CN105524034A - 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用 - Google Patents

香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN105524034A
CN105524034A CN201510140439.9A CN201510140439A CN105524034A CN 105524034 A CN105524034 A CN 105524034A CN 201510140439 A CN201510140439 A CN 201510140439A CN 105524034 A CN105524034 A CN 105524034A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
preparation
coumarin kind
kind compound
cerebral
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201510140439.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105524034B (zh
Inventor
付宏征
王克威
张碧晨
张�浩
王功新
陈晓玲
黄晓敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Peking University
Original Assignee
Peking University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peking University filed Critical Peking University
Priority to CN201510140439.9A priority Critical patent/CN105524034B/zh
Publication of CN105524034A publication Critical patent/CN105524034A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105524034B publication Critical patent/CN105524034B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
    • C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
    • C07D311/12—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 3 and unsubstituted in position 7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
    • C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
    • C07D311/16—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 7

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于治疗脑缺血的香豆素衍生物7，8-羟基-4-三氟甲基-苯并吡喃-2-酮(7,8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)的制备及其分子药理学机制及脑缺血动物模型等方面的药效学研究，以及适用于脑缺血治疗的制剂学研究。该活性化合物的药理作用机制明确，用于治疗脑缺血模型确定有效，可用于治疗脑缺血的临床应用。

Description

香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用
技术领域
本发明属于药物化学、药理学与制剂领域，具体包括活性香豆素衍生物的合成与纯化、药理作用机制研究、治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤的用途、制剂。
背景技术
香豆素类化合物是一类具有芳香气味的天然产物，具有苯并α-吡喃酮母核，可视为顺式邻羟基桂皮酸脱水形成的内酯，是重要的药用天然活性化合物，以香豆素为主要有效成分的中药-补骨脂、祖师麻、秦皮、蛇床子、前胡等，以苯并α-吡喃酮为基本母核，通过化学合成与修饰的方法制备非天然的香豆素衍生物，对于探讨与发现这一类结构母核新的药理活性及构效关系研究，具有重要的研究意义。
瞬时感受器电位离子通道(transientreceptorpotentialionchannel，TRPchannel)是一类在外周和中枢神经系统分布很广泛的阳离子通道蛋白，TRP家族主要由七个亚族组成：TRPC、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP、TRPA和TRPN。TRP受到多种因素的调节，包括渗透压、pH值、机械力以及一些内、外源性配体和细胞内信号分子，其参与生物体内感觉信息传递如视觉、温度觉、痛觉和触觉等，并且具有调节胞内Ca2+平衡等多种重要的生理功能。
TRPV3通道于2002年首次被发现，有三个不同实验室发现了其可以被温热温度(32℃-39℃)激活。随后的研究发现，该通道还可以被合成化合物2-APB、樟脑、胞内氢离子激活。TRPV3通道在人体内分布广泛，在感觉神经元如背根神经节、三叉神经节和皮肤角质细胞中大量表达。对于TRPV3的生理功能，目前研究认为其与人体的温度感受密切相关。另外，由于TRPV3较为特殊的在皮肤角质细胞中的表达，一系列相关研究发现了TRPV3与脱发、瘙痒等皮肤疾病的相关性，但具体机制尚不明了。2012年，Linetal首次发现了TRPV3突变导致的一种严重的皮肤系统遗传疾病——Olmsted综合症，也暗示着TRPV3在生理、病理过程中扮演的重要角色。
FlexStation3技术是一种基于钙荧光的高通量筛选技术。它的主要原理是：应用可以与钙离子特异性结合的染料孵育细胞，细胞内含有大量可结合钙离子的未发光染料分子。当所表达通道激活后大量钙离子内流，与胞内的染料结合并发出荧光。通过读取荧光值的强度，由其强度变化反应离子通道的开合。该方法适用于96孔板或384孔板，可以一次性筛选多种化合物，实现高通量筛选。
研究离子通道活性及评估化合物对其作用的方法是利用电生理技术进行检测，因其直接、灵敏的优点而成为了检测离子通道的“金标准”。电生理膜片钳技术是应用玻璃微电极在细胞膜表面形成高阻封接，将细胞上的离子通道接入放大器、电极、浴液组成的电环路，给予细胞不同刺激，通过人工钳制细胞的膜电位而观察记录电环路中的电流改变情况，从而反映离子通道的开合。
Transientreceptorpotentialvanilloid-3(TRPV3)是非选择性通透钙离子的阳离子通道，在皮肤表皮细胞广泛的表达。TRPV3可被非伤害性的温觉刺激和伤害性的热觉刺激激活。随着人们对TRPV3通道的研究加深，发现点突变导致的TRPV3功能上调导致皮肤溃烂、产生剧烈瘙痒及疼痛；敲除TRPV3，在AEW处理的慢性瘙痒模型中，搔抓反应明显减少；而且在研究过敏性皮炎患者时发现TRPV3的表达量明显增高。据此，人们认为TRPV3有可能成为治疗瘙痒疾病的一个作用靶点。
神经细胞钙离子超载的兴奋毒性是脑缺血性损伤的病生理学机制。脑中风是以脑局部缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，是严重危害人类健康的三大主要杀手之一。长期以来，人们对脑中风和缺血性脑损伤的关注焦点一直集中在控制和抑制NMDA(N-甲基-D-天(门)冬氨酸)受体介导的钙内流，其理论依据在于NMDA受体作为谷氨酸受体的亚型具有高钙离子通透性。NMDA受体的病理性激活导致细胞内钙浓度升高，使得细胞内下游信号传导通路激活，引发延迟的神经细胞凋亡。然而，过去的20年里所有基于阻断NMDA受体功能所研发的抑制剂在只在临床前有效，而在抗脑缺血的临床试验中均告失败。这些研究结果提示，寻找非NMDA通路的分子靶点是探索脑缺血性损伤保护的新希望。
脑缺血性损伤和缺血再灌注损伤(在缺血基础上恢复血流后，组织器官的结构破坏不但未减轻反而加重)重要的病理特征表现为脑缺血引起的组织酸化和缺血引起的代谢性酸中毒。其原因在于脑缺血激活了醣酵解的厌氧途径，导致乳酸在细胞内和细胞外间隙的堆积。研究表明，乳酸酸中毒可以激活氢离子门控的非选择性阳离子TRP通道和ASIC通道，导致细胞内钙超载而进一步加重脑缺血性损伤(见说明书附图)。我们近期的研究发现，细胞内氢离子浓度升高即细胞内酸化可特异性激活增强TRPV3通道的功能，导致细胞钙超载并引起凋亡。这些研究结果提示，脑缺血引起的组织酸化以及缺血引起的代谢性酸中毒激活TRPV3通道，过度激活的TRPV3导致细胞钙离子内流超载引起细胞凋亡，进而加重大脑细胞的缺血性损伤。
技术方案
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。
R1、或、和、R2为甲基、氯甲基、三氟甲基、乙羧基、乙酸甲酯基、乙酰基、乙羧基、丁基、苯基、氟、氯、溴中的任意一种或多种。
R3、或、和、R4为羟基
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
7，8-羟基-4-三氟甲基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)
本发明涉及香豆素类化合物，它结构是如下任意一种或多种：
本发明涉及香豆素类化合物的制备。
本发明涉及香豆素类化合物的制备、后处理及纯化方法。采用连苯三酚、间苯二酚、3-甲氧基邻羟基苯甲醛、或5-溴邻羟基苯甲醛，与乙酰乙酸乙酯衍生物、丙酮二羧酸、或丁酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、哌啶、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物。
