃存在下加热进行。见The Merck Index，第10版，7581页(Merck & Co.，Rahway，NJ，1983)。

聚维酮聚合物的制造方法产生的聚合物包含链长不等，因此分子量不同的分子。对于每种特定的商业等级，此分子量均围绕一个平均值变化。因为难以直接确定聚合物的分子量，所以最常用的将不同分子量等级分类的方法是利用基于粘度测量的K值。各种不同等级的聚维酮聚合物的K值代表平均分子量的一个函数，它得自粘度测量，按照Fikentscher公式计算。

分子量的重均值Mw，是通过测定各个分子的重量的方法，例如光散射法，来确定。表1提供了几种市售的聚维酮聚合物的分子量数据，它们都是可溶的。

表1

聚维酮	K-值	Mv(道尔顿)＊＊	Mw(道尔顿)＊＊	Mn(道尔顿)＊＊
					Plasdone C-15	17±1	7,000	10,500	3,000
Plasdone C-30	30.5±1.5	38,000	62,500*	16,500
					Kollidon 12 PF	11-14	3,900	2,000-3,000	1,300
Kollidon 17 PF	16-18	9,300	7,000-11,000	2,500
					Knllidon 25	24-32	25,700	28,000-34,000	6,000

^*因为分子量大于40,000道尔顿，此种聚维酮聚合物不适合作为肠道外给药(即，注射)的药物化合物的表面稳定剂使用。

^**Mv是粘均分子量，Mn是数均分子量，Mw是重均分子量。Mw和Mn用光散射和超离心方法测定，Mv用粘度测量来确定。

根据表1中提供的数据，优选的商品聚维酮聚合物实例包括但不限于：Plasdone C-15^，Kollidon 12PF^，Kollidon 17PF^和Kollidon25^。

3.纳米颗粒他克莫司颗粒大小

这里使用的颗粒大小是用本领域技术人员所熟知的常规的颗粒大小测定技术，在重均颗粒大小的基础上确定的。这类技术包括例如沉降场流动分级，光子相关谱法，光散射和盘式离心法。

本发明的组合物，特别是包肠溶衣的组合物，含有有效平均颗粒大小小于约2000nm(即，2微米)的他克莫司纳米颗粒。在本发明的另外的实施方案中，当用光散法，显微镜法或其它合适的方法测定时，他克莫司颗粒的有效颗粒大小小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm。

在另一实施方案中，本发明的纳米颗粒组合物，特别是可注射的纳米颗粒组合物，含有有效平均颗粒大小小于约600nm的他克莫司纳米颗粒。在其它的实施方案中，有效平均颗粒大小小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm。

“有效平均颗粒大小小于约2000nm”意味着，按重量计，至少50％的他克莫司颗粒的颗粒大小小于该有效平均值，即，小于约2000nm。如果“有效平均颗粒大小”小于约1900nm，则在用上述方法测定时，至少约50％的他克莫司颗粒的大小小于约1900nm。对于上面提到的其它颗粒大小也是同样。在其它实施方案中，至少约70％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％的他克莫司颗粒的颗粒大小小于该有效平均值，即，小于约2000nm，约1900nm，约1800nm等。

在本发明中，纳米颗粒他克莫司组合物的D50值，是按重量计50％的他克莫司颗粒低于此值的某个颗粒大小。类似地，D90是按重量计90％的他克莫司低于此值的某个颗粒大小。

4.纳米颗凿他克莫司和表面稳定剂的浓度

他克莫司和一种或多种表面稳定剂的相对数量可在很宽范围内变化。各个组分的最佳数量取决于例如所选择的表面稳定剂的物理和化学特性，例如亲水亲油平衡(HLB)、熔点和表面稳定剂水溶液的表面张力等。

优选的是，他克莫司的浓度按照不包括其它赋形剂在内的他克莫司与至少一种表面稳定剂的总重计算，可以从约99.5％至约0.001％，从约95％至约0.1％，或从约90％至约0.5％变化。从剂量和成本效率的观点考虑，通常优选较高的活性成分浓度。

优选的是，按照不包括其它赋形剂在内的他克莫司和至少一种表面稳定剂的总干重量计算，表面稳定剂的浓度可以从约0.5％至约99.999％，从约5.0％至约99.9％，或从约10％至约99.5％变化。

5.其它药物赋形剂

本发明的药物组合物，根据给药途径和所希望的剂型，还可以含有一种或多种粘合剂、填充剂、润滑剂、悬浮剂、甜味剂、风味剂、防腐剂、缓冲剂、润湿剂、崩解剂、泡腾剂和其它赋形剂。这些赋形剂是本领域所熟知的。

填充剂的实例是一种水合乳糖、无水乳糖和各种淀粉；粘合剂的实例是各种纤维素和交联的聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素如Avicel^PH101和Avicel^PH102，微晶纤维素，如硅化的微晶纤维素(ProSolvSMCC^TM)。

合适的润滑剂，包括对要被压缩的粉末的流动性起作用的试剂，是胶体二氧化硅，例如Aerosil^200、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和硅胶。

甜味剂的实例是天然或人工甜味剂，例如蔗糖、木糖醇、糖精钠、环己氨磺酸盐、天冬甜素和乙酰舒泛。风味剂的实例是Magnasweet^(商品名称MAFCO)，泡泡糖香精和水果香精等。

防腐剂的实例是山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，苯甲酸及其盐，对羟基苯甲酸的其它酯，例如对羟基苯甲酸丁酯，醇例如乙醇或苯甲醇，酚类化合物如苯酚，以及季铵化合物如苯扎氯铵。

合适的稀释剂包括可药用的惰性填料，例如微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或上述任何物质的混合物。稀释剂的实例包括微晶纤维素，例如Avicel^PH101和Avicel^PH102；乳糖，例如一水合乳糖、无水乳糖和Pharmatose^DCL21；磷酸氢钙和Emcompress^；甘露醇；淀粉；山梨醇；蔗糖和葡萄糖。

合适的崩解剂包括轻度交联的聚乙烯吡咯烷酮，谷物淀粉，土豆淀粉，玉米淀粉及改性淀粉，交联的羧甲基纤维素钠，交联的聚乙烯吡咯烷酮，淀粉羟乙酸钠及它们的混合物。

泡腾剂的实例是泡腾配对物，例如有机酸与碳酸盐或碳酸氢盐。合适的有机酸包括例如柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、己二酸、丁二酸和藻酸以及酸酐和酸式盐。合适的碳酸盐和碳酸氢盐包括例如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、甘氨酸碳酸钠、L-赖氨酸碳酸盐和精氨酸碳酸盐。或者是，可以只存在泡腾配对物中的碳酸氢钠组分。

6.可注射的纳米颗粒他克莫司制剂

本发明提供了可注射的纳米颗粒他克莫司制剂，其在低的注射体积中含有高浓度药物，同时在服用时药物快速溶解。另外，本发明的可注射的纳米颗粒他克莫司制剂不需要使用聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油(HCO-60)作为稳定剂。

