CN105483194A - 一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高f值寡肽的方法 - Google Patents

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李梦茹
杜敬河
伍蓉莉
杜欣欣
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

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Abstract

本发明属于水产加工废弃物的综合利用技术领域，公开了一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，该方法利用蛋白酶水解罗非鱼鱼排碎肉，将鱼肉蛋白水解为各种肽，再利用活性炭吸附去除水解液中芳香族氨基酸含量较高的肽，经过滤获得上清液，再经截留分子量为1000？Da的膜过滤，即可获得F值大于20，分子量低于1000？Da的高F值寡肽溶液；用此方法获得的寡肽F值最高可达40，可高效获得寡肽，并且能提高罗非鱼加工废弃物的利用率，具有广泛和实际的应用价值。

Description

一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法
技术领域
本发明涉及水产加工废弃物的综合利用技术领域，更具体地，涉及一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法。
背景技术
中国为罗非鱼的生产与出口大国，年产量150万吨以上，罗非鱼的加工品主要为鱼片，在加工过程中将产生大量鱼排等废弃物。罗非鱼废弃物的迄今仍很不充分，主要被用作生产鱼粉的原料，甚至丢弃，不仅浪费，而且污染环境。
高F值寡肽（HighFischerRatioOligopeptides，HFRP）是指蛋白质水解得到的由2～9个氨基酸组成的寡肽混合物，F值是指支链氨基酸（即缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸）与芳香族氨基酸（即苯丙氨酸、酪氨酸）含量的摩尔比值（支/芳比），高F值寡肽的F值应在20以上。高F值寡肽具有辅助治疗肝性脑病、抗疲劳、治疗苯丙酮尿病等功能。
罗非鱼鱼排碎肉蛋白质的支/芳比与传统的制备高F值寡肽的原料的支/芳比接近，故罗非鱼碎肉可以作为制备高F值寡肽的原料。但迄今未见有利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤：
（1）将罗非鱼鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，，在温度40～60℃条件下水解0.5～24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液；
（2）取上清液，按质量比加入0.3～1.5g活性炭，吸附0.5～2h，去除活性炭，经截留分子量为1000Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液。
优选地，步骤（1）中，分离获得绞碎罗非鱼碎肉的方法有很多种，可用震荡、水流冲洗、煮熟等各种方法将碎肉与鱼骨分离，然后滤除水，得到罗非鱼碎肉；另外还要求所用的鱼排必须为未发生腐败的鱼排，可为新鲜的或冻结的。
优选地，这里罗非鱼碎肉与蛋白酶发生水解反应，反应的温度低于蛋白酶的失活温度，水解时间0.5h以上，具体的，可为0.5～6h。
优选地，步骤（1）中的水解反应可适量添加水，从而提高水解效率，这里罗非鱼碎肉与水的质量体积比为1：2～20（m/v）。
更优选地，步骤（1）中的水解反应可适量添加水，从而提高水解效率，这里罗非鱼碎肉与水的质量体积比为1：10～15（m/v）。
优选地，步骤（1）中所述蛋白酶为碱性蛋白酶。
优选地，步骤（1）是将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，调pH为7～10。
优选地，步骤（2）是加入活性炭前，将上清液调pH值至5～7，在室温下吸附。
