CN105496841B - 一种肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及保湿作用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法，该方法包括：a)沸水提取；b)浓缩，然后脱蛋白，然后碱中和；c)透析，浓缩，离心去沉淀，上清液用有机溶剂沉淀；d)收集沉淀，干燥后得到干燥的肉苁蓉鳞茎水提多糖；e)步骤d)所得肉苁蓉鳞茎水提多糖在强酸、70‑200℃温度条件下降解；f)去除酸性成分，离心后取上清液，得到包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。本发明还涉及本发明方法制备得到的肉苁蓉鳞茎提取物及其纯化富集寡糖后的产物在具有保湿作用的化妆品中的应用。

Description

一种肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及保湿作用

技术领域

本发明涉及天然药物化学领域和化妆品领域，更具体地说，涉及一种从中草药肉苁蓉的鳞茎提取得到的主要成分之一多糖经降解后获得的寡糖混合物。此外，本发明还涉及所述方法提取得到的肉苁蓉鳞茎提取物的保湿作用。具体涉及该肉苁蓉鳞茎提取物在制备具有保湿作用的化妆品中的应用。

背景技术

皮肤由表皮、真皮和皮下脂肪组织所构成，每层都含有水分。皮肤含水量的多少是皮肤稚嫩、丰满、亮泽与柔软与否的关键。婴幼儿皮肤含水量量高就显得细嫩光泽，老年人皮肤因为含水量较低，所以显得干燥、萎瘪、脱屑，甚至于发生皱纹。

保湿在化妆品当中是十分受消费者关注的一类宣称，同时也是保证皮肤健康、延缓衰老的重要条件。几乎所有类别的化妆品都会添加具有保湿功能的原料，而开发研究性能优异的保湿剂也是人们孜孜以求的目标。

一方面随着年龄增长，皮肤保湿机构受到损伤，皮肤组织细胞和细胞间的水分含量减少，当角质层水分下降到10％以下时，皮肤就会显得干燥、失去弹性、起皱、加速皮肤老化。另一方面皮肤遭受炎热、寒冷、风吹、清洁剂、紫外线辐射等侵害，表层会变得更加干燥。因此如何保持皮肤的水分，减少水分散失十分重要。目前常用的肌肤保湿手段主要有两种形式：一种通过甘油一类的吸水保水物质在皮肤表面防止水分的流失；另一种则是通过活性添加剂渗透进表皮作用于皮肤细胞，增强保湿相关的基因表达，提高皮肤自身的保水能力。

表皮层有很多不同的蛋白能帮助皮肤自身保湿。角质包膜(cornified envelope)是角质层内细胞膜广泛交联后形成的不溶性的坚韧外膜，它是表皮防御屏障功能的基础，保障皮肤不受外界刺激物损伤，同时锁住表皮水分减少流失。外皮蛋白(involucrin)是角质细胞再分化过程中形成角质包膜的先驱蛋白，故而它的表达对于皮肤锁水十分重要。水通道蛋白(AQP-3) 与表皮层含水量密切相关，它能够为表皮层细胞间水、甘油的渗透提供通道；透明质酸是表皮层细胞外基质的主要成分，具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，而它的受体(CD44)在细胞内的含量与其密切相关，研究证明，含水量高的皮肤中CD44的表达量也高于平均水平。通过抗原抗体的特异性结合，可以用荧光基团标记出表皮细胞表达的AQP-3和CD44，荧光强度即对应了该蛋白的表达量，从而可以一定程度上反映出皮肤自身锁水的能力。

我国中医药资源丰富，为我们寻找优越的保湿添加剂提供了基础。肉苁蓉(HerbaCistanche)Cistanche deserticolaY.C.Ma(c.dor)为列当科 (Orobanchaeceae)肉苁蓉属(Cistanche)多年生高等寄生植物，其味甘咸微辛酸、微温，在《神农百草经》中列为上品，具有补肾益精、润肠通便和延缓衰老等功效，被誉为“沙漠人参”。别名大芸、寸芸、苁蓉、纵蓉、肉松蓉、精笋、地精、查干告亚(蒙语)。长期的药学实践和大量近代药理学研究表明，它具有提高机体的免疫功能，促进DNA合成，增强体力，提高智能，还有抗衰老等方面的作用。肉苁蓉多糖作为肉苁蓉药材的主要功效成分之一，也有许多报道称其有抗衰老、抗氧化等方面的作用。