一种可注射的他克莫司制剂实例按％w/w计含有：

他克莫司      5-50％

聚维酮聚合物  0.1-50％

防腐剂        0.05-0.25％

pH调节剂      pH约6-7

注射用水      适量

防腐剂的实例包括对羟基苯甲酸甲酯(按％w/w计为约0.18％)，对羟基苯甲酸丙酯(按％w/w计为约0.02％)，苯酚(按％w/w计为约0.5％)，和苯甲醇(最高达2％v/v)。一种pH调节剂实例是氢氧化钠，液体载体的实例是注射用的无菌水。其它可用的防腐剂、pH调节剂和液体载体是本领域熟知的。

他克莫司在本发明可注射的纳米颗粒制剂中的含量优选为约0.01-50mg，最好是约0.05-20mg。

7.包肠衣的口服制剂

当与食物一起服用时，他克莫司的生物利用度降低。与食物一起服用造成他克莫司在胃内的停留时间增加。停留时间增加使他克莫司得以在酸性的胃液条件下溶解。于是，当被溶解的药物离开胃进入上小肠的较高碱性的条件时，他克莫司从溶液中沉淀出来。沉淀的他克莫司吸收差，因为它在能被吸收之前必须再次溶解，这一过程由于他克莫司的水溶性差而很慢。药物在胃中溶解并随后沉淀，减小了他克莫司能从服用纳米颗粒剂型，例如纳米颗粒他克莫司固体分散体或纳米颗粒他克莫司液体填充胶囊，所获得的生物利用度的提高。保护药物与胃的低pH条件隔绝会减小或消除生物利用度的这一减小。此外，肠溶衣会减少或消除与服用他克莫司有关的恶心和呕吐。

因此，本文描述了一种含有包肠溶衣纳米他克莫司的组合物。在一项实施方案中，该口服制剂含一种包肠溶衣的固体剂型。

用于口服的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，他克莫司与至少一种以下物质混合：(a)一种或几种惰性赋形剂(或载体)，例如柠檬酸钠或磷酸氢钙；(b)填料或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖和硅酸；(c)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(d)增湿剂，例如甘油；(e)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶解阻滞剂，例如石蜡；(g)吸收加速剂，例如季铵化合物；(h)润湿剂，例如十六醇和甘油单硬脂酸酯；(i)吸附剂，例如高岭土和膨润土；和(j)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或其混合物。对于胶囊、片剂和丸剂，剂型中还可含有缓冲剂。

药物释放型式

在一项实施方案中，这里所述的包肠溶衣的他克莫司组合物在以口服剂型对患者施用时，显示出脉动型式的血浆浓度。与服用药物化合物相联系的血浆浓度型式可以描述成“脉动型式”，其中观察到被低浓度谷值间隔的高的他克莫司浓度的脉冲。含两个峰的脉动型式可称为“双峰的”。类似地，在服药时产生这种型式的组合物或剂型可称为显示出“脉动释放”他克莫司。

定期服用立即释放(IR)剂型的常规频繁用药方案通常产生脉动型式的血浆浓度。在这种情形，在每次服用IR剂型后会观察到血浆药物浓度的一个峰值，在两次相连的用药时间之间则形成谷值(低药物浓度区域)。这样的用药方案(及其形成的脉动式血浆浓度)具有与其相关的特定的药理和治疗作用。例如，用于峰值之间的他克莫司血浆浓度下降所形成的间歇时间被认为是减小或防止患者对各类药物的耐受性的一个起作用的因素。

在授予Devane等的美国专利6,228,398、6,730,325和6,793,936中公开并要求保护与本发明中公开的相似的多颗粒改性控释(CR)组合物，所有这些专利都在这里专门引用作为参考。此领域中所有相关的先有技术均可在其中找到。

本发明的另一方面是一个多颗粒改性释放组合物，它有一个含第一集群他克莫司的第一组分和一个含第二集群他克莫司的第二组分。第二组分的含活性成分颗粒用改性释放包衣包覆。替代地或者附加地，第二集群的含他克莫司的颗粒还可以含有改性的释放基质材料。在口服之后，服用的组合物以脉动方式释放出他克莫司。

在根据本发明的多颗粒改性释放组合物的一项优选的实施方案中，第一组分是一种立即释放组分。

涂覆在第二集群他克莫司颗粒上的改性释放包衣造成了从第一集群含他克莫司颗粒释放出活性物与从第二集群含活性他克莫司颗粒释放出活性物之间的滞后时间。类似地，第二集群含他克莫司颗粒中改性释放基质材料的存在造成了从第一集群含他克莫司颗粒中释放他克莫司和从第二集群含他克莫司颗粒中释放活性成分之间的滞后时间。滞后时间的长短可通过改变改性释放包衣的成分和/或数量和/或改变所用的改性释放基质材料的成分和/或数量来变化。因此，可以设计滞后时间的长短以模拟所要求的血浆浓度型式。

因为由多颗粒改性的释放组合物在服用时产生的血浆浓度型式与顺序服用两种或多种IR剂型产生的血浆浓度型式基本上相似，所以本发明的多颗粒控释组合物特别适用于向耐受性可能成问题的患者施用他克莫司。这种多颗粒改性释放组合物因此有利于将患者对组合物中活性成分耐受性的产生降低或减至最小程度。

本发明进一步提供了一种预防器官排斥的方法，包括服用治疗有效量的本发明组合物或固体口服型，以提供脉动式的或双峰的他克莫司给药。本发明的优点包括减小常规的多次IR用药方案所需要的用药频率，同时仍保持由脉动式血浆浓度型式产生的好处。用药频率减小在患者顺从性方面的好处在于有了一种服药频率可以减少的制剂。由于采用本发明而使得用药频率有可能减小，这会减少健康护理人员花费在施用药物上的时间，从而有助于降低健康护理的花费。

每种组分中的活性成分可以相同或不同。例如，一种组合物中第一组分含有他克莫司，第二组分含有对于联合治疗可能是理想的第二活性成分。实际上，当活性成分彼此相容时，两种或多种活性成分可以掺合到同一组分中。在本发明组合物的一种组分中存在的药物化合物，可以伴随着例如在该组合物另一组分中的一种增强剂化合物或敏化剂化合物，以便修改该药物的生物利用度或治疗效果。

这里使用的术语“增强剂”是指能通过促进动物(例如人)内横跨GIT的净转运，提高活性成分的吸收和/或生物利用度的化合物。增强剂包括但不限于中等链长的脂肪酸；其盐、酯、醚和衍生物，包括甘油酯和甘油三酯；非离子型表面活性剂，例如可以通过环氧乙烷与脂肪酸、脂肪醇、烷基酚或者失水山梨醇或甘油脂肪酸酯反应制备的那些；细胞色素P450抑制剂，P糖蛋白抑制剂等；以及这些试剂中的两种或多种的混合物。

各组分中包含的他克莫司的比例根据所要求的用药方案可以相同或不同。在第一组分和第二组分中存在的他克莫司的数量是足以引起治疗响应的任何数量。当可以应用时，他克莫司可以以一种基本上旋光纯的对映异构体的形式，或是以对映体混合物、外消旋物或者其它形式存在。他克莫司在组合物中的含量优选为0.1-60mg，最好是1-30mg。第一组分中他克莫司的含量优选为0.5-60mg，更优选为2.5-30mg。后继组分中他克莫司的含量处在与对第一组分所述的类似范围内。