作为一种优选方案，上述步骤（5）中的活性炭的用量是每克罗非鱼碎肉添加1.0g～1.5g。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤：（1）将罗非鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，水解0.5～24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液；（2）取上清液，按质量比加入0.3～1.5g活性炭，吸附0.5～2h，去除活性炭，经截留分子量为1000Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液，用此方法获得的寡肽F值最高可达40，可高效获得寡肽，并且能提高罗非鱼加工废弃物的利用率，具有广泛和实际的应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。获得的高F值寡肽分子量一般在1000Da以下，F值在20以上，且F值越高越好。
实施例1
制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤：
（1）原料预处理：将罗非鱼排洗净，按质量比1：5加入水，煮沸5min，冷却至室温，震荡令鱼肉脱落，挑出鱼骨后静置5min，令鱼肉沉淀，倾出上层水，然后过滤收集罗非鱼碎肉。
（2）用绞肉机将收集的罗非鱼碎肉进一步绞碎。
（3）取绞碎的罗非鱼碎肉20g置于反应容器中，按质量体积比1：12加入水，用食品级碳酸钠溶液调pH为8.5，按照800U/g碎肉的比例加入碱性蛋白酶（诺维信产），在温度45℃条件下水解6h，水解结束后，煮沸灭酶2min，冷却至室温后过滤去残渣，收集上清液。
（4）取上清液，用2mol/L食用醋酸调节上清液pH值至6.0，在室温下加入20g食品级活性炭，吸附0.5h，然后过滤分离活性炭和寡肽混合物，即得到罗非鱼碎肉高F值寡肽粗品。
（5）将所得到的高F值寡肽粗品经截留分子量为1000Da的膜过滤，所得到的透过液即为罗非鱼碎肉高F值寡肽液，其F值为22.4，获得F值寡肽0.94g（产品得率为35%）。
实施例2
制备高F值寡肽的方法，包括以下步骤：
（1）原料预处理：将罗非鱼排洗净，按质量比1：10加入水，煮沸5min，冷却至室温，震荡令鱼肉脱落，挑出鱼骨后静置5min，令鱼肉沉淀，倾出上层水，然后过滤收集罗非鱼碎肉。
（2）用绞肉机将收集的罗非鱼碎肉进一步绞碎。
（3）取绞碎的罗非鱼碎肉20g置于反应器中，按质量体积比1：15加入水，用食品级碳酸钠溶液调pH为9.0，按照1200U/g碎肉的比例加入碱性蛋白酶（诺维信产），在温度50℃条件下水解5h，当水解结束后，煮沸灭酶2min，冷却至室温过滤，收集上清液。
（4）取上清液，用2mol/L食用醋酸调整pH值至5.0，使活性炭在其最适pH范围内。在室温下加入30g食品级活性炭，吸附1.0h，然后过滤分离活性炭和寡肽混合物，即得到罗非鱼碎肉高F值寡肽粗品。
（5）将得到的高F值寡肽粗品经截留分子量为1000Da的膜过滤，所得到的透过液即为罗非鱼碎肉高F值寡肽液，其F值为40，获得F值寡肽1.53g（产品得率为46%）。
实施例3
实验方法同实施例2，唯一不同的是，在温度40℃条件下水解5h，最终获得的寡肽液的F值为23，产品得率为36%。
实施例4
实验方法同实施例2，唯一不同的是，步骤（3）中，按质量体积比1：10加入水进行水解反应，最终获得的寡肽液的F值为30，产品得率为39%。
对比例1
实验方法同实施例2，唯一不同的是，在温度70℃条件下水解5h，最终获得的寡肽液的F值为7.0，产品得率为12.3%。
对比例2
实验方法同实施例2，唯一不同的是，步骤（3）中，按水解时间为10min进行水解反应，最终获得的寡肽液的F值为8.0，产品得率为14%。

Claims (4)

1.一种利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将罗非鱼鱼排洗净并分离获得绞碎罗非鱼碎肉，将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，加入蛋白酶，40～60℃条件下水解0.5～24h，水解结束后，煮沸灭酶，冷却至室温后过滤收集上清液；
（2）取上清液，按每克罗非鱼碎肉添加0.3～1.5g活性炭，吸附0.5～2h，去除活性炭，经截留分子量为1000Da的膜过滤即得罗非鱼碎肉高F值寡肽溶液。
2.根据权利要求1所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤（1）中所述蛋白酶为碱性蛋白酶。
3.根据权利要求2所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤（1）是将绞碎罗非鱼碎肉加水匀浆后，调pH为7～10。
4.根据权利要求2所述的利用罗非鱼鱼排碎肉制备高F值寡肽的方法，其特征在于，步骤（2）是加入活性炭前，将上清液调pH值至5～7，在室温下吸附。
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