CN105524888A - 一种鸭IgG单克隆抗体及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鸭IgG单克隆抗体及应用，本发明提供了一种鸭IgG单克隆抗体，该单克隆抗体特异性高，而且能够大量生产，该单抗能够特异性识别鸭血清IgG的表面蛋白，特异性好，灵敏度高，为建立鸭血清IgG相关检测试剂盒提供基础。该单克隆抗体由杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株4C7，保藏编号为：CCTCC？NO：C201608。本发明还提供了基于该鸭IgG单克隆抗体制备的鸭坦布苏病毒抗体的ELISA检测试剂盒，以HRP-小鼠抗鸭IgG单抗作为试剂盒二抗，可大大提高检测结果的特异性和敏感性，可对目前我国流行的鸭坦布苏病毒病病进行有效的诊断，为鸭坦布苏病毒病的防治和流行情况的掌握提供一种快速简便的检测方法。

Description

一种鸭IgG单克隆抗体及应用
技术领域
本发明涉及鸭血清的检测与鉴定技术领域，具体涉及一种鸭IgG单克隆抗体及应用。
背景技术
自2010年春季以来，在我国华东地区产蛋鸭群中爆发了以产蛋下降为特征的鸭的流行病，并且该病在短时间里迅速传播至河南、河北、江苏地区、随后又传至安徽、福建、广东沿海等主要鸭养殖地区，该病传播迅猛，主要导致种鸭、产蛋鸭采食量和产蛋率直线下降、感染程度较重的甚至绝产及死亡，不同地区不同品种的蛋鸭都有发病，只是各个鸭群的发病率高低不一，同一鸭群的发病率几乎是百分之百，病死率不等(李玉峰等，2011；滕巧泱等，2010)。
万春和等人2010年在某个产蛋急剧下降种鸭场中通过采集病鸭的卵巢，无菌分离到病毒，经过对病毒提取，克隆测序后，序列分析显示，分离到的病毒有600750bp序列与黄病毒科黄病毒属坦布苏病毒(TMUV)同源性最高。随后，苏敬良等人在河北省白洋淀地区的发病鸭群中也分离到了相似的病毒，并暂且命名为BYD病毒。对分离到的病毒做遗传进化分析显示该病源与1955年在马来西亚地区伊蚊体内分离到的坦布苏病毒(Tembusuvirus)亲缘关系最近，同源性也很高(Yanetal.，2011)。因此在2011年的水禽大会上根据黄病毒的命名规则最终确定该病毒是黄病毒属的新成员，将该病名称统一为“鸭坦布苏病毒病”，将该病毒命名为鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus，DTMUV)。
目前用于该病的诊断方法主要是进行鸭坦布苏病毒的分离和鉴定，至少需要5天时间。针对该病毒的PCR和等温环介导方法方法灵敏高，但前者需要特殊仪器设备，且两种方法都容易因污染核酸而出现假阳性。常规的抗体检测方法诊断鸭坦布苏病毒的灵敏度低，非特异性高。因此，建立灵敏度高、特异性好的抗体检测方法将对该病的快速诊断具有重要意义，而由高亲合力单克隆抗体制备的酶标二抗是建立抗体检测方法的前提。因此，申请者以纯化的鸭血清IgG为抗原，获得了分泌抗鸭血清IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞，并利用所分泌的单克隆抗体，研发了一种鸭坦布苏病毒ELISA抗体检测试剂盒，该方法将为鸭坦布苏病毒的诊断提供灵敏、特异、且适合批量检测的检测手段。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种鸭IgG单克隆抗体，该单克隆抗体特异性高，而且能够大量生产，该单抗能够特异性识别鸭血清IgG的表面蛋白，特异性好，灵敏度高，为建立鸭血清IgG相关检测试剂盒提供基础。
本发明还有一个目的是在于提供了一种分泌抗鸭IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞，申请人于2016年1月14日将该杂交瘤细胞送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：C201608，分类命名：杂交瘤细胞株4C7。