他克莫司从各组分中释放的时间-释放特性可以通过改变各组分的成分，包括改变可能存在的任何赋形剂或包衣，加以改变。特别是，他克莫司的释放可以通过改变颗粒上的改性释放包衣的成分和/或数量来控制，如果存在这样的包衣的话。如果存在一个以上改性的释放组分，则各个组分的改性释放包衣可以相同或不同。类似地，当通过包含一种改性释放基质材料实现改性释放时，活性成分的释放可以通过所用的改性释放基质材料的选择和数量来控制。各组分中改性释放包衣的含量可以是足以产生各特定组分所要求的延迟时间的任何数量。各组分中改性释放包衣的含量可以是足以产生所希望的组分间的滞后时间的任何数量。

对于他克莫司从各组分中的释放，滞后时间或延迟时间也可以通过改变各组分的成分，包括改变可能存在的任何赋形剂和包衣，来改变。例如，第一组分可以是立即释放组分，其中他克莫司在服用时基本上立即释放。或者是，第一组分可以是例如时间延迟型立即释放组分，其中他克莫司在一段时间延迟后基本上立即释放。第二组分可以是象刚刚提到的时间延迟型立即释放组分，或者是，时间延迟型持久释放或长期释放组分，其中他克莫司在延长的时间内以受控方式释放。

本领域技术人员将会理解，血浆浓度曲线的准确本质将受刚刚提到的所有这些因素的综合影响。特别是，各组分中他克莫司的释放(也即开始起作用)之间的滞后时间可以通过改变各组分的成分和包衣(如果存在)来控制。于是，通过改变各组分的成分(包括活性成分的数量和本性)和改变滞后时间，可以得到许多种释放型式和血浆浓度型式。根据他克莫司从各组分中各次释放之间的滞后时间和从各组分释放的性质(即，立即释放、持久释放等)，血浆浓度型式中的脉冲可以是充分分离和清楚确定的峰(例如，当滞后时间长时)，或这些峰可以有一定程度的重叠(例如，当滞后时间短时)。

在一项优选的实施方案中，本发明的多颗粒改性释放组合物有一种立即释放组分和至少一种改性释放组分，该立即释放组分含有第一集群含他克莫司的颗粒，而改性释放组分则含有第二及后继集群的含他克莫司颗粒。第二和后继的改性释放组分可以含一个控释包衣。附加地或者替代地，第二和后继的改性释放组分可以含一种改性的释放基质材料。在实施时，施用这样一种具有例如单独一个改性释放组分的多颗粒改性释放组合物，会形成特征的脉动式的他克莫司血浆浓度水平，其中该组合物的立即释放组分产生血浆浓度型式中的第一个峰，而改性释放组分产生血浆浓度型式中的第二个峰。本发明的含一个以上改性释放组分的实施方案在血浆浓度型式中产生另外的峰。

由服用单一剂量单元产生的这样一种血浆浓度型式，在希望释放出两个(或多个)他克莫司脉冲而不需要服用两个(或多个)剂量单元时，具有优越性。

肠溶衣

任何从所希望的方式改变他克莫司的释放的包衣材料均可使用。特别是，适合用来实施本发明的包衣材料包括但不限于聚合物包衣材料，例如醋酸邻苯二甲酸纤维素，醋酸-1，2，4-苯三酸纤维素，邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素，聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯；甲基丙烯酸铵共聚物，例如以Eudragit^RS和RL为商标销售的那些；聚丙烯酸和聚丙烯酸酯和铵基甲基丙烯酸酯共聚物，例如以Eudragit^S和L为商标销售的那些；聚乙烯醇缩乙醛二乙氨基乙酸酯，醋酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素，虫胶；水凝胶和胶凝材料，例如羧基乙烯基聚合物，藻酸钠，羧甲基纤维素钠，羧甲基纤维素钙，羧甲基淀粉钠，聚乙烯醇，羟乙基纤维素，甲基纤维素，明胶，淀粉，基于纤维素的交联的聚合物，其中交联度很低，从而有利于水的吸附和聚合物基质的膨胀；羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，交联的淀粉，微晶纤维素，甲壳质，氨酰基甲基丙烯酸酯共聚物(Eudragit^RS-PM，Rohm & Haas)，支链淀粉，胶原，酪蛋白，琼脂，阿拉伯胶，羧甲基纤维素钠，(可溶胀的亲水性聚合物)聚(羟烷基甲基丙烯酸酯，mw约5k-5,000k道尔顿)，聚乙烯吡咯烷酮(mw约10k-360k)，阴离子和阳离子型水凝胶，有少量乙酸酯残余物的聚乙烯醇，琼脂和羧甲基纤维素的可溶胀混合物，马来酸酐和苯乙烯、乙烯、丙烯或异丁烯的共聚物，果胶(mw约30k-300k)，多糖例如琼脂、阿拉伯胶，刺梧桐树胶、黄蓍胶、藻酸钠和瓜尔胶，聚丙烯酰胺，Polyox聚氧乙烯(mw约100k-5,000k)，Aquakeep丙烯酸酯聚合物，葡聚糖的二酯，交联的聚乙烯醇和聚N-乙烯基-2-吡咯烷酮，淀粉羟基乙酸钠(例如Explotab^；Edward Mandell C.Ltd.)；亲水性聚合物例如多糖、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或钙，羟丙基甲基纤维素，羟丙基纤维素，羟乙基纤维素，硝化纤维素，羧甲基纤维素，纤维素醚，聚氧乙烯(例如Polyox^，Union Carbide)，甲基乙基纤维素，乙基羟基乙基纤维素，乙酸纤维素，丁酸纤维素，丙酸纤维素，明胶，胶原，淀粉，麦芽糖糊精，支链淀粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚醋酸乙烯酯，甘油脂肪酸酯，聚丙烯酰胺，聚丙烯酸，甲基丙烯酸的共聚物或甲基丙烯酸(例如Eudragit^，Rohm & Haas)，其它的丙烯酸衍生物，失水山梨醇酯，天然树胶，卵磷酯，果胶，藻酸盐，藻酸铵，藻酸钠，钙，钾，丙二醇藻酸酯，琼脂以及树胶，例如阿拉伯胶、刺梧桐树胶、刺槐豆胶、黄蓍胶、角叉菜胶、瓜尔胶、黄原胶、硬葡聚糖及它们的混合物和掺混物。本领域技术人员将会理解，诸如增塑剂、润滑剂、溶剂等赋形剂可以加到包衣中。合适的增塑剂包括例如乙酰化的单甘油酯，丁基邻苯二甲酰基乙醇酸丁酯，酒石酸二丁酯，邻苯二甲酸二乙酯，邻苯二甲酸二甲酯，乙基邻苯二甲酰乙醇酸乙酯，甘油，丙二醇，甘油三醋酸酯，柠檬酸酯，甘油三丙酸酯，甘油二乙酸酯，邻苯二甲酸二丁酯，乙酰基甘油单酯，聚乙二醇，蓖麻油，柠檬酸三乙酯，多元醇，甘油，乙酸酯，甘油三乙酸酯，乙醚基柠檬酸三乙酯，邻苯二甲酸二苄酯，邻苯二甲酸二己酯，邻苯二甲酸丁基辛基酯，邻苯二甲酸二异壬酯，邻苯二甲酸丁基辛基酯，壬二酸二辛酯，环氧化妥尔油脂肪酸酯，1，2，4-苯三酸三异辛酯，邻苯二甲酸二乙基己基酯，邻苯二甲酸二正辛酯，邻苯二甲酸二异辛酯，邻苯二甲酸二异癸酯，邻苯二甲酸二正十一烷基酯，邻苯二甲酸二正十三烷基酯，1，2，4-苯三酸三-2-乙基己基酯，己二酸二-2-乙基己基酯，癸二酸二-2-乙基己基酯，壬二酸二-2-乙基己基酯，癸二酸二丁酯。

