CN105461684B

CN105461684B - 抗菌的环戊二烯并[c]吡咯取代的3,4-二氢-1h-[1,8]萘啶酮

Info

Publication number: CN105461684B
Application number: CN201511000870.XA
Authority: CN
Inventors: J.E.G.圭尔勒蒙特; D.F.A.兰科伊斯; M.M.S.莫特; A.考尔; W.M.A.巴勒曼斯; E.P.A.阿诺特
Original assignee: Janssen Sciences Ireland ULC
Current assignee: Janssen Sciences Ireland ULC
Priority date: 2011-08-10
Filing date: 2012-08-10
Publication date: 2018-09-25
Anticipated expiration: 2032-08-10
Also published as: TW201313714A; HK1223352A1; IL230549A; US20160194324A1; PE20141410A1; CN103874698A; BR112014003063A2; WO2013021054A1; US20150080413A1; MX2014001600A; US9884864B2; AU2012293621A1; US8906923B2; BR112014003063B1; US9290493B2; CA2842518C; US20190084982A1; CN103874698B; IL230549A0; UA111210C2

Abstract

本发明涉及抗菌的环戊二烯并[C]吡咯取代的3,4‑二氢‑1H‑[1,8]萘啶酮。本发明涉及抑制FabI酶活性的新的式(I)化合物，其因此可用于治疗细菌感染。其进一步涉及包括这些化合物的药用组合物，及制备这些化合物的化学方法。

Description

抗菌的环戊二烯并[C]吡咯取代的3,4-二氢-1H-[1,8]萘啶酮

本申请是申请日为2012年8月10日，申请号为201280038643.4(国际申请号为PCT/EP2012/065733)，发明名称为“抗菌的环戊二烯并[C]吡咯取代的3,4-二氢-1H-[1,8]萘啶酮”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及抑制FabI酶活性的新的式(I)化合物，其因此可用于治疗细菌感染。其进一步涉及包括这些化合物的药用组合物，及制备这些化合物的化学方法。

背景技术

本发明的化合物为抑制FabI蛋白的抗菌化合物，FabI蛋白为脂肪酸生物合成路径中的一种NADH-依赖性烯酰基-酰基载体蛋白(ACP)还原酶。脂肪酸合成酶(FAS)涉及所有生物体中饱和脂肪酸的整体生物合成路径，但FAS的结构组织在其中却差异很大。脊椎动物和酵母菌的不同的FAS特性为所有的酶活性被编码在一或二条多肽链上，且该酰基载体蛋白(ACP)以复合物的形式存在。相反，在细菌的FAS中，各合成步骤由不同的单功能酶催化，且ACP为一离散蛋白(discrete protein)。因此，有可能通过使用抑制剂阻断其中一个合成步骤而选择性抑制细菌的FAS。NADH-依赖性烯酰基-ACP还原酶(Fab I)涉及牵涉各细菌脂肪酸生物合成循环中四个反应步骤的最后一个步骤。因此，FabI酶为细菌脂肪酸生物合成的整个合成路径中的生物合成酶。

已显示FabI酶构成主要病原，例如大肠杆菌(E. Coli)中的必要靶标(Heath等人,J. Biol. Chem. 1995, 270, 26538; Bergler等人, Eur. J. Biochem. 2000, 275,4654)。因此，抑制FabI的化合物可用作抗菌剂。

具有FabI酶抑制活性的化合物已公开于WO-01/26652、WO-01/26654和WO-01/27103中。具有FabI抑制活性的取代的萘啶酮(naphthyridinone)化合物已公开于WO-03/088897、WO-2007/043835和WO-2008/098374中。国际专利申请号WO 2007/053131公开了可能用作FabI抑制剂的各种化合物。国际专利申请号WO 2011/061214也公开了可能用作FabI抑制剂的各种化合物。然而，这些文件中没有一篇公开了直接与α位连接烯烃的羰基基团相连接的稠合双环部分。

发明内容

本发明涉及式(I)化合物

其中

A代表–C≡C–或;

键代表单键或双键，

X代表碳或氮，且当X代表氮时，则键代表单键；

Z₁代表CH或N；

R¹为氢、C_1-4烷基或卤素；

R²为氢、C_1-4烷基或卤素；

R³为氢、C_1-6烷基、羟基或卤素；

R⁴为氢；卤素；C_1-6烷基；C_2-6烯基；C_2-6炔基；C_1-6烷氧基；C_1-4烷氧基羰基；氨基羰基；单-或二(C_1-4烷基)-氨基羰基；芳基；芳氧基；芳基羰基；芳基磺酰基；杂芳基；由氰基取代的C_1-6烷基；由芳基或芳氧基取代的C_1-6烷基；或由杂芳基取代的C_1-6烷基；

芳基为苯基；被一、二或三个各自分别选自卤素、羟基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、多卤素C_1-4烷基、多卤素C_1-4烷氧基、氰基、硝基和氨基的取代基取代的苯基；

杂芳基为呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、吲哚基、2,3-二氢-1H-吲哚基、四氢噻吩基或喹啉基，

其中各杂芳基可被一或二个各自独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基羰基或苯基的取代基取代；

或其药学上可接受的酸加成盐。

如在前述定义中所用的：

-卤素为氟、氯、溴和碘的统称；

-C_1-4烷基定义为具有1至4个碳原子的直链和支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基等；

-C_1-6烷基意欲包括C_1-4烷基和具有5或6个碳原子的其较长链的类似物，例如2-甲基丁基、戊基、己基等；

-多卤代C_1-4烷基定义为被2至6个卤原子取代的多卤代取代的C_1-4烷基(如上文所定义)，例如二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基等。

如在说明书中所用的，当使用术语“式(I)化合物”时，其意欲也包括式(I)化合物能形成的药用加成盐及式(I)化合物的溶剂化物或式(I)化合物能形成的药学上可接受的加成盐。

“式(I)化合物”的定义在文中包括所有的式(I)化合物的立体异构体，或者作为纯的立体异构体，或者作为二或更多种立体异构体的混合物。对映体为相互为不能重迭的镜像的立体异构体。对映体对的1:1混合物为外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)为非对映体的立体异构体，即它们并非为镜像关系。如果化合物含有双取代环烷基，则取代基可为顺式或反式构型。因此，本发明包括对映体、非对映异构体、外消旋体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。

绝对构型根据Cahn-Ingold-Prelog系统确定。不对称碳的构型规定为R或S。其绝对构型未知的拆分化合物可依照其中它们旋转平面偏振光的方向指定为(+)或(-)。当鉴别出特定的立体异构体时，这意味着所述立体异构体基本上无，即带有低于50%，优选地低于20%，更优选地低于10%，甚更优选地低于5%，特别是低于2%及最优选地低于1%的其它异构体。因此，当式(I)化合物例如被指明为(R)时，这意味着该化合物基本上无(S)异构体；当式(I)化合物例如被指出为E時，这意味着该化合物基本上无Z异构体；当式(I)化合物例如被指明为顺式時，这意味着该化合物基本上无反式异构体。

上文或下文的术语“立体异构体”或“立体化学异构形式”可交换地使用。

式(I)化合物及用于其制备的中间体的绝对立体化学构型可容易地由本领域技术人员使用熟知的方法，例如X-光衍射来测定。

某些式(I)化合物也可以其互变异构形式存在，这样的形式虽然在上式中未明确地指出，但打算包括在本发明范围内。

此外，某些式(I)化合物和用于其制备的某些中间体可以多形性存在。应该理解，本发明涵盖任何具有可用于治疗上文所提及病症的特性的多晶型物。

如上文所提及的药学上可接受的酸加成盐意欲包括式(I)化合物所能形成的治疗活性的无毒酸加成盐形式。这些药学上可接受的酸加成盐可方便地通过将碱形式以这样的适合的酸处理来制得。适合的酸包括，例如无机酸如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其类似酸；或有机酸例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(也即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(如丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸及其类似酸。

反之，所述盐形式可通过用适合的碱处理而转变为游离碱形式。

式(I)化合物可以非溶剂化和溶剂化形式存在。术语“溶剂化物”在本文中用于描述包括本发明化合物和一或多个药学上可接受的溶剂分子，例如水或乙醇的分子缔合(association)。当所述溶剂为水时，则使用术语“水合物”。

术语“FabI”为本技术领域所认可的并指细菌酶，据认为该酶在涉及细菌脂肪酸生物合成的各个循环的四个反应的最终步骤中起着烯酰基-酰基载体蛋白(ACP)还原酶的功能。相信此酶广泛地分布于细菌中。

可提及的式(I)化合物包括那些化合物，其中：

(i) Z₁代表CH，而因此式I化合物代表下式：

其中

(ii) 当R¹或R²代表卤素时，则它们优选地为F或Cl；

(iii) R¹代表氢或C_1-4烷基；和/或

(iv) R²代表氢或C_1-4烷基。

优选的式(I)化合物包括其中A代表双键(且非三键)的那些化合物，即其优选为：

A代表。

有兴趣的式(I)化合物为其中适用一或多个下列限制的那些式(I)化合物：

a) R¹和R²代表氢；或

b) R³代表氢；或

c) R³代表氢、卤素或羟基；或

d) R⁴代表氢或卤素；或

e) R⁴代表芳基；或

f) R⁴代表C_1-6烷基；或

g) R⁴代表芳氧基，或芳基磺酰基；或

h) R⁴代表被芳基取代的C_1-6烷基；或

i) R⁴代表杂芳基；或

j) R⁴代表由杂芳基取代的C_1-6烷基；或

k) 杂芳基代表呋喃基、噻吩基、吡唑基、异噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基，或嘧啶基；或

l) X代表碳；或

m) X代表氮且键代表单键。

第一组化合物为式(I)化合物

其中

A代表–C≡C–或；

键代表单键或双键，

X代表碳或氮，且当X代表氮时，则键代表单键；

R¹为氢；

R²为氢；

R³为氢、羟基或卤素；

R⁴为氢；卤素；C_1-6烷基；C_1-6烷氧基；C_1-4烷氧基羰基；氨基羰基；单-或二(C_1-4烷基)-氨基羰基；芳基；芳氧基；芳基磺酰基；杂芳基；由氰基取代的C_1-6烷基；由芳基取代的C_1-6烷基；或由杂芳基取代的C_1-6烷基；

芳基为苯基；由一个选自卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基和氰基的取代基取代的苯基；

杂芳基为呋喃基、噻吩基、吡唑基、异噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基，或嘧啶基；

其中各杂芳基可由一个选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4烷基羰基的取代基取代；

或其药学上可接受的酸加成盐。

第二组的式(I)化合物为其中A代表–C≡C–的那些式(I)化合物。

第三组的式(I)化合物为其中

A代表的那些式(I)化合物。

优选的式(I)化合物包括那些化合物，其中含X的环代表以下结构之一：

即在环形结上含顺式关系的双环(反式关系应会造成环紧张(ring tension))，其可为外消旋或单一对映体。如下文所说明的，如果对于单一对映体而言，该绝对立体化学为未知的，则环形结上的手性碳可以粗线(hold line)或虚线(而非楔形)描述。

