CN105566269B - 香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗瘙痒的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于治疗皮肤瘙痒症状的香豆素衍生物7,8‑羟基‑4‑三氟甲基‑苯并吡喃‑2‑酮(7,8‑dihydroxy‑4‑trifluoromethyl‑2H‑chromen‑2‑one)的制备及其分子药理学机制及瘙痒动物模型等方面的药效学研究，以及适用于皮肤瘙痒治疗的制剂学研究。该活性化合物的药理作用机制明确，用于治疗皮肤瘙痒症状广谱有效，可用于治疗皮肤疾病的临床应用。

Description

香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗瘙痒的应用
技术领域
本发明属于药物化学、药理学与制剂领域，具体包括活性香豆素衍生物的合成与纯化、药理作用机制研究、治疗瘙痒的用途、制剂。
背景技术
香豆素类化合物是一类具有芳香气味的天然产物，具有苯并α-吡喃酮母核，可视为顺式邻羟基桂皮酸脱水形成的内酯，是重要的药用天然活性化合物，以香豆素为主要有效成分的中药-补骨脂、祖师麻、秦皮、蛇床子、前胡等，以苯并α-吡喃酮为基本母核，通过化学合成与修饰的方法制备非天然的香豆素衍生物，对于探讨与发现这一类结构母核新的药理活性及构效关系研究，具有重要的研究意义。
瞬时感受器电位离子通道(transient receptor potential ion channel，TRPchannel)是一类在外周和中枢神经系统分布很广泛的阳离子通道蛋白，TRP家族主要由七个亚族组成：TRPC、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP、TRPA和TRPN。TRP受到多种因素的调节，包括渗透压、pH值、机械力以及一些内、外源性配体和细胞内信号分子，其参与生物体内感觉信息传递如视觉、温度觉、痛觉和触觉等，并且具有调节胞内Ca2+平衡等多种重要的生理功能。
TRPV3通道于2002年首次被发现，有三个不同实验室发现了其可以被温热温度(32℃-39℃)激活。随后的研究发现，该通道还可以被合成化合物2-APB、樟脑、胞内氢离子激活。TRPV3通道在人体内分布广泛，在感觉神经元如背根神经节、三叉神经节和皮肤角质细胞中大量表达。对于TRPV3的生理功能，目前研究认为其与人体的温度感受密切相关。另外，由于TRPV3较为特殊的在皮肤角质细胞中的表达，一系列相关研究发现了TRPV3与脱发、瘙痒等皮肤疾病的相关性，但具体机制尚不明了。2012年，Lin et al首次发现了TRPV3突变导致的一种严重的皮肤系统遗传疾病——Olmsted综合症，也暗示着TRPV3在生理、病理过程中扮演的重要角色。
FlexStation3技术是一种基于钙荧光的高通量筛选技术。它的主要原理是：应用可以与钙离子特异性结合的染料孵育细胞，细胞内含有大量可结合钙离子的未发光染料分子。当所表达通道激活后大量钙离子内流，与胞内的染料结合并发出荧光。通过读取荧光值的强度，由其强度变化反应离子通道的开合。该方法适用于96孔板或384孔板，可以一次性筛选多种化合物，实现高通量筛选。
研究离子通道活性及评估化合物对其作用的方法是利用电生理技术进行检测，因其直接、灵敏的优点而成为了检测离子通道的“金标准”。电生理膜片钳技术是应用玻璃微电极在细胞膜表面形成高阻封接，将细胞上的离子通道接入放大器、电极、浴液组成的电环路，给予细胞不同刺激，通过人工钳制细胞的膜电位而观察记录电环路中的电流改变情况，从而反映离子通道的开合。
Transient receptor potential vanilloid-3(TRPV3)是非选择性通透钙离子的阳离子通道，在皮肤表皮细胞 广泛的表达。TRPV3可被非伤害性的温觉刺激和伤害性的热觉刺激激活。随着人们对TRPV3通道的研究加深，发现点突变导致的TRPV3功能上调导致皮肤溃烂、产生剧烈瘙痒及疼痛；敲除TRPV3，在AEW处理的慢性瘙痒模型中，搔抓反应明显减少；而且在研究过敏性皮炎患者时发现TRPV3的表达量明显增高。据此，人们认为TRPV3有可能成为治疗瘙痒疾病的一个作用靶点。
瘙痒是皮肤科最常见的症状之一，见于多种皮肤病、胆道疾病、甲状腺疾病、肾脏疾病、恶性肿瘤以及艾滋病等多种临床常见疾病。瘙痒程度不尽相同，有的瘙痒可以忍受，有的则自觉剧痒，需要不断抓挠，直至皮肤损伤才稍感减轻；往往晚间加剧，影响患者睡眠。
目前，与瘙痒有关的神经通路和分子机制已经逐渐被人们发现，包括组胺依赖的瘙痒通路、组胺非依赖的瘙痒通路及这些通路所依赖的受体、递质、神经等。尽管人们针对瘙痒形成的特点和原因已经发明了很多治疗皮肤瘙痒的药物，包括针对组胺依赖的急性瘙痒的抗组胺药物、清除致痒源的洗剂和短暂缓解瘙痒的清凉药物等，但对于非组胺依赖的急性瘙痒和慢性瘙痒在临床上一直缺少理想的皮肤止痒药物。因此，开发疗效更好的止痒药物是有意义的。
技术方案
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。
R1、或、和、R2为甲基、氯甲基、三氟甲基、乙羧基、乙酸甲酯基、乙酰基、乙羧基、丁基、苯基、氟、氯、溴中的任意一种或多种。
R3、或、和、R4为羟基
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
4-三氟甲基-7,8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7,8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)
本发明涉及香豆素类化合物，它结构是如下任意一种或多种：
本发明涉及香豆素类化合物的制备。
本发明涉及香豆素类化合物的制备、后处理及纯化方法。采用连苯三酚、间苯二酚、3-甲氧基邻羟基苯甲醛、或5-溴邻羟基苯甲醛，与乙酰乙酸乙酯衍生物、丙酮二羧酸、或丁酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、哌啶、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物。
本发明涉及香豆素类化合物的结构，衍生合成的其它同系列化合物的制备及后处理方法。
本发明涉及香豆素类化合物制备调节瞬时离子通道蛋白TRPV3亚型的组合物。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物用于瞬时受体电位离子通道蛋白(transientreceptor potential channels)中的TRPV亚型家族的分子生物学机制研究，通过FlexStation3技术及电生理技术对该类化合物的生物学机制进行系统研究。本发明涉及分子生物学方法模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析。