本发明的再一个目的是在于提供了一种鸭IgG单克隆抗体在制备鸭血清抗体检测试剂中的应用，以该单抗作为一抗或酶标二抗应用于鸭血清IgG的检测，检测量大、敏感性高、特异性好、结果易于分析判断。
本发明的最后一个目的是在于提供了一种鸭坦布苏病毒间接ELISA试剂盒，该试剂盒使用方便，临床使用中不需要特殊的仪器设备，大大节约了疾病监测成本。
为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：
一种分泌鸭IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞：
用纯化的鸭血清IgG为抗原免疫小鼠，用获得的免疫鼠脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞；进一步用鸭血清IgG为抗原筛选，获得能稳定分泌高亲合力抗鸭IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。
申请人于2016年1月14日将该杂交瘤细胞送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：C201608，分类命名：杂交瘤细胞株4C7。
该杂交瘤细胞株4C7可以在含有20％胎牛血清的1640培养基中以半贴壁方式生长，生长环境为37℃，5％CO2的培养箱。该杂交瘤细胞株为浑圆透亮，成簇生长，并能稳定的分泌鸭血清IgG的单克隆抗体。
一种鸭IgG单克隆抗体在检测鸭血清抗体中的应用，包括以本发明提供的鸭IgG单克隆抗体作为检测抗体制备成的鸭血清抗体检测试剂盒，或是利用本发明提供的鸭IgG单克隆抗体检测鸭血清抗体。
一种鸭坦布苏病毒抗体的ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包含DTMUVE蛋白抗原包被板、HRP标记的鸭IgG单克隆抗体，所述的鸭IgG单克隆抗体由杂交瘤细胞株4C7分泌得到。优选的，抗原的最佳包被浓度为每孔0.15μg-1.5μg，每孔100μl，抗原的最佳包被条件为4℃12-16h，最佳封闭条件为37℃封闭2h，，HRP标记的鸭IgG单克隆抗体浓度为1-3μg/ml，显色时间为10分钟。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明提供的单抗4C7直接检测鸭血清中的各种特异性抗体，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短的特点；
本发明的检测方法不需要特殊的仪器设备，有利于推广和普及，检测成本低的特点，操作简单，不需要由专业人员操作。本发明检测试剂保存期长，稳定性好。
本发明通过制备单抗而建立的鸭坦布苏病毒抗体检测方法，与目前常用的通过多抗进行抗体检测的方法相比具有很大的优势，降低了血清抗体检测中的非特异性，更能直接说明病原的感染。
附图说明
图1为一种小鼠抗鸭IgG单克隆抗体(单抗4C7)纯化后SDS-PAGE结果示意图。
表明纯化后的单抗纯度高。
图2为E蛋白表达纯化SDS-PAGE示意图。
其中：M：标准蛋白质marker；泳道1～2：蛋白表达纯化样品。该图表明所述试剂盒的包被抗原纯度好，为该试剂盒的敏感性提供良好依据。
图3为表达E蛋白纯化后Western-blot分析示意图。
其中，M：标准蛋白质marker；泳道1：表达蛋白样品。该图表明所述试剂盒的包被抗原的特异性高，为该试剂盒的特异性提供良好依据。
具体实施方式
本发明实施例所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或材料，如未特备说明，均来源于商业渠道。其中，本发明实施例ELISA反应中所用的：
底物液A：Na2HPO4·12H2O14.60g，柠檬酸9.33g，过氧化氢脲0.52g，加注射用水溶解并定容至1000ml，调pH值至5.0～5.4。
底物液B：四甲基联苯胺(TMB)20.00mg，加入无水乙醇10.00ml溶解，再用注射用水定容至1000ml。