更优选的式(I)化合物包括那些化合物，其中含X的稠合双环由以下结构之一代表：

其中在上述的稠合双环中，该化合物可为如前文所述的外消旋体或单一对映体(如果不存在相关的对称性，则对映体是可能的)。

在式(I)化合物中，其优选的为：

(i) 至少有一个不代表氢的R³或R⁴取代基存在；

(ii) 其中R³和R⁴之一(例如R³)代表氢、羟基或卤素(例如氟)，而R³和R⁴的另一个(例如R⁴)代表非氢的取代基；

(iii) R³代表氢、羟基或卤素(例如氟)及最优选地代表氢(即R³基本上不存在)；

(iv) R⁴代表非氢的取代基(即有一R⁴取代基存在，且不代表氢)；

(v) R⁴代表与X连接的非氢取代基，

其中上述的任一项可结合在一起或组合。例如，可将(iii)、(iv)和/或(v)组合，以提供如下特别优选的式(I)化合物：

其中R⁴代表非氢的取代基。R⁴(此处和别处)可代表的特别优选的取代基包括：

(i) 任选取代的芳基；

(ii) 任选取代的杂芳基

(iii) 由芳基或杂芳基取代的C_1-6烷基(其后二个芳基和杂芳基本身任选如文中所定义的被取代)；

(iv) 芳氧基(其中芳基部分任选如文中所定义的被取代)；

(v) 芳基磺酰基(其中芳基部分任选如文中所定义的被取代)；

(vi) 未取代的C_1-6烷基(例如乙基、甲基、异丙基)；

(vii) 二(C_1-4烷基)氨基羰基(例如-C(O)N(CH₃)₂)；

(viii) 氨基羰基(-C(O)NH₂)；

(ix) C_1-4烷氧基羰基(例如-C(O)O-CH₂CH₃)；

(x) 卤素(例如氟)；

(xi) C_2-6炔基(例如-C≡C)；

(xii) C_1-6烷氧基(例如-OCH₃)。

特别优选的是，R⁴基团含有芳族部分，且因此上述的(i)、(ii)、(iii)、(iv)和(v)为特别优选的。

当R⁴代表上述(i)的情况时，则芳基优选地为未取代或由一或二个(例如一个)选自C_1-4烷氧基、卤素、C_1-4烷基或氰基(例如-OCH₃、氯、氟、甲基或氰基)的取代基取代的苯基。

当R⁴代表上述(ii)的情况时，则杂芳基为含一至四个杂原子的单环5-或6-员环，例如噻吩基(例如2-或3-噻吩基)、吡啶基(例如4-吡啶基或3-吡啶基)、吡唑基(例如5-吡唑基、4-吡唑基或1-吡唑基)、呋喃基(例如2-或3-呋喃基)、噻唑基(例如2-噻唑基)、异噁唑基(例如4-异噁唑基)、吡咯基(例如1-吡咯基)、三唑基(例如1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-2-基或1,2,4-三唑-2-基)、噻二唑基(例如1,3,4-噻二唑-2-基)、嘧啶基(例如5-嘧啶基)、四唑基(例如1,2,3,4-四唑-2-基、1,2,3,4-四唑-1-基)、咪唑基(例如2-咪唑基)。这些杂芳基可为未取代或由一或二个(例如二个，或优选一个)选自卤素、氰基、C_1-4烷基(例如C_1-2烷基)、C_1-4烷氧基(例如C_1-2烷氧基)和C_1-4烷基羰基(例如C_1-2烷基羰基)，例如-OCH₃、甲基、卤素(例如氯)、氰基和-C(O)-CH₃的取代基取代。

当R⁴代表上述(iii)的情况时，则优选地C_1-6烷基为甲基，即由芳基(例如苯基，例如未取代的苯基)或杂芳基(例如含一或二个(例如一个)杂原子的5-或6-员单环杂芳基，因而形成噻吩基，例如2-噻吩基；且此杂芳基优选地为未取代的)取代的-CH₃。

当R⁴代表上述(iv)或(v)的情况时，芳基优选地为未取代的苯基，而因此R⁴基团为-O-苯基或-S(O)₂-苯基。

最优选地，R⁴基团代表上述(i)或(ii)，即芳基或杂芳基。甚至更优选地，R⁴基团代表上述(i)，特别是未取代的苯基。

最优选的式(I)化合物包括那些化合物，其中含X的稠合双环部分代表：

其中R⁴如本文所定义。含有或者N(R⁴)部分或者邻近双键的C(R⁴)部分的此类化合物可实施例B.2

以是有益的。这是因为氮原子的形状(例如，实际上为更接近平面的，与不邻近双键的CR⁴部分比较)或含X的环中双键的存在可帮助R⁴基团(如果存在)取向，以致化合物大体上(例如考虑到R⁴取代基的取向)显示更好/改进的对FabI细菌酶的结合性质。因此，本发明的这些化合物在双键的存在可导致改善对FabI酶的结合/FabI酶的抑制作用的意义上说，可以是有利的。所以，本发明的化合物由于其可必然地导致更好的潜力，效能等的这些性质，可以是有优势的化合物(例如与已知的化合物相比)。

式(I)化合物一般可通过使式(II)的中间体与式(III)的中间体，在至少一种反应惰性的溶剂中及任选在至少一种适合的偶合剂和/或适合的碱的存在下反应来制备，所述方法进一步任选地包括将式(I)化合物转变为其加成盐，和/或制备其立体化学异构形式。

可以方便地通过添加有效量的反应促进剂活化式(III)的羧酸。这些反应促剂进的非限定实例包括羰基二咪唑、N,N’-二环己基-碳二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、羟基苯并三唑、苯并三唑基-氧基三(二甲基氨基)-六氟磷酸鏻、四吡咯烷子基-六氟磷酸鏻、溴三吡咯烷子基六氟磷酸鏻，或其功能衍生物。

式(I)化合物也可通过使式(II)的中间体与式(IV)的中间体反应来制备，其中Y代表羟基或卤素。反应可在反应惰性的溶剂，例如二氯甲烷或二甲基甲酰胺中及任选在适合的碱，例如二异丙基乙基-胺(DIPEA)的存在下进行。

式(I)化合物，其中A代表-C(R²)=C(R¹)-，也可通过使式(V)的中间体与式(VI)的中间体，

其中X_a1代表适合的离去基团，例如适合的卤素基团(例如氯、碘及特别是溴)且其它整数系如上文所定义，于反应适合的反应条件下，例如于金属催化剂偶合反应条件(例如贵金属偶合反应条件，其中该贵金属为例如基于钯的)，特别是于Heck反应条件下，使用优选的钯-基催化剂例如乙酸钯、四(三苯基膦基)钯(0)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)等(优选地，该催化剂为乙酸钯)，例如任选于适合的溶剂(例如乙腈等)、碱(例如胺碱，如N,N-二异丙基胺等)及配体(例如三苯基膦、三-O-甲苯基膦等)的存在下反应来制备。此反应可在密封试管和/或于微波中进行。

起始原料和某些中间体为已知的化合物且可从市面上购得或可根据本领域一般已知的常规反应程序来制备。

对于其中Z₁代表CH的化合物，中间体(IV)和(VI)可如文中所述来制备，或根据本领域一般已知的常规反应程序来制备。对于其中Z₁代表N的对应的中间体，也为如此。然而，这些化合物也可依照下列流程来制备：

条件：

a) NBS, ACN, 回流, 3 h, 70%；b) LiAlH₄ 1M在THF中, THF, 5℃至RT, o.n.,20%；c) PBr₃, DCM, RT, o.n., 90%；f)丙二酸二甲酯, NaOMe于MeOH中, MeOH, RT,o.n., 25%；g) NaOH, MeOH, 回流, 4h, HCl, 回流, o.n.；h) DIEA, Pd(OAc)₂, 三-O-甲苯基膦, ACN, DMF, µw, 180℃, 25 min。

如上文所述的方法所制备的式(I)化合物可合成为对映体的外消旋混合物形式，其可依照技术中已知的拆分过程将彼此分离。以外消旋形式所得到的那些式(I)化合物可通过与适合的手性酸反应转变为对应的非对映异构的盐形式。随后将所述非对映异构的盐形式，例如通过选择性或分级结晶分离，且通过碱将对映体从其中释出。另一种备选的分离式(I)化合物的对映体形式的方法包括使用手性固定相的液相层析。所述纯的立体化学异构形式也可从适合的起始原料的对应的纯立体化学异构形式来衍生，前提为该反应系以立体有择地发生。优选地，如果特定的立体异构体为所需的，则所述化合物应以立体有择的制备方法来合成。这些方法将有利地应用对映异构上纯的起始原料。

本文中所述的化合物为如以下实施例(包括药学实施例1)所验证的FabI酶的抑制剂。鉴于这些FabI酶抑制性质，本文中所述的化合物可用于治疗细菌感染。例如，这些化合物可用于治疗细菌感染，例如上呼吸道感染(例如中耳炎、细菌性气管炎、急性会厌炎、甲状腺炎)、下呼吸道(例如脓胸、肺脓肿)、心(例如感染性心内膜炎)；胃肠道(例如分泌性腹泻、脾脓肿、腹膜后脓肿)、CNS (例如脑脓肿)、眼睛(例如眼睑炎、结膜炎、角膜炎、眼内炎、隔膜前和眼眶蜂窝组织炎、泪囊炎)、肾及尿道(例如附睪炎、肾内和肾周围脓肿、中毒性休克综合征)、皮肤(例如脓疱病、毛囊炎、皮肤脓肿、蜂窝组织炎、伤口感染、细菌性肌炎)，及骨骼和关节(例如败血性关节炎、骨髓炎)。此外，所述化合物可用于与已知的抗生素组合。

因此，本发明也涉及用作为医药，特别是用于治疗细菌感染，特别是由表达FabI酶的细菌引起的细菌感染的式(I)化合物。因此，本发明的化合物可用于制备医药供治疗细菌感染，特別是由表达FabI酶的细菌引起的细菌感染。

另外，本发明提供治疗细菌感染的方法，其包括给予有此需要的受治疗者的抑制FabI酶的式(I)化合物。

需要治疗的受治疗者具有细菌感染或已暴露于感染性细菌，其症状可通过给予治疗上有效量的本发明化合物来减缓。例如，需要治疗的受治疗者可具有感染，对其可给予式(I)化合物作为治疗。在另外的实例中，需要治疗的受治疗者可具有开放伤口或烧伤，对其可给予式(I)化合物作为预防剂。典型地，可用于治疗存在细菌感染的受治疗者。

受治疗者可具有由炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、柠檬酸菌种(Citrobactersp.)、大肠杆菌(Escherichia coli)、土拉热弗朗西丝氏菌(Francisella tularensis)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)、单核细胞增多性李司忒氏菌(Listeria mono- cytogenes)、卡他性摩拉克氏菌(Moraxella catarrhalis)、结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、沙门氏菌种(Salmonella sp.)、沙雷氏菌种(Serratia sp.)、志贺氏菌种(Shigella sp.)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)或表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)引起的感染。优选地，(预防性或治疗性)治疗受治疗者的由表达FabI酶的细菌引起的细菌感染。