当改性的释放组分含有一种改性的释放基质材料时，任何合适的改性释放基质材料或者改性释放基质材料的合适组合均可使用。这些材料是本领域技术人员已知的。这里使用的术语“改性释放基质材料”包括能改变分散于其中的他克莫司在体外或体内的释放的亲水性聚合物，疏水性聚合物及其混合物。适合本发明的实施的改性释放基质材料包括但不限于：微晶纤维素，羧甲基纤维素钠，羟基烷基纤维素，例如羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素，聚氧乙烯，烷基纤维素，例如甲基纤维素和乙基纤维素，聚丙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，乙酸纤维素，丁酸乙酸纤维素，邻苯二甲酸乙酸纤维素，1，2，4-苯三酸乙酸纤维素，聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯，聚甲基丙烯酸烷基酯，聚醋酸乙烯酯及它们的混合物。

本发明的多颗粒改性释放组合物可以掺加到有利于活性成分以脉动方式释放的任何合适的剂型中。通常，该剂型可以是构成立即释放组分和改性释放组分的含他克莫司颗粒的不同集群的掺混物，该掺混物被装入合适的胶囊中，例如硬和软明胶胶囊中。或者是，各不同集群的含活性成分的颗粒可以被压制(任选地和其它赋形剂一起)或小片，随后按合适的比例装入胶囊中。另一合适的剂型是多层片剂。在这种情形，多颗粒改性释放组合物的第一组分可以被压制成一层，随后加入第二组分作为多层片剂的第二层。构成本发明组合物的含他克莫司颗粒的集群还可以被包含在快速溶解剂型，例如泡腾剂型或快速熔化剂型之中。

在另一实施方案中，本发明组合物含有至少两个体外溶解型式不同的含他克莫司颗粒的集群。

最好是，实施中的本发明组合物及含有该组合物的固体口服剂型释放出他克莫司，使得基本上所有包含在第一组分中的他克莫司都在从第二组分中释放出他克莫司之前释放出来。例如，当第一组分含有一种IR组分时，优选他克莫司从第二组分中的释放被延迟到IR组分中基本上所有的他克莫司都已释放为止。他克莫司从第二组分中的释放可以如以上详细说明的利用改性释放包衣和/或改性释放基质材料来延迟。

在一项实施方案中，当希望通过提供一种促进首剂他克莫司从患者系统中除净的用药方案来减小患者耐受性时，他克莫司从第二组分的释放被推迟到第一组分中包含的他克莫司基本上全部被释放为止，并且进一步推迟到至少一部分从第一组分中释放出的他克莫司已经从患者系统中被清除。在一项具体的实施方案中，他克莫司从组合物的第二组分中的释放基本上(如果不是完全地)被推迟了服用组合物后至少约2小时的一段时间。

实际上，药物从组合物的第二组分中的释放，被基本上(如果不是完全地)推迟了服用组合物后至少约4小时，优选约4小时的一段时间。

E.制备的纳米颗粒他克莫司制剂的方法

纳米颗粒他克莫司组合物可以用本领域已知的任何合适的方法制备，例如，研磨、均化或沉淀技术。在美国专利5,145,684中描述了制备纳米颗粒组合物的方法实例。制备纳米颗粒组合物的方法还描述于以下专利文献中：美国专利5,518,137“Method of GrindingPharmaceutical Substances；”美国专利5,718,388“Continuous Methodof Grinding Pharmaceutical Substances；”美国专利5,862,999“Methodof Grinding Pharmaceutical Substances；”美国专利5,665,331“Co-Microprecipitation of Nanoparticulate Pharmaceutical Agents withCrystal Growth Modifiers；”美国专利5,662,883“Co-Microprecipitationof Nanoparticulate Pharmaceutical Agents with Crystal GrowthModifiers；”美国专利5,560,932“Microprecipitation of NanoparticulatePharmaceutical Agents；”美国专利5,543,133“Process of Preparing X-Ray Contrast Compositions Containing Nanoparticles；”美国专利5,534,270“Method of Preparing Stable Drug Nanoparticles；”美国专利5,510,118“Process of Preparing Therapeutic Compositions ContainingNanoparticles；”和美国专利5,470,533“Method of PreparingNanoparticle Compositions Containing Charged Phospliolipids to ReduceAggregation，”，它们均在本文中专门引用作为参考。

所形成的纳米颗粒他克莫司组合物或分散体可以以固体、半固体或液体剂型的形式使用，例如液体分散体、凝胶、气溶胶、油膏、乳膏、控释制剂、速熔制剂、冷冻干燥制剂、片剂、胶囊、延迟释放制剂、延长释放制剂、脉动释放制剂、混合型立即释放和受控释放制剂等。

与以上内容相一致，还提供了一种制备本发明的他克莫司纳米颗粒制剂的方法。该方法包括以下步骤：(1)将他克莫司在液体介质中分散；和(2)以机械方式将他克莫司的颗粒大小降至所希望的有效平均颗粒大小，例如小于约2000nm或小于约600nm。在他克莫司的颗粒粉碎之前、之中或之后，可以加入一种表面稳定剂。液体分散介质在颗粒粉碎过程中可以保持生理pH，例如从约3.0至约8.0；更优选在颗粒粉碎期间保持在约5.0-7.5。用于粉碎过程的分散介质优选是水基介质，但他克莫司于其中溶解差并可分散的任何介质均可使用，例如红花油、乙醇、叔丁醇、甘油、聚乙二醇(PEG)、己烷或乙二醇。

为他克莫司的颗粒粉碎提供机械力的有效方法包括球磨法，介质研磨和均化法，例如利用Microfluidizer^(Microfluidicx Corp.)均化。球磨是一种使用研磨介质、药物、稳定剂和液体的低能量研磨方法。物质被放在以最佳速度旋转的研磨容器中，使得研磨介质阶式落下，通过撞击减小药物的颗粒大小。使用的研磨介质必须具有高密度，因为粉碎的能量是由重力和研磨介质的质量提供的。

介质研磨是一种高能量研磨过程。将药物、稳定剂和液体放在容器内，在装有研磨介质和转杆/叶轮的小室内循环。转杆搅动研磨介质，使药物受到冲击和剪切力，从而减小了药物的颗粒大小。