本发明涉及香豆素类化合物作用于小鼠瘙痒模型。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物作用于皮肤瘙痒动物模型的搭建与实验方法，实验结果及数据分析。
本发明涉及香豆素类化合物作用于制备治疗瘙痒的药物组合物。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明涉及香豆素类化合物作用于制备治疗皮肤瘙痒的药物组合物。
本发明涉及香豆素类化合物作用于制备治疗组胺依赖的瘙痒、氯喹引起的瘙痒及慢性瘙痒的药物组合物。
本发明涉及香豆素类化合物的制剂，每制剂单位含有1-200mg的活性化合物。
本发明涉及香豆素类化合物的制剂，制剂类型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、缓释胶囊剂、冻干粉针剂、注射剂、O/W乳剂型基质软膏剂、W/O乳剂型基质软膏剂、油脂性基质软膏剂、水性基质软膏剂、霜剂、贴剂、喷雾剂、洗剂、乳剂等药物制剂及洗发露、沐浴液等。
本发明的香豆素类化合物
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环3位、或、和、4位被取代，7、或、和、8位为羟基取代。
R1、或、和、R2为甲基、氯甲基、三氟甲基、乙羧基、乙酸甲酯基、乙酰基、乙羧基、丁基、苯基、氟、氯、溴、中的任意一种或多种。
R3、或、和、R4为羟基。
本发明涉及香豆素类化合物，苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位为羟基取代。
本发明的香豆素类化合物的催化条件的选择
本发明采用Pechmann反应进行香豆素类化合物的合成，该反应的基本类型为连苯三酚与乙酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物，本发明首先比较不同的催化剂对于Pechmann反应的催化效率。
本发明的预试验1：
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与2ml浓H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入30ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与1mmol TiCl4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入10ml乙酸乙酯，过滤除去反应液中的固体，将滤液蒸干，硅胶拌样，色谱柱分离，洗脱剂比例为石油醚：乙酸乙酯(1:1)。
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与1mmol TUD混合搅拌均匀，130℃熔融条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入30ml甲醇溶解反应物，硅胶拌样，色谱柱分离，洗脱剂比例为石油醚：乙酸乙酯(1:1)。
本发明通过比较四种不同的催化条件，比较不同的乙酰乙酸乙酯衍生物的反应条件、后处理及目标产物的收率，结果表明70％H2SO4的催化条件下具有底物适应性广、后处理简单、收率较高等优点，因此本发明在后面的反应中采用70％H2SO4作为Pechmann反应的催化条件合成了一系列的香豆素衍生物。
本发明的香豆素类化合物的合成与纯化
本发明涉及香豆素类化合物的制备、后处理及纯化方法。采用连苯三酚、间苯二酚、3-甲氧基邻羟基苯甲醛、或5-溴邻羟基苯甲醛，与乙酰乙酸乙酯衍生物、丙酮二羧酸、或丁酰乙酸乙酯衍生物在浓H2SO4、70％H2SO4、TiCl4、哌啶、TUD的催化条件下生成香豆素类化合物。
4-三氟甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的三氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下 反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
4-乙羧基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-acetic acid-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丙酮二羧酸与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-溴-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-bromo-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的2-溴乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氟-4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-fluoro-7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氟-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-fluoro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的2-氟乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-苯基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的苯代乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-苯基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的苯代乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-溴-4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-bromo-7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-溴乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7-甲氧基-苯并吡喃-2-酮(7-methoxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮加入到无水DMF溶液中，加入10mmol氢化钠与10mmol碘甲烷，反应结束后用水淬灭反应，将DMF蒸干后硅胶柱拌样，石油醚:乙酸乙酯(1:1)洗脱分离。