术语“治疗”和“医治”，如文中所用的，系指疗效、减缓和预防性治疗，包括逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的疾病、紊乱或症状的进展或预防所述疾病、紊乱或病症，或一或多个这样的疾病、紊乱或病症的症状。

本发明化合物的“治疗有效量”为当给予需要治疗的受治疗者时，其改善该受治疗者的预后，例如延缓该受治疗者的一或多个与细菌感染有关的症状的发作和/或减轻该受治疗者一或多个与细菌感染有关的症状的严重度的量。要给予受治疗者的公开化合物的量将依照特定的疾病、给药方式及受治疗者的特质，例如一般健康状况、其它疾病、年龄、性别、基因型、体重和对药物的耐受性而定。依照这些和其它因素，技术人员应能决定适当的剂量。

化合物可以数个生物分析之一进行试验，以测定具有特定的药理功效所需的化合物的浓度。

另外，本发明提供包括至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的式(I)化合物的药用组合物。

为了制备本发明的药用组合物，将有效量的碱或酸加成盐形式的特定化合物(作为活性成分)与至少一种药学上可接受的载体紧密混合，所述载体依照给药所需的制剂形式可采用广泛的各种形式。这些药用组合物理想地为适合(优选地)口服给药、直肠给药、经皮给药或非经肠注射的单位剂型。

例如在制备口服剂型的组合物中，在口服液体制剂例如悬浮剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂的情况下，可使用任何常用的液体药用载体，例如水、二醇、油、醇等；在散剂、丸剂、胶囊和片剂的情况下，可使用固体药用载体例如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、结合剂、崩解剂等。因为片剂和胶囊剂给药容易，它们代表了最有利的口服单位剂型，在该情形中显然采用固体药用载体。对于肠胃外注射组合物，药用载体将主要包含无菌水，虽然可包含其他成分，以改进活性成分的溶解度。可注射溶液可例如，通过使用包括食盐水溶液、葡萄糖溶液或二者的混合物的药用载体来制备。也可通过使用合适的液体载体、助悬剂等制备可注射混悬剂。在合适的经皮给予的组合物中，药用载体可任选地包括渗透促进剂和/或合适的湿润剂，任选地与较小比例的合适的添加剂组合，所述添加剂對皮肤不会引起显著的有害效应。所述添加剂可经选择以便于将活性成分给予至皮肤和/或帮助制备所需的组合物。这些局部的组合物可以各种方式给药，例如作为透皮贴剂、滴剂(spot-on)或软膏剂。式(I)化合物的加成盐，由于其增加水溶性优于对应的碱形式，明显地更适合制备水性组合物。

将本发明的药用组合物配制成容易给药和剂量一致的单位剂型为特別有利的。如文中所用的“单位剂型”指适合作为单位剂量的物理上的离散单位，各单位含有与所需药用载体结合的经计算产生所欲治疗效果的預定量的活性成分。这些单位剂型的實例有片剂(包括刻痕或包衣片)、胶囊、丸剂、散袋剂、糯米纸囊剂(wafers)、可注射溶液或混悬剂、茶匙剂、汤匙剂等，和其分開的多剂量。

对于口服给药，本发明的药用组合物可采用固体剂型的形式，例如片剂(可吞咽和可咀嚼形式二者)、胶囊或微囊片(gelcaps)，通过常规方法用药学上可接受的赋形剂和载体例如粘合剂(例如预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等)、填充剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸钙等)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等)、崩解剂(例如马铃薯淀粉、乙醇酸淀粉钠等)、湿润剂(例如月桂基硫酸钠)等来制备。这些片剂也可以本领域熟知的方法包衣。

口服给药的液体制剂可采用例如溶液剂、糖浆剂或混悬剂的形式，或者可将它们配制为干燥产品，用于在使用前与水和/或另外的适合液体载体混合。这样的液体制剂可以常规的方法，任选用药学上可接受的添加剂例如助悬剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或氢化食用油)、乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性载体(例如杏仁油、油酯或乙醇)、甜味剂、矫味剂、掩蔽剂和防腐剂(例如对-羟基苯甲酸甲酯或对-羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)来制备。

可用于本发明的药用组合物的药学上可接受的甜味剂优选地包括至少一种强力甜味剂例如阿斯巴甜(aspartame)、乙酰氨基磺酸钾(acesulfame potassium)、环己基氨基磺酸钠、阿力甜(alitame)、二氢查尔酮甜味剂、莫内林(monellin)、甜菊苷(stevioside)、三氯蔗糖(sucralose) (4,1',6'-三氯-4,1',6'-三脱氧半乳果寡糖)，或优选糖精、糖精钠或糖精钙，及任选的至少一种填充甜味剂例如山梨醇、甘露醇、果糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇(isomalt)、葡萄糖、氢化葡萄糖糖浆、木糖醇、焦糖或蜂蜜。强力甜味剂方便地以低浓度使用。例如，在糖精钠的情况下，所述浓度可在最终制剂的约0.04%至0.1% (重量/体积)的范围。填充甜味剂可有效地以范围从约10%至约35%，优选地10%至15% (重量/体积)的较大浓度来使用。

在低剂量制剂中可掩蔽苦味成分的药学上可接受的矫味剂优选地为水果矫味剂，例如樱桃、覆盆子、黑醋栗或草莓矫味剂。二种矫味剂的组合可产生非常良好的结果。在高剂量制剂中，可能需要较强的药学上可接受的矫味剂，例如焦糖巧克力、沁薄荷(MintCool)、幻想香型(Fantasy)等。各矫味剂可以范围从约0.05%至1% (重量/体积)的浓度存在于最终的组合物中。可有利地使用所述强力矫味剂的组合。优选地使用在配制的环境中不会经历任何改变或丧失风味和/或颜色的矫味剂。

式(I)化合物可经配制供通过注射，方便地静脉内、肌肉内或皮下注射，例如以大剂量推注或连续静脉内输注以经胃肠外给药。用于注射的制剂可以单位剂型存在，例如以安瓶或包括添加的防腐剂的多剂量容器存在。它们可采用在油性或水性媒介中的混悬剂、溶液剂或乳液形式，并可含有配制剂例如等渗剂、助悬剂、稳定剂和/或分散剂。作为选择，活性成分可以粉末的形式存在供在使用前与适合的媒介，例如无菌、无热源水混合。

式(I)化合物也可配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，其例如含有常规的栓剂基质例如可可脂和/或其它甘油酯。

具有治疗与抑制FabI酶相关的抗菌疾病的技术的人员应能从下文所示的试验结果容易地确定式(I)化合物的治疗上有效量。一般而言，预计治疗有效剂量应从约0.001mg/kg至约50 mg/kg所欲治疗的患者体重，更优选地从约0.01 mg/kg至约10 mg/kg体重。将治疗上有效的剂量以二或更多个亚剂量的形式于一整天以适当的时间间隔给药可能是适当的。所述亚剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型各含有约0.1至1000 mg，更特别是约1至500 mg的活性成分。

如本领域技术人员所熟知的，给药的精确剂量和频率取决于所用的特定式(I)化合物、所欲治疗的特定病症、所欲治疗的病症的严重度、特定病患的年龄、体重及一般的身体状况以及病患可能服用的其它医药而定。此外，取决于治疗患者的反应和/或取决于开具本发明化合物处方的医师的评估，所述“治疗有效量”可减少或增加。上文所提及的每日有效剂量范围因此仅为指导准则。

式(I)化合物，无论是用于上述适应症或其它适应症可能具有比先有技术已知化合物更有效、毒性更低、作用时间更长、更强效、产生较低副作用、更容易吸收，和/或具有更佳的药物动力学特性(例如较高的口服生物可利用性和/或较低的清除率)的优点，和/或具有优于先有技术已知化合物的其它有用的药理、生理或化学性质。考虑到所述化合物在含X环中存在NR⁴部分或邻近双键的CR⁴部分，它们也可显示出这样的优点。

例如，式(I)化合物可具有这样的优点，即它们具有良好或改良的热动力学溶解度(例如相较于先有技术中已知的化合物；及例如以已知的方法和/或本文中所述的方法来测定)。式(I)化合物也可具有这样的优点，即它们具有广谱的抗菌活性(例如与先有技术中已知的化合物相比，具有更广谱的抗菌活性；及例如以已知的试验和/或本文中所述的试验来测定)。式(I)化合物也可具有这样的优点，即它们具有良好或改良的体内药物动力学及口服生物利用度。它们可具有这样的优点，即它们具有良好或改良的体内疗效。例如，本发明化合物可适用于静脉制剂/剂量且因此当以静脉给药时，可展现改良的体内功效。考虑到所述化合物在含X环中存在NR⁴部分或邻近双键的CR⁴部分，它们也可显示出这样的优点。

具体实施方式

实验部分

缩写

“DMF”定义为N,N-二甲基甲酰胺，“DCM”或“CH₂Cl₂”定义为二氯甲烷，“MeOH”定义为甲醇，“EtOH”定义为乙醇，“MgSO₄”定义为硫酸镁，而“THF”定义为四氢呋喃，“AcOEt”或“EtOAc”定义为乙酸乙酯，“DIPEA”定义为二异丙基乙基胺，“EDCI”定义为N'-(乙基甲亚氨酰基)-N,N-二甲基-1,3-丙二胺单盐酸盐，“HOBT”定义为1-羟基-1H-苯并三唑，“DIPA”定义为二异丙基胺，“K₂CO₃”定义为碳酸钾，“TFA”定义为三氟乙酸，“NH₄OH”定义为氢氧化铵，“NaHCO₃”定义为碳酸氢钠，“Et₂O”定义为乙醚，“Na₂SO₄”定义为硫酸钠，“CH₃CN”定义为乙腈，“NaOH”定义为氢氧化钠，“n-BuLi”定义为正丁基锂，“i-PrOH”定义为异丙醇，“Pd(OAc)₂”定义为乙酸钯，“DMA”定义为二甲基乙酰胺，“Et₃N”定义为三乙胺。

立体化学表现

式(I)化合物具有如下所示的至少二个不对称碳原子，其中所述不对称碳原子用*来识别：

由于在二个成环的(annulated)五员环系统中的环张力(ring tension)，仅可制备“顺式”形式而非“反式”形式。

各上述的“顺式”化合物由二种对映体的外消旋混合物组成，且粗体键和虚线键已用于指出此相对的立体化学构型。

如果此“顺式”化合物分离成其二种独立的对映体，则单一对映体的立体化学构型系如相对立体化学所示，指定为R*或S*。因此，指定为(R*,S*)的单一对映体可具有或者绝对(R,S)构型或者(S,R)构型。如果单一对映体中特别的手性碳的绝对立体化学为已知的，该粗体键和虚线键可以楔形键替代，指示该化合物为具有已知绝对立体化学的单一对映体。