均化是一种不使用研磨介质的技术。药物、稳定剂和液体(或者药物和液体，稳定剂在粉碎之后加入)构成加工物流被推进到加工区中，该加工区在Microfluidizer^中被称作作用室。要处理的产物被引入泵中，然后压出。Microfluidizer的起动阀将泵中的空气排出。一旦泵中充满产物，将起动阀关闭。产物被挤压穿过作用室。作用的几何结构产生强有力的剪切、冲击和空化作用力，它们是颗粒被粉碎的原因。具体地说，在作用室内，受压的产物分裂成两股液流并被加速到极高的速度。所形成的射流随后在作用区内彼此互射和碰撞。所形成的产物具有很细和均匀的颗粒大小或液滴大小。Microfluidizer^还提供了一个热交换以使产物冷却。美国专利5,510,118提到了使用Microfluidizer^的方法，在此被专门引用作为参考。

采用颗粒粉碎方法，他克莫司的颗粒大小被减小到所希望的有效平均颗粒大小，例如对于包肠溶衣的制剂小于约2000nm，对于可注射的他克莫司制剂小于约600nm。

可以将他克莫司加到它基本上不溶解的一种液体介质中形成预混物。他克莫司在液体介质中的浓度可以从约5％至约60％变化，优选为约15-50％(w/v)，更优选为约20-40％。预混物中可以存在表面稳定剂，或者可以在颗粒粉碎后向药物分散体中加入表面稳定剂。表面稳定剂的浓度可以从约0.1％至约50％变化，优选为约0.5-20％，更优选为约1-10％(重量)。

预混物可以直接用来通过机械手段将分散体内的他克莫司平均颗粒大小降至小于约600nm。优选在使用球磨机进行研磨时直接使用预混物。或者是，可以将他克莫司和至少一种表面稳定剂用合适的搅拌方法，例如Cowles型混合器，分散在液体介质中，直到观察到均匀的分散体，其中没有肉眼可见的大的团聚体。当使用循环介质磨进行研磨时，预混物最好是经受这样一种预磨分散步骤。

用来降低他克莫司颗粒大小的机械装置可以采取分散磨的形式。合适的分散磨包括球磨机、磨盘式磨碎机、振动磨、介质磨例如砂磨机和珠磨机。优选介质磨，因其为达到所希望的颗粒大小降低所需要的研磨时间较短。对于介质磨，预混物的表观粘度优选为约100-1000厘泊，对于球磨，预混物的表观粘度优选从约1厘泊直至约100厘泊。这样的范围会在有效的颗粒粉碎和磨料磨损之间形成最佳的平衡。

研磨时间可以有很大变化，这主要取决于所选择的具体的机械装置和加工条件。对于球磨，加工时间可能需要长达5天或更长。或者是，在使用高剪切介质磨时加工时间可能不到1天(1分钟直至几小时的停留时间)。

他克莫司必须在不去使其显著降解的温度下粉碎。通常优选从低于约30℃到低于约40℃的加工温度。如果希望，加工设备可以用常规的冷却设备冷却。可考虑例如利用套管或将研磨室置于冰水中来控制温度。一般来说，本发明方法适合在环境温度和对研磨加工安全有效的加工压力下进行。球磨机、磨盘式磨碎机和振动磨通常采用环境加工压力。

研磨介质

研磨介质可包括基本上由聚合物树脂构成的颗粒，其形状优选基本上为球形，例如珠形。或者是，研磨介质可包括一个核心，在其上粘结着一个聚合物树脂涂层。

一般来说，合适的聚合物树脂是化学和物理上惰性的，基本上不含金属、溶剂和单体，并具有足够的硬度和脆性，使其能避免在研磨期间碎裂或粉碎。合适的聚合物树脂包括交联的聚苯乙烯，例如用二乙烯基苯交联的聚苯乙烯；苯乙烯共聚物；聚碳酸酯；聚缩醛，例如Delrin^(杜邦公司)；氯乙烯聚合物和共聚物；聚氨酯；聚酰胺；聚(四氟乙烯)，例如Teflon^(杜邦公司)和其它含氟聚合物；高密度聚乙烯；聚丙烯；纤维素醚和酯，例如乙酸纤维素；聚羟基甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸羟乙酯；和含硅聚合物，例如聚硅氧烷等。聚合物可以是可生物降解的。可生物降解的聚合物实例包括聚(丙交酯)聚(乙交酯)，丙交酯和乙交酯的共聚物，聚酐，聚(甲基丙烯酸羟乙酯)，聚(亚氨基碳酸酯)，聚(N-酰基羟脯氨酸)酯，聚(N-棕榈酰羟脯氨酸)酯，乙烯-醋酸乙烯共聚物，(聚原酸酯)，聚(己内酯)和聚磷腈。对于可生物降解的聚合物，来自介质本身的沾污可以有利地在体内代谢成可以从体内排出的生物上可接受的产物。

研磨介质的尺寸范围优选为约0.01-3mm。对于精细研磨，研磨介质优选尺寸为约0.02-2mm，更优选为约0.03-1nm。

聚合物树脂的密度可以为约0.8-3.0g/cm³。

在一种优选的研磨方法中，颗粒被连续制备。这样一种方法包括将他克莫司连续加入到研磨室中，使他克莫司与研磨介质接触，同时在该室内降低他克莫司的颗粒大小，并从研磨室中连续取出纳米颗粒他克莫司。

在二次加工中利用常规的分离技术，例如利用简单的过滤，经过筛网过滤器或滤网筛分等，将研磨介质与研磨过的纳米颗粒他克莫司分离。其它的分离技术例如离心也可以采用。

无菌产品制造

可注射组合物的发展要求制造无菌产品。本发明的制造方法与用于无菌混悬剂的典型的已知制造方法类似。一种典型的无菌混悬剂制造工艺流程图如下：

如括号内可任选的步骤所示，一些加工步骤取决于颗粒粉碎方法和/或灭菌方法。例如，对于不使用研磨介质的研磨方法，不需要介质调节。如果由于化学和/或物理不稳定性而无法实现热灭菌，则可使用无菌加工。

F.治疗方法

在人类治疗中，重要的是提供一种他克莫司剂型，它能在体内以恒定方式释放出所需治疗量的药物，并赋予该药物生物可利用性。因此，本发明的另一方面提供了一种利用本发明的纳米颗粒他克莫司制剂治疗哺乳动物(包括人)的方法，用来预防器官排斥，特别是接受异基因肝或肾移植的患者的器官排斥。这些方法包括对治疗对象施用治疗有效量的本发明纳米颗粒他克莫司制剂。在一项实施方案中，该纳米颗粒他克莫司制剂是一种可注射的制剂。在另一实施方案中，该纳米颗粒他克莫司制剂是一种包肠溶衣的口服制剂。

普通技术人员将会理解，他克莫司的有效数量可以从经验上确定，并且以纯形式，或者在存在其它形式时，以可药用的盐、酯或前药的形式使用。本发明的包肠溶衣组合物中他克莫司的实际剂量水平可以改变，以便达到对于特定的组合物和给药方法获得所希望的治疗响应有效的他克莫司数量。选择的剂量水平因此依赖于所希望的治疗效果，服药途径，服用的他克莫司的效力，所希望的治疗持续时间及其它因素。