4-氯甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(4-(chloromethyl)-7，8-dihydroxy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的氯甲基乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙酸甲酯基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-acetate methy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的丙酮二羧酸二甲酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙羧基-7-羟基-苯并吡喃-2-酮(7-hydroxy-4-acetic acid-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的丙酮二羧酸与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-氯-4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(3-chloro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的间苯二酚和10mmol的2-氯乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-甲基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-8-甲氧基苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-8-methoxy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的3-甲氧基邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-乙酸甲酯基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-acetate methy-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丙酮二羧酸二甲酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
3-乙酰基-6-溴-苯并吡喃-2-酮(3-acetyl-6-bromo-2H-chromen-2-one)
将10mmol的5-溴邻羟基苯甲醛和10mmol的乙酰乙酸乙酯与10％催化量哌啶混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶
4-丁基-7，8-羟基-苯并吡喃-2-酮(7，8-dihydroxy-4-propyl-2H-chromen-2-one)
将10mmol的连苯三酚和10mmol的丁酰乙酸乙酯与10ml70％H2SO4混合搅拌均匀，室温条件下反应约6hr，反应结束后向反应液加入20ml水，有大量固体析出，过滤洗涤固体化合物，将固体产物烘干，70％乙醇/水溶液重结晶。
本发明香豆素类化合物与瞬时离子通道蛋白TRPV3亚型的作用机制研究
TRPV3通道是一种阳离子非选择性通道，可以大量通透钙离子，本发明采用FlexStation3技术与电生理技术对合成的化合物进行活性筛选。Flex Station3技术是一种基于钙荧光的高通量筛选技术，可应用该方法对TRPV3通道的调节剂进行筛选；电生理技术主要应用全细胞式记录方法，应用HEKA EPC10放大器系统及PatchMaster记录软件(玻璃微电极阻值为3-5MΩ，细胞钳制电位为0mV，使用-80mV和+80mV方波电压记录)。
实验应用HEK293细胞，接种于24孔板中，37℃、5％CO2培养过夜。瞬时转染pIRES-EGFP/hTRPV3质粒(Cao et al,Intracellular proton-mediated activation ofTRPV3channels accounts for the exfoliation effect of alpha-hydroxyl acids onkeratinocytes,Journal of Biological Chemistry,Vol.287,No.31,25905-25916)，换液时传代至96孔板，细胞密度约为50，000每孔。转染后24h时进行染料孵育，所用染料为Cal-520assay kit。吸出40μl培养基，此时96孔板中剩余60μl培养基，加入等量的Cal-520染料，孵箱孵育1.5小时可上机检测。Flex Station系统激发波长490nm，发射波长525nm，每间隔1.6s读数一次。17s时加入待测化合物，100s时加入TRPV3激动剂2-APB(2-氨基乙氧基联苯硼酸盐)(终浓度200μM)，每次测试共计180s。对于拮抗剂，其筛选实验的荧光特征应为加入2-APB后荧光值没有明显上升；浓度依赖特性应表现为随着化合物浓度的递减对通道的抑制效应减弱，即加入激动剂2-APB后，荧光信号随化合物孵育浓度下降而增高。
结果表明，化合物
FHZ-1(7，8-dihydroxy-4-trifluoromethyl-2H-chromen-2-one)、
FHZ-3(3-bromo-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)、
FHZ-5(3-fluoro-7，8-dihydroxy-4-methyl-2H-chromen-2-one)、和
FHZ-7(7，8-dihydroxy-4-phenyl-2H-chromen-2-one)
能够抑制2-APB引起的TRPV3通道激活(见图1)
图1的解释：瑞香素衍生物(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)抑制TRPV3通道的作用。图中升高的深蓝信号为阳性药2-APB(300μM)。筛选采用FlexStation3作站检测化合物对通道的作用。17s时，给予瞬时转染TRPV3通道的HEK293细胞不同浓度的化合物或2-ABP