例如，中国专利申请CN201110039116.2公开了一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用。具体说，该申请公开了属于药用植物应用研究技术领域的一种肉苁蓉提取物提取方法及其应用。该提取物来源于列当科肉苁蓉属的荒漠肉苁蓉或管花肉苁蓉。将肉苁蓉的干燥肉质茎磨成粉末，通过回流提取、过滤、药渣再回流提取、冰冻干燥仪干燥得到棕色粉末，即为肉苁蓉提取物。本发明的肉苁蓉提取物可激活免疫系统，增加免疫器官脾脏的重量，治疗肠癌，减少肠道增生的发生，保护正常的肠道表皮细胞，减少肠道幽门杆菌感染。

例如，中国专利申请CN201210064589.2公开了一种含管花肉苁蓉提取物的美白抗衰老化妆品及其制备方法。具体说，该申请提供了一种管花肉苁蓉提取物的制备方法及美白抗衰老化妆品，所述管花肉苁蓉提取物的制备方法包括粉碎、粗提取、将粗提取物进行离心收集、并经过静置后洗脱、烘干，得管花肉苁蓉提取物。该制备方法简单并无污染，所述提取物的松果菊苷的含量≥25％，毛蕊花糖苷的含量≥55％，总苷含量≥80％；将此方法制得的管花肉苁蓉提取物经过抗氧化性活性等的测试后，证明管花肉苁蓉提取物具有抗氧化，美白、抗衰老的作用。将其添加到化妆品制得美白抗衰老化妆品，并对化妆品进行细胞毒性及安全性等测试，验证了化妆品的安全无刺激、且具有很好的美白效果。

但是，现有技术均未公开由肉苁蓉提取得到的多糖降解形成寡糖混合物的方法。也就是说，迄今为止还没有对肉苁蓉鳞茎提取得到的多糖进行降解，形成寡糖混合物的研究报道，更没有关于这种寡糖混合物具有保湿功效的报道。本发明首次研究得出此寡糖混合物具有保湿功效，其保湿能力强于原多糖。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有保湿作用的肉苁蓉鳞茎提取物。本发明的肉苁蓉鳞茎提取物按提供的方法制成，其成分主要为寡糖混合物，包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物可直接用于皮肤保湿，帮助皮肤在干燥环境下抵御干燥损伤。

因此，本发明的一个目的是提供一种包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物的制备方法及其可能的分纯方法，它能通过以下方法制备得到的：

