CN105496995B - bumetanide在抑制肿瘤细胞增殖中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了bumetanide在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。本发明提供了布美他尼在制备抑制肿瘤细胞的药物中的应用。所述肿瘤细胞可为肺腺癌细胞、结肠癌细胞、白血病细胞、食管癌细胞、宫颈癌细胞或乳腺癌细胞。所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。本发明对于肿瘤的治疗具有重大价值。
Description
技术领域
本发明涉及bumetanide在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。
背景技术
癌症(Cancer)，亦称恶性肿瘤(Malignant neoplasm)，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了生长失控外，还会局部侵入周遭正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。常见的癌症有肺癌、结肠癌、白血病、食管癌、宫颈癌、乳腺癌等。肺癌：咳嗽是肺癌的早期症状，其特点是以阵发性刺激性呛咳为主，如经抗炎治疗2周后无改善，应警惕肺癌的可能，或在原有慢性咳嗽基础上出现咳嗽性质改变，甚至伴有“气管鸣”、“气短”应予注意，肺癌的另一警号是间断性反复少量血痰，或痰中带血丝。大肠癌：凡30岁以上的人出现腹部不适、隐痛、腹胀、大便习惯发生改变，出现便秘、腹泻或者交替出现，有下坠感，且大便带血，继而出现贫血，疲乏无力，腹部摸到肿块，应考虑大肠癌的可能(大肠癌包括结肠癌和直肠癌)。白血病(血癌)：发热、出血、贫血是(急性)白血病的三大早期症状，发热为37.5℃－38.5℃常提示有感染，如皮肤、呼吸道、肠道、口腔、泌尿系统等部位炎症，出血可发生在任何部位，但以皮下、口腔、鼻、牙龈等处常见，出血程度可由瘀点、瘀斑以至口、鼻腔大出血，贫血是因为红系造血障碍和出血所致，且演进迅速，病人面色苍白。食管癌：吞咽食物有迟缓、滞留或轻微梗噎感，可自行消退，但数日后又可出现，反复发作，并逐渐加重，或在吞口水或吃东西时，总感觉胸骨有定位疼痛。平时感觉食管内有异物且与进食无关，持续存在，喝水及咽食物均不能使之消失。宫颈癌：性交、排便、活动后阴道点滴状出血、血液混在阴道分泌物中，开始出现量少，常自行停止，不规则阴道出血，尤其是停经多年又突然阴道出血，白带增多，呈血性或洗肉水样，下腹部及腰部疼痛。乳腺癌：乳房发生异常性变化，如摸到拉厚或包块、胀感、出现微凹(“酒窝征”)皮肤变粗发红，乳头变形、回缩或有鳞屑等，疼痛或压痛，非哺乳期妇女突然出现单侧乳头流水(乳样、血样、水样液体)。
布美他尼(bumetanide)是一种利尿剂，主要抑制肾小管髓袢升支厚壁段对NaCl的主动重吸收，对近端小管重吸收Na+也有抑制作用，但对远端肾小管无作用。能抑制前列腺素分解酶的活性，使前列腺素E2含量升高，从而具有扩张血管作用。扩张肾血管，降低肾血管阻力，使肾血流量尤其是肾皮质深部血流量增加，在布美他尼的利尿作用中具有重要意义，也是其用于预防急性肾功能衰竭的理论基础。另外，布美他尼能扩张肺部容量静脉，降低肺毛细血管通透性，加上其利尿作用，使回心血量减少，左心室舒张末期压力降低，有助于急性左心衰竭的治疗。由于布美他尼可降低肺毛细血管通透性，为其治疗成人呼吸窘迫综合征提供了理论依据。
发明内容
本发明的目的是提供bumetanide在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。
本发明提供了布美他尼在制备抑制肿瘤细胞的药物中的应用。所述肿瘤细胞可为肺腺癌细胞、结肠癌细胞、白血病细胞、食管癌细胞、宫颈癌细胞或乳腺癌细胞。所述肿瘤细胞可为人肺腺癌细胞、人结肠癌细胞、人白血病细胞、人食管癌细胞、人宫颈癌细胞或人乳腺癌细胞。所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。
本发明还要要求保护布美他尼在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。所述肿瘤细胞可为肺腺癌细胞、结肠癌细胞、白血病细胞、食管癌细胞、宫颈癌细胞或乳腺癌细胞。所述肿瘤细胞可为人肺腺癌细胞、人结肠癌细胞、人白血病细胞、人食管癌细胞、人宫颈癌细胞或人乳腺癌细胞。所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。
本发明还要求保护布美他尼在制备治疗癌症的药物中的应用。所述癌症可为肺腺癌、结肠癌、白血病、食管癌、宫颈癌或乳腺癌。所述癌症是由肿瘤细胞引起的；所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。
本发明还保护一种药物，其活性成分为布美他尼；所述药物的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)：(a)抑制肿瘤细胞；(b)抑制肿瘤细胞增殖；(c)治疗癌症。
所述(a)和/或所述(b)中：所述肿瘤细胞可为肺腺癌细胞、结肠癌细胞、白血病细胞、食管癌细胞、宫颈癌细胞或乳腺癌细胞。所述(a)和/或所述(b)中：所述肿瘤细胞可为人肺腺癌细胞、人结肠癌细胞、人白血病细胞、人食管癌细胞、人宫颈癌细胞或人乳腺癌细胞。所述(a)和/或所述(b)中：所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。
所述(c)中：所述癌症可为肺腺癌、结肠癌、白血病、食管癌、宫颈癌或乳腺癌。所述(c)中：所述癌症是由肿瘤细胞引起的；所述肿瘤细胞具体可为A549细胞、HCT116细胞、K562细胞、Eca109细胞、Hela细胞、Jurkat细胞或MCF7细胞。
本发明对于肿瘤的治疗具有重大价值。
附图说明
图1为实施例1的结果。
图2为实施例2的结果。
图3为实施例3的结果。
图4为实施例4的结果。
图5为实施例5的结果。
图6为实施例6的结果。
图7为实施例7的结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
布美他尼(bumetanide)：sigma公司，货号B3023，产品形态为白色粉末。CCK-8试剂盒：日本株式会社DOJINDO，产品目录号为CK04。布美他尼母液：取布美他尼，用DMSO配制成5μg/μl的布美他尼母液。完全培养基：含有10％胎牛血清的DMEM培养基。Multi-Mode detection platform：Molecular Devices。
A549细胞(人肺腺癌细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu150。HCT116细胞(人结肠癌细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu99。K562细胞(人慢性髓原白血病细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu191。Eca109细胞(人食管癌细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu69。Hela细胞(人宫颈癌细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu187。Jurkat细胞(人T淋巴细胞白血病细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu123。MCF7细胞(人乳腺癌细胞)：购自中国科学院上海生命科学研究所细胞库，产品目录号TCHu74。
抑制率(％)＝100％-[(As-Ab)/(Ac-Ab)]*100％，其中As为实验孔，Ac为对照孔，Ab为空白孔。
实施例1、布美他尼对A549细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对A549细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的A549细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，A549细胞的浓度为30个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔100微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔100微升；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后，取96孔板，吸出孔内的培养液：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为0.1、1、10或100μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，吸出孔中的培养液，每孔加入10微升CCK-8和90微升DMEM培养基，40分钟后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图1。布美他尼对A549细胞的IC50值见表1。