剂量单元组合物可以含有这些数量的约量，以用来构成日剂量。然而应该清楚，对于任何特定的患者，具体的剂量水平将取决于多种因素：要达到的细胞或生理响应的类型和程度；使用的具体药物或组合物的活性；使用的具体药物或组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和欲食；服药时间、途径和药物的排泄速度；治疗的持续时间；与具体药剂联合或同时使用的药物；以及医学领域中熟知的类似因素。

给出以下实施例用以说明本发明。但是应该清楚，本发明的精神和范围不是这些实施例中描述的具体条件或细节的限制，而只应受下述权利要求的范围的限制。本文中给出的所有参考文献，包括美国专利，都专门被引用作为参考。

实施例

实施例1

此实施例的目的是制备一种纳米颗粒他克莫司制剂。图1表示未研磨的他克莫司的放大100倍的相差显微镜照片。

加有2％(w/w)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K29/32和0.05％(w/w)磺化琥珀酸二辛酯(DOSS)的10％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体在一台NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中与500微米的PolyMill^研磨介质(Dow Chemical，89％介质装载量)一起研磨。将混合物在2500rpm的速度下研磨60分钟。

研磨后在去离子的蒸馏水中使用Horiba LA 910粒子大小分析仪测定磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小。磨细的他克莫司初始平均颗粒大小为192nm，D50为177nm，D90为278nm。图2是磨细的他克莫司的放大100倍的相差光学显微镜照片。在低于15℃下冷冻一周后于蒸馏水中进行第二次测定，他克莫司平均颗粒大小为245nm，D50为219nm，D90为374nm。图3是磨细的他克莫司冷冻一周后放大100倍的相差光学显微镜照片。

结果表明成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为192nm，在储存后观察到的颗粒大小增长很小。

实施例2

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

含2％PVP K12和0.15％脱氧胆酸钠的10％(w/w)他克莫司(CamidaLLC)水分散体与500微米PolyMill^研磨介质(Dow Chemical)(89％介质装载量)一起在一台NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King ofPrussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室内研磨。该混合物在2500rpm的速度下研磨150分钟。

研磨之后，磨细的他克莫司的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司的平均颗粒大小为329nm，D50为303nm，D90为466nm。图4表示该磨细的他克莫司放大100倍的相差光学显微镜照片。

结果显示成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为329nm。

实施例3

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

含3％(w/w)Pluronic^S630和0.05％(w/w)DOSS的20％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体与500微米PolyMill^研磨介质(DowChemical)(89％介质装载量)一起在一台NanoMill^0.01(NanoMillSystems，King of Prussia，PA；见例如U.S.专利6,431,478)的10ml研磨室中研磨。该混合物在2500rpm的速度下研磨60分钟。磨细的他克莫司的放大100倍的相差光学显微镜照片示于图5。

研磨后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司的初始平均颗粒大小为171nm，D50为163nm，D90为230nm。在低于15℃冷冻一周后，于蒸馏水中第二次测定，他克莫司平均颗粒大小为194nm，D50为180nm，D90为279nm。磨细的他克莫司在冷冻下储存一周后放大100倍的相差光学显微镜照片示于图6中。

结果表明成功地制备了稳定的他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为171nm，并且在储存后观察到的颗粒大小增长很小。

实施例4

此实施例的目的是制备他克莫司纳米颗粒制剂。

含2％(w/w)羟丙基纤维素(HPC-SL)和0.1％(w/w)DOSS的10％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体与500微米PolyMill^研磨介质(Dow Chemical)(89％介质装载量)一起，在一台NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中研磨。该混合物在2500rpm的速度下研磨150分钟。磨细的他克莫司的放大100倍的相差光学显微镜照片示于图7。

研磨后，在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定磨细的他克莫司的颗粒大小。磨细的他克莫司的平均颗粒大小为389nm，D50为328nm，D90为614nm。

结果表明成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为389nm。

实施例5

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

含1％(w/w)HPC-SL和0.15％(w/w)DOSS的5％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体与500微米PolyMill^研磨介质(DowChemical)(89％介质装载量)一起，在一台NanoMill^0.01(NanoMillSystems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中研磨。该混合物在5500rpm的速度下研磨90分钟。磨细的他克莫司的放大100倍的相差光学显微镜照片示于图8。

研磨后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司的初始平均颗粒大小为169nm，D50为160nm，D90为225nm。在低于15℃冷冻12天后于蒸馏水中第二次测定，他克莫司平均颗粒大小为155nm，D50为138nm，D90为216nm。磨细的他克莫司在冷冻储存12天后放大100倍的相差光学显微镜照片示于图9。

结果表明成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为169nm，而且储存后观察到的颗粒大小变化很小。

实施例6

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

含1％(w/w)HPC-SL和0.1％(w/w)脱氧胆酸钠的5％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体与500微米PolyMill^研磨介质(DowChemical)(89％介质装载量)一起，在一台NanoMill^0.01(NanoMillSystems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,341,478)的10ml研磨室中研磨。该混合物在5500rpm的速度下研磨75分钟。磨细的他克莫司的放大100倍的相差光学显微镜照片示于图10。

研磨后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司的初始平均颗粒大小为1780nm，D50为220nm，D90为6.665nm。在低于15℃下冷冻12天后于蒸馏水中第二次测定，他克莫司平均颗粒大小为65,100nm，D50为31,252nm，D90为175,813nm。该磨细的他克莫司在冷冻储存12天后放大100倍的相差光学显微镜示于图11。

结果表明，没有成功地制备出稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为在12天储存后观察到显著的颗粒大小增长和团聚。另外，研磨后放大100倍的相差光学显微镜照片也显示出大的、可能“未磨细”的晶体的存在。

实施例7

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

含2％(w/w)羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.05％(w/w)DOSS的10％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体，与500微米PolyMill^研磨介质(Dow Chemical)(89％介质装载量)一起，在一台NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中研磨。该混合物在2500rpm的速度下研磨60分钟。磨细的他克莫司放大100倍的相差光学显微镜照片示于图12中。

研磨后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司初始平均颗粒大小为215nm，D50为196nm，D90为311nm。在低于15℃冷冻1周后于蒸馏水中第二次测定，他克莫司平均颗粒大小为227nm，D50为206nm，D90为337nm。磨细的他克莫司在冷冻储存一周后放大100倍的相差光学显微镜照片示于图13中。

结果表明成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小为215nm，而且储存后观察到的颗粒大小增长很小。

实施例8

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

10％(w/w)他克莫司(Camida LLC)和2％(w/w)Pluronic^F108水分散体在NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中与500微米的PolyMill^研磨介质(Dow Chemical)(89％介质装载量)一起研磨。该混合物在2500rpm下研磨60分钟。磨细的他克莫司放大100倍的相差光学显微镜照片示于图14中。

研磨之后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司初始颗粒大小为237nm，D50为212nm，D90为355nm。在低于15℃冷冻1周后于蒸馏水中二次测量，他克莫司的平均颗粒大小为332nm，D50为306nm，D90为467nm。磨细的他克莫司冷冻储存一周后放大100倍的相差光学显微镜示于图15中。