a)沸水提取；

b)浓缩，然后脱蛋白，然后碱中和；

c)透析，浓缩，离心去沉淀，上清液用有机溶剂沉淀；

d)收集沉淀，干燥后得到干燥的肉苁蓉鳞茎水提多糖；

e)步骤d)所得肉苁蓉鳞茎水提多糖在强酸、70-200℃温度条件下降解；

f)去除酸性成分，离心后取上清液，得到包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。

在本发明的一个实施方式中，所述方法还包括在步骤a)之前进行脱脂的步骤。

在本发明的一个实施方式中，所述方法还包括在步骤f)之后采用活性炭硅藻土层析柱进行分离纯化的步骤。

在本发明的一个实施方式中，所述步骤e)中使用的强酸选自：三氟乙酸、盐酸、高锰酸、硫酸、硝酸、高氯酸、硒酸、氢溴酸、氢碘酸、氯酸。

在本发明的一个实施方式中，所述步骤a)包括取肉苁蓉鳞茎中草药，原药材用沸水提取，硫酸-苯酚法检测提取液的糖含量，直至糖反应不明显。在本发明的一个实施方式中，所述步骤b)包括合并提取液，浓缩，用流动水透析，透析内液浓缩后加入30％(w/v)的三氟乙酸水溶液脱蛋白，然后碱中和至pH 值7.0-8.0。在本发明的一个实施方式中，所述步骤c)包括用流动水透析，透析内液浓缩后，加入2-5倍体积的95％有机溶剂进行沉淀。在一个优选的实施方式中，所述步骤c)中使用的有机溶剂是乙醇。在本发明的一个实施方式中，所述步骤d)包括收集沉淀，用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后得到干燥的肉苁蓉鳞茎水提多糖。在本发明的一个实施方式中，所述步骤e)包括在0.1～4M的强酸溶液中，70～200℃的温度下加热降解反应1～4小时，获得包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。在一个优选的实施方式中，所述步骤e)中的强酸为三氟乙酸或盐酸。在本发明的一个实施方式中，所述步骤f)包括用透析或蒸馏手段去除酸性成分，离心后取上清液，通过活性炭硅藻土混合柱(w/w＝1:1)进行分离，用0-100％乙醇洗脱。装柱方法：以适量水混合椰壳活性炭(承德兴华活性炭有限责任公司)和硅藻土(国药)，成泥浆状后均匀轻缓地倒入玻璃柱中，静置沉降后用去离子水平衡至柱体积不变，便可用于样品分离。在本发明的一个实施方式中，采用苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤b)中的脱蛋白的操作采用 30％(w/v)的三氟乙酸水溶液。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤c)中使用的有机溶剂选自：乙醇，丙酮，氯仿。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤e)中使用的强酸选自：三氟乙酸、盐酸。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤f)中使用的活性炭硅藻土层析柱是通过将活性炭与硅藻土按照1：1的重量比在水中混合形成泥浆状，然后将所得泥浆状混合物均匀倒入层析柱制备得到。

在本发明一个优选的实施方式中，所述步骤f)中采用0-100％的乙醇洗脱。

在本发明的另一方面，提供了通过本发明方法制备得到的包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。

在本发明的另一方面，提供了通过本发明方法制备得到的包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物可以使用的除去多糖的提纯方法。

在本发明的另一方面，提供了按照本发明方法制备得到的肉苁蓉鳞茎提取物在具有保湿作用的化妆品中的应用。

在本发明的另一方面，提供了一种具有保湿作用的化妆品，所述化妆品包含按照本发明方法制备得到的肉苁蓉鳞茎提取物以及化妆品领域可接受的赋形剂。在本发明一个优选的实施方式中，所述化妆品还包含另一种具有保湿作用的添加剂。在一个实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。在一个优选的实施方式中，所述肉苁蓉鳞茎提取物的使用量为0.0001％-80％(w/w)。优选的浓度范围为0.001 ％-10％(w/w)。更优选的浓度范围为0.005％-5％(w/w)。最优选的是肉苁蓉鳞茎提取物在0.1％-1％(w/w)的浓度范围。

附图说明

图1是本发明肉苁蓉鳞茎提取物的提取工艺流程图。

图2、3是荧光显微镜拍摄的荧光照片，蓝色荧光代表角质细胞核。绿色荧光为目标蛋白，其光强弱即对应细胞目标蛋白数量的多少。对应的培养条件标在各自图片的上方，对照组为普通培养基处理的细胞，药物处理组则为含0.08mg/ml样品的培养基，样品种类包含肉苁蓉鳞茎提取多糖、肉苁蓉鳞茎制备寡糖以及纯化后的肉苁蓉鳞茎制备寡糖。

具体实施方式

下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。

本发明实施例中使用的仪器设备如下：

SHB-III循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸易有限公司。

85-2型恒温磁力搅拌器：上海思乐仪器有限公司。

DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱：上海一恒科技有限公司。

N-1100D-WD真空旋转蒸发仪：日本EYELA公司。

UV260可见分光光度计：日本Shimadzu。

GL-21M低温高速离心机：上海离心机研究所有限公司。

Labconco大型冷冻干燥机：美国Labconco公司。

Edwards小型冷冻干燥机：英国Edwards公司。

全波长双板多功能仪(酶标仪)：美国BMG Labtech公司Novostar

细胞培养箱：美国Thermo serial II

以下实施例1-5例举本发明涉及的肉苁蓉鳞茎提取物制备方法及可能的纯化方法，所述肉苁蓉产自甘肃或新疆。

实施例1

取肉苁蓉鳞茎2kg，乙醇浸泡脱脂，室温自然干燥，干燥后的肉苁蓉鳞茎原药材用30L沸水提取，直至水提液中糖含量值较低，低温浓缩至5L，加入6L 30％(w/v)三氯乙酸溶液，脱蛋白之后用碱中和至pH为7.0，对流动水透析三天，内液浓缩，离心去沉淀，上清液加入3倍乙醇沉淀，静置，离心保留沉淀，分别用无水乙醇，丙酮洗涤，真空干燥后得到干燥肉苁蓉鳞茎水提多糖200g，为棕褐色粉末。