A. 中间体的合成

实施例A.1

搅拌6-溴-3,4-二氢-1H-[1,8]萘啶-2-酮(1.0 g, 4.4 mmol)、丙烯酸叔-丁酯(2.56 ml, 17.62 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.46 ml, 8.81 mmol)于乙腈(20 ml)和DMF(7 ml)中的溶液并以氮气脱气10分钟。加入三-邻-甲苯基膦(0.27 g, 0.88 mmol)和乙酸钯(II) (47%于Pd上) (0.099 g, 0.44 mol)并将生成的混合物经微波处理(1600 W, 180℃, 35分钟)。将反应混合物蒸发至干，溶于DCM/甲醇(8/2) (50 ml)混合物中，经由硅藻土(celite)短垫过滤并以DCM清洗。将有机层以水清洗，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发至干。将残余物置于冷乙醇(10 ml)中处理并于5℃搅拌5分钟，将沉淀滤出，以冷乙醇(3 ml)清洗并于真空下干燥，得到950 mg中间体(1)。

将中间体(1) (4.1 g, 14.95 mmol)溶于三氟乙酸(23.2 ml)于DCM(41 ml)中的混合物。将反应于室温搅拌30分钟。将反应混合物于减压下浓缩。生成的固体用乙醚研磨，过滤并于真空下干燥，得到3.97 g的中间体(2)。

将中间体(2)于HCl的二噁烷(4 M, 48 ml)混合物中研磨过夜，将固体滤出，用乙醚洗涤并于真空下干燥，得到3.7 g的中间体(3)。

实施例A.2

搅拌烯丙基-丙-2-炔基-氨基甲酸叔-丁酯(CAS 147528-20-9, 45 g, 0.23mol)、羰基钴(17.5 g, 46.1 mmol)和1,1,3,3-四甲基-2-硫脲(36.6 g, 0.277 mol)于甲苯(1.8 L)中的溶液及在高压釡中于CO压力下(2-3巴)下，于70℃加热5小时。将生成的混合物通过硅藻土短垫过滤并蒸发至干。将残余物于DCM中处理并通过硅藻土短垫过滤，以得到澄清溶液。将其蒸发至干，得到85.7 g的粗残余物。将其以制备型液相层析于(硅胶20-45µm, 1000 g, 流动相(DCM/AcOEt梯度从95/5至80/20)纯化。收集纯的部分并蒸发溶剂，得到36.5 g的中间体(4)。

将中间体(4) (37.6 g, 0.168 mol)和10%披钯碳(7.5 g)于乙酸乙酯(750 ml)中的混合物在密闭的容器反应器中于室温以3巴氢化30分钟。将生成的混合物通过硅藻土短垫过滤并蒸发至干，得到38.2 g的中间体(5)。

将n-BuLi 1.6M的己烷溶液(64 ml, 0.102 mol)于-20℃、N₂气压下逐滴加到二异丙基胺(14.3 ml, 0.102 mol)的无水THF(140 mL)溶液中，然后将混合物于-20℃搅拌20分钟。然后于-78℃加入中间体(5) (19.1 g, 84.8 mmol)的无水THF (190 mL)溶液并将生成的混合物于-78℃搅拌1小时。于-78℃加入N-苯基-三氟甲烷磺酰亚胺(36.4 g, 0.102mol)的无水THF (110 mL)溶液，然后使混合物达到室温并搅拌过夜。将混合物蒸发至干。将残余物置于DCM中处理，以NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到27.7 g的中间体(6)。

将中间体(6) (9.3 g, 26.0 mmol)和苯基硼酸(3.81 g, 31.2 mmol)于碳酸钾2M(26 ml)和乙二醇二甲醚(93 ml)溶液中的溶液通入N₂吹洗10分钟，然后加入四三苯基膦-钯(3.0 g, 2.6 mmol)。将此密闭的反应器使用多模谐振腔微波CEM Mars系统，以范围从0至400W的输出功率于80℃加热30分钟。将生成的溶液冷却至室温，加入水和EtOAc，将有机层分离，以水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。经硅胶快速层析(330g, 15-40µm,庚烷/EtOAc从100/0至80/20)，将残余物纯化。收集纯的部分并蒸发至干，得到4.3 g的中间体(7)。

将三氟乙酸(44 ml)逐滴加到中间体(7) (14.5 g, 50.8 mmol)的CH₂Cl₂(44 ml)溶液中。将生成的溶液于室温下搅拌30 min，然后将混合物冷却至5℃。缓慢地加入NaOH 3N直到混合物为碱性，将其以CH₂Cl₂萃取二次。将组合的有机层用NaOH 3N，然后用水洗涤，以MgSO₄干燥并蒸发，得到8.8 g的中间体(8)的外消旋化合物。

将中间体(8)纯化并以手性SFC于(CHIRALPAK AD-H 5µm 250x20 mm)上拆分。流动相(0.3%异丙胺, 73% CO₂, 27% iPrOH)。收集纯的部分并除去溶剂，得到3.9 g的中间体(10) (R*,S*) ([α]_D ²⁰ = -53.19° (589 nm, c 0.3365 w/v %, DMF, 20℃))及4 g的中间体(9) (S*,R*) ([α]_D ²⁰ = +38.6° (589 nm, c 0.285 w/v %, DMF, 20℃))。

中间体(9)

。

中间体(10)

。

实施例A.3

将中间体(6) (44.4 g, 111.82 mmol)和3-噻吩硼酸(17.17 g, 134.19 mmol)于碳酸钾2M (112 ml)和乙二醇二甲醚(444 ml)中的溶液，于开放的容器中通入N₂吹洗10分钟，然后加入四三苯基膦钯(12.92 g, 223.65 mmol)。将溶液使用多模谐振腔微波CEMMARS系统，以范围从0至400W输出功率于78℃加热1小时。将溶液冷却至室温，加入水和EtOAc。将混合物通过硅藻土垫过滤。将有机层分离，以水和盐水先后洗涤，以MgSO₄干燥并蒸发至干。将残余物以制备型液相层析于(硅胶20-45µm, 1000 g, 流动相(80%庚烷, 20%AcOEt))上纯化。收集纯的部分并浓缩，得到16 g的中间体(11)。

将三氟乙酸(14.37 ml, 186.47 mmol)加到中间体(11) (5.72 g, 18.65 mmol)的CH₂Cl₂(57 ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌3小时。于0℃加入K₂CO₃(10%水溶液,50 ml)，然后加入K₂CO₃固体以将溶液碱化。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将残余物以制备型液相层析于(硅胶20-45µm, 1000 g, 流动相(1% NH₄OH, 93% DCM,7% MeOH))纯化。收集纯的部分并浓缩，得到12 g的中间体(12)。

将中间体(12)纯化并以手性SFC于(CHIRALPAK AD-H 5µm 250x20 mm)上拆分。流动相(0.3%异丙基胺, 80% CO₂, 20%甲醇)。收集纯的部分并除去溶剂，得到5.8 g的中间体(14) (R*,S*) ([α]_D ²⁰ = -12.4° (589 nm, c 0.5 w/v %, DCM, 20℃))及5.6 g的中间体(13) (S*,R*)([α]_D ²⁰ = +9.43° (589 nm, c 0.35 w/v %, DCM, 20℃))。

中间体(13)

。

中间体(14)

。

实施例A.4

将中间体(6) (108 g, 0.302 mol)和吡啶-4-硼酸(49.5 g, 0.363 mol)于碳酸钾水溶液2M (302 ml, 0.604 mol)和乙二醇二甲醚(1.1 L)中的溶液用N₂吹洗5分钟，然后加入四三苯基-膦钯(34.9 g, 0.030 mol)，将混合物使用多模谐振腔微波(CEM Mars 5)，以范围从0至800W的输出功率于78℃加热1小时，冷却至室温，加入水和EtOAc，将有机层分离，用水和盐水先后洗涤，以MgSO₄干燥并蒸发至干。将残余物以制备型液相层析于(硅胶15-40µm, 300 g, 流动相(0.1% NH₄OH, 97% DCM, 3% iPrOH)纯化。收集纯的部分并除去溶剂，得到47.6 g的中间体(15)。

将中间体(16)纯化并经层析于Chiralpak AD上(20µm, 2000g, 110 mm)以750ml/min的流速拆分。流动相为甲醇100%。收集纯的部分并蒸发至干，得到18.7 g的中间体(18) (R*,S*) (([α]_D ²⁰ =+55.75°(589 nm, c 0.339 w/v %, DMF, 20 ℃))及20.7 g的中间体(17) (S*,R*) (([α]_D ²⁰ = -68.38°(589 nm, c 0.253 w/v %, DMF, 20℃))。

中间体(17)

中间体(18)

实施例A.5

将中间体(18) (24.8 g, 86.6 mmol)于5℃加到HCl的二噁烷(4 M, 108 ml)溶液中，然后将混合物于室温搅拌90分钟。将沉淀滤出，以Et₂O洗涤并于真空下于70℃干燥，得到21.1 g的中间体(19)。

中间体(20)由中间体(17)开始，类似地制备。

实施例A.6

反应采用4批各0.5g的6-溴-3,4-二氢-1H-[1,8]萘啶-2-酮完成。搅拌6-溴-3,4-二氢-1H-[1,8]萘啶-2-酮(0.5 g, 2.20mmol)、二硼酸二频哪醇酯(0.67 g, 2.64 mmol)和乙酸钾(0.648 g, 6.61 mmol)的DMF (5 ml)和CH₃CN (10 ml)溶液并用氮脱气10分钟。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II) (0.161 g, 0.22mmol)并将生成的混合物使用微波(Biotage引发剂60)，以范围从0至400W的输出功率于120℃加热40分钟。将混合物蒸发至干，将残余物溶于DCM和水中，通过硅藻土短垫过滤。将滤液的有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。使残余物溶于EtOH中，过滤并干燥，得到0.36 g的中间体(21)。

将中间体(21) (1.0 g, 3.65 mmol)、丙炔酸叔丁酯(0.426 ml, 3.04 mmol)、氧化银(I) (1.06 g, 4.56 mmol)和K₂CO₃ (0.84 g, 6.08 mmol)于CH₃CN (10 ml)和DMF(5ml)中的溶液通入N₂吹洗，然后加入乙酸钯(II) (47% Pd) (0.034 g, 0.152 mmol)并使用单模微波(Biotage引发剂60)以范围从0至400W的输出功率于100℃加热20分钟。加入水和EtOAc，将混合物通过硅藻土短垫过滤，将有机层分离，用水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(15-40µm, 柱30g, 从CH₂Cl₂至CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH：98.5/1.5/0.1)。收集纯的部分并蒸发至干，得到0.037g的中间体(22)。

将中间体(22) (0.053 g, 0.195 mmol)溶于TFA/DCM溶液(0.37 ml /0.5 ml)。将反应混合物于室温搅拌30分钟。将反应混合物于减压下浓缩。将产生的固体以Et₂O研磨，过滤并于真空下干燥(80℃)，得到0.032 g的中间体(23)。