从单浓度筛选得到的苗头化合物(图1)，进一步采用FlexStation3工作站对瑞香素衍生化合物3(FHZ-3)和7(FHZ-7)进行了浓度梯度的筛选确认(图2)。结果表明，化合物3和7能够剂量依赖的抑制2-APB引起的TRPV3通道激活(图2)。
图2的解释：瑞香素衍生物FHZ-3和FHX-7抑制TRPV3通道的量效关系。筛选采用FlexStation3作站检测化合物对通道的作用。17s时，给予瞬时转染TRPV3通道的HEK293细胞不同浓度的化合物或2-ABP
为了初步确定上面化合物FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5和FHZ-7的选择性，首选在表达TRPV1、TRPV4和TRPA1表达细胞并在测定了这些化合物的通道选择性(图3)。结果表明，瑞香素衍生物1、3、5和7对其它TRP通道没有抑制作用。
图3的解释：瑞香素衍生物1、3、5和7(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)对其它TRPV1、TRPV4和TRPA1通道的选择性。化合物1、3、5和7(FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7)对TRPV1、TRPV4和TRPA1通道没有抑制作用
应用瞬时转染pIRES-EGFP/hTRPV3质粒的HEK293T细胞，于转染后24小时开始测试。电极内液及外液的组成成分为130mMNaCl，0.2mMEDTA，3mMHEPES，pH为7.4。测试开始待基线平稳后，给予2-APB激活TRPV3通道。电流平稳后，分别重力灌流给予不同化合物观察其对通道的抑制作用。IC50曲线的绘制由重力灌流不同浓度的化合物制得。2-APB的EC50偏移曲线则由重力灌流不同浓度的2-APB得到。
结果表明，给予细胞不同浓度的化合物1，TRPV3电流受到不同程度的抑制，呈现明显的浓度依赖关系，其IC50值＝21±1.0μM(图4)。
图4瑞香素衍生物FHZ-1抑制2-APB诱导激活TRPV3通道的量-效关系曲线。图4的左图：瞬时转染TRPV3的HEK293T细胞50μM激动剂2-APB后，正负向电流均明显增大，通道被激活打开；在50μM 2-APB存在的情况下，给予浓度为100μM的化合物FHZ-1，电流被迅速且强烈的降低，显示通道被阻断。图4 的右图：B，在50μM 2-APB存在的情况下，给予细胞不同浓度的化合物FHZ-1(1mM、300μM、100μM、30μM、10μM和3μM)，TRPV3电流被不同程度的抑制，呈现明显的浓度依赖性关系。半数抑制浓度由Hill方程拟合得出
本发明香豆素类化合物作用于小鼠瘙痒模型的研究
在瘙痒的动物模型中，标准模型是在颈后皮内注射致痒剂产生瘙痒，观察后肢对注射部位的搔抓行为。搔抓行为是在瘙痒研究中的一个主要指标，瘙痒的程度用搔抓的次数或时间来衡量。搔抓一次为从后肢抬起搔抓注射部位快速的高频的挠动到后肢落地或放入嘴中啃咬整个过程。通过记录一定时间内的搔抓次数来判断瘙痒的程度。本发明主要包括作用于TRPV3蛋白活性最好的化合物FHZ-1用于组胺依赖的瘙痒行为学研究、氯喹引起的瘙痒行为学研究、慢性瘙痒的行为学研究。
1、对小鼠组胺依赖的瘙痒止痒作用行为学研究
组胺是一种自体活性物质，是人们公认的诱导瘙痒产生的主要物质之一，在体内由组氨酸脱羧基而成，组织中的组胺是以无活性的结合型存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中，在皮肤含量较多。当机体受到理化刺激或发生过敏反应时，可引起这些细胞脱颗粒，导致组胺释放，与组胺受体结合而产生生物效应。
组胺H1受体拮抗剂以其对细胞上组胺受体位点的可逆性竞争作用而阻止组胺作用于靶细胞，通过阻滞和拮抗H1受体而发挥抗过敏作用，以达到防止一系列生理反应的发生。现在临床上使用的抗组胺药物主要有：第一代H1受体拮抗剂，如氯苯那敏、赛庚啶、羟嗪等；第二代H1受体拮抗剂，如西替利嗪、氯雷他啶、咪唑斯汀、阿司咪唑等；第三代H1受体拮抗剂，如非索非那丁、去甲基阿司咪唑、脱羧基氯雷他啶等。其中市场占有率最大、疗效最好的药物是氯雷他定。在该试验中，选该药为阳性对照药物。
小鼠在购进之后SPF环境恢复两天，然后每天抓拿抚摸老鼠5-10min/天，并放到视频观察盒中适应30min，连续处理5-7天，使老鼠充分适应抓拿和视频观察，表现出正常生理状态。取CD1小鼠31只，随机分为3组，第一组为溶媒(PEG400:水:甘油＝996:100:40，质量比)对照组，第二组为FHZ-1组，第三组为氯雷他定组。一次灌胃给药，灌胃体积为10ml/Kg。于给药后1h在颈后皮内注射组胺50μg/site，造成瘙痒模型，视频观察给组胺前5min至给组胺后30min，统计给药前后的搔抓次数。结果见表1
表1对小鼠组胺引起的瘙痒的止痒作用()
注：与溶媒对照组比较*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001(下表同)
由表1结果可见，一次灌胃给药后，FHZ-1 100mg/kg和氯雷他定10mg/kg均可明显抑制小鼠在注射组胺后引发的搔抓次数，与溶媒对照组比较，差异显著(p＜0.05)，且二者作用强度相同。
2、对小鼠氯喹引起的瘙痒止痒作用行为学研究
氯喹最初用于疟疾的治疗，其副作用之一就是可以引起皮肤瘙痒。在之前的研究中，皮下注射氯喹可以引发剧烈的瘙痒，而抗组胺药物对该瘙痒治疗无效。
小鼠在购进之后SPF环境恢复两天，然后每天抓拿抚摸老鼠5-10min/天，并放到视频观察盒中适应30min，连续处理5-7天，使老鼠充分适应抓拿和视频观察，表现出正常生理状态。取CD1小鼠80只，随机分为4组，第一组为溶媒(PEG400:水:甘油＝996:100:40，质量比)对照组，第二组为FHZ-1组，第三组为氯雷他定组，第四组为空白对照组。一次灌胃给药，灌胃体积为10ml/Kg。于给药后1h在颈后皮内注射氯喹100μg/site，造成瘙痒模型，视频观察给氯喹前5min至给氯喹后30min，统计给药前后的搔抓次数。结果见表2
表2对小鼠氯喹引起的瘙痒的止痒作用()
由表2结果可见，一次灌胃给药后，FHZ-1 100mg/kg可明显抑制小鼠在注射氯喹后引发的搔抓次数，与氯喹+溶媒对照组比较，差异显著(p＜0.05)，而氯雷他定不能抑制氯喹引起的瘙痒；
3、对小鼠慢性瘙痒的止痒作用行为学研究
慢性瘙痒是很多皮肤性疾病和系统性疾病的并发症状，在临床上的治愈率很低。急性瘙痒可以帮助人们防止蚊虫的叮咬、清除侵害皮肤的物质等，但慢性瘙痒会产生持续的剧痒，其引起搔抓行为也会进一步加重瘙痒反应并会引起皮肤损伤，患者常伴有睡眠困难、躁狂、注意力不集中等症状，严重影响正常的生活。慢性瘙痒性皮肤病包括：老年搔痒症、慢性湿疹、过敏性皮炎、银屑病、干皮病等。
