EA043636B1

EA043636B1 - АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ 3,4-ДИГИДРО-1Н-[1,8]НАФТИРИДИНОНЫ, ЗАМЕЩЕННЫЕ ЦИКЛОПЕНТА[с]ПИРРОЛОМ

Info

Publication number: EA043636B1
Application number: EA201490438
Authority: EA
Inventors: Жером Эмиль Жорж Гийемон; Давид Франсис Ален Лансуа; Магали Мадлен Симон Мотт; Анил Коул; Уэнди Миа Альберт Балеманс; Эрик Пьер Александр Арну
Original assignee: Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси
Priority date: 2011-08-10
Filing date: 2012-08-10
Publication date: 2023-06-07

Description

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), ингибирующим активность фермента Fabl, которые поэтому являются полезными для лечения бактериальных инфекций. Оно также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и химическим способам получения таких соединений.

Соединения настоящего изобретения являются антибактериальными соединениями, ингибирующими белок Fabl NADH-зависимый фермент еноил-ацил-переносящий белок (АСР) редуктаза в пути биосинтеза жирных кислот. Синтаза жирных кислот (FAS) участвует в общем пути биосинтеза насыщенных жирных кислот всех организмов, но структурная организация FAS среди них значительно различается. Отличительными характеристиками FAS позвоночных и дрожжей является то, что все виды ферментативной активности записываются на одной или двух полипептидных цепях, и то, что ацилпереносящий белок (АСР) присутствует в виде комплекса. В отличие от этого в бактериальной FAS каждая стадия синтеза катализируется определенным монофункциональным ферментом, а АСР представляет собой отдельный белок. По этой причине существует возможность селективного ингибирования бактериальной FAS путем блокирования одной из стадий синтеза, используя ингибирующий агент. NADH-зависимая еноил-АСР редуктаза (Fabl) участвует в последней стадии четырехстадийной реакции, участвующей в каждом цикле бактериального биосинтеза жирных кислот. Так, фермент Fabl является ферментом биосинтеза в общем пути синтеза бактериального биосинтеза жирных кислот.

Было показано, что фермент Fabl представляет собой важнейшую цель в основных патогенах, таких как Е. Coli (Heath et al., J. Biol. Chern. 1995, 270, 26538; Bergler et al., Eur. J. Biochem. 2000, 275, 4654). Следовательно, соединения, ингибирующие Fabl, могут быть полезны в качестве антибактериальных средств.

Соединения, обладающие ингибирующем действием в отношении фермента Fabl, раскрыты в публикациях WO-01/26652, WO-01/26654 и WO-01/27103. Замещенные соединения нафтиридинона, обладающие ингибирующим действием в отношении Fabl, раскрыты в публикациях WO-03/088897, WO2007/043835 и WO-2008/098374. Международная патентная заявка WO 2007/053131 раскрывает различные соединения для предположительного применения в качестве ингибиторов Fabl. Международная патентная заявка WO 2011/061214 также раскрывает различные соединения для предположительного применения в качестве ингибиторов Fabl. Однако ни один из этих документов не раскрывает конденсированный бициклический фрагмент, который присоединен непосредственно к карбонильному фрагменту, находящемуся в положении а к алкену.

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I)

где А представляет собой -ОС- или связь ⁷⁷⁷⁷⁷⁷ представляет собой одинарную или двойную связь, X представляет собой углерод или азот, и, если X представляет собой азот, то связь представляет собой одинарную связь;

Zi представляет собой СН или N;

R¹ является водородом, С^алкилом или галогеном;

R² является водородом, Смалкилом или галогеном;

R³ является водородом, С1.₆алкилом, гидроксилом или галогеном;

R⁴ является водородом; галогеном; С1.₆алкилом; С₂.балкенилом; С₂.бЭлкинилом; С1.₆алкилокси; С1.4алкилоксикарбонилом; аминокарбонилом; моно- или ди(С1.4алкил)аминокарбонилом; арилом; арилокси; арилкарбонилом; арилсульфонилом; гетероарилом; С1.₆алкилом, замещенным цианогруппой; С1.₆алкилом, замещенным арилом или арилоксигруппой; или С1.₆алкилом, замещенным гетероарилом; арил является фенилом; фенилом, замещенным одним, двумя или тремя заместителями, каждый из них в отдельности выбирается из галогена, гидроксила, С^алкила, С1.4алкокси, полигалогснС/^алкила, полигалогенС1.4алкокси, циано-, нитро- и аминогруппы; гетероарил является фуранилом, тиофенилом, пирролилом, пиразолилом, имидазолилом, изоксазолилом, тиазолилом, триазолилом, тетразолилом, изотиазолилом, тиадиазолилом, оксадиазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидинилом, пиразинилом, бензо [1,3] диоксолилом, бензофуранилом, бензотиазолилом, индолилом, 2,3-дигидро-1Н-индолилом, тетрагидротиофенилом или хинолинилом, где каждый гетероарил может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из них в отдельности выбирается из галогена, цианогруппы, С1.₄алкила, С1.₄алкокси, С1.₄алкилкарбонила или фенила;

или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты.