实施例A.7

微波条件：Biotage, 90℃, 25分钟, 预搅拌30秒后减低。搅拌溴苯(0.228ml,2.64mmol)、顺式-2-叔丁氧基-羰基-六氢吡咯并[3.4]吡咯(0.6 g, 2.82 mmol)和叔丁醇钠(0.624 g, 6.5 mmol)的甲苯(以分子筛额外干燥) (15 ml)溶液并以氮脱气10分钟。加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0) (0.198 g, 0.216 mmol)和2-(二叔-丁基膦基)联苯(0.065g, 0.216 mmol)并将生成的混合物依上述微波条件照射。加入水和EtOAc，将有机层分离，然后干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(15-40µ, 40 g,庚烷/EtOAc 80/20)。收集纯的部分并浓缩，得到中间体(24)。

将TFA (4.54 ml, 58.95 mmol)加到中间体(24) (1.7 g, 5.9 mmol)的DCM (15ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌2小时，加入水和DCM，加入K₂CO₃(10%水溶液)碱化并将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)及蒸发至干，得到中间体(25)，为油状物。

下列化合物使用与实施例A.7相同的程序，通过分别用2-溴噻吩、2-溴苯甲醚、2-溴-1-甲基苯、2-溴-1-氯苯、3-溴吡啶、2-溴噻唑、4-溴-1-氯苯或3-溴-1-氯苯取代溴苯制备。

实施例A.8

于N₂下反应。于-20℃将n-BuLi (1.6M在己烷中) (3.33 ml, 5.33 mmol)逐滴加到DIPA (0.749 ml, 5.33 mmol)的THF (8 ml)溶液中，然后将混合物于-20℃搅拌20分钟。然后于-78℃加入中间体(4) (1.0 g, 4.44 mmol)的THF (10 ml)溶液并将生成的混合物于-78℃搅拌30分钟。于-78℃加入N-苯基三氟-甲磺酰胺酰(1.74 g, 4.88 mmol)的THF (6ml)溶液，然后使混合物达到室温并搅拌过夜。将混合物浓缩并将残余物经硅胶快速层析(40 g, 15-40 µm,庚烷/EtOAc 70/30)纯化。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(34)。

于氮气下反应。微波条件：Biotage引发剂60, 80℃, 20分钟。将中间体(34)(0.42g, 0.881mmol)和噻吩-2-硼酸(0.135 g, 1.06 mmol)于K₂CO₃(2 M, 0.88 ml)和乙二醇二甲醚(4 ml)中的溶液用N₂吹洗10分钟，然后加入四(三苯基-膦)钯(0) (0.102 g,0.088 mmol)。将混合物依上述微波条件照射，冷却至室温，加入水和EtOAc，将有机层分离，用水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将残余物经硅胶快速层析(10 g, 15-40µm, 庚烷100至庚烷/EtOAc 80/20)纯化。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(35)。

将中间体(35) (0.226 g, 0.776 mmol)于TFA(0.7 ml)和DCM(4ml)中的混合物在室温搅拌1小时，然后将反应混合物倒至K₂CO₃(10%水溶液)中并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(36)。

下列化合物使用与实施例A.8b/A.8c相同的程序，通过分别用2-甲氧基苯基-硼酸或甲酸替代噻吩-2-硼酸制备。

实施例A.9

微波条件：Biotage, 120℃, 30分钟。将顺式-2-叔-丁基氧基羰基六氢吡咯并[3.4]吡咯(0.027 g, 0.13 mmol)、2-溴-丙烷(0.018 mL, 0.19 mmol)和三乙胺(0.088ml, 0.64 mol)于DMF (0.2 ml)中的混合物依上述条件照射。加入水和EtOAc，将有机层分离，用EtOAc萃取水层二次，将组合的有机层用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(37)。

将TFA (0.62 ml, 8.02 mmol)加入中间体(37) (0.204 g, 0.8 mmol)的DCM (2ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌3小时，加入水和DCM，加入K₂CO₃ 10%碱化，加入NaCl固体使其饱和并将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(38)，为油状物。

下列化合物使用与实施例A.9相同的程序，通过分别用溴丙炔、苯磺酰氯或2-噻吩基甲基甲磺酸酯替代2-溴丙烷制备。

实施例A.10

于N₂下反应。于-78℃将BuLi (1.6M在己烷中) (4.8 ml, 7.70 mmol)逐滴加到噻唑(0.5 ml, 7.05 mmol)的Et₂O (5 ml)溶液中，然后将混合物搅拌30分钟。加入中间体(5)(1.44 g, 6.41mmol)的Et₂O (7 ml)溶液，然后搅拌混合物并使其达到室温2小时。加入水及EtOAc，将有机层分离，用水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(50 g, 15-40µm,庚烷/EtOAc 80/20至庚烷/EtOAc 50/50)。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(44)。

将中间体(44) (1.05 g, 3.38 mmol)于HCl (37%在H₂O中) (7ml)中的混合物于密封试管中使用单模微波(Biotage Initiator EXP 60)以范围从0至400W的输出功率于140℃加热1小时。将反应混合物倒入K₂CO₃(10%水溶液)，将有机层分离，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到0.23g的残余物(1)。将水层蒸发至干，将固体悬浮于DCM并搅拌10分钟。将悬浮液过滤并将滤液蒸发至干，得到0.29 g的残余物(2)。将残余物(1)和(2)组合进行纯化，其经硅胶快速层析进行(15-40µm, 30 g, 从CH₂Cl₂至CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH：90/10/1)。收集纯的部分并蒸发至干，得到0.42 g的中间体(45)。

实施例A.11

将二乙氨基三氟化硫(1.24 ml, 10.12 mmol)逐滴加到于5℃冰浴上冷却的中间体(5) (0.570 g, 2.53 mmol)的DCM (6 ml)溶液中，将混合物于5℃搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。将混合物于0℃冷却并加入饱和的NaHCO₃。以CH₂Cl₂萃取有机层，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩，得到中间体(46)。

将TFA (0.39 ml, 5.12 mmol)加到中间体(46) (0.146 g, 0.51 mmol)的DCM(1.5 ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌3小时，加入水和DCM，加入K₂CO₃(10%水溶液)碱化并将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(47)为油状物。

实施例A.12

将中间体(7) (0.3g, 1.05mmol)和Pd/C10%无水(0.06 g)于MeOH(15 ml)中的混合物于室温及大气压下氢化2小时。将反应混合物通过硅藻土短垫过滤，用DCM洗涤并将滤液蒸发至干，得到中间体(48)。

将中间体(48) (0.286 g, 0.995 mmol)和TFA (0.9 ml)于DCM (6ml)中的混合物于室温搅拌30分钟，然后将反应混合物倒入K₂CO₃(10%水溶液)中并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(49)。

实施例A.13

于N₂下反应。微波条件：Biotage引发剂60, 80℃, 20分钟。将中间体(38) (0.45g, 1.26 mmol)和2-氯苯基硼酸(0.236 g, 1.51mmol)于K₂CO₃(2 M, 1.26 ml)和乙二醇二甲醚(5 ml)中的溶液通入N₂吹洗10分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(0) (0.146 g, 0.126mmol)。将混合物依上述条件照射，冷却至室温，加入水和DCM，将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将残余物以制备型液相层析于(硅胶5µm, 150 x 30.0 mm)上纯化。流动相(100% DCM)。收集所需部分并蒸发溶剂，得到中间体(50)。

将中间体(50) (0.3 g, 0.938 mmol)和TFA (0.9 ml)于DCM (6 ml)中的混合物在室温搅拌30分钟，然后将反应混合物倒入K₂CO₃(10%水溶液)中并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(51)。

下列化合物使用与实施例A.13相同的程序，通过分别用2-甲基苯基硼酸、1-甲基-1H-吡唑-5-硼酸频哪醇酯、呋喃-2-硼酸、2-氟苯基-硼酸、呋喃-3-硼酸、2-氰基苯基硼酸、5-二甲基异噁唑-4-硼酸、吡啶-3-硼酸、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑、苯甲基溴化锌、2-氯吡啶-3-硼酸、嘧啶基-5-硼酸频哪醇酯、1-boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯、5-甲基呋喃-2-硼酸或4-甲氧基-3-吡啶基硼酸替代2-氯苯基硼酸制备。

实施例A.14

将中间体(34) (2.798 mmol)、乙酸钯(II) (47% Pd) (0.14 mmol)、K₂CO₃(4.198mmol)、三甲基乙酸(0.84 mmol)和三环己基四氟硼酸鏻(0.196 mmol)置于密封试管中用N₂吹洗。加入噻唑(4.198 mmol)和DMA (10 ml)并将反应混合物于100℃加热过夜。加入水和EtOAc，将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(柱30g, 15-40µm，庚烷/EtOAc 80/20至庚烷/EtOAc 60/40)。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(67)。

将中间体(67) (0.24 g, 0.821 mmol)的TFA (0.8 ml)和DCM (5 ml)溶液于室温搅拌30分钟，然后将反应混合物倒入K₂CO₃(10%水溶液)并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到0.1 g的中间体(68)。

实施例A.15

将Pd(OAc)₂(1.3 mg, 0.0056 mmol)于氮气压下加到中间体(34) (0.1 g, 0.28mmol)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷(4.6 mg, 0.011 mmol)和乙酸钾(0.041 g, 0.42 mmol)的EtOH (0.25 ml)和THF (2 ml)溶液中。将混合物物置于不锈钢高压釡中于5巴的一氧化氮下，于100℃搅拌18小时，得到中间体(69)。

将中间体(69) (0.2 g, 0.711 mmol)于HCl (4M在二噁烷中) (2 ml)中的溶液在室温下搅拌30分钟，然后将其蒸发至干，得到0.13 g的中间体(70)。

实施例A.16

将Pd(OAc)₂(25 mg, 0.112 mmol)于氮气压下加到中间体(34) (2.0 g, 5.6mmol)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷(92 mg, 0.22 mmol)和乙酸钾(0.82 g, 8.4 mmol)的EtOH (5 ml)和THF (40 ml)溶液中，然后将混合物物置于不锈钢高压釡中于5巴的一氧化氮下，于100℃搅拌18小时。将反应混合物倒入水和EtOAc中，将有机层用水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(15-40µm, 40g,庚烷/EtOAc 90/10至庚烷/EtOAc 70/30)。收集纯的部分并蒸发至干，得到0.61 g的中间体(71)。

将中间体(71)(0.3 g, 1.18 mmol)、二甲基胺的THF溶液(2 M, 1.18 ml, 2.37mmol)、EDCI (0.27 g, 1.42 mmol)、HOBt (0.19 g, 6.21 mmol)和三乙胺(0.25 ml, 1.78mmol)于DCM (3 ml)和THF (3 ml)中的混合物在室温搅拌过夜。加入水和DCM，将有机层分离，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到0.37 g的中间体(72)。