在小鼠的动物模型中，常用的两种慢性瘙痒模型为模拟过敏性皮炎反应的NC/Nga自发瘙痒小鼠和模拟干皮病的AEW模型。在普通级环境下饲养的NC/Nga小鼠会产生自发的搔抓反应，并产生类似于过敏性皮炎症状的皮肤损伤和血清学变化。该小鼠后被广泛的用于慢性瘙痒的实验研究之中。AEW模型为物理诱 导的干皮病模拟模型，其处理过程如下：用1:1的乙醚丙酮混合溶液擦拭皮肤15s，然后用水擦拭30s，每天处理两次，连续处理5-7天将会出现明显的搔抓行为。
实验案例6：
一次给药对小鼠干皮病瘙痒的抑制作用研究
小鼠在购进之后SPF环境恢复两天，然后每天抓拿抚摸老鼠5-10min/天，并放到视频观察盒中适应30min，连续处理5-7天，使老鼠充分适应抓拿和视频观察，表现出正常生理状态。取CD1小鼠40只，随机分为4组，第一组为AEW+溶媒(PEG400:水:甘油＝996:100:40，质量比)对照组，第二组为AEW+FHZ-1组，第三组为AEW+氯雷他定组，第四组为生理盐水+空白对照组。其中，前三组先用棉球蘸取乙醚：丙酮＝1：1的混合液擦拭颈后15s，然后用蘸有水的棉球擦拭30s，每天两次，连续处理5天；第四组用棉球蘸水连续擦拭45s，每天两次，同样连续处理5天。在第六天时灌胃给药，灌胃体积为10ml/Kg。拍摄给药前1h及给药后2h的视频，观察视频统计给药前后的搔抓次数。
五次给药对小鼠干皮病瘙痒的抑制作用研究
小鼠在购进之后SPF环境恢复两天，然后每天抓拿抚摸老鼠5-10min/天，并放到视频观察盒中适应30min，连续处理5-7天，使老鼠充分适应抓拿和视频观察，表现出正常生理状态。取CD1小鼠40只，随机分为4组，第一组为AEW+溶媒对照组，第二组为AEW+FHZ-1组，第三组为AEW+氯雷他定组，第四组为W+空白对照组。其中，前三组先用棉球蘸取乙醚：丙酮＝1：1的混合液擦拭颈后15s，然后用蘸有水的棉球擦拭30s，每天两次，连续处理5天；第四组用棉球蘸水连续擦拭45s，每天两次，同样连续处理5天。在这5天处理过程中每天灌胃给药一次，灌胃体积为10ml/Kg。于第六天拍摄小鼠视频2h，观察视频统计2h内的搔抓次数。结果见表3
表3对小鼠的慢性瘙痒的止痒作用()
由表3结果可见，连续5每天1次灌胃给药后，FHZ-1 100mg/kg可明显抑制小鼠AEW造成干皮病引发的搔抓次数，与AEW+溶媒对照组比较，差异显著(p＜0.05)，而氯雷他定不能抑制AEW引起的瘙痒。
剂型的研究
片剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；微晶纤维素1-200g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g； 25％淀粉浆10-2000ml；硬酸镁1-20g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1
胶囊剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；微晶纤维素1-200g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；12目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，填入空胶囊；得1000粒胶囊；每粒胶囊含1-200mg化合物FHZ-1
颗粒剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；淀粉1-200g；泊洛沙姆1-50g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-50g；25％淀粉浆10-2000ml；糖粉10-50g；硬酸镁1-20g，14目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，分装成袋；1000袋；每袋含1-200mg化合物FHZ-1。
缓释片剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；硬酸镁1-20g g，滑石粉1-200g；14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1。
微丸剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；滚动制丸，60℃干燥，制成微丸，填入空胶囊；1000粒；每粒含1-200mg化合物FHZ-1。
缓释胶囊剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；微晶纤维素1-500g；泊洛沙姆1-200g；95％乙醇1-500ml；羟丙基纤维素1-100g；25％淀粉浆10-2000ml；微粉硅胶1-100g；硬酸镁1-20g，14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1。
冻干粉针剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；泊洛沙姆0.5-10g；加入1.0-10.0g谷氨酸，加入1-30.0g甘露醇，加入注射用水，加热溶解，稀释至50-5000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含化合物FHZ-1 1-200mg。上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
注射剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；泊洛沙姆1-20g；加入1-20g谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至100-5000ml，过滤、滤液超滤，灌装、灭菌。制成1000只，每只含化合物FHZ-1 1-200mg。
O/W乳剂型基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；先将白凡士林240g，十八醇160g，单硬脂酸甘油酯40g，80℃水浴加热熔融，成油相；十二烷基硫酸钠20g，甘油140g，4％羟苯乙酯4g，80℃加热溶于500ml蒸馏水中，成水相；慢慢将水相加入油相中，边加边搅拌，冷凝成乳状基质，加入FHZ-1100g，灌装、灭菌。制成软膏剂1000支，每支含FHZ-1 1-200mg。
W/O乳剂型基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；先将白凡士林10-500g，石蜡50-1000g，液体石蜡500-8000g，单硬脂酸甘油酯100-2000g，，司盘805-100g，80℃水浴加热熔融，成油相；乳化剂OP5-100g，4％羟苯乙酯1-20g，80℃加热溶于100-2000ml蒸馏水中，成水相；慢慢将油相加入水相中，边加边搅拌，冷凝成乳状基质，加入FHZ-1 1-200g，灌装、灭菌。制成软膏剂1000支，每支含化合物FHZ-1 1-200mg。