Как использовано в предшествующих определениях термин галоген является общим для атомов фтора, хлора, брома и йода;

С1.₄алкил обозначает углеводородные радикалы с прямой и разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, бутил, 1-метилэтил, 2-метилпропил и т.п.;

С1.₆алкил включает С^алкил и его более высокие гомологи, содержащие 5 или 6 атомов углерода, такие как, например, 2-метилбутил, пентил, гексил и т.п.;

- 1 043636 полигалогенС1-₄алкил определен как полигалоген-замещенный С_1-4алкил (как определено здесь и выше), замещенный 2-6 атомами галогена, такие как дифторметил, трифторметил, трифторэтил и т.п.

Как используется в описании, всякий раз, когда используется термин соединение формулы (I), предполагается, что оно также включает фармацевтические соли присоединения, которые способны образовывать соединения формулы (I), и сольваты, которые могут образовывать соединения формулы (I) или фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы (I).

Определение соединения формулы (I) в сущности включает все стереоизомеры соединения формулы (I) либо в виде чистого стереоизомера, либо в виде смеси двух или более стереоизомеров. Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые представляют собой не совмещаемые друг с другом зеркальные изображения. Смесь 1: 1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь. Диастереомеры (или диастереоизомеры) являются стереоизомерами, которые не являются энантиомерам, то есть они не соотносятся как зеркальные изображения. Если соединение содержит дизамещенную циклоалкильную группу, заместители могут находиться в цис- или транс-конфигурации. Поэтому данное изобретение включает энантиомеры, диастереомеры, рацематы, цис-изомеры, трансизомеры и их смеси.

Абсолютная конфигурация определяется согласно системе Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурация асимметрического атома указана с помощью либо R, либо S. Выделенные соединения, чья абсолютная конфигурация не известна, могут быть обозначены с помощью (+) или (-), в зависимости от направления, в котором они вращают плоскополяризованный свет. Если указан определенный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически свободен от других изомеров, то есть связан с менее чем 50%, предпочтительно менее чем 20%, более предпочтительно менее чем 10%, еще более предпочтительно менее чем 5%, в частности менее чем 2% и наиболее предпочтительно менее чем 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I) указано как (R), то это означает, что соединение практически не содержит (S) изомер; если соединение формулы (I) указано, например, как E, это означает, что соединение практически не содержит Z изомер; если соединение формулы (I) указано, например, как цис, это означает, что соединение практически не содержит транс-изомер.

Термины стереоизомеры или стереохимически изомерные формы ранее и далее в настоящем документе применяются взаимозаменяемо.

Специалисты в данной области техники могут легко определить абсолютную стереохимическую конфигурацию соединений формулы (I) и промежуточных соединений, используемых в их получении, применяя хорошо известные методы, такие как, например, рентгеновская дифракция.

Некоторые соединения формулы (I) могут также существовать в их таутомерной форме. Такие формы, хотя они явно и не указаны в приведенной выше формуле, предназначены быть включенными в объем настоящего изобретения.

Кроме того, некоторые соединения формулы (I) и промежуточные соединения, используемые в их получении, могут проявлять полиморфизм. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любые полиморфные формы, обладающие свойствами, полезными в терапевтическом лечении описанных выше состояний.

Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот, упоминаемые здесь и ранее, включают нетоксичные формы солей присоединения кислот, обладающие терапевтическим действием, которые могут быть образованы соединением формулы (I). Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты можно легко получить путем обработки основной формы такой соответствующей кислотой. Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например соляная или бромоводородная кислота, серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропионовая, гликолевая, молочная, пировиноградная, щавелевая (то есть этандиовая), малоновая, янтарная (то есть бутандиовая), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты.

И наоборот, указанные солевые формы можно превратить путем обработки соответствующим основанием в свободную основную форму.

Соединения формулы (I) могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Термин сольват используется в данном контексте для обозначения молекулярной ассоциации, включающей соединения данного изобретения и одну или несколько молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например, воды или этанола. Термин гидрат используется, если растворителем является вода.

Термин FabI известен в данном уровне техники и относится к бактериальным ферментам, которые предположительно действуют как еноил-ацил переносящий белок (АСР) редуктаза на последней стадии четырех реакций, участвующих в каждом цикле бактериального биосинтеза жирных кислот. Предполагается, что этот фермент широко распространен в бактериях.