终止液：2.50ml氢氟酸(HF)加到900ml注射用水中，定容至1000ml。
实施例1：
小鼠抗鸭IgG单克隆抗体的制备
A制备纯化的鸭血清IgG:选取SPF试验鸭，无菌采集血液，离心分离血清，经辛酸硫酸法提取血清中的IgG，鉴定正确后以此作为免疫原。
B筛选小鼠抗鸭IgG阳性杂交瘤细胞株
(1)BALB/c小鼠免疫程序取纯化鸭血清IgG，用0.01MpH7.4的PBS作适当稀释，与弗氏氏完全佐剂等体积混合后，充分乳化，按100μg/只(0.3ml/只)的抗原量经背部皮下注射6周龄BALB/c雌性小鼠3只；两周后，再经背部皮下注射用弗氏不完全佐剂处理的同一剂量抗原，以后每隔两周重复免疫一次，均经背部皮下注射，免疫剂量不变。三免后10天尾静脉采血测效价，合格后加强免疫抗原量为200μg/只，3～4天后取其脾脏进行融合。
(2)SP2/0骨髓瘤细胞的培养用含20％胎牛血清的1640完全培养基进行培养并传代，冻存数批以备用，复苏后的骨髓瘤细胞一周后在对数生长期进行融合。
(3)饲养细胞的制备取未经免疫的SPFBALB/c小鼠1只，用摘眼球法采血，分离阴性血清，然后拉颈致死，浸泡于75％酒精中3～5min后，固定在泡沫板上，用灭菌剪刀和镊子无菌操作剪开腹部皮肤，且勿伤及腹膜，然后用镊子提起腹膜，用注射器吸取10mlHAT培养基注入小鼠腹腔中，用左手拇指和食指轻揉几分钟，再用留置小鼠腹膜上的原注射器吸出含饲养细胞的培养液，并进行细胞计数，融合时直接加入。
(4)免疫脾细胞的准备取高免BALB/c小鼠一只，摘眼球采血，分离阳性血清，拉颈处死后，于75％酒精中浸泡3～5min，无菌操作打开腹腔，并小心取出脾脏至于平皿中，加入少量DMEM基础培养基漂洗2～3次，并仔细去除脾脏周围的结缔组织，然后再放入另一有少量DMEM培养基平皿，用自制压脾器轻轻将脾细胞压出尽量减少对脾细胞的损伤，最后进行细胞计数。
(5)融合分装将脾细胞和SP2/0细胞按5～10∶1的比例加入到50ml融合管中，1200rpm，离心5min，倾弃上清液，并用手掌轻击管底，使细胞松散并混合均匀呈泥状，然后在40℃水浴中边转动边加入50％PEG-1500(v/v)1ml，45～60s内加完，再用10ml吸管在90s内加入20～30ml预热的无血清DMEM培养基，室温静置10min后，1500rpm离心5min，倾弃上清液，加入少量HAT完全培养基，轻轻吹吸数次，使细胞团块分散，然后加入80～100mlHAT培养基，按24孔板1ml/孔和96孔板0.1～0.15ml/孔进行分装，放于37℃5～6％CO2
培养箱中进行培养。
(6)筛选用建立的间接ELISA方法检测融合细胞上清液中抗体，
初次检测时用抗原按最佳稀释度包被酶标板，每个杂交瘤孔上清液检测2孔，初检阴性孔予以淘汰，阳性孔及可疑阳性孔进行二次检测。初检中判为阳性的杂交瘤孔进行二次检测时，并且包被抗原量相同。对筛选所获得的阳性杂交瘤细胞孔以有限稀释法进行克隆化，以获取能稳定分泌抗体的单克隆孔。共获得6株杂交瘤细胞。
(7)检测杂交瘤细胞上清及腹水效价测定将所收集的6株单抗的杂交瘤细胞上清及制备的小鼠腹水进行系列倍比稀释，用间接ELISA方法分别测定效价。其中4C7的效价最高，申请人于2016年1月14日将该杂交瘤细胞送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：C201608，分类命名：杂交瘤细胞株4C7。选取这株杂交瘤细胞进行扩大培养、纯化及辣根过氧化物酶标记。
实施例2：
单抗的纯化和鉴定
A.制备腹水：先腹腔注射0.5mL弗氏不完全佐剂于BALB/C鼠，1周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多、而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中，一般一只小鼠可获5～10mL腹水。也可用注射器抽提腹水，可反复收集数次。腹水中单克隆抗体含量可达到5～10mg/mL，这是目前最常用的方法，还可将腹水中细胞冻存起来，复苏后转种小鼠腹腔则产生腹水快、且量多。用间接ELISA方法对腹水效价进行检测，杂交瘤细胞4C7腹水效价均可达到1：800000。