将中间体(72) (0.37 g, 1.32 mmol)的HCl (4M在二噁烷中) (4 ml)溶液于室温搅拌30分钟，然后将反应混合物倒入K₂CO₃(10%水溶液)并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到中间体(73)。

实施例A.17

将中间体(71) (0.3 g, 1.18 mmol)、1,1,1,3,3,3-六甲基二硅氮烷(0.23 g,1.42 mmol)、EDCI (0.27 g, 1.42 mmol)、HOBt (0.19 g, 6.21 mmol)和三乙胺(0.25 ml,1.78 mmol)于DCM (3 ml)和THF (3 ml)中的混合物于室温搅拌过夜。加入水和DCM，将有机层分离，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(15-40µm, 10 g,从CH₂Cl₂至CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH：94/6/0.1)。收集纯的部分并蒸发至干，得到0.16g的中间体(74)。

将中间体(74) (0.16 g, 0.634 mmol)的HCl (4M在二噁烷中) (2 ml)溶液于室温搅拌30分钟，然后将其蒸发至干，得到0.1 g的中间体(75)。

实施例A.18

搅拌中间体(34) (0.2 g, 0.56 mmol)、二硼酸二频哪醇酯(0.171 g, 0.67mmol)和乙酸钾(0.165 g, 1.68 mmol)的1,4-二噁烷(2 ml)溶液并以N₂脱气10分钟。加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II) (0.041 g, 0.056 mmol)并将反应混合物使用单模微波(Biotage Initiator EXP 60)以范围从0至400 W的输出功率于100℃加热20分钟。加入水和EtOAc，将有机层分离，用水和盐水先后洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(10g, 15-40µm, 庚烷/EtOAc 85/15至庚烷/EtOAc 70/30)。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(76)。

搅拌中间体(76) (0.45 g, 1.34 mmol)和2-溴-5-甲基-1,3,4-噻二唑(0.288 g,1.61 mmol)于K₂CO₃(2 M, 1.34 mL, 2.69 mmol)和乙二醇二甲醚(5ml)中的溶液并以N₂脱气10分钟。加入四(三苯基膦)钯(0) (0.155 g, 0.134 mmol)并将反应混合物使用单模微波(Biotage Initiator EXP 60)以范围从0至400 W的输出功率于150℃加热5分钟。加入水和EtOAc，将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(柱30 g, 15-40µm, DCM至DCM/MeOH/NH₄OH：98/2/0.1)。收集纯的部分并蒸发至干，得到中间体(77)。

将中间体(77) (0.14 g, 0.455 mmol)的HCl(4M的二噁烷溶液) (2 ml)溶液于室温搅拌30分钟，然后将反应混合物倒入K₂CO₃10%水溶液中并用DCM萃取。将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干，得到81 mg的中间体(78)。

实施例A.19

于-78℃、氮气下，将BuLi (1.6M在己烷中) (4.2 ml, 6.66 mmol)逐滴加到1-甲基咪唑(0.53 ml, 6.66 mmol)的THF (5 ml)溶液中，然后将生成的混合物于0℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至-78℃，加入中间体(5) (1.0 g, 4.44 mmol)的THF (10 ml)溶液。将混合物于-78℃搅拌2小时，然后使其达到室温并搅拌过夜。加入水和EtOAc，将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将得到的残余物经硅胶快速层析纯化(15-40µm, 30 g, 从CH₂Cl₂至CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH：95/5/0.1)。收集纯的部分并蒸发至干，得到0.54 g的中间体(79)。

将中间体(79) (0.54 g, 1.76 mmol)在HCl (37%在H₂O中) (5 ml)中的混合物于密封试管中使用单模微波(Biotage Initiator EXP 60)以范围从0至400 W的输出功率于140℃加热1小时。将反应混合物蒸发至干，得到0.47 g的中间体(80)。

实施例A.20

此反应在无水的条件中，于氩气压下进行并以TLC监测(硅胶, 石油醚/乙酸乙酯1/1, UV/PMA)。将正丁基锂2.5M的己烷溶液(4.28 ml, 10.7 mmol)于-20℃逐滴加到(5min)二异丙基胺(1.51 ml, 10.7 mmol)的THF(16 ml)溶液中。将混合物于-20℃搅拌15分钟，然后冷却至-78℃。于-78℃加入(5 min)中间体(95) (2.00 g, 8.88 mmol)的THF (20ml)溶液。将混合物于-78℃搅拌2小时。于-78℃加入2-[N,N-双(三氟甲基-磺酰基)氨基]吡啶(3.50 g, 9.77 mmol)的THF (12.5 ml)溶液(5分钟)。然后使混合物回温至室温并搅拌17小时。将混合物于50℃搅拌4小时。通过加入饱和的氯化铵水溶液(100 ml)猝灭混合物并用乙酸乙酯(3 x 100 ml)萃取。将合并的有机层干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩。将二氯甲烷(50 ml)加到所得到的残余物中(6.07 g)，然后将混合物过滤，得到1.30 g的白色固体。将滤液浓缩，然后经硅胶快速柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯100/0至60/40)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到1.02 g的中间体(81)。

此反应于氩气压下进行并经TLC监测(硅胶, 石油醚/乙酸乙酯8/2, UV/PMA)。将5-乙酰基-2-噻吩基硼酸(0.057 g, 0.336 mmol)和2M碳酸钾水溶液(0.280 ml, 0.560mmol)加到中间体(81) (0.100 g, 0.280 mmol)的1,2-二甲氧乙烷(5 ml)溶液中。将混合物通入氩气吹洗并加入四(三苯基膦)钯(0) (0.032 g, 0.028 mmol)。然后将混合物于80℃加热过夜。将混合物冷却至室温，然后加入水(10 ml)和乙酸乙酯(10 ml)。将有机层分离，用水(10 ml)和盐水(10 ml)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并于真空下蒸发至干。残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯 8/2)。收集所需部分并蒸发溶剂，得到0.076 g的中间体(82)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行并经TLC监测(硅胶, 二氯甲烷/甲醇9/1,UV)。将氯化氢4M的二噁烷溶液(3.33ml, 13.3mmol)加到中间体(82) (0.444 g,1.33mmol)的二噁烷(9 ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌70小时，然后浓缩至干，得到0.370 g的中间体(83)。

下列化合物使用与实施例A.20b/A.20c相同的程序，通过分别用4-甲基噻吩-2-硼酸、2-氯噻吩-3-硼酸、4-甲基-3-噻吩-硼酸、2-乙酰基-3-噻吩硼酸、5-氰基噻吩-2-硼酸、5-氯-噻吩-2-硼酸、5-甲基噻吩-2-硼酸频哪醇酯、3-甲基-噻吩-2-硼酸频哪醇酯或3-甲氧基噻吩-2-硼酸频哪醇酯替代5-乙酰基-2-噻吩基硼酸制备。

实施例A.21

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯9/1, PMA)。将甲基锂1.6M的乙醚(3.29 ml, 5.26 mmol)溶液于0℃加到碘化亚铜(I) (0.794 g, 4.17 mmol)的THF(5.0 ml)悬浮液中。1小时后，于0℃通过导管加入中间体(81) (0.355 g, 0.993 mmol)的THF (2.1 ml)溶液，以THF (2.1 ml)冲洗。将混合物于室温下搅拌过夜。以饱和NH₄Cl水溶液(14 ml)猝灭混合物并蒸发至干。残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：戊烷/乙酸乙酯95/5)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到0.180 g的中间体(93)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯9/1, PMA)。将氯化氢4M的二噁烷溶液(2.02 ml, 8.06 mmol)加到中间体(93)(0.180 g, 0.806 mmol)的1,4-二噁烷(4.3 ml)溶液中，将溶液于室温搅拌65小时，然后浓缩至干，得到0.141 g的中间体(94) (110%)。

实施例A.22

此氢化作用在无水的条件下进行并经TLC监测(硅胶, 石油醚/乙酸乙酯50/50,显影剂：UV/PMA)。将中间体(4) (6.93 g, 31.0 mmol)的THF (180 ml)溶液于室温(大气压)以披钯碳，10重量%承载量(1.65 g)作为催化剂氢化15小时。于硅藻土上(clarcel)将催化剂滤出，以二氯甲烷(50 ml)冲洗滤饼并将合并的滤液于减压下浓缩至干。将得到的残余物(7.26 g)经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯80/20至50/50)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到6.70 g的中间体(95)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯6/4, DCIP)。将三氯化镧-锂复合物0.6M的THF溶液(3.70 ml, 2.22 mmol)加到中间体(95) (0.500 g, 2.22 mmol)的THF(15 ml)溶液中。将混合物于室温下搅拌1小时，然后冷却至0℃。逐滴加入乙基溴化镁1.0M的THF溶液(2.66 ml, 2.66 mmol)并使反应混合物升温至室温及搅拌18小时。通过加入饱和NH₄Cl水溶液(50 ml)猝灭混合物并以乙酸乙酯(3 x50 ml)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将得到的残余物(0.635 g)经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯9/1至7/3)。收集产物部分并蒸发溶剂。将得到的残余物(0.410 g)经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯8/2)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到0.235 g的中间体(96)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并以1H NMR监测。将HCl的二噁烷溶液(4M, 2.30 ml, 9.20 mmol)加到中间体(96) (0.235 g, 0.920 mmol)的二噁烷(2 ml)溶液中。将反应混合物于60℃搅拌18小时。冷却至室温后，于玻璃粉上将沉淀滤出并用乙醚(20ml)洗涤，得到0.126 g固体。将滤液浓缩至干，得到0.077 g的残余物。合并固体和残余物并溶于二噁烷(2 ml)。加入4M HCl的二噁烷溶液(2.30 ml, 9.20 mmol)及将混合物于60℃搅拌24小时，然后于100℃搅拌72小时。将反应混合物浓缩至干，得到0.158 g的中间体(97)。

实施例A.23

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯1/1, PMA)。于0℃，经30分钟期间，将硼氢化钠(0.893 g, 23.6 mmol)分批加入到中间体(95) (2.66 g, 11.8 mmol)的MeOH(60 ml)溶液中。将反应混合物于0℃搅拌1小时，然后浓缩至干。将残余物用乙酸乙酯(200 ml)稀释并用水(100 ml)、1M盐酸水溶液(100 ml)和盐水(100 ml)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到2.27 g的中间体(98)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯1/1, PMA)。于0℃，将甲磺酰氯(0.930 ml, 11.9 mmol)逐滴加入中间体(98) (2.27g, 9.98 mmol)和三乙胺(4.17 ml, 29.9 mmol)的DCM (50 ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌1小时并浓缩至干。将残余物以乙酸乙酯(200 ml)稀释并用水(100 ml)、盐水(100ml)、1M盐酸水溶液(100 ml)和盐水(100 ml)再次洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将得到的残余物(2.52 g)经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 8/2至5/5)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到2.39 g的中间体(99)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 8/2, 茚三酮/PMA)。将中间体(99) (0.300 g, 0.982 mmol)溶于DMF(3 ml)并将混合物冷却至0℃。加入吡咯(0.102 ml, 1.47 mmol)和氢化钠60%的矿物油分散液(0.0589g, 1.47 mmol)，并将反应混合物于室温搅拌18小时。将反应混合物以乙酸乙酯(50 ml)稀释并用水洗涤(2 x 50 ml)，然后用盐水(3 x 50 ml)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将得到的残余物(0.290 g)经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 98/2至95/5, 然后90/10)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到0.175 g的中间体(100)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 6/4, PMA)。将4M HCl的二噁烷溶液(1.58 ml, 6.33 mmol)加到中间体(100)(0.175 g, 0.633 mmol)的二噁烷(3 ml)溶液中。将反应混合物于50℃搅拌2小时并浓缩至干，得到0.135 g的中间体(101)。