油脂性基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g，加入50-5000g液体石蜡中搅拌成糊状，加入凡士林100-8000g，研磨至均匀。灌装、灭菌。制成软膏剂1000支，每支含化合物FHZ-1 1-200mg。
水性基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 1-200g；CMC-Na30-300g加入乙醇100-8000ml，研磨使湿润，再加甘油500-8000ml，继续研磨至均匀(无块状)，继续加入苯甲酸钠水溶液50-300ml(含5-30g苯甲酸钠)边加边研磨，混匀，溶胀得水溶性基质；加入FHZ-1 100g，混匀，灌装，灭菌。制成软膏剂1000支，每支含化合物FHZ-1 1-200mg。
附图说明：
图1.瑞香素衍生物抑制TRPV3通道的作用。
图2.瑞香素衍生物FHZ-3和FHX-7抑制TRPV3通道的量效关系。
图3.瑞香素衍生物1、3、5和7对其它TRPV1、TRPV4和TRPA1通道的选择性。
图4.瑞香素衍生物FHZ-1抑制2-APB诱导激活TRPV3通道的量-效关系曲线。
具体实施方式
实施例1
片剂的制备
化合物FHZ-1 5g；微晶纤维素70g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素15g；25％淀粉浆120ml；硬酸镁5g，制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；每片含1-200mg化合物FHZ-1；
实施例2
胶囊剂的制备
化合物FHZ-1 5g；微晶纤维素80g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素25g；25％淀粉浆120ml；12目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，填入空胶囊；得1000粒胶囊；
实施例3
颗粒剂的制备
化合物FHZ-1 5g；淀粉120g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素15g；25％淀粉浆120ml；糖粉20g；硬酸镁5g，14目筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，分装成袋；1000袋；
实施例4
缓释片剂的制备
化合物FHZ-1 2g；微晶纤维素70g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素150g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；硬酸镁5g，滑石粉20g；14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；
实施例5
微丸剂的制备
化合物FHZ-1 2g；微晶纤维素180g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素20g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；滚动制丸，60℃干燥，制成微丸，填入空胶囊；1000粒；
实施例6
缓释胶囊剂的制备
化合物FHZ-1 2g；微晶纤维素80g；泊洛沙姆10g；95％乙醇50ml；羟丙基纤维素150g；25％淀粉浆100ml；微粉硅胶20g；硬酸镁5g，14目制粒，60℃干燥，12目筛整粒，压成片剂；1000片；
实施例7
冻干粉针剂的制备
化合物FHZ-1 1g；泊洛沙姆2g；加入5.0g谷氨酸，加入10.0g甘露醇，加入注射用水，加热溶解，稀释至2000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖。制成1000只，每只含化合物FHZ-11-200mg。上述冷冻干燥分为四个阶段：(1)预冻3.6小时，温度在-33℃；(2)减压干燥14小时，温度在-36℃；(3)升温干燥4小时，温度在-13℃；(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃。
实施例8
注射剂的制备
化合物FHZ-1 1g；泊洛沙姆2g；加入5.0g谷氨酸，加入注射用水，加热溶解，稀释至2000ml，过滤、滤液超滤，灌装、灭菌。制成1000只；
实施例9
O/W乳剂型基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 5g；先将白凡士林240g，十八醇160g，单硬脂酸甘油酯40g，80℃水浴加热熔融，成油相；十二烷基硫酸钠20g，甘油140g，4％羟苯乙酯4g，80℃加热溶于500ml蒸馏水中，成水相；慢慢将水相加入油相中，边加边搅拌，冷凝成乳状基质，加入FHZ-1 100g，灌装、灭菌。制成软膏剂1000支；
实施例10
W/O乳剂型基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 5g；先将白凡士林100g，石蜡200g，液体石蜡1000g，单硬脂酸甘油酯200g，，司盘8010g，80℃水浴加热熔融，成油相；乳化剂OP10g，4％羟苯乙酯4g，80℃加热溶于500ml蒸馏水中，成水相；慢慢将油相加入水相中，边加边搅拌，冷凝成乳状基质，加入FHZ-1 100g，灌装、灭菌。制成软膏剂1000支；
实施例11
油脂性基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 5g，加入500g液体石蜡中搅拌成糊状，加入凡士林2000g，研磨至均匀。灌装、灭菌。制成软膏剂1000支；
实施例12
水性基质软膏剂的制备
化合物FHZ-1 5g；CMC-Na120g加入乙醇2000ml，研磨使湿润，再加甘油3000ml，继续研磨至均匀(无块状)，继续加入苯甲酸钠水溶液168ml(含10g苯甲酸钠)边加边研磨，混匀，溶胀得水溶性基质；加入FHZ-1 100g，混匀，灌装，灭菌。制成软膏剂1000支。
实施例13 FHZ-1、FHZ-3、FHZ-5、FHZ-7的红外、氢谱、碳谱、核磁