B.单抗纯化：采用辛酸-硫酸铵法纯化小鼠腹水中的IgG，基本步骤如下：
(1)将腹水12000r/m离心10min，以去除脂质等杂质。
(2)向1mL要纯化腹水中加入4mL的0.06mol/L的醋酸缓冲液(pH4.5)。
(3)冰浴条件下，每mL腹水加辛酸25μL，边加边慢慢搅拌。
(4)冰浴条件下，继续搅拌30min。
(5)12000r/m离心30min，取上清液经滤纸过滤后，调节pH至7.4。
(6)冰浴条件下缓慢加入pH7.4的饱和硫酸铵，硫酸铵饱和浓度不超过45％，搅拌30min，静置2-4h或4℃过夜。
(7)4℃12000r/m离心30min，收集沉淀物，并用适当体积的PBS(pH7.4)重悬，装进透析袋里放入PBS(pH7.4)透析过夜，即为纯化后的抗体(单抗4C7)，浓度为5.5mg/ml。
(8)将纯化出的单抗经SDS-PAGE鉴定，结果见图1。
C.单克隆抗体的特异性鉴定:采用间接ELISA法检测单抗特异性：
(1)将纯化的鸭血清、鸡血清、鸽子血清IgG用pH9.6的碳酸盐缓冲液分别稀释至1μg/mL，每孔100μL包被96孔板,4℃过夜。
(2)洗板封闭，用PBST1:100稀释单抗4C7，每孔加100μL，37℃孵育30分钟。
(3)以PBST洗涤3次，拍干；加入10000倍稀释的商品化的HRP标记的羊抗鼠二抗(SouthernBiotech)各100μL/孔，37℃孵育30分钟。
(4)以PBST洗涤4次，拍干；TMB底物A液和B液(各50μL/孔)，37℃显色10分钟，加入0.25mol/L氢氟酸50μL/孔终止反应,于630nm测吸光度。
(5)结果判定：待测孔与阴性对照孔的OD630比值，即P/N值大于2判定为阳性(表1)。结果显示该单抗仅与鸭血清反应，与其他血清不反应，说明该单抗特异性良好。
表1单克隆抗体的特异性鉴定
血清编号 OD630nm值 P/N值 单抗4C7的反应性
鸭血清1 1.234 12.21 +
鸭血清2 1.409 13.9 +
鸭血清3 1.649 16.32 +
鸡血清1 0.102 1.0 _
鸡血清2 0.098 0.97 _
鸡血清3 0.110 1.08 _
鸽子血清1 0.078 0.77 _
鸽子血清2 0.072 0.71 _
鸽子血清3 0.065 0.64 _
阴性对照 0.101
D.单克隆抗体的敏感性鉴定:采用间接ELISA法检测单抗敏感性：
(1)将纯化的鸭血清IgG(浓度为1mg/ml)用pH9.6的碳酸盐缓冲液进行倍比稀释至1μg/mL，每孔100μL包被96孔板,4℃过夜。
(2)洗板封闭，用PBST1:100稀释单抗4C7，每孔加100μL，37℃孵育30分钟。
(3)以PBST洗涤3次，拍干；加入10000倍稀释的商品化的HRP标记的羊抗鼠二抗(SouthernBiotech)各100μL/孔，37℃孵育30分钟。
(4)以PBST洗涤4次，拍干；TMB底物A液和B液(各50μL/孔)，37℃显色10分钟，加入0.25mol/L氢氟酸50μL/孔终止反应,于630nm测吸光度。
(5)结果判定：待测孔与阴性对照孔的OD630比值，即P/N值大于2判定为阳性(表2)。结果显示在抗原浓度低至5ng/ml时该单抗仍能检测到，表明该单抗敏感性高。
表2单克隆抗体的敏感性鉴定
实施例3：
鸭坦布苏病毒抗体ELISA检测试剂盒，包括：
DTMUVE蛋白抗原包被板、HRP标记的鸭IgG单克隆抗体，所述的鸭IgG单克隆抗体由杂交瘤细胞株4C7分泌得到。
具体的制备方法包括：