下列化合物使用与实施例A.23c/A.23d相同的程序，通过分别用四唑、吡唑、1,2,4-三唑、1,2,3-三唑或苯酚替代吡咯制备。

实施例A.24

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 8/2, 茚三酮/PMA)。将甲醇钠25重量%的甲醇溶液(0.449 ml, 1.96 mmol)加到中间体(99) (0.300 g, 0.982 mmol)的MeOH (4 ml)溶液中。将混合物回流搅拌20小时。将反应混合物浓缩至干。将残余物以乙酸乙酯(50 ml)稀释并以水(50 ml)，然后用盐水(50 ml)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将得到的残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 100/0至97/3, 然后1/1)。收集产物部分并蒸发溶剂，得到0.182 g的中间体(109)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯, 8/2, 茚三酮/PMA)。将4M HCl的二噁烷溶液(1.88 ml, 7.54 mmol)加到中间体(109) (0.182 g, 0.754 mmol)的二噁烷(4 ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌18小时，然后于50℃搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干，得到0.139 g的中间体(110)。

某些用于制备最终化合物的中间化合物例如可从市面上购得。

B. 最终化合物的合成

实施例B.1

将中间体(3) (9.4 g, 36.9 mmol)、中间体(9) (8.2 g, 44.3 mmol)、EDCI (8.5g, 44.3 mmol)、羟基苯并三唑(6.0 g, 44.3 mmol)和三乙胺(15.4 ml, 0.111 mmol)于CH₂Cl₂(160 ml)和THF (160 ml)中的混合物于室温搅拌过夜。加入水(175 ml)，将沉淀滤出，用水/EtOH (50 ml)洗涤。将固体悬浮于EtOH (50 ml)中并搅拌15分钟。将生成的悬浮液过滤并于真空下以70℃干燥，得到7.3 g的化合物(14)，为白色粉末(mp = 266℃),([α]_D ²⁰ = -105.1°(589 nm, c 0.1275 w/v%, CH₂Cl₂, 20℃)。

。

实施例B.2

将中间体(14) (5.8 g, 30.32 mmol)、中间体(3) (7.72 g, 30.32 mmol)、1-羟基苯并三唑(4.92 g, 36.38 mmol)、EDCI (6.97 g, 36.38 mmol)和三乙胺(14.71 mL,106.12 mmol)于CH₂Cl₂(100 ml)和THF(100 ml)中的溶液于室温搅拌过夜。将混合物倒入水中。将沉淀滤出并以EtOH洗涤二次，及于真空下于65℃干燥。将此沉淀从EtOH中结晶，过滤并于真空下于62℃干燥，得到9.02 g的化合物(44)，为白色粉末，(mp = 264℃) ([α]_D ²⁰= +170.12° (589 nm, c 0.2075 w/v%, CH₂Cl₂, 20℃))。

。

实施例B.3

将中间体(19) (21.1 g, 81.4 mmol)、中间体(3) (17.3 g, 67.8 mmol)、1-羟基苯并三唑(11.0 g, 81.4 mmol)、EDCI (15.6 g, 81.4 mmol)和三乙胺(47 ml, 0.339mol)于CH₂Cl₂ (350 ml)和THF(350 ml)中的溶液在室温搅拌过夜。向混合物中加入水。将沉淀滤出，用水/EtOH洗涤，然后用EtOH洗涤并于真空下于70℃干燥，得到12.7 g的化合物(40)，为白色粉末(mp = 271℃) ([α]_D ²⁰ = +116.08° (589 nm, c 0.2145 w/v%, CH₂Cl₂,20℃))。

化合物(41)依照相同程序通过中间体(20)与中间体(3)的反应类似地制备。

。

实施例B.4

此反应于Ar-气压下进行并经TLC监测(硅胶, CH₂Cl₂/甲醇/三乙胺95/5/0.1, UV/PMA)。将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(.HCl) (1.70 g, 8.87 mmol)加到中间体(3) (2.02 g, 7.39 mmol)、粗品顺式六氢-环戊二烯并[C]吡咯-5(1H)酮(1.85 g, 最高8.89 mmol)、1-羟基苯并三唑单水合物(1.36 g, 8.87 mmol)和N-乙基二异丙基胺(6.32ml, 36.9 mmol)于DMF(75 ml)中的混合物中。将混合物于室温下搅拌18小时过夜。将混合物于减压下浓缩，以二氯甲烷(150 ml)稀释并用饱和NaHCO₃水溶液(100 ml)洗涤。将水层以二氯甲烷(2 x 150 ml)反萃取。将合并的有机层用盐水洗涤(400 ml)，干燥(Na₂SO₄)，过滤并于减压下浓缩至干。将得到的残余物经硅胶快速柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/0至94/6)。收集产物部分并蒸发溶剂。将碱性水层再次以二氯甲烷(3 x 300 ml)萃取。将合并的有机层用盐水(900 ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并减压下浓缩至干。将得到的残余物经硅胶快速柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100/0至94/6)。收集产物部分并蒸发溶剂。将所需残余物合并，得到1.58 g的中间体(111)。

此反应在无水的条件中于氩气压下进行，并经TLC监测(硅胶, 二氯甲烷/甲醇95/5, UV/PMA)。将三氯化镧-氯化锂复合物0.6M的THF溶液(2.38 ml, 1.43 mmol)加到中间体(111) (0.464 g, 1.43 mmol)的THF (18 ml)悬浮液中。将混合物于室温搅拌1小时，然后冷却至0℃。逐滴加入苯基溴化镁1.0M的THF溶液(3.57 ml, 3.57 mmol)。搅拌反应混合物并回温至室温3天。逐滴加入另外的苯基溴化镁1.0 M的THF溶液(2.85 ml, 2.85 mmol, 2当量)。将混合物于室温再搅拌另外2天。通过加入饱和的氯化铵水溶液(30 ml)使混合物猝灭并以EtOAc (3 x 30 ml)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并于减压下浓缩至干。将得到的残余物(0.801 g)经硅胶快速柱层析纯化(洗脱剂：CH₂Cl₂/MeOH 100/0至95/5)。将收集的产物部分的溶剂蒸发。将残余物以乙醚(2 x 3 ml)研磨，然后于真空下干燥，得到0.077 g的化合物(71)。

实施例B.5

将中间体(23) (0.032 g, 0.097 mmol)、中间体(8) (0.032 g, 0.145 mmol)、EDCI (0.022 g, 0.0116 mmol)、HOBT (0.016 g, 0.116 mmol)和三乙胺(0.049 ml,0.349 mmol)于DCM (1 ml)和THF (1 ml)中的混合物于室温搅拌过夜。加入水，并用DCM萃取混合物，将有机层分离，用水洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发至干。将残余物从EtOH中结晶，将固体滤出，以EtOH洗涤并干燥(真空70℃)，得到0.015 g的化合物(73)。

表F-1列出根据上述实施例之一制备的化合物。

表F-1

C. 化合物鉴定

C1. LCMS

对于本发明化合物的LCMS-特征鉴定，使用下列方法。

通用程序A

LC测量使用UPLC (超效液相层析) Acquity (Waters)系统来进行，其包括带有脱气器的二元泵(binary pump)、自动取样器、二极管阵列检测器(DAD)和下列各方法中所指定的柱，将该柱保持在40℃的温度。液流由柱流向MS检测器。MS检测器配置有电喷雾离子源。毛细管的针电压(needle voltage)为3 kV而源温度(source temperature)于Quattro上(购自Waters的三重四极杆质谱仪)维持在130℃。使用氮作为雾化气体。数据采集以Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统进行。

通用程序B

HPLC测量使用Alliance HT 2795 (Waters)系统进行，其包括带有脱气器的四元泵(quaternary pump)、自动取样器、二极管阵列检测器(DAD)和下列各方法中所指定的柱，该柱保持在30℃的温度。液流由柱被分流至MS光谱仪。MS检测器配置有电喷雾离子源。毛细管的针电压为3 kV而源温度于LCT上(购自Waters的Time of Flight Zspray^TM质谱仪)维持在100℃。使用氮作为雾化气体。数据采集以Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据系统进行。

方法1

除了通用程序A的外：反相UPLC于Waters Acquity BEH (桥接乙基硅氧烷/二氧化硅杂化的) C18柱(1.7 µm, 2.1 x 100 mm)上以0.35 ml/min的流速进行。应用二个流动相(流动相A：95% 7 mM乙酸铵/5%乙腈；流动相B：100%乙腈)运行梯度条件：于3.5分钟内从90%A和10% B (保持0.5分钟)至8% A和92% B，保持2 min并于0.5 min内回到最初的条件，保持1.5分钟。使用2 µl的注射体积。正和负离子化模式的锥孔电压(Cone voltage)为20 V。质谱使用0.1秒的中间扫描延迟于0.2秒内从100扫描至1000而获得。

方法2

除了通用程序A外：反相UPLC于Waters Acquity BEH (桥接乙基硅氧烷/二氧化硅杂化的) C18柱(1.7 µm, 2.1 x 100 mm)上以0.345 ml/min的流速进行。应用二个流动相(流动相A：95% 7 mM乙酸铵/5%乙腈；流动相B：100%乙腈)来运行梯度条件：于2.18分钟内从84.2% A和15.8% B (保持0.49分钟)至10.5% A和89.5% B，保持1.94 min并于0.73 min内回到最初的条件，保持0.73分钟。使用2 µl的注射体积。正和负离子化模式的锥孔电压为20V。质谱使用0.1秒的中间扫描延迟于0.2秒内从100扫描至1000而获得。

方法3

除了通用程序B外：反相UPLC于Waters X-bridge C18柱(3.5 µm, 4.6 x 100 mm)上以0.8 ml/min的流速进行。应用二个流动相(流动相A：100% 7 mM乙酸铵；流动相B：100%乙腈)来运行梯度条件：于4.5分钟内从80% A和20% B (保持0.5分钟)至90% B，90% B进行4分钟并以最初条件再平衡3分钟。使用5 µl的注射体积。正和负离子化模式的锥孔电压为20V。质谱使用0.3秒的中间扫描延迟于0.4秒内从100扫描至1000所获得。