本发明涉及香豆素类化合物的结构，衍生合成的其它同系列化合物的制备及后处理方法。
本发明涉及香豆素类化合物制备调节瞬时离子通道蛋白TRPV3亚型的组合物。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物用于瞬时受体电位离子通道蛋白(transientreceptorpotentialchannels)中的TRPV亚型家族的分子生物学机制研究，通过FlexStation3技术及电生理技术对该类化合物的生物学机制进行系统研究。本发明涉及分子生物学方法模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析。
7,8-羟基-4-三氟甲基-苯并吡喃-2-酮(7,8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)电生理实验IC50值＝21±1.0μM。
本发明涉及香豆素类化合物用于制备治疗脑缺血的药物组合物。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物作用于脑缺血动物模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析。
本发明涉及香豆素类化合物作用于制备治疗脑缺血的药物组合物。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物用于制备治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤中任意一种或多种疾病的药物组合物。
本发明涉及香豆素类化合物作用于制备抑制脑缺血引起的神经功能损伤及脑梗死、降低脑水含量、缓解脑水肿现象中任意一种或多种疾病的药物组合物。
7，8-羟基-4-三氟甲基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)用于制备治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤中任意一种或多种疾病的药物组合物，该化合物用于小鼠神经功能缺损、脑梗死体积测定及脑水含量，口服用量范围是0.1-500mg/kg，50、100、200mg/kg灌胃给药可明显抑制小鼠脑缺血引起的神经功能损伤及脑梗死、降低脑水含量、缓解脑水肿现象.
本发明涉及香豆素类化合物的制剂，每制剂单位含有1-200mg的活性化合物。
本发明涉及香豆素类化合物的制剂，制剂类型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、缓释胶囊剂、冻干粉针剂、注射剂等。
在小鼠脑缺血模型中，100mg/kg的化合物FHZ-1与20mg/kg的尼莫地平效果相当。该类化合物针对脑缺血的作用机制新颖有效，具有较好的市场应用前景。
该类化合物针对治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤的作用机制新颖有效，具有较好的市场应用前景。
本发明的香豆素类化合物
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。
R1、或、和、R2为甲基、氯甲基、三氟甲基、乙羧基、乙酸甲酯基、乙酰基、乙羧基、丁基、苯基、氟、氯、溴、中的任意一种或多种。
R3、或、和、R4为羟基。
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物，它结构是如下任意一种或多种：
本发明的香豆素类化合物的催化条件的选择
本发明采用Pechmann反应进行香豆素类化合物的合成，该反应的基本类型为连苯三酚与乙酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物，本发明首先比较不同的催化剂对于Pechmann反应的催化效率。
本发明的预试验1：
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与2ml浓H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入30ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与1mmolTiCl4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入10ml乙酸乙酯，过滤除去反应液中的固体，将滤液蒸干，硅胶拌样，色谱柱分离，洗脱剂比例为石油醚：乙酸乙酯(1:1)。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与1mmolTUD混合搅拌均匀，130℃熔融条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入30ml甲醇溶解反应物，硅胶拌样，色谱柱分离，洗脱剂比例为石油醚：乙酸乙酯(1:1)。
本发明通过比较四种不同的催化条件，比较不同的乙酰乙酸乙酯衍生物的反应条件、后处理及目标产物的收率，结果表明70％H2SO4的催化条件下具有底物适应性广、后处理简单、收率较高等优点，因此本发明在后面的反应中采用70％H2SO4作为Pechmann反应的催化条件合成了一系列的香豆素衍生物。
本发明的香豆素类化合物的合成与纯化
本发明涉及香豆素类化合物的制备、后处理及纯化方法。采用连苯三酚、间苯二酚、3-甲氧基邻羟基苯甲醛、或5-溴邻羟基苯甲醛，与乙酰乙酸乙酯衍生物、丙酮二羧酸、或丁酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、哌啶、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物。
4-三氟甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的三氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
4-乙羧基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-aceticacid-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丙酮二羧酸与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-溴-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-bromo-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的2-溴乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氟-4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-fluoro-7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氟-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-fluoro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的2-氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-苯基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的苯代乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-苯基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的苯代乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-溴-4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-bromo-7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-溴乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7-甲氧基-苯并吡喃-2-酮(7-methoxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮加入到无水DMF溶液中，加入10mmol氢化钠与10mmol碘甲烷，反应结束后用水淬灭反应，将DMF蒸干后硅胶柱拌样，石油醚:乙酸乙酯(1:1)洗脱分离。