1).E蛋白的表达及纯化：根据鸭坦布苏病毒xn株E基因序列(上海生工生物工程股份有限公司测序)，利用primer5软件设计一对E基因的特异性引物(表3)。以提取的鸭坦布苏病毒RNA为模板，反转录后合成cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增。1％琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物，回收目的片段。产物回收后连接到PMD-18T载体上，构建PMD-18T-E阳性质粒，酶切回收再将其连接到原核表达载体pGEX-6p1上，构建重组表达阳性质粒pGEX-6p1-E。将构建好的阳性质粒转化到TOP10表达菌株中，生长过夜后挑取单个菌落加入到氨苄的LB液体培养基中，并且将其放在摇床中进行培养过夜，然后将菌液进行提取质粒，接着进行酶切鉴定、PCR鉴定等，最终挑取阳性重组质粒，并将其命名为pET-32a-E，最后将阳性重组质粒送上海生工生物工程股份有限公司测序，测序结果没有发现序列中有碱基突变，最后以pET-32a-E阳性质粒进行蛋白表达。挑取含有pET-32a-E的E.coliBL21阳性菌，接种于含氨苄青霉素(100ug/mL)的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜，将鉴定正确的含pET32a-E重组质粒菌液按1：100比例加入液体培养基中(含氨苄青霉素100ug/mL)，37℃200rpm/min振荡培养3左右至OD600值为0.4～0.6，取出2mL作为对照菌，剩余菌液加入终浓度为1mmol/L的IPTG，分别于诱导前和诱导后4h收集菌液，超声裂解破碎变性后进行SDS-PAGE和WesternBlot分析。结果显示，蛋白表达主要以包涵体形体存在于沉淀中，大约在75KD条带处出现一条明显的特异性蛋白条带。将大量制备的诱导菌液用Tris洗涤后压力破碎，离心获得沉淀，融入8mol/L尿素沉淀透析纯化蛋白，最后透析掉尿素，用蔗糖浓缩至一半量，获得纯化后的蛋白。经SDS-PAGE和WesternBlot进行纯度分析(图2，图3)。结果看到，在75KD条带处出现一条明显的特异性蛋白条带而且没有非特异性条带出现，表明E蛋白表达纯化后蛋白活性很好，蛋白的抗原性良好。
表3扩增鸭坦布苏病毒xn株E蛋白基因的引物序列
引物名称 序列
P1 5'—ACGAATTCTTCAGCTGTCTGGGGATG—3’
P2 5'—ACCTCGAGAGGCATTGACATTTACTGC—3’
包被板的制备：将纯化好的E蛋白用0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液稀释至1.56μg/mL，加入96孔酶标板中，100μL/孔，置2～8℃下作用15小时；弃去包被液，拍干；每孔加封闭液120μl，置37℃下温育2小时；弃去封闭液，拍干，再置37℃下干燥2小时后用锡箔封口膜将抗原包被板密封，2～8℃保存。
样品稀释液的制备：牛血清白蛋白(BSA)5.00g、吐温20(Tween-20)0.50ml、氯化钠(NaCl)8.00g、十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2.90g、磷酸二氢钾(KH2PO4)0.20g、氯化钾(KCl)0.20g、硫柳汞钠0.20g，加注射用水溶解并定容至1000ml。
20倍浓缩洗涤液的制备：NaCl170.00g，Tween-2010.00ml，加注射用水溶解并定容至1000ml。
阴性对照血清的制备：选取70日龄SPF试验鸭，无菌采集血液，离心分离血清，所得血清经56℃灭活30分钟。按血清量的0.04％加入硫柳汞钠防腐，0.22μm滤膜过滤除菌。置-70℃下保存。
阳性对照血清的制备：将超离纯化后的鸭坦布苏病毒xn株(1mg/ml)与弗氏佐剂1:1(体积比)进行混合乳化，按600μg/只的量肌肉注射接种SPF试验鸭，0.5ml/只，接种三次，每次间隔两周，末次接种后7日无菌采集血液，离心分离血清，所得血清经56℃灭活30分钟。按血清量的0.04％加入硫柳汞钠防腐，0.22μm滤膜过滤除菌。置-70℃下保存。
底物液A的制备：Na2HPO4·12H2O14.60g，柠檬酸9.33g，过氧化氢脲0.52g，加注射用水溶解并定容至1000ml，调pH值至5.0～5.4。