方法4

除了通用程序B外：反相UPLC于Waters Atlantis C18柱(5 µm, 3.9 x 100 mm)上以0.8 ml/min的流速进行。应用三个流动相(流动相A：100% 7 mM乙酸铵；流动相B：100%乙腈；流动相C：0.2%甲酸+99.8%超纯水))来运行梯度条件：于4.5分钟内从50% A和50% C (保持1.5分钟)至10% A，80% B和10% C，保持4分钟并以最初条件再平衡3分钟。使用5 µl的注射体积。正和负离子化模式的锥孔电压为20 V。质谱使用0.3秒的中间扫描延迟于0.4秒内从100扫描至1000来获得。

方法5

HPLC测量使用HPLC 1100/1200 (Agilent)系统进行，其包括带有脱气器的四元泵、自动取样器、二极管阵列检测器(DAD)和下列各方法中所指定的柱，该柱保持在室温。MS检测器(MS-Agilent simple quadripole (单一四极杆))配置有电喷雾-APCI离子源。使用氮作为雾化气体。数据采集以Chemstation数据系统进行。

反相UPLC于Nucleosil C18柱(3 µm, 3 x 150 mm)上以0.42 ml/min的流速来进行。应用二个流动相(流动相A：水/TFA(0.1%)；流动相B：100%乙腈)来运行梯度条件：从98%A进行3分钟，于12分钟内至100% B，100% B进行5分钟，然后于2分钟内回到98% A，并以98%A再平衡6分钟。使用2 µl的注射体积。毛细管电压为2 kV，电晕放电保持在1 µA且源温度维持在250℃。可变电压用于碎裂器(fragmentor)。质谱以电喷雾离子化，而APCI以正电模式(positive mode)，通过从100扫描至1100 amu获得。

表C.1：LC/MS数据

C2. 熔点

对于许多化合物而言，熔点用具有线性温度梯度的加热板、滑动指示器和摄氏温标所组成的Kofler热台获得。

对于许多化合物，熔点使用示差扫描热量分析仪(DSC)测定。以10℃/分钟的温度梯度由25℃开始测量熔点。最大温度为350℃。

对于许多化合物，熔点使用Büchi熔点测定仪B-560获得。加热介质为金属块。样本的熔点以放大透镜和大光度对比(big light contrast)以肉眼观察。熔点以3或10℃/分钟的温度梯度来测量。最大温度为300℃。

其余的熔点使用开放的毛细管测定。

表C.2：熔点数据

D. 药理学实施例

D.1 FabI酶抑制作用：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) FabI酶抑制分析

FabI酶抑制分析于半区384-孔微量滴定板中进行。以40-µl含100 mM NaADA, pH6.5 (ADA = N-[2-乙酰氨基]-2亚氨基二乙酸)、250 µM巴豆酰基-CoA、625 µM NADH和50 µg/ml金黄色葡萄球菌ATCC 29213 FabI的分析混合物来评估化合物。抑制剂典型地于50至0.39 µM的范围内变化。将反应混合物于室温培养30分钟并通过加入200 mM Tris缓冲液(pH 9.0)产生pH-移位而停止反应。通过测量于340的吸收度变化来监测NADH的消耗量。比较样本读数与阴性(无化合物)和阳性(无酶)对照品的读数，测定化合物的酶活性的抑制百分比。以最小平方法拟合最佳拟合曲线。由此得到造成50%酶活性抑制的IC₅₀-值(以µg/ml表示)。

表D.1：金黄色葡萄球菌FabI IC₅₀值

D.2 体外试验化合物对抗各种细菌株的抗菌活性的方法

制备敏感性试验的细菌悬浮液

使用下列细菌：金黄色葡萄球菌ATCC 29213、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)ATCC 700788和大肠杆菌ATCC 35218。将用于此研究的细菌于含100 ml Mueller-Hinton培养液(Difco cat. nr. 0757-17)的烧瓶中，于无菌去离子水中，伴有震荡下于37℃生长过夜。将储备液于-70℃储存直到使用。

将细菌于含5%羊血的胰蛋白酶大豆琼脂培养板(Becton Dickinson cat. nr.254053)于35℃有氧的条件下培养18-24小时(第一代)。对于第二代，将新鲜的Mueller-Hinton培养液以5-10个菌落接种并于35℃生长过夜，直到有氧的条件下达到混浊(达到对数期)。然后将细菌悬浮液调整至0.5 McFarland密度并进一步以Mueller Hinton肉汤培养基稀释1:100。将其用作接种物。

结果(对于STA ATCC 29213)在下表D2中描述。

抗菌药敏感性试验：IC ₉₀ 测定

MIC分析通过肉汤微量稀释法，在含二倍系列稀释的化合物的最终体积0.1 ml的Mueller Hinton肉汤的96-孔格式板(平底微量滴定版)中进行，并以5x10⁵ CFU/ml的细菌接种(根据CLSI指南的标准接种物大小)。抑制剂典型地在63至0.49 µM的范围内变化。分析的最终的DMSO浓度为1.25 % (最大可耐受DMSO浓度=6%)。在测试了人血清对于化合物对抗金黄色葡萄球菌的活性的影响的测定中，以10%的终浓度添加人血清。将板于35℃培养16-20小时。在培养结束时，对细菌生长进行荧光计定量。为此，将刃天青添加至所有孔中，并将板再孵育。孵育时间取决于细菌的种类。从蓝色到粉红色的颜色变化指示细菌的生长。在计算机控制的荧光计(Fluoroskan Ascent FL, Labsystems)中，在540 nm的激发波长和590nm的发射波长下读取荧光。根据标准方法计算由化合物实现的生长抑制%。IC₉₀(以µg/ml表示)被定义为是细菌生长的90%抑制的浓度。同时测试一组参比化合物来用于QC验证。

在下表D2 (STA + 10% HS)中对结果进行了描述。

细胞毒性分析

化合物的细胞毒性使用MTT分析来评估。将生长于96-孔板的人类HelaM细胞暴露于试验化合物的系列稀释液(最终体积0.2 ml)并于37℃和5% CO₂下培养72小时。抑制剂典型地在25至0.8 µM的范围内变化。分析中最终的DMSO浓度为0.5 %。加入MTT (3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑鎓，一种四唑)并仅在活细胞中还原成紫色的甲臜(formazan)。通过加入100 µl 2-丙醇使甲臜结晶溶解。通过测量还原的甲臜(在540 nm和690 nm处给出紫色颜色)的吸光度来确定细胞活力。从在540 nm处测定的吸光度自动减去在690 nm处测定的吸光度，以消除非特异性吸收的影响。根据标准方法来计算由化合物实现的细胞毒性百分比。细胞毒性报告为CC₅₀，这是造成细胞活力降低50%的浓度。

在下表D2 (TOX HELAM)中对结果进行了描述。

表D2 –代表性实施例的数据

实施例E

E.1 热力学溶解度/在水溶液中的溶解度

pH溶解度分析是在环境温度下以4天的时期进行的。进行了一项饱和溶解度研究，以确定在特定缓冲溶液中的最大溶解度。将化合物添加至各自的缓冲溶液中，直至达到饱和点。随后在环境温度下摇动烧瓶4天。4天之后，将溶液过滤并注入到UPLC上，并且使用通用HPLC方法对浓

NT = 未测试。

E.2抗微生物活性谱

按照临床和实验室标准协会(CLSI)抗好氧菌(CLSI M07-A8)的方法(见临床和实验室标准协会，2009年，抗好氧生长的细菌进行稀释抗微生物药敏试验的方法，CLSI文件M07-A8，第29卷，第2期)，通过肉汤微量稀释法，采用阳离子调节的Mueller Hinton (米勒-海顿)肉汤(CA-MHB)培养基(这种培养基用于除了流感嗜血杆菌以外的大多数生物体，而流感嗜血杆菌使用嗜血杆菌测试培养基(HTM)肉汤)，对最小抑菌浓度(MIC)进行确定。在表中可以找到对单独生物的描述。在可能的情况下，对ATCC标准菌株进行试验。

对用于药敏试验的接种密度进行标准化，以给出大约5 × 10⁵ CFU/mL的最终接种物。将肉汤MIC确定为药物最低浓度，该药物最低浓度可在35℃-37℃孵育16-24小时(取决于物种)之后阻止可见的生长。

表：对测试的单独生物的描述

这些化合物的储备液以1 mg/mL的浓度在DMSO中制备。利奈唑胺以2 mg/mL的浓度在DMSO中制备。将所有化合物的储备液稀释成CA-MHB，得到一系列的2倍稀释液，取决于被测试的生物体的灵敏度。

结果（如果可获得的话）

E.3体内药代动力学以及口服生物利用度

在单次静脉内(i.v.)快速推注以及口服(p.o.)给药之后，在雄性Swiss小鼠(伺喂)中，对实施例化合物的体内药代动力学以及口服生物利用度进行研究。对于i.v.以及p.o.溶液配制物，该化合物被溶解在20% HP-β-CD溶液中。配制物的pH值是约pH 4。所有的i.v.配制物均是等渗的。

结果

E.4体内效力

通过对腹腔内感染的小鼠进行治疗来研究抗菌化合物的体内效力的概念是在1911年针对奥普托欣(optochin)对抗肺炎双球菌而引入的(Morgenroth和Levy，1911年）。该模型的普及来自于其易于使用，同时具有短持续时间的实验、可重现的感染以及简单的终点。

方法

使用甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌菌株ATCC 29213来感染雌性Swiss白化小鼠。将脑心浸液（BHI）肉汤细菌培养物在感染前一天进行接种，在37℃培养过夜，并且在新鲜的BHI肉汤中稀释至所希望的浓度。在腹部的任意侧下象限中进行腹膜内(i.p.)注射大约5 × 10⁹菌落形成单位(CFU)。接种之后，将小鼠关在它们的笼子里，每日观察感染迹象进展或死亡。对于小鼠的治疗，p.o.和 i.v.途径两者均可以使用，并且每个小鼠是通过强饲法或i.v.注射来单独治疗。在此模型中对溶液以及悬浮液两者均进行测试。用于监测感染过程和治疗效果的参数是感染后动物的死亡率或超过3天的存活率。因为死亡也可能是由于毒副作用，包括了用最高剂量的测试化合物(在所述研究中使用混悬剂)治疗的未感染对照组的3只小鼠。

结果

本发明/实例的化合物显示了良好的体内效力特性，例如这些化合物可展现出测量为存活%（按照以上测试）的此类特性。

结果

在使用溶液口服和i.v.给药后，金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)感染的腹膜炎模型中活体内抗菌活性

在各个相应的试验中，对照组小鼠表现出80%和100%的死亡率。

Claims

1.一种化合物，该化合物为

或其药学上可接受的酸加成盐。

2.一种药用组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗活性量的根据权利要求1所述的化合物。

3.一种制备根据权利要求2所述的药用组合物的方法，其中治疗活性量的根据权利要求1所述的化合物与药学上可接受的载体紧密混合。

4.权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于抑制FabI酶的活性。

5.权利要求1所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗细菌感染。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述细菌感染由表达FabI酶的细菌引起。