Соединения формулы (I), которые можно упомянуть, включают те, в которых:

(i) Z1 представляет собой CH, и, следовательно, соединение формулы I представляет собой следующее:

- 2 043636

где: (ii) если R¹ или R² представляют собой галоген, то они предпочтительно являются F или С1;

(iii) R¹ представляет собой водород или С1_₄алкил и/или (iv) R² представляет собой водород или С1_₄алкил.

Предпочтительные соединения формулы (I) включают те, в которых А представляет собой двойную связь (а не тройную связь), то есть предпочтительно, чтобы А представляло собой V

Представляют интерес соединения формулы (I), которые являются теми соединениями формулы (I), где применяется одно или несколько из следующих ограничений:

a) R¹ и R² представляют собой водород; или

Ь) R³ представляет собой водород; или

с) R³ представляют собой водород, галоген или гидроксил; или

d) R⁴ представляет собой водород или галоген; или

е) R⁴ представляет собой арил; или

f) R⁴ представляет собой С1_₆алкил; или

g) R⁴ представляет собой арилокси или арилсульфонил; или

h) R⁴ представляет собой С1_₆алкил, замещенный арилом; или

i) R⁴ представляет собой гетероарил; или

j) R⁴ представляет собой С1_₆алкил, замещенный гетероарилом; или

к) гетероарил представляет собой фуранил, тиофенил, пиразолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, тиадиазолил, пиридинил или пиримидинил; или

1) X представляет собой углерод; или

m) X представляет собой азот, и связь ⁷⁷⁷⁷⁷¹ представляет собой одинарную связь.

Первая группа соединений является соединениями формулы (I)

R¹ где А представляет собой -С=С- или ^r2 = св язь представляет собой одинарную связь или двойную связь, X представляет собой углерод или азот, и, если X представляет собой азот, то связь ^⁷⁷⁷⁷^ представляет собой одинарную связь;

R¹ является водородом;

R является водородом;

R³ является водородом, гидроксилом или галогеном;

R⁴ является водородом, галогеном; С1_₆алкилом; С1_₆алкилокси; С1_₄алкилоксикарбонилом; аминокарбонилом; моно- или ди(С1_₄алкил)аминокарбонилом; арилом; арилокси; арилсульфонилом; гетероарилом; С1_₆алкилом, замещенным цианогруппой; С1_₆алкилом, замещенным арилом; или С1_₆алкилом, замещенным гетероарилом; арил является фенилом; фенилом, замещенным одним заместителем, выбранным из галогена, С1_₄алкила, С1_₄алкилокси и цианогруппой; гетероарил является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, изоксазолилом, тиазолилом, триазолилом, тетразолилом, тиадиазолилом, пиридинилом или пиримидинилом; где каждый гетероарил может быть замещен одним заместителем, выбранным из галогена, цианогруппы, С1_₄алкила, С1_₄алкилокси или С 1_₄алкил карбонил а;

или их фармацевтически приемлемой солью присоединения кислоты.

Вторая группа соединений формулы (I) является теми соединениями формулы (I), где А представляет собой -С^С-.

Третья группа соединений формулы (I) является теми соединениями формулы (I), где А представR¹ ляет собой ϊ

Предпочтительные соединения формулы (I) включают те, в которых Х-содержащее кольцо представляет собой одно из следующего:

_cj_s одинарный энантиомер (cis) одинарный энантиомер (cis) то есть двойные циклы, содержащие цис-конфигурацию в точке соединения колец (трансконфигурация вызовет напряжение в кольце), которые могут быть рацемическим или одним энантиомерами. Как объясняется здесь и далее, если абсолютная стереохимия одинарного энантиомера не известна/не была известна, хиральные углероды в точке соединения колец могут быть обозначены жирными или штриховыми линиями (а не в виде клина).

-3 043636

Более предпочтительные соединения формулы (I) включают те, в которых конденсированное бициклическое X-содержащее кольцо представляет собой одно из следующего:

где в вышеупомянутых конденсированных двойных циклах соединения могут быть рацемическим или одним энантиомером (если соответствующая симметрия отсутствует, и существование энантиомеров возможно), как описано здесь и выше. Предпочтительно в соединениях формулы (I):

(i) присутствует по меньшей мере один заместитель R³ или R⁴, который не является водородом;

(ii) один из R³ и R⁴ (например, R³) представляет собой водород, гидроксил или галоген (например, фтор), а другой из R³ и R⁴ (например, R⁴) представляет собой заместитель, отличный от водорода;

(iii) R³ представляет собой водород, гидроксил или галоген (например, фтор) и более предпочтительно представляет собой водород (то есть R³ в основном не присутствует);

(iv) R⁴ представляет собой заместитель, отличный от водорода (то есть присутствует заместитель R⁴, который не представляет собой водород);

(v) R⁴ представляет собой заместитель, отличный от водорода, который присоединен к X, в котором любое из указанного выше может быть взято вместе или в комбинации.