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.05(d,1H),6.98–6.84(m,1H),6.68(s,1H),5.47(s,1H),4.91(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ159.28(s),151.03(s),144.53(s),140.82(s),140.50(s),133.39(s),123.64(s),120.90(s),115.69(s),113.59(s),112.18(d,J＝5.8Hz),106.43(s),
[M-2H]+244.01
IR(KBr)3292,1715,1617,1398,1274,1167cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),5.40(s,1H),4.90(s,1H),2.42(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.50(s),149.13(s),147.75(s),142.67(s),135.01(s),116.39(s),111.99(s),111.50(s),96.18(s),19.95(s).
[M-2H]+267.95
IR(KBr)3386,1712,1613,1592,1261,1123cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),4.86(s,1H),4.78(s,1H),2.42(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ154.83(s),149.24(s),143.37(s),135.26(s),131.03(s),116.19(s),111.60(s),109.93(s),20.00(s).
[M-2H]+208.03
IR(KBr)3189,1681,1622,1390,1301,1056cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ(7.48-7.54)(5H),7.21(d,1H),6.59(d,1H),6.51–6.49(m,1H),4.87(s,1H),4.83(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ160.64(s),151.35(s),147.23(s),140.56(s),138.96(s),136.84(s),127.83(d,J＝3.4Hz),127.12(s),119.79(s),113.73(s),113.52(s),113.29(s).
[M-2H]+252.04
IR(KBr)3230,1639,1610,1350,1296,1156cm-1
实施例14
所合成的其他化合物的红外、氢谱、碳谱、核磁
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.37(s,1H),5.03(s,1H),4.84(s,1H),3.66(s,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ177.65(s),161.38(s),150.32(s),143.10(s),142.18(s),136.67(s),117.32(s),112.48(s),110.90(s),107.79(s),41.19(s).
[M-H]+235.14
IR(KBr)3272,1716,1619,1592,1364,1169,1110cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),5.22(s,1H),2.42(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.03(s),156.00(s),155.25(s),149.27(s),132.21(s),124.95(s),112.90(s),110.25(s),104.38(s),20.00(s).
[M-H]+193.26
IR(KBr)3341,1730,1618,1462,1288,1185,1140cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),7.68(s,1H),7.55(s,1H),7.35(d,2H),2.37(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),161.83(s),152.43(s),132.91(s),128.55(s),128.13(s),125.62(s),125.32(s),120.12(s),117.43(s),28.61(s).
[M+H]+1189.05
IR(KBr)3220,1708,1614,1562,1390,1140cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.66(s,1H),7.55(s,2H),7.49(d,3H),6.76(s,1H),6.62(s,1H),6.51(s,1H),5.26(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.10(s),158.93(s),153.07(s),152.43(s),138.96(s),129.59(s),127.83(d,J＝3.4Hz),127.12(s),115.25(s),113.82(s),112.48(s),104.21(s).
[M-H]+237.06
IR(KBr)3210,1680,1618,1362,1200,1165,1110cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),5.21(s,1H),2.42(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ160.53(s),159.52(s),154.00(s),149.91(s),126.69(s),113.45(s),111.16(s),103.99(s),94.09(s),19.95(s).
[M-H]+252.96
IR(KBr)3341,1730,1618,1462,1288,1185,1140cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.72(s,1H),7.03(d,2H),6.23(s,1H),3.84(s,3H),2.40(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ162.60(s),162.19(s),154.41(s),153.46(s),124.92(s),115.19(s),110.63(d,J＝5.4Hz),102.15(s),56.08(s),21.59(s).