实施例2、布美他尼对HCT116细胞细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对HCT116细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的HCT116细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，HCT116细胞的浓度为40个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔100微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔100微升；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后，取96孔板，吸出孔内的培养液：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64或128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，吸出孔中的培养液，每孔加入10微升CCK-8和90微升DMEM培养基，40分钟后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图2。布美他尼对HCT116细胞细胞的IC50值见表1。
实施例3、布美他尼对K562细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对K562细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的K562细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，K562细胞的浓度为120个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔50微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔50微升。
2、完成步骤1后，取96孔板：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64、128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，每孔加入10微升CCK-8，1小时后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图3。布美他尼对K562细胞的IC50值见表1。
实施例4、布美他尼对Eca109细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对Eca109细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的Eca109细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，Eca109细胞的浓度为30个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔100微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔100微升；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后，取96孔板，吸出孔内的培养液：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64或128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，吸出孔中的培养液，每孔加入10微升CCK-8和90微升DMEM培养基，40分钟后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图4。布美他尼对Eca109细胞的IC50值见表1。
实施例5、布美他尼对Hela细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对Hela细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的Hela细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，Hela细胞的浓度为30个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔100微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔100微升；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后，取96孔板，吸出孔内的培养液：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64或128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，吸出孔中的培养液，每孔加入10微升CCK-8和90微升DMEM培养基，40分钟后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图5。布美他尼对Hela细胞的IC50值见表1。
实施例6、布美他尼对Jurkat细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对Jurkat细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的Jurkat细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，Jurkat细胞的浓度为120个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔50微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔50微升。
2、完成步骤1后，取96孔板：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64、128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为50微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，每孔加入10微升CCK-8，2小时后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图6。布美他尼对Jurkat细胞的IC50值见表1。
实施例7、布美他尼对MCF7细胞的抑制作用
采用CCK-8试剂盒检测布美他尼对MCF7细胞的抑制作用，具体步骤如下：
1、取96孔板：将处于对数生长期的MCF7细胞制备成细胞悬液(细胞悬液中，MCF7细胞的浓度为30个细胞/微升)接种至96孔板的试验孔和对照孔，每孔100微升；将完全培养基加至96孔板的空白孔，每孔100微升；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
2、完成步骤1后，取96孔板，吸出孔内的培养液：试验孔各孔分别加入不同体积的布美他尼母液和完全培养基(使得试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，布美他尼在培养体系中的终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64或128μg/ml，每个浓度设置3个复孔)；对照孔各孔加入完全培养基(使得对照孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个对照孔)；空白孔各孔加入完全培养基(使得空白孔各孔内的培养体系的体积与试验孔各孔内培养体系的体积相等，均为100微升，设置3个空白孔)；然后将96孔板置于37℃、5％CO2培养箱培养72h。
3、完成步骤2后，取96孔板，吸出孔中的培养液，每孔加入10微升CCK-8和90微升DMEM培养基，40分钟后于波长450nm下测定吸光度。
用GraphPad Prism5软件作图，抑制率-log药物浓度曲线见图7。布美他尼对MCF7细胞的IC50值见表1。
表1 布美他尼对各个肿瘤细胞的IC50值
| A549 | HCT116 | K562 | Eca109 | Hela | Jurkat | MCF7 | |
| IC50(μg/ml) | 18.40 | 37.43 | 42.68 | 51.75 | 65.79 | 76.06 | 80.06 |
结果表明，布美他尼对以上各个肿瘤细胞均有抑制作用，对A549细胞、HCT116细胞和K562细胞的抑制效果最明显。
Claims (3)
1.布美他尼在制备抑制肿瘤细胞的药物中的应用；所述肿瘤细胞为肺腺癌细胞。
2.布美他尼在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用；所述肿瘤细胞为肺腺癌细胞。
3.布美他尼在制备治疗癌症的药物中的应用；所述癌症为肺腺癌。
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Legal Events
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| TR01 | Transfer of patent right |