4-氯甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(4-(chloromethyl)-7，8-dihydroxy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的氯甲基乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙酸甲酯基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-acetatemethy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的丙酮二羧酸二甲酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙羧基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-aceticacid-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的丙酮二羧酸与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氯-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-chloro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-氯乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-8-甲氧基苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-8-methoxy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的3-甲氧基邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙酸甲酯基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-acetatemethy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丙酮二羧酸二甲酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-6-溴-苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-6-bromo-2H-chromen-2-one)
将10mmol的5-溴邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-丁基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-propyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丁酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
本发明香豆素类化合物与瞬时离子通道蛋白TRPV3亚型的作用机制研究
TRPV3通道是一种阳离子非选择性通道，可以大量通透钙离子，本发明采用FlexStation3技术与电生理技术对合成的化合物进行活性筛选。FlexStation3技术是一种基于钙荧光的高通量筛选技术，可应用该方法对TRPV3通道的调节剂进行筛选；电生理技术主要应用全细胞式记录方法，应用HEKAEPC10放大器系统及PatchMaster记录软件(玻璃微电极阻值为3-5MΩ，细胞钳制电位为0mV，使用-80mV和+80mV方波电压记录)。
实验应用HEK293细胞，接种于24孔板中，37℃、5％CO2培养过夜。瞬时转染pIRES-EGFP/hTRPV3质粒(Caoetal,Intracellularproton-mediatedactivationofTRPV3channelsaccountsfortheexfoliationeffectofalpha-hydroxylacidsonkeratinocytes,JournalofBiologicalChemistry,Vol.287,No.31,25905-25916)，换液时传代至96孔板，细胞密度约为50，000每孔。转染后24h时进行染料孵育，所用染料为Cal-520assaykit。吸出40μl培养基，此时96孔板中剩余60μl培养基，加入等量的Cal-520染料，孵箱孵育1.5小时可上机检测。FlexStation系统激发波长490nm，发射波长525nm，每间隔1.6s读数一次。17s时加入待测化合物，100s时加入TRPV3激动剂2-APB(2-氨基乙氧基联苯硼酸盐)(终浓度200μM)，每次测试共计180s。对于拮抗剂，其筛选实验的荧光特征应为加入2-APB后荧光值没有明显上升；浓度依赖特性应表现为随着化合物浓度的递减对通道的抑制效应减弱，即加入激动剂2-APB后，荧光信号随化合物孵育浓度下降而增高。
结果表明，化合物
FHZ-1(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)、
FHZ-3(3-bromo-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)、
FHZ-5(3-fluoro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)、和
FHZ-7(7，8-dihydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
能够抑制2-APB引起的TRPV3通道激活(见图1)
图1的解释：瑞香素衍生物(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)抑制TRPV3通道的作用。图中升高的深蓝信号为阳性药2-APB(300μM)。筛选采用FlexStation3作站检测化合物对通道的作用。17s时，给予瞬时转染TRPV3通道的HEK293细胞不同浓度的化合物或2-ABP
从单浓度筛选得到的苗头化合物(图1)，进一步采用FlexStation3工作站对瑞香素衍生化合物3(FHZ-3)和7(FHZ-7)进行了浓度梯度的筛选确认(图2)。结果表明，化合物3和7能够剂量依赖的抑制2-APB引起的TRPV3通道激活(图2)。
图2的解释：瑞香素衍生物FHZ-3和FHX-7抑制TRPV3通道的量效关系。筛选采用FlexStation3作站检测化合物对通道的作用。17s时，给予瞬时转染TRPV3通道的HEK293细胞不同浓度的化合物或2-ABP
为了初步确定上面化合物FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5和FHZ-7的选择性，首选在表达TRPV1、TRPV4和TRPA1表达细胞并在测定了这些化合物的通道选择性(图3)。结果表明，瑞香素衍生物1、3、5和7对其它TRP通道没有抑制作用。
图3的解释：瑞香素衍生物1、3、5和7(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)对其它TRPV1、TRPV4和TRPA1通道的选择性。化合物1、3、5和7(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)对TRPV1、TRPV4和TRPA1通道没有抑制作用
应用瞬时转染pIRES-EGFP/hTRPV3质粒的HEK293T细胞，于转染后24小时开始测试。电极内液及外液的组成成分为130mMNaCl，0.2mMEDTA，3mMHEPES，pH为7.4。测试开始待基线平稳后，给予2-APB激活TRPV3通道。电流平稳后，分别重力灌流给予不同化合物观察其对通道的抑制作用。IC50曲线的绘制由重力灌流不同浓度的化合物制得。2-APB的EC50偏移曲线则由重力灌流不同浓度的2-APB得到。
结果表明，给予细胞不同浓度的化合物1，TRPV3电流受到不同程度的抑制，呈现明显的浓度依赖关系，其IC50值＝21±1.0μM(图4)。
图4瑞香素衍生物FHZ-1抑制2-APB诱导激活TRPV3通道的量-效关系曲线。图4的左图：瞬时转染TRPV3的HEK293T细胞50μM激动剂2-APB后，正负向电流均明显增大，通道被激活打开；在50μM2-APB存在的情况下，给予浓度为100μM的化合物FHZ-1，电流被迅速且强烈的降低，显示通道被阻断。图4的右图：B，在50μM2-APB存在的情况下，给予细胞不同浓度的化合物FHZ-1(1mM、300μM、100μM、30μM、10μM和3μM)，TRPV3电流被不同程度的抑制，呈现明显的浓度依赖性关系。半数抑制浓度由Hill方程拟合得出
本发明香豆素类化合物作用于小鼠小鼠脑缺血模型的研究
小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型(I/R)的制备
以Longa线栓法为基础，采用颈外进线的方式制作小鼠局灶性脑I/R损伤模型：选用成年雄性ICR小鼠(体重30-35g)，称重，用5％水合氯醛(500mg/kg，i.p.)麻醉，仰卧位固定于37℃恒温手术台上。颈部正中偏右约2mm切口，体式显微镜下，钝性分离胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌间的肌间隙，暴露出颈总动脉(CCA)和迷走神经，用显微镊钝性分离出左侧颈总动脉(commoncarotidartery，CCA)及其分支颈外动脉(externalcarotidartery，ECA)、颈内动脉(internalcarotidartery，ICA)，避免损伤迷走神经、气管和颌下腺体背面的静脉窦。用6-0缝合线在CCA上打一活结，然后用双极电凝器凝断颈外分支，接着在ECA穿两根线，结扎远心端，于近心端做一松结，以微动脉夹同时夹闭翼腭动脉(pterygopalatineartery，PPA)及远端颈ICA，。于ECA远心端剪一小口，将一根尼龙栓线(用前用100U/mL的肝素钙生理盐水浸泡)经切口处插入。微微系紧ECA上的松结，剪断ECA，打开微动脉夹，将尼龙栓线拉至与ICA一条直线，然后缓慢插入ICA。以CCA分叉处为标记，继续将线栓缓慢地向内推进约10mm，微遇阻力时停止，然后略向后退回，此时线栓头端已通过大脑中动脉(middlecerebralartery，MCA)根部进入大脑前动脉起始部，可以阻塞同侧MCA血流，收紧CCA根部的活结，固定栓线。剪口处予以盐酸利多卡因0.1mL局麻，皮下给与1.0mLNS补液。小鼠脑缺血1.5h后，缓慢拉出线栓，系紧ECA松结，即可恢复血流，观察有无出血，缝合皮肤并涂抹氧氟沙星凝胶，完成I/R损伤手术。以提尾悬空时左前肢屈曲内收为模型成功。假手术组只分离剪口并结扎血管，不插入栓线。术后处理动物手术后应予以保温，环境温度应维持24℃左右，安静清洁环境中分笼饲养，避免苏醒迟缓或意识障碍的小鼠被咬伤。
实验分组及给药方式
ICR雄性小鼠60只(不计实验中死亡的小鼠)，随机分为6组(每组≥10只)：1)假手术组(sham组)；2)模型组(vehicle组)；3)给药组(各给药组于手术前7天通过灌胃给药以10mL/kg的体积分别给予高中低三个剂量的瑞香素类似物FHZ-1化合物)；4)阳性药组(Nimodipine，给药方式与体积与给药组相同)。假手术组、模型组给予同体积实验溶剂(以上溶剂均为PEG400:水:甘油＝996:100:40，质量比)。