[M+Na]+213.06
IR(KBr)3100,1760,1658,1362,1188,1140cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.50(s,1H),5.02(s,1H),4.87(s,1H),4.41(s,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.38(s),153.18(s),151.97(s),145.49(s),136.20(s),117.13(s),113.06(s),110.50(s),109.62(s),48.98(s).
[M-2H]+224.00
IR(KBr)3311,1748,1628,1432,1210,1155,1120cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.37(s,1H),5.24(s,1H),3.71(s,2H),3.67(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ173.01(s),162.08(s),160.74(s),153.18(s),150.95(s),126.61(s),113.96(s),110.26(s),108.62(s),105.74(s),51.87(s),35.14(s).
[M-H]+233.02
IR(KBr)3241,1760,1635,1482,1308,1125,1100cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.23(s,1H),5.27(s,1H),2.40(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ162.19(s),160.04(s),154.55(s),153.46(s),126.07(s),113.53(s),112.00(s),110.66(s),104.70(s),21.59(s).
[M-H]+176.16
IR(KBr)3211,1710,1628,1772,1238,1155,1118cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(s,1H),6.69(d,2H),6.37(s,1H),5.27(s,1H),3.65(s,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ177.65(s),162.08(s),160.74(s),153.18(s),146.18(s),126.61(s),113.96(s),110.26(s),108.24(s),105.74(s),41.19(s).
[M-H]+219.08
IR(KBr)3241,1748,1628,1492,1238,1203,1151cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),4.85(s,1H),4.76(s,1H),2.52(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ158.49(s),149.38(s),143.50(s),141.79(s),135.29(s),122.37(s),116.08(s),111.52(s),109.79(s),19.87(s).
[M-2H]+224.00
IR(KBr)3141,1750,1625,1492,1258,1130,1180cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,1H),6.68(s,1H),6.27(s,1H),5.46(s,1H),4.93(s,1H),2.43(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.53(s),151.77(s),148.64(s),142.84(s),135.64(s),116.49(s),112.23(s),111.89(d,J＝15.8Hz),21.59(s).
[M-2H]+190.06
IR(KBr)3320,1756,1623,1442,1243,1145,1125cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),7.40(s,1H),7.36(s,1H),7.23(s,1H),3.83(s,3H),2.37(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),162.27(s),145.64(s),143.08(s),126.80(s),125.50(s),125.03(s),121.98(d,J＝15.9Hz),116.90(s),56.83(s),28.61(s).
[M+H]+219.26
IR(KBr)3142,1740,1612,1440,1258,1135,1122cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.09(s,1H),6.67(s,1H),6.36(s,1H),4.82(d,2H),3.71(s,2H),3.66(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ173.01(s),161.38(s),150.32(s),148.07(s),142.18(s),136.67(s),117.32(s),112.48(s),110.90(s),108.46(s),51.87(s),35.14(s).
[M-2H]+248.05
IR(KBr)3181,1710,1602,1492,1278,1135,1182cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.45(s,1H),8.07(s,1H),7.67(s,1H),7.25(s,1H),2.37(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ192.71(s),161.83(s),154.06(s),136.40(s),130.26(s),128.85(s),126.25(s),120.42(s),119.78(s),117.47(s),28.61(s).
[M+H]+266.96
IR(KBr)3250,1748,1623,1482,1238,1145,1122cm-1
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.10(s,2H),6.68(s,2H),6.23(s,2H),5.46(s,2H),4.94(s,2H),2.39(s,2H),1.41(s,2H),0.94(s,3H).
13C NMR(100MHz,DMSO)δ161.38(s),151.34(s),149.15(s),142.15(s),136.71(s),116.20(s),112.91(s),112.56(s),112.26(s),37.14(s),21.80(s),13.55(s).
[M-2H]+218.06
IR(KBr)3311,1750,1622,1482,1238,1115,1090cm-1
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Claims (6)

1.香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的药物组合物的应用，其特征在于：
苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位都被羟基取代；
2.根据权利要求1的香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的药物组合物的应用，其特征在于：
每制剂单位含有1-200mg的活性化合物；
药物制剂类型：片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸剂、冻干粉针剂、注射剂、O/W乳剂型基质软膏剂、W/O乳剂型基质软膏剂、油脂性基质软膏剂、水性基质软膏剂、霜剂、贴剂、喷雾剂、洗剂、乳剂药物制剂。
3.根据权利要求1的香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的药物组合物的应用，其特征在于：
每制剂单位含有1-200mg的活性化合物；
药物制剂类型：缓释胶囊剂。
4.香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的化妆品制剂的应用，其特征在于：
苯并吡喃酮环4位被三氟甲基取代，7、8位都被羟基取代；
每制剂单位含有1-200mg的活性化合物；
化妆品制剂类型：洗发露、沐浴液。
5.根据权利要求1的香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的药物组合物的应用，其特征在于：用于制备治疗皮肤瘙痒的药物组合物。
6.根据权利要求1的香豆素类化合物在制备治疗瘙痒的药物组合物的应用，其特征在于：用于制备治疗组胺依赖的瘙痒、氯喹引起的瘙痒及慢性瘙痒的药物组合物。
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