水提粗多糖10g以适量水溶解，离心除去不溶物。在终浓度为0.2M三氟乙酸溶液中，以及70℃加热4小时获得混合寡糖。蒸馏除去三氟乙酸，离心后取上清液。获得深棕色水溶液，包含寡糖的肉苁蓉鳞茎提取物，固含量77mg/ml。

50g椰壳活性炭混合50g硅藻土于500ml去离子水中，搅拌均匀后缓慢倒入直径6cm高80cm的玻璃柱中，装柱后用蠕动泵压纯水平衡2天至柱体积不变，吸出上层清水，加入降解除酸后的混合寡糖溶液。以纯水洗脱，苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液，固体含量15mg/ml。

实施例2

取肉苁蓉鳞茎2kg，丙酮浸泡脱脂，通风橱内室温自然干燥，干燥后的肉苁蓉鳞茎原药材用40L沸水提取，直至水提液中糖含量值较低，低温浓缩至6L，加入7L 30％(w/v)三氯乙酸溶液，脱蛋白之后用碱中和至pH 为7.3，对流动水透析三天，内液浓缩，离心去沉淀，上清液加入2倍丙酮沉淀，静置，离心保留沉淀，分别用无水乙醇，丙酮洗涤，烘箱干燥后得到干燥肉苁蓉鳞茎水提多糖275g，为棕褐色粉末。

水提粗多糖10g以适量水溶解，离心除去不溶物。在终浓度为0.4M盐酸溶液中，以及160℃加热1小时获得混合寡糖。用孔径为100Da的透析袋透析除去盐酸，离心后取上清液。获得深棕色水溶液，包含寡糖的肉苁蓉鳞茎提取物，固含量84mg/ml。

50g椰壳活性炭混合50g硅藻土于600ml去离子水中，搅拌均匀后缓慢倒入直径6cm高80cm的玻璃柱中，装柱后用蠕动泵压纯水平衡3天至柱体积不变，吸出上层清水，加入降解除酸后的混合寡糖溶液。以5％乙醇洗脱，苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液，固体含量11.3mg/ml。

实施例3

取肉苁蓉鳞茎2kg，氯仿浸泡脱脂，通风橱内室温自然干燥，干燥后的肉苁蓉鳞茎原药材用60L沸水提取，直至水提液中糖含量值较低，低温浓缩至8L，加入8L 30％(w/v)三氯乙酸溶液，脱蛋白之后用碱中和至pH 为7.1，对流动水透析三天，内液浓缩，离心去沉淀，上清液加入3倍乙醇沉淀，静置，离心保留沉淀，分别用无水乙醇，丙酮洗涤，真空干燥后得到干燥肉苁蓉鳞茎水提多糖310g，为棕褐色粉末。

水提粗多糖10g以适量水溶解，离心除去不溶物。在终浓度为0.4M三氟乙酸溶液中，以及100℃加热4小时获得混合寡糖。蒸馏除去三氟乙酸，离心后取上清液。获得深棕色水溶液，包含寡糖的肉苁蓉鳞茎提取物，固含量50mg/ml。

60g椰壳活性炭混合60g硅藻土于450ml去离子水中，搅拌均匀后缓慢倒入直径6cm高80cm的玻璃柱中，装柱后用蠕动泵压纯水平衡2天至柱体积不变，吸出上层清水，加入降解除酸后的混合寡糖溶液。以50％乙醇洗脱，苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液，固体含量5mg/ml。

实施例4

取肉苁蓉鳞茎2kg，乙醇浸泡脱脂，室温自然干燥，干燥后的肉苁蓉鳞茎原药材用50L沸水提取，直至水提液中糖含量值较低，低温浓缩至8L，加入8L 30％(w/v)三氯乙酸溶液，脱蛋白之后用碱中和至pH为7.6，对流动水透析三天，内液浓缩，离心去沉淀，上清液加入2倍丙酮沉淀，静置，离心保留沉淀，分别用无水乙醇，丙酮洗涤，烘箱干燥后得到干燥肉苁蓉鳞茎水提多糖298g，为棕褐色粉末。

水提粗多糖10g以适量水溶解，离心。在终浓度为3M三氟乙酸溶液中，以及120℃加热1小时获得混合寡糖。蒸馏除去三氟乙酸，离心后取上清液。获得深棕色水溶液，包含寡糖的肉苁蓉鳞茎提取物，固含量32mg/ml。