结果表明，成功地制备了稳定的纳米颗粒他克莫司制剂，因为得到的平均颗粒大小是237nm，而且储存后观察到的颗粒大小增长很小。

实施例9

此实施例的目的是制备纳米颗粒他克莫司制剂。

10％(w/w)他克莫司(Camida LLC)水分散体和2％(w/w)Tween^80在NanoMill^0.01(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见例如美国专利6,431,478)的10ml研磨室中与500微米PolyMill^研磨介质(Dow Chemical)(89％介质装载量)一起研磨。该混合物在2500rpm下研磨60分钟。磨细的他克莫司放大100倍的相差光学显微镜照片示于图16。

研磨后，磨细的他克莫司颗粒的颗粒大小在去离子的蒸馏水中用Horiba LA 910颗粒大小分析仪测定。磨细的他克莫司的初始平均颗粒大小为208nm，D50为191nm，D90为298nm。在低于15℃下冷冻1周后于蒸馏水中第二次测定，他克莫司的平均颗粒大小为406nm，D50为348nm，D90为658nm。磨细的他克莫司在冷冻储存一周后放大100倍的相差光学显微镜照片示于图17中。

结果表明此制剂大概不可取，因为在储存一周后他克莫司的颗粒大小几乎加倍。

Claims (35)

1.一种纳米颗粒他克莫司制剂，其中含有：

(a)有效平均颗粒大小小于约2000nm的他克莫司颗粒；和

(b)至少一种表面稳定剂。

2.权利要求1的组合物，其中他克莫司选自晶体相、无定形相、半晶相、半无定形相以及它们的混合物。

3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中纳米颗粒他克莫司的有效平均颗粒大小选自小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，和小于约50nm。

4.权利要求1至3中任一项的组合物，其中组合物被配制成：

(a)用于经口、经肺、直肠、眼部、结肠、非肠道、脑池内、阴道内、腹膜内、局部、含服、经鼻和表面给药；

(b)选自他克莫司的液体分散体，固体分散体，液体填充胶囊，凝胶，气溶胶，油膏，乳膏，冷冻干燥制剂，片剂，胶囊剂，多颗粒填充胶囊，多颗粒组成的片剂，压制片剂和用包肠溶衣的小珠填充的胶囊的一种剂型，

(c)选自控释制剂，速溶制剂，缓释制剂，延长释放制剂，脉冲释放制剂，和立即释放与控释混合制剂的一种剂型；或者

(d)(a)、(b)和(c)的任何组合。

5.权利要求1至4中任一项的配制成可注射给药的组合物，其中他克莫司的有效平均颗粒大小小于约600nm。

6.权利要求5的组合物，其中含有一种分子量为约40000道尔顿或更小的聚维酮聚合物作为表面稳定剂。

7.权利要求1至4中任一项的组合物，其中纳米颗粒他克莫司的包肠溶衣的制剂。

8.权利要求7的纳米颗粒包肠溶衣制剂，其中该制剂减小或消除了与口服非纳米颗粒的或溶解的他克莫司有关的恶心和呕吐。

9.权利要求1至8任一项的组合物，其中组合物还含有一种或多种可药用的赋形剂、载体或其组合。

10.权利要求1至9中任一项的组合物，其中他克莫司的含量，按照他克莫司与至少一种表面稳定剂、但不包括其它赋形剂的重量总和计，为约99.5-0.001％，约95-0.1％，和约90-0.5％重量。

11.权利要求1至10中任一项的组合物，其中至少一种表面稳定剂的含量，按照他克莫司与至少一种表面稳定剂、但不包括其它赋形剂的干重量总和计，为约0.5-99.999％，约5.0-99.9％，和约10-99.5％。

12.权利要求1至11中任一项的组合物，其中含有至少一种主要的表面稳定剂和至少一种次要的表面稳定剂。

13.权利要求1至12中任一项的组合物，其中表面稳定剂是选自阴离子表面稳定剂，阳离子表面稳定剂，两性离子型表面稳定剂，非离子型表面稳定剂和离子型表面稳定剂。

14.权利要求1至13中任一项的组合物，其中所述的至少一种表面稳定剂是选自：西吡氯铵，明胶，酪蛋白，磷脂，葡聚糖，甘油，阿拉伯胶，胆固醇，黄蓍胶，硬脂酸，苯扎氯铵，硬脂酸钙，甘油单硬脂酸酯，十六十八烷基醇混合物，聚乙二醇单鲸蜡基醚乳化蜡，失水山梨醇酯，聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙烯蓖麻油衍生物，聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯，聚乙二醇，溴化十二烷基三甲铵，聚氧乙烯硬脂酸酯，胶体二氧化硅，磷酸盐，十二烷基硫酸钠，羧甲基纤维素钙，羟丙基纤维素，羟丙甲纤维素，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟乙基纤维素，邻苯二甲酸羟丙甲纤维素，非晶纤维素，硅酸铝镁，三乙醇胺，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，4-(1，1，3，3-四甲基丁基)酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物，泊洛沙姆，乙二胺聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物，一种带电的磷脂，磺基琥珀酸二辛酯，磺基琥珀酸钠二烷基酯，十二烷基硫酸钠，烷基芳基聚醚磺酸盐，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物，对异壬基苯氧基聚缩水甘油，癸酰-N-甲基葡糖胺，正癸基β-D-吡喃葡糖苷，正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷，正十二烷基β-D-吡喃葡糖苷，正十二烷基β-D-麦芽糖苷，庚酰-N-甲基葡糖胺，正庚基-β-D-吡喃葡糖苷，正庚基β-D-硫葡糖苷，正辛基β-D-吡喃葡糖苷，壬酰-N-甲基葡糖胺，正壬酰β-D-吡喃葡糖苷，辛酰-N-甲基葡糖胺，正辛基-β-D-吡喃葡糖苷，辛基β-D-硫吡喃葡糖苷，溶菌酶，PEG-磷脂，PEG-胆固醇，PEG-胆固醇衍生物，PEG-维生素A，PEG-维生素E，乙酸乙烯酯与乙烯基吡咯烷酮的无规共聚物，阳离子型聚合物，一种阳离子型生物高分子，一种阳离子型多糖，一种阳离子型纤维素，阳离子型藻酸盐，阳离子型非聚合化合物，阳离子型磷脂，阳离子型脂类，聚甲基丙烯酸酯溴化三甲铵，锍化合物，聚乙烯吡咯烷酮-2-甲基丙烯酸二甲基氨乙基酯二甲基硫酸盐，溴化十六烷基三甲铵，化合物，季铵化合物，溴化苄基二(2-氯乙基)乙基铵，氯化椰油基三甲铵，溴化椰油基三甲铵，氯化椰油基甲基二羟乙基铵，溴化椰油基甲基二羟乙基铵，氯化癸基三乙铵，氯化癸基二甲基羟乙基铵，氯化溴化癸基二甲基羟乙基铵，氯化C_12-15烷基二甲基羟乙基铵，氯化溴化C_12-15烷基二甲基羟乙基铵，氯化椰油基二甲基羟乙基铵，溴化椰油基二甲基羟乙基铵，甲基硫酸化十四烷基三甲铵，氯化十二烷基二甲基苄基铵，溴化十二烷基二甲基苄基铵，氯化十二烷基二甲基(乙氧基)₄铵，溴化十二烷基二甲基(乙氧基)₄铵，氯化N-烷基(C_12-18)二甲基苄基铵，氯化N-烷基(C_14-18)二甲基苄基铵，氯化N-十四烷基二甲基苄基铵-水合物，氯化二甲基二癸基铵，氯化N-烷基(C_12-14)二甲基1-萘甲基铵，卤化三甲铵，烷基三甲基铵盐，二烷基二甲基铵盐，氯化十二烷基三甲铵，乙氧基化烷酰氨基烷基二烷基铵盐，乙氧基化三烷基铵盐，氯化二烷基苯二烷基铵，氯化N-二癸基二甲基铵，氯化N-十四烷基二甲基苄基铵-水合物，氯化N-烷基(C_12-14)二甲基1-萘甲基铵，氯化十二烷基二甲基苄基铵，氯化二烷基苯烷基铵，氯化十二烷基三甲铵，氯化烷基苄基甲铵，溴化烷基苄基二甲铵，溴化C₁₂烷基三甲铵，溴化C₁₅烷基三甲铵，溴化C₁₇烷基三甲铵，氯化十二烷基苄基三乙基铵，聚氯化二烯丙基二甲基铵(DADMAC)，氯化二甲基铵，卤化烷基二甲基铵，氯化三(十六烷基)甲铵，溴化癸基三甲基铵，溴化十二烷基三乙基铵，溴化十四烷基三甲基铵，氯化甲基三辛基铵，POLYQUAT 10^TM，溴化四丁铵，溴化苄基三甲基铵，胆碱酯，苯扎氯铵，硬脂基二甲基苄基氯化铵，溴化十六烷基吡啶，氯化十六烷基吡啶，季铵化的聚氧乙基烷基铵的卤化物盐，MIRAPOL^TM，ALKAQUAT^TM，烷基吡啶盐，胺盐，氧化胺，咪唑盐，质子化的季型丙烯酰胺，甲基化的季型聚合物和阳离子型瓜尔胶。