Например, (iii), (iv) и/или (v) могут быть взяты в комбинации, чтобы обеспечить особенно предпочтительные соединения формулы (I) ниже

в которых R⁴ представляет собой заместитель, отличный от водорода. Особенно предпочтительные заместители, которые могут быть представлены R⁴ (здесь и в других частях документа), включают:

(i) необязательно замещенный арил;

(ii) необязательно замещенный гетероарил (iii) C_1-6алкил, замещенный арилом или гетероарилом (последние из двух групп арила и гетероарила в свою очередь сами необязательно замещены, как определено в данном документе);

(iv) арилокси (в котором арильный фрагмент необязательно замещен, как определено в данном документе);

(v) арилсульфонил (в котором арильный фрагмент необязательно замещен, как определено в данном документе);

(vi) C_1-6алкил, который является незамещенным (например, этил, метил, изопропил);

(vii) ди(С_1-4алкил)аминокарбонил (например, -C(O)N(CH₃)₂);

(viii) аминокарбонил (-C(O)NH2);

(ix) C_1-4алкилоксикарбонил (например, -С(О)О-СН₂СН₃);

(х) галоген (например, фтор);

(xi) C_2-6алкинил (например, -С=С);

(xii) C_1-6алкокси (например, -ОСН₃).

Особенно предпочтительно, чтобы группа R⁴ содержала ароматический фрагмент, и, следовательно, приведенные выше (i), (ii), (iii), (iv) и (v) являются особенно предпочтительными.

В случае если R⁴ представляет собой приведенный выше (i), то арильная группа предпочтительно является фенилом, причем указанная группа может быть незамещенной или замещенной одним или двумя (например, одним) заместителем, выбранным из C_1-4алкилокси, галогена, C_1-4алкила или цианогруппы (например, OCH3, хлор, фтор, метил или цианогруппа).

В случае, где R⁴ представляет собой приведенный выше (ii), гетероарильная группа является моноциклическим 5- или 6-членным кольцом, содержащим от одного до четырех гетероатомов, например, тиенил (например, 2- или 3-тиенил), пиридил (например, 4-пиридил или 3-пиридил), пиразолил (например, 5-пиразолил, 4-пиразолил или 1-пиразолил), фуранил (например, 2-или 3-фуранил), тиазолил (например, 2-тиазолил), изоксазолил (например, 4-изоксазолил), пирролил (например, 1-пирролил), триазолил (например, 1,2,3-триазол-1-ил, 1,2,3-триазол-2-ил или 1,2,4-триазол-2-ил), тиадиазолил (например, 1,3,4-тиадиазол-2-ил), пиримидинил (например, 5-пиримидинил), тетразолил (например, 1,2,3,4-тетразол2-ил, 1,2,3,4-тетразол-1-ил), имидазолил (например, 2-имидазолил). Такие гетероарильные группы могут быть незамещенными или замещенными одним или двумя (например, двумя или предпочтительно одним) заместителем(ями), выбранными из галогена, цианогруппы, C_1-4алкила (например, C_1-2алкил), С_1-4алкилокси (например, C_1-2алкилокси) и C_1-4алкилкарбонила (например, C_1-2алкилкарбонил), например, -ОСН₃, метил, галоген (например, хлор), цианогруппа и -C(O)-CH₃.

В случае, где R⁴ представляет собой приведенный выше (iii), C_1-6алкильная группа является метилом, то есть -CH3, замещенным арилом (например, фенилом, таким как незамещенный фенил) или гетероарилом (например, 5- или 6-членной моноциклической гетероарильной группой, содержащей один или

- 4 043636 два (например, один) гетероатом(а), таким образом образуя, например, тиенильную группу, такую как 2тиенильная группа; и такая гетероарильная группа предпочтительно является незамещенной).

В случае, где R⁴ представляет собой приведенные выше (iv) или (v), арил предпочтительно является незамещенным фенилом, и, следовательно, группа R⁴ является -О-фенилом или -S(О)₂-фенилом.

Более предпочтительно R⁴ группа представляет собой приведенные выше (i) или (ii), то есть арил или гетероарил. Еще более предпочтительно R⁴ группа представляет собой приведенный выше (i), особенно незамещенный фенил.

Наиболее предпочтительные соединения формулы (I) включают те, в которых X-содержащий конденсированный бициклический фрагмент представляет собой:

r⁴—^R4— в котором R⁴ является таким, как определено в данном документе. Могут быть полезными такие соединения, которые содержат либо N(R⁴) фрагмент, либо C(