神经功能缺损评分
按照Longa的5分法评分标准，MCAO小鼠在缺血再灌后24h评分：
0分，正常，无神经学征象；
1分，不能完全伸展右前肢；
2分，行走时右侧转圈；
3分，行走时右侧倾倒；
4分，无自主行走并伴有意识水平降低；
5分，死亡。
≥2分且不死亡为有效模型。
小鼠脑梗死体积测定
在再灌注24h后，用10％水合氯醛麻醉，断头取脑，于脑切片磨具中切片，每片厚度1mm，置于1％TTC溶液中37℃避光孵育20分钟(10分钟翻面一次使其染色均匀)。孵育完毕后，将脑片置于4％多聚甲醛中固定24h。正常脑组织呈鲜红色，梗死脑组织呈白色。使用数码相机(PowerShotG12，Canon)照相后，以AdobePhotoshopCC软件进行图像分析。测量各脑片梗塞面积，再乘以厚度得出梗塞体积，根据以下公式算得梗死区域所占比例：
脑梗死体积(％)＝(总梗死体积-(全半脑体积-2*对侧半脑体积))/对侧半脑体积*100％
脑水含量测定
取出脑后迅速称出湿重W1，然后在染色的全脑用相机拍照后，置110℃烘箱中烘干8h，然后称出干重W2。按如下公式计算脑水含量：
脑水含量(％)＝(W2-W1)/W2*100％
统计学分析
采用Excel2013及GraphPadPrism软件进行数据分析，实验结果均以平均值±标准误表示，数据组间比较采取学生双尾t检验，P<0.05即为具有统计学差异。
实验结果
1.瑞香素类似物FHZ-1化合物对小鼠脑I/R损伤引起的神经功能损伤的影响
表1.瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠神经功能评分的影响
^^^^P<0.001comparedwithShamgroup；**P<0.01；*P<0.05comparedwithVehiclegroup；
注：与溶媒对照组比较*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001(下表同)
如表1和图5(瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠神经功能评分的影响)所示，假手术(Sham)组小鼠神经功能无损伤，模型(Vehicle)组的神经功能缺损评分与Sham组相比明显升高(^^^^P<0.0001)；与模型组相比，低剂量(50mg/kg)的瑞香素类似物FHZ-1化合物对小鼠脑I/R引起的神经功能缺损有所改善(*P<0.05)。而阳性对照组(Nimodipine尼莫地平20mg/kg)和中、高剂量(100、150mg/kg)的瑞香素类似物FHZ-1化合物能明显改善小鼠脑I/R引起的神经功能缺损(**P<0.01)
2、瑞香素类似物FHZ-1化合物对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑梗死的影响
表2.瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠脑梗死的影响
^^^^P<0.001comparedwithShamgroup；*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001comparedwithVehiclegroup；
如表2和图6(瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠脑梗死的影响)、图7(再灌注24h时经TTC染色的脑片，白色区域代表梗死部分，红色区域代表存活的组织)所示，Sham组未见脑梗死，Vehicle组与Sham组相比脑梗死体积明显增加(^^^^P<0.0001)；与模型组相比，低、中、高剂量的瑞香素类似物FHZ-1化合物均能不同程度抑制小鼠脑I/R引起的脑梗死体积增加(*p<0.05；；***p<0.001；**P<0.01)，并且中剂量的FHZ-1化合物效果与阳性对照(Nimodipine)组相当。
3、瑞香素类似物FHZ-1化合物对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑水肿的影响
表3.瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠脑水肿的影响
^^^^P<0.001comparedwithShamgroup；*p<0.05；****p<0.0001comparedwithVehiclegroup；
如表3和图8(FHZ-1化合物对缺血再灌注小鼠脑含水量的影响)、图9(再灌注24h时经TTC染色的全脑，白色区域代表梗死部分，红色区域代表存活的组织)所示，Vehicle组与Sham组相比脑水含量明显增加(^^^^P<0.0001)；与模型组相比，低剂量(50mg/kg)的FHZ-1化合物能降低小鼠脑水含量，但效果略低于阳性对照(Nimodipine)组。然而，中、高剂量(100、150mg/kg)的瑞香素类似物FHZ-1化合物的脑水含量明显降低(****P<0.01)，且效果略强于阳性对照(Nimodipine)组。
剂型的研究
片剂的制备
化合物FHZ-11-200g；微晶纤维素1-200g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；硬酸镁1-20g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1
胶囊剂的制备
化合物FHZ-11-200g；微晶纤维素1-200g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；12目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，填入空胶囊；得1000粒胶囊；每粒胶囊含1-200mg化合物FHZ-1
颗粒剂的制备
化合物FHZ-11-200g；淀粉1-200g；泊洛沙姆1-50g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-50g；25％淀粉浆10-2000ml；糖粉10-50g；硬酸镁1-20g，14目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，分装成袋；1000袋；每袋含1-200mg化合物FHZ-1。
缓释片剂的制备
化合物FHZ-11-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；硬酸镁1-20gg，滑石粉1-200g；14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1。
微丸剂的制备
化合物FHZ-11-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；滚动制丸，60℃干燥，制成微丸，填入空胶囊；1000粒；每粒含1-200mg化合物FHZ-1。
缓释胶囊剂的制备
化合物FHZ-11-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；硬酸镁1-20g，14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1。
冻干粉针剂的制备
化合物FHZ-11-200g；泊洛沙姆0.5-10g；加入1.0-10.0g谷氨酸，加入1-30.0g甘露醇，加入注射用水，加热溶解，稀释至50-5000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含化合物FHZ-11-200mg。上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
注射剂的制备
化合物FHZ-11-200g；泊洛沙姆1-20g；加入1-20g谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至100-5000ml，过滤、滤液超滤，灌装、灭菌。制成1000只，每只含化合物FHZ-11-200mg。
附图说明：
图1.瑞香素衍生物抑制TRPV3通道的作用。
图2.瑞香素衍生物FHZ-3和FHX-7抑制TRPV3通道的量效关系。
图3.瑞香素衍生物1、3、5和7对其它TRPV1、TRPV4和TRPA1通道的选择性。
图4.瑞香素衍生物FHZ-1抑制2-APB诱导激活TRPV3通道的量-效关系曲线。
图5.瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠神经功能评分的影响
图6.瑞香素类似物FHZ-1化合物对脑缺血再灌注小鼠脑梗死的影响
图7.再灌注24h时经TTC染色的脑片，白色区域代表梗死部分，红色区域代表存活的组织
图8.FHZ-1化合物对缺血再灌注小鼠脑含水量的影响
图9.再灌注24h时经TTC染色的全脑，白色区域代表梗死部分，红色区域代表存活的组织
图10.乳酸酸中毒可以激活氢离子门控的非选择性阳离子TRP通道和ASIC通道，导致细胞内钙超载而进一步加重脑缺血性损伤
具体实施方式
实施例1
片剂的制备
化合物FHZ-15g；微晶纤维素70g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素15g；25％淀粉浆120ml；硬酸镁5g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1；
实施例2
胶囊剂的制备
化合物FHZ-15g；微晶纤维素80g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素25g；25％淀粉浆120ml；12目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，填入空胶囊；得1000粒胶囊；
实施例3
颗粒剂的制备