40g椰壳活性炭混合40g硅藻土于700ml去离子水中，搅拌均匀后缓慢倒入直径6cm高80cm的玻璃柱中，装柱后用蠕动泵压纯水平衡3天至柱体积不变，吸出上层清水，加入降解除酸后的混合寡糖溶液。以65％乙醇洗脱，苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液，固体含量5.6mg/ml。

实施例5

取肉苁蓉鳞茎2kg，丙酮浸泡脱脂，通风橱内室温自然干燥，干燥后的肉苁蓉鳞茎原药材用70L沸水提取，直至水提液中糖含量值较低，低温浓缩至5L，加入9L 30％(w/v)三氯乙酸溶液，脱蛋白之后用碱中和至pH 为7.8，对流动水透析三天，内液浓缩，离心去沉淀，上清液加入5倍氯仿沉淀，静置，离心保留沉淀，分别用无水乙醇，丙酮洗涤，真空干燥后得到干燥肉苁蓉鳞茎水提多糖322g，为棕褐色粉末。

水提粗多糖10g以适量水溶解，离心。在终浓度为2M盐酸溶液中，以及90℃加热2小时获得混合寡糖。用孔径为100Da的透析袋透析除去盐酸，离心后取上清液。获得深棕色水溶液，包含寡糖的肉苁蓉鳞茎提取物，固含量128mg/ml。

60g椰壳活性炭混合60g硅藻土于800ml去离子水中，搅拌均匀后缓慢倒入直径6cm高80cm的玻璃柱中，装柱后用蠕动泵压纯水平衡2天至柱体积不变，吸出上层清水，加入降解除酸后的混合寡糖溶液。以95％乙醇洗脱，苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集合并洗脱液，蒸馏去乙醇后用蒸馏水溶解获得浅黄色澄清溶液，固体含量3.5mg/ml。

以下实施例6-12 中所使用的肉苁蓉鳞茎提取物均为实施例3得到的肉苁蓉鳞茎提取物(未经分纯)，其生药浓度为50mg/ml(即5％w/w)；实施例中各组分的单位均为重量百分比。

实施例6：面霜的制备

实施例7：乳液的制备

实施例8：精华液的制备

实施例9：眼霜的制备

实施例10：喷雾的制备

实施例11：沐浴露的制备

实施例12：洗面奶的制备

以上6-12实施例中所述的组合物均经过①稳定性测试，将料体分别在-20℃、4℃、室温、48℃、循环(连续变换四个温度条件)放置12周，各料体的颜色和形态都保持稳定；②皮肤安全性测试，证实对皮肤无刺激，不会引发红斑、脱屑、刺痛及灼热等不良反应，可安心使用；③使用感觉测试，请20位中国女性志愿者在面部连续使用实施例6所述的面霜8周，评估结果表明，肉苁蓉鳞茎提取物能够增强肌肤锁水能力，提高皮肤含水量，给肌肤带来水润光彩。

实施例13：肉苁蓉鳞茎提取物的保湿作用的评价

1)实验原理

就如背景中所说，皮肤自身有很强的控制水分输送、流失的能力。它所依靠的，是表皮层中各式各样的特殊分子。这其中，位于表皮细胞膜上的水通道蛋白(AQP-3)发挥着至关重要的作用。表皮层内没有血管，而AQP-3能够为表皮层与基底层细胞间水、甘油的渗透提供通道，维持表皮内水含量的平衡状态。也就是说，水通道蛋白表达得越多、在膜上的流动越快，表皮内细胞间的水分输送就越充足，表皮内的含水量就越高。因此，在角质层水分挥发速率不变的情况下，AQP-3表达的越多，皮肤就越水润。

角质包膜(cornified envelope)是角质层内细胞膜广泛交联后形成的不溶性的坚韧外膜，它是表皮防御屏障功能的基础，保障皮肤不受外界刺激物损伤，同时锁住表皮水分减少流失。外皮蛋白(involucrin)是角质细胞再分化过程中形成角质包膜的先驱蛋白，故而它的表达对于皮肤锁水十分重要。

透明质酸是表皮层细胞外基质的主要成分，具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，而它的受体 (CD44)在细胞内的含量与其密切相关，他们的结合能够促进细胞增殖和迁移。有研究证明，含水量高的肌肤中，CD44的含量也明显高于平均水平。