底物液B的制备：四甲基联苯胺(TMB)20.00mg，加入无水乙醇10.00ml溶解，再用注射用水定容至1000ml。
终止液的制备：2.50ml氢氟酸(HF)加到900ml注射用水中，定容至1000ml。
2.鸭坦布苏病毒抗体ELISA检测试剂盒的使用方法
A样品准备取动物全血，待血液凝固后，4000r/min离心10分钟，收集上清。也可采集血液，待凝固后自然析出血清。血清应清亮，无溶血。
B洗涤液配制使用前，浓缩的洗涤液应恢复至20～25℃，并摇动，使沉淀溶解(最好在37℃水浴中加热5～10分钟)，然后用蒸馏水作20倍稀释，混匀，2～8℃可存放7日。
C待检血清和对照血清的稀释将待检血清在血清稀释板中按1:40稀释，对照血清在血清稀释板中按1:4稀释。
D取抗原包被板(根据样品多少，可拆开分次使用)，用稀释好的洗涤液200μl/孔洗板2次，每次静置3分钟，拍干。再将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100μl加至抗原包被板中，待检血清设1孔，阴、阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品，置37℃下温育60分钟。
E弃去板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟后弃去，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。
F每孔加1μg/ml的酶标(HRP)单抗4C7100μl，置37℃下温育30分钟。
G弃去板孔中的溶液，洗涤5次。
H每个反应孔加入底物液A50μl、底物液B50μl，混匀，置20～25℃避光显色10分钟。
I每个反应孔中加入终止液50μl，10分钟内测定结果。
J判定在酶标仪上测各孔OD630nm值，OD630nm值≥0.41判为鸭坦布苏病毒抗体阳性，待检血清OD630nm值＜0.41时判为鸭坦布苏病毒抗体阴性。
实施例4：
鸭坦布苏病毒抗体ELISA检测试剂盒的特异性、敏感性检测：
1.特异性试验：用本研究研制的试剂盒分别检测禽流感病毒(H5)、禽流感病毒(H9)、新城疫病毒(NDV)、鸭肝炎病毒(DHV-I)、鸭瘟病毒(DPV)、大肠杆菌、沙门氏菌等的阳性血清，结果均为阴性，详见表4，表明试剂盒具有良好的特异性。
表4特异性血清检测结果
敏感性试验：将10份不同的鸭坦布苏病毒阳性血清按1：5、1：10～1：640连续倍比稀释后用实施例3制备的ELISA试剂盒检测，可以看出，当血清稀释到1：40时，血清OD630nm值较大的降低，在1：640，10份阳性血清中，5份为阴性。此结果表明，敏感性良好(见表5)。
表5试剂盒敏感性检测

Claims (5)

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于：所述的杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株4C7，保藏编号为：CCTCCNO：C201608。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备鸭血清抗体检测试剂盒中的应用。
4.一种鸭坦布苏病毒抗体的ELISA检测试剂盒，包括DTMUVE蛋白抗原包被板、HRP标记的鸭IgG单克隆抗体，所述的鸭IgG单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株4C7分泌得到。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：抗原的包被浓度为每孔0.15μg-1.5μg，每孔100μl；抗原的包被条件为4℃12-16h，封闭条件为37℃封闭2h，HRP标记的鸭IgG单克隆抗体浓度为1-3μg/ml，显色时间为10分钟。
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