15.权利要求1至14中任一项的组合物，其中还含有一种或多种非他克莫司活性药物。

16.权利要求1至15中任一项的组合物，其中在对哺乳动物施用时，他克莫司颗粒重新分散，使得该颗粒的有效平均颗粒大小小于约2微米，小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm。

17.权利要求1至16中任一项的组合物，其中组合物重新分散在生物相关介质中，使得他克莫司的颗粒的有效平均颗粒大小小于约2微米，小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm。

18.权利要求17的组合物，其中的生物相关介质选自水、电解质水溶液、盐的水溶液、酸的水溶液、碱的水溶液和它们的组合。

19.权利要求1至18中任一项的组合物，其中当对服用后的哺乳动物治疗对象的血浆进行分析时，其T_max小于服用相同剂量的非纳米颗粒他克莫司制剂的T_max。

20.权利要求19的组合物，其中该T_max不大于服用相同剂量非纳米颗粒他克莫司制剂时显示的T_max的约90％，不大于约80％，不大于约70％，不大于约60％，不大于约50％，不大于约30％，不大于约25％，不大于约20％，不大于约15％，不大于约10％，不大于约5％。

21.权利要求19的组合物，其中该组合物在对禁食的治疗对象施用后其T_max小于约6小时，小于约5小时，小于约4小时，小于约3小时，小于约2小时，小于约1小时，和小于约30分钟。

22.权利要求1至21中任一项的组合物，其中在服药后对哺乳动物治疗对象的血浆测定时，他克莫司的C_max值大于以相同的剂量服用非纳米颗粒他克莫司制剂的C_max。

23.权利要求22的组合物，其中C_max比以相同剂量服用他克莫司非纳米颗粒制剂时显示的C_max大至少约50％，至少约100％，至少约200％，至少约300％，至少约400％，至少约500％，至少约600％，至少约700％，至少约800％，至少约900％，至少约1000％，至少约1100％，至少约1200％，至少约1300％，至少约1400％，至少约1500％，至少约1600％，至少约1700％，至少约1800％，或至少约1900％。

24.权利要求1至23中任一项的组合物，其中在哺乳动物治疗对象服药后血浆中测得的AUC，大于服用相同剂量非纳米颗粒他克莫司制剂时的AUC。

25.权利要求24的组合物，其中该AUC比服用相同剂量非纳米颗粒的他克莫司制剂所显示的AUC大至少约25％，至少约50％，至少约75％，至秒约100％，至少约125％，至少约150％，至少约175％，至少约200％，至少约225％，至少约250％，至少约275％，至少约300％，至少约350％，至少约400％，至少约450％，至少约500％，至少约550％，至少约600％，至少约650％，至少约700％，至少约750％，至少约800％，至少约850％，至少约900％，至少约950％，至少约1000％，至少约1050％，至少约1100％，至少约1150％，或至少约1200％。

26.权利要求1至25中任一项的组合物，它在进食条件下服用时，与在禁食条件下相比，吸收水平没有显著的不同。

27.权利要求26的组合物，其中本发明的他克莫司组合物在进食状态与禁食状态下服用时，吸收水平的差别小于约100％，小于约90％，小于约80％，小于约70％，小于约60％，小于约50％，小于约40％，小于约30％，小于约25％，小于约20％，小于约15％，小于约10％，小于约5％，小于约3％。

28.权利要求1至27中任一项的组合物，其中对于在禁食状态的人施用该组合物，与在进食状态下施用该组合物，具有生物等效性。

29.权利要求28的组合物，其中“生物等效性”由以下标准确定：

(a)对于C_max和AUC，90％置信区间均在0.80和1.25之间；或

(b)对于AUC，90％置信区间在0.80和1.25之间，对于C_max，90％置信区间在0.70和1.43之间。

30.权利要求1至29中任一项的组合物对于药物制造的应用。

31.权利要求30的用来制造可用于器官排斥预防性治疗的药物的应用。

32.权利要求31的应用，其中他克莫司组合物包有肠溶衣，并被配制成在体内受控释放，使得每天只需要用药一次来保持他克莫司的治疗性血液浓度。

33.一种制备他克莫司组合物的方法，包括他克莫司的颗粒与至少一种表面稳定剂在一定条件下接触一段时间，其足以形成有效平均颗粒大小小于约2000nm的他克莫司组合物。

34.权利要求33的方法，其中的接触包括研磨，湿磨，均化或沉淀。

35.权利要求33或权利要求34的方法，其中他克莫司颗粒的有效平均颗粒大小小于约1900nm，小于约1800nm，小于约1700nm，小于约1600nm，小于约1500nm，小于约1400nm，小于约1300nm，小于约1200nm，小于约1100nm，小于约1000nm，小于约900nm，小于约800nm，小于约700nm，小于约650nm，小于约600nm，小于约550nm，小于约500nm，小于约450nm，小于约400nm，小于约350nm，小于约300nm，小于约250nm，小于约200nm，小于约150nm，小于约100nm，小于约75nm，小于约50nm。

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