因此，以上三种蛋白在皮肤中的含量直接关系到皮肤自身锁水能力的强弱。通过抗原抗体的特异性结合，可以用荧光基团标记出表皮细胞表达的外皮蛋白、AQP-3和CD44，用荧光显微镜可以观察并拍摄到荧光基团标记的目标蛋白，其荧光强度即对应了该蛋白的表达量，从而可以一定程度上反映出皮肤自身锁水的能力。

2)实验方法

在8孔板每孔加入500μL细胞培养液，再分别加入500μL角质细胞悬液。细胞接种量为1.83×10⁴个/孔，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养24h。吸出培养基，再加入含有肉苁蓉鳞茎提取多糖(对应入中多糖)、肉苁蓉鳞茎制备寡糖(对应图中混合寡糖)、纯化后的肉苁蓉鳞茎制备寡糖(对应图中寡糖)的培养基各1ml/孔，使其终浓度为0.08mg/ml。所有药物浓度均已做过细胞毒性检测，对该细胞密度下的角质细胞无毒害作用。37℃5％ CO₂培养箱培养72小时。用丙酮固定细胞后，用单克隆抗体(一抗)分别处理每孔细胞12h后洗去，再用含有荧光基团的二抗(sigma)染色2h。洗去后，最终用DAPI溶液衬染细胞核，洗去，并封片。所得结果如下图。

3)实验结果如图2、3所示。

由图2可以看出，通过本发明使用的方法制备的肉苁蓉鳞茎提取物(对应图中的混合寡糖)，能够明显提高角质细胞中与肌肤保湿、屏障功能密切相关的外皮蛋白的表达，且分纯后的寡糖效果更佳。而由图3可以看出，通过本发明使用的方法制备的肉苁蓉鳞茎提取物(对应图中混合寡糖)，能够明显提高角质细胞中与肌肤保湿密切相关的两种蛋白：AQP-3以及 CD44的表达，从而能够从肌肤内部着手，提高表皮层自身的锁水能力，带来长久的保湿效果。并且，结果还证明本发明的保湿功效是普通肉苁蓉提取物(未经降解)所不具备的新功效。

Claims (10)

1.一种包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物在制备具有保湿作用的化妆品中的应用，其中所述肉苁蓉鳞茎提取物是通过以下方法制备得到的：

a)沸水提取；

b)浓缩，然后脱蛋白，然后碱中和；

c)透析，浓缩，离心去沉淀，上清液用有机溶剂沉淀；

d)收集沉淀，干燥后得到干燥的肉苁蓉鳞茎水提多糖；

e)步骤d)所得肉苁蓉鳞茎水提多糖在0.1～4M的强酸溶液中、70-200℃温度下加热降解反应1～4小时；

f)去除酸性成分，离心后取上清液，得到包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述方法还包括在步骤a)之前进行脱脂的步骤。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述方法还包括在步骤f)之后采用活性炭硅藻土层析柱进行分离纯化的步骤。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤e)中使用的强酸选自：三氟乙酸、盐酸、高锰酸、硫酸、硝酸、高氯酸、硒酸、氢溴酸、氢碘酸、氯酸。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述分离纯化步骤中使用的活性炭硅藻土层析柱是通过将活性炭与硅藻土按照1：1的重量比在水中混合形成泥浆状，然后将所得泥浆状混合物均匀倒入层析柱制备得到。

6.一种具有保湿作用的化妆品，所述化妆品包含肉苁蓉鳞茎提取物以及化妆品领域可接受的赋形剂，其中，所述肉苁蓉鳞茎提取物是通过以下方法制备得到的：

a)沸水提取；

b)浓缩，然后脱蛋白，然后碱中和；

c)透析，浓缩，离心去沉淀，上清液用有机溶剂沉淀；

d)收集沉淀，干燥后得到干燥的肉苁蓉鳞茎水提多糖；

e)步骤d)所得肉苁蓉鳞茎水提多糖在0.1～4M的强酸溶液中、70-200℃温度下加热降解反应1～4小时；

f)去除酸性成分，离心后取上清液得到包含寡糖混合物的肉苁蓉鳞茎提取物。

7.如权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品还包含另一种具有保湿作用的添加剂。

8.如权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述肉苁蓉鳞茎提取物的使用量为0.0001％-80％(w/w)。

9.如权利要求6所述的化妆品，所述化妆品是以下形式：化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。

10.如权利要求6所述的化妆品，所述化妆品是洁面乳。