化合物FHZ-15g；淀粉120g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素15g；25％淀粉浆120ml；糖粉20g；硬酸镁5g，14目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，分装成袋；1000袋；
实施例4
缓释片剂的制备
化合物FHZ-12g；微晶纤维素70g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素150g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；硬酸镁5g，滑石粉20g；14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；
实施例5
微丸剂的制备
化合物FHZ-12g；微晶纤维素180g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素20g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；滚动制丸，60℃干燥，制成微丸，填入空胶囊；1000粒；
实施例6
缓释胶囊剂的制备
化合物FHZ-12g；微晶纤维素80g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素150g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；硬酸镁5g，14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；
实施例7
冻干粉针剂的制备
化合物FHZ-11g；泊洛沙姆2g；加入5.0g谷氨酸，加入10.0g甘露醇，加入注射用水，加热溶解，稀释至2000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含化合物FHZ-11-200mg。上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
实施例8
注射剂的制备
化合物FHZ-11g；泊洛沙姆2g；加入5.0g谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至2000ml，过滤、滤液超滤，灌装、灭菌。制成1000只；
实施例9FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7的红外、氢谱、碳谱、核磁数据
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.05(d,1H),6.98–6.84(m,1H),6.68(s,1H),5.47(s,1H),4.91(s,1H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ159.28(s),151.03(s),144.53(s),140.82(s),140.50(s),133.39(s),123.64(s),120.90(s),115.69(s),113.59(s),112.18(d,J＝5.8Hz),106.43(s),
[M-2H]+244.01
IR(KBr)3292,1715,1617,1398,1274,1167cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),5.40(s,1H),4.90(s,1H),2.42(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ158.50(s),149.13(s),147.75(s),142.67(s),135.01(s),116.39(s),111.99(s),111.50(s),96.18(s),19.95(s).
[M-2H]+267.95
IR(KBr)3386,1712,1613,1592,1261,1123cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),4.86(s,1H),4.78(s,1H),2.42(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ154.83(s),149.24(s),143.37(s),135.26(s),131.03(s),116.19(s),111.60(s),109.93(s),20.00(s).
[M-2H]+208.03
IR(KBr)3189,1681,1622,1390,1301,1056cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ(7.48-7.54)(5H),7.21(d,1H),6.59(d,1H),6.51–6.49(m,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ160.64(s),151.35(s),147.23(s),140.56(s),138.96(s),136.84(s),127.83(d,J＝3.4Hz),127.12(s),119.79(s),113.73(s),113.52(s),113.29(s).
[M-2H]+252.04
IR(KBr)3230,1639,1610,1350,1296,1156cm-1
实施例10
所合成的其他化合物的红外、氢谱、碳谱、核磁
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.37(s,1H),5.03(s,1H),4.84(s,1H),3.66(s,2H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ177.65(s),161.38(s),150.32(s),143.10(s),142.18(s),136.67(s),117.32(s),112.48(s),110.90(s),107.79(s),41.19(s).
[M-H]+235.14
IR(KBr)3272,1716,1619,1592,1364,1169,1110cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),5.22(s,1H),2.42(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ161.03(s),156.00(s),155.25(s),149.27(s),132.21(s),124.95(s),112.90(s),110.25(s),104.38(s),20.00(s).
[M-H]+193.26
IR(KBr)3341,1730,1618,1462,1288,1185,1140cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),7.68(s,1H),7.55(s,1H),7.35(d,2H),2.37(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),161.83(s),152.43(s),132.91(s),128.55(s),128.13(s),125.62(s),125.32(s),120.12(s),117.43(s),28.61(s).
[M+H]+1189.05
IR(KBr)3220,1708,1614,1562,1390,1140cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.66(s,1H),7.55(s,2H),7.49(d,3H),6.76(s,1H),6.62(s,1H),6.51(s,1H),5.26(s,1H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ161.10(s),158.93(s),153.07(s),152.43(s),138.96(s),129.59(s),127.83(d,J＝3.4Hz),127.12(s),115.25(s),113.82(s),112.48(s),104.21(s).
[M-H]+237.06
IR(KBr)3210,1680,1618,1362,1200,1165,1110cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),5.21(s,1H),2.42(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ160.53(s),159.52(s),154.00(s),149.91(s),126.69(s),113.45(s),111.16(s),103.99(s),94.09(s),19.95(s).
[M-H]+252.96
IR(KBr)3341,1730,1618,1462,1288,1185,1140cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.72(s,1H),7.03(d,2H),6.23(s,1H),3.84(s,3H),2.40(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ162.60(s),162.19(s),154.41(s),153.46(s),124.92(s),115.19(s),110.63(d,J＝5.4Hz),102.15(s),56.08(s),21.59(s).
[M+Na]+213.06
IR(KBr)3100,1760,1658,1362,1188,1140cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.50(s,1H),5.02(s,1H),4.87(s,1H),4.41(s,2H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ161.38(s),153.18(s),151.97(s),145.49(s),136.20(s),117.13(s),113.06(s),110.50(s),109.62(s),48.98(s).
[M-2H]+224.00
IR(KBr)3311,1748,1628,1432,1210,1155,1120cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.37(s,1H),5.24(s,1H),3.71(s,2H),3.67(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ173.01(s),162.08(s),160.74(s),153.18(s),150.95(s),126.61(s),113.96(s),110.26(s),108.62(s),105.74(s),51.87(s),35.14(s).
[M-H]+233.02
IR(KBr)3241,1760,1635,1482,1308,1125,1100cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.23(s,1H),5.27(s,1H),2.40(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ162.19(s),160.04(s),154.55(s),153.46(s),126.07(s),113.53(s),112.00(s),110.66(s),104.70(s),21.59(s).
[M-H]+176.16
IR(KBr)3211,1710,1628,1772,1238,1155,1118cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.37(s,1H),5.27(s,1H),3.65(s,2H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ177.65(s),162.08(s),160.74(s),153.18(s),146.18(s),126.61(s),113.96(s),110.26(s),108.24(s),105.74(s),41.19(s).
[M-H]+219.08
IR(KBr)3241,1748,1628,1492,1238,1203,1151cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),4.85(s,1H),4.76(s,1H),2.52(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ158.49(s),149.38(s),143.50(s),141.79(s),135.29(s),122.37(s),116.08(s),111.52(s),109.79(s),19.87(s).
[M-2H]+224.00
IR(KBr)3141,1750,1625,1492,1258,1130,1180cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.27(s,1H),5.46(s,1H),4.93(s,1H),2.43(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ161.53(s),151.77(s),148.64(s),142.84(s),135.64(s),116.49(s),112.23(s),111.89(d,J＝15.8Hz),21.59(s).
[M-2H]+190.06
IR(KBr)3320,1756,1623,1442,1243,1145,1125cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),7.40(s,1H),7.36(s,1H),7.23(s,1H),3.83(s,3H),2.37(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),162.27(s),145.64(s),143.08(s),126.80(s),125.50(s),125.03(s),121.98(d,J＝15.9Hz),116.90(s),56.83(s),28.61(s).
[M+H]+219.26
IR(KBr)3142,1740,1612,1440,1258,1135,1122cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.09(s,1H),6.67(s,1H),6.36(s,1H),4.82(d,2H),3.71(s,2H),3.66(s,3H).13CNMR(100MHz,DMSO)δ173.01(s),161.38(s),150.32(s),148.07(s),142.18(s),136.67(s),117.32(s),112.48(s),110.90(s),108.46(s),51.87(s),35.14(s).
[M-2H]+248.05
IR(KBr)3181,1710,1602,1492,1278,1135,1182cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),8.07(s,1H),7.67(s,1H),7.25(s,1H),2.37(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),161.83(s),154.06(s),136.40(s),130.26(s),128.85(s),126.25(s),120.42(s),119.78(s),117.47(s),28.61(s).
[M+H]+266.96
IR(KBr)3250,1748,1623,1482,1238,1145,1122cm-1
1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,2H),6.68(s,2H),6.23(s,2H),5.46(s,2H),4.94(s,2H),2.39(s,2H),1.41(s,2H),0.94(s,3H).
13CNMR(100MHz,DMSO)δ161.38(s),151.34(s),149.15(s),142.15(s),136.71(s),116.20(s),112.91(s),112.56(s),112.26(s),37.14(s),21.80(s),13.55(s).
[M-2H]+218.06
IR(KBr)3311,1750,1622,1482,1238,1115,1090cm-1
参考文献：
1.Caterina，M.J.，etal.，Thecapsaicinreceptor:aheat-activatedionchannelinthepainpathway.Nature，1997.389(6653):p.816-24.
2.Smith，G.D.，etal.，TRPV3isatemperature-sensitivevanilloidreceptor-likeprotein.Nature，2002.418(6894):p.186-90.
3.Xu，H.，etal.，TRPV3isacalcium-permeabletemperature-sensitivecationchannel.Nature，2002.418(6894):p.181-6.
4.Guler，A.D.，etal.，Heat-evokedactivationoftheionchannel，TRPV4.JNeurosci，2002.22(15):p.6408-14.
5.Talavera，K.，B.Nilius，andT.Voets，NeuronalTRPchannels:thermometers，pathfindersandlife-savers.TrendsNeurosci，2008.31(6):p.287-95.
6.Kim，S.R.，etal.，InteractionsbetweenCB(1)receptorsandTRPV1channelsmediatedby12-HPETEarecytotoxictomesencephalicdopaminergicneurons.BrJPharmacol，2008.155(2):p.253-64.
7.Hu，H.Z.，etal.，2-aminoethoxydiphenylborateisacommonactivatorofTRPV1，TRPV2，andTRPV3.JBiolChem，2004.279(34):p.35741-8.
8.Liao，M.，E.Cao，D.Julius，andY.Cheng.2013.StructureoftheTRPV1ionchanneldeterminedbyelectroncryo-microscopy.Nature504:107-112.
9.Cao，E.，M.Liao，Y.Cheng，andD.Julius.2013.TRPV1structuresindistinctconformationsrevealactivationmechanisms.Nature504:113-118.
10.HuynhKW，CohenMR，ChakrapaniS，HoldawayHA，StewartPL，Moiseenkova-BellVY(2014)StructuralInsightintotheAssemblyofTRPVChannels.Structure22:260-268
11.MasuyamaR，VriensJ，VoetsT，KarashimaY，OwsianikG，VennekensR，LiebenL，TorrekensS，MoermansK，VandenBoschA，BouillonR，NiliusB，CarmelietG(2008)TRPV4-mediatedcalciuminfluxregulatesterminaldifferentiationofosteoclasts.Cellmetabolism8:257-265
12.WatanabeH，etal.，(2002)ActivationofTRPV4channels(hVRL-2/mTRP12)byphorbolderivatives.TheJournalofbiologicalchemistry277:13569-13577
13.ThorneloeKS，etal.，(2008)N-((1S)-1-{[4-((2S)-2-{[(2，4-dichlorophenyl)sulfonyl]amino}-3-hydroxypropanoyl)-1-piperazinyl]carbonyl}-3-methylbutyl)-1-benzothiophene-2-carboxamide(GSK1016790A)，anovelandpotenttransientreceptorpotentialvanilloid4channelagonistinducesurinarybladdercontractionandhyperactivity:PartI.TheJournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics326:432-442
14.YeL，etal.，(2012)TRPV4isaregulatorofadiposeoxidativemetabolism，inflammation，andenergyhomeostasis.Cell151:96-110
15.ShiDJ，YeS，CaoX，ZhangR，WangK(2013)CrystalstructureoftheN-terminalankyrinrepeatdomainofTRPV3revealsuniqueconformationoffinger3loopcriticalforchannelfunction.Protein&cell4:942-950
16.LinZ，ChenQ，LeeM，CaoX，ZhangJ，MaD，ChenL，HuX，WangH，WangX，ZhangP，LiuX，GuanL，TangY，YangH，TuP，BuD，ZhuX，WangK，LiR，YangY(2012)ExomesequencingrevealsmutationsinTRPV3asacauseofOlmstedsyndrome.Americanjournalofhumangenetics90:558-564
17.CaoX，YangF，ZhengJ，WangK(2012)IntracellularProton-mediatedActivationofTRPV3ChannelsAccountsfortheExfoliationEffectofalpha-HydroxylAcidsonKeratinocytes.TheJournalofbiologicalchemistry287:25905-25916.
18.Chung，M.K.，etal.，2-aminoethoxydiphenylborateactivatesandsensitizestheheat-gatedionchannelTRPV3.JNeurosci，2004.24(22):p.5177-82.
19.Hu，H.Z.，etal.，2-aminoethoxydiphenylborateisacommonactivatorofTRPV1，TRPV2，andTRPV3.JBiolChem，2004.279(34):p.35741-8.
20.Vogt-Eisele，A.K.，etal.，MonoterpenoidagonistsofTRPV3.BrJPharmacol，2007.151(4):p.530-40.
21.GullapalliS，etal.，GRC15133-Anovel，selectiveTRPV3antagonistwithanti-hyperalgesiceffectsininflammatoryandneuropathicpain.CHI-WorldPharmaCong，2008.22(1):12-13
22.BangS，etal.，17R-resolvinD1specificallyinhibitsTRPV3leadingtoperipheralantinociception.BrJPharmacol，2012.165:683-692
23.管玉珠，余兰，毕凌.祖师麻中瑞香素提取比较.兰州医学院学报，2000，6(2):26.
24.曲淑岩.瑞香素抗血栓作用.药学学报，1986，21:498.
25.KimuraY.Inhibitionoftheformationof5-hydroxy-6，8，11，14-eicosatetranenoicacidfromarachidonicacidinpolymorphonuclearleukocytesbyvarioscoumarins.BiochimBiophysActa，1985，834:224.
26.刘国卿.祖师麻甲素的药理研究.中草药通讯，1977，(3):117.
27.BrownSS.ForeignCompoundMetabolisminMammais.TheChemicalSociety、BurlinglonHouse.London1970，1:58.
28.郑建靖，石森林.瑞香素的药理研究进展.浙江中医学院学报，1999，23(4):50-51.
29.GoldsteinLB，etal.，(2011)Guidelinesfortheprimarypreventionofstroke:aguidelineforhealthcareprofessionalsfromtheAmericanHeartAssociation/AmericanStrokeAssociation.Stroke；ajournalofcerebralcirculation42:517-584.
30.ZhangJ，YangJ，ZhangC，JiangX，ZhouH，LiuM(2012)Calciumantagonistsforacuteischemicstroke.CochraneDatabaseSystRev5:CD001928.
31.RehncronaS(1985)Brainacidosis.Annalsofemergencymedicine14:770-776.
32.LamTI，WisePM，O'DonnellME(2009)CerebralmicrovascularendothelialcellNa/Hexchange:evidenceforthepresenceofNHE1andNHE2isoformsandregulationbyargininevasopressin.AmericanjournalofphysiologyCellphysiology297:C278-289。

Claims (9)

1.香豆素类化合物，其特征在于：苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。
2.根据权利要求1的香豆素类化合物，其特征在于：苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
3.根据权利要求1的香豆素类化合物，其特征在于：香豆素类化合物的结构，
R1、或、和、R2为甲基、氯甲基、三氟甲基、乙羧基、乙酸甲酯基、乙酰基、乙羧基、丁基、苯基、氟、氯、溴中的任意一种或多种。
R3、或、和、R4为羟基；或；
香豆素类化合物的制备、后处理及纯化方法；或；
衍生合成的其它同系列化合物的制备及后处理方法。
4.香豆素类化合物，其特征在于：它结构是如下任意一种或多种：
5.根据权利要求1或4的香豆素类化合物，其特征在于：采用连苯三酚、间苯二酚、3-甲氧基邻羟基苯甲醛、或5-溴邻羟基苯甲醛，与乙酰乙酸乙酯衍生物、丙酮二羧酸、或丁酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、哌啶、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物。
6.根据权利要求1的香豆素类化合物用于制备调节瞬时离子通道蛋白TRPV3亚型的药物组合物；通过FlexStation3技术及电生理技术对该类化合物的生物学机制进行系统研究；分子生物学方法模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析；或；香豆素类化合物作用于脑缺血模型；脑缺血动物模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析。
7.根据权利要求1、2的香豆素类化合物用于制备治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤中任意一种或多种疾病的药物组合物。
8.根据权利要求7的药物组合物，其特征是：口服用量范围是0.1-500mg/kg。
9.根据权利要求1的香豆素类化合物的制剂，每制剂单位含有1-200mg的活性化合物；制剂类型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、缓释胶囊剂、冻干粉针剂、注射剂。
CN201510140439.9A 2015-03-27 2015-03-27 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用 Active CN105524034B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510140439.9A CN105524034B (zh) 2015-03-27 2015-03-27 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510140439.9A CN105524034B (zh) 2015-03-27 2015-03-27 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105524034A true CN105524034A (zh) 2016-04-27
CN105524034B CN105524034B (zh) 2018-08-17

Family

ID=55766606

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510140439.9A Active CN105524034B (zh) 2015-03-27 2015-03-27 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105524034B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136935A (zh) * 2018-10-25 2019-01-04 西南石油大学 一种吡喃衍生物的用途及其制备方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3567832A (en) * 1967-11-20 1971-03-02 Lipha New hypotensive and oddian spasmolytic pharmaceutical methods employing various hydroxy coumarines
JPS6032783A (ja) * 1983-07-30 1985-02-19 Daikin Ind Ltd 含フッ素クマリン類
CN1028527C (zh) * 1989-07-31 1995-05-24 三共株式会社 香豆素衍生物的制备方法
WO2009102498A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Novel imaging agents for detecting neurological dysfunction
US20120028912A1 (en) * 2000-02-22 2012-02-02 J.David Gladstone Institute Methods of modulating bromodomains
WO2013148197A1 (en) * 2012-03-28 2013-10-03 The J. David Gladstone Institutes Compositions and methods for reactivating latent immunodeficiency virus
CN103446154A (zh) * 2012-05-29 2013-12-18 中国医学科学院药物研究所 香豆素衍生物在防治脑部重大疾病中的应用
EP2767832A1 (en) * 2013-02-18 2014-08-20 Imabiotech Photo or chemolabile conjugates for molecules detection
TWI457121B (zh) * 2008-06-12 2014-10-21 Nat Health Research Institutes 化合物於製造治療病毒感染的藥物之用途

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3567832A (en) * 1967-11-20 1971-03-02 Lipha New hypotensive and oddian spasmolytic pharmaceutical methods employing various hydroxy coumarines
JPS6032783A (ja) * 1983-07-30 1985-02-19 Daikin Ind Ltd 含フッ素クマリン類
CN1028527C (zh) * 1989-07-31 1995-05-24 三共株式会社 香豆素衍生物的制备方法
US20120028912A1 (en) * 2000-02-22 2012-02-02 J.David Gladstone Institute Methods of modulating bromodomains
WO2009102498A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Novel imaging agents for detecting neurological dysfunction
TWI457121B (zh) * 2008-06-12 2014-10-21 Nat Health Research Institutes 化合物於製造治療病毒感染的藥物之用途
WO2013148197A1 (en) * 2012-03-28 2013-10-03 The J. David Gladstone Institutes Compositions and methods for reactivating latent immunodeficiency virus
CN103446154A (zh) * 2012-05-29 2013-12-18 中国医学科学院药物研究所 香豆素衍生物在防治脑部重大疾病中的应用
EP2767832A1 (en) * 2013-02-18 2014-08-20 Imabiotech Photo or chemolabile conjugates for molecules detection

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DINESH SHARMA，等: "A facile synthesis of 2 H -chromen-2-ones via Pechmann condensation under solvent free conditions using grinding technique", 《GREEN PROCESS SYNTH》 *
EUGENE R. BISSELL，等: "Some 7-Substituted 4- (TrifluoromethyI) coumarins", 《J.CHEM.ENG.DATA》 *
HAI-MING GUO等: "A Fluorogenic Aldehyde Bearing a 1,2,3-Triazole Moiety for Monitoring the Progress of Aldol Reactions", 《J.ORG.CHEM.》 *
JOVANA B. VESELINOVIC，等: "Selected 4-phenyl hydroxycoumarins: In vitro cytotoxicity, teratogenic effect on zebrafish （Danio rerio） embryos and molecular docking study", 《CHEMICO-BIOLOGICAL INTERACTIONS》 *
JURI M. TIMONEN，等: "Synthesis and anti-inflammatory effects of a series of novel 7-hydroxycoumarin derivatives", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *
LI JING，等: "Crystal Structure, Photoluminescent, and Theoretical Studies of 3-Acetyl-8-methoxy-coumarin", 《结构化学》 *
M. KATKEVIČS，等: "MICROWAVE-PROMOTED AUTOMATED SYNTHESIS", 《CHEMISTRY OF HETEROCYCLIC COMPOUNDS》 *
MARK W. IRVINE，等: "Coumarin-3-carboxylic acid derivatives as potentiators and inhibitors of recombinant and native N-methyl-D-aspartate receptors", 《NEUROCHEMISTRY INTERNATIONAL》 *
NA ZHANG，等: "Docking and 3D-QSAR studies of 7-hydroxycoumarin derivatives as CK2 inhibitors", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *
SAI-PARNG S. FUNG，等: "Discovery and characterisation of hydrazines as inhibitors of the immune suppressive enzyme, indoleamine 2,3-dioxygenase 1（IDO1）", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *
SAI-SAI XIE，等: "Multi-target tacrine-coumarin hybrids: Cholinesterase and monoamine oxidase B inhibition properties against Alzheimer’s disease", 《EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 *
SUKRITI NIGAM，等: "Microbial biotransformation - a novel approach for modification on coumarin substrates", 《INDIAN JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY》 *
曾育才，等: "KF•2H2O催化无溶剂合成3-乙酰基香豆素衍生物", 《日用化学工业》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136935A (zh) * 2018-10-25 2019-01-04 西南石油大学 一种吡喃衍生物的用途及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105524034B (zh) 2018-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10624938B2 (en) Total flavone extract of flower of abelmoschus manihot L. medic and preparation method thereof
Gao et al. Incorporation of lapatinib into core–shell nanoparticles improves both the solubility and anti-glioma effects of the drug
TWI733061B (zh) 養血清腦製劑在製備提高記憶認知能力的藥物中的應用
US20100069481A1 (en) Methods and compositions for the treatment of cancer
CN104557532B (zh) 二联苯衍生物及其应用
CN1931217B (zh) 一种由银杏叶与红景天制成的药物组合物
BR112017021190B1 (pt) Uso de uma composição farmacêutica que compreende um extrato de indigo naturalis
CN105566269B (zh) 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗瘙痒的应用
Li et al. Cardioprotective effects of Amentoflavone by suppression of apoptosis and inflammation on an in vitro and vivo model of myocardial ischemia-reperfusion injury
Xing et al. Role of cerebrospinal fluid-contacting nucleus in sodium sensing and sodium appetite
CN104546809B (zh) 3,3’,5,5’-四异丙基-4,4’-二联苯酚在预防及治疗缺血性脑卒中中的应用
CN105524034A (zh) 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用
CN101143157A (zh) 酪醇及酪醇副产红景天苷植物提取物及其制剂与用途
CN103083298B (zh) 丹酚酸a组合物用于制备保护缺血脑组织损伤药物的用途
KR20120099215A (ko) 다운 증후군을 치료하기 위한 방법 및 약학적 조성물
BR122018007412B1 (pt) Processo para preparação de isopropil éster de ácido (s)-(7-ciano-4-piridin-2-ilmetil-1,2,3,4- tetra-hidrociclopenta[b]indol-2-il)-carbâmico, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo
JP2012521424A (ja) 癌の処置のための方法および組成物
TWI542348B (zh) 含４－乙醯基－安卓奎諾－ｂ之組合物用於製備抑制癌細胞生長之藥物的用途
CN1935178A (zh) 银杏叶提取物与淫羊藿提取物的组合物
CN1931216B (zh) 一种由红花与红景天制成的药物组合物
US20210015881A1 (en) Agent exhibiting antiarrhythmic effect
CN107334813A (zh) 一种四方蒿提取物及其制法和用途
CN107982265B (zh) 一种用于治疗肺癌的组合物
Xinwen et al. Neuroprotective effect of Trichosanthes kirilowii cassia twig on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.
CN100548316C (zh) 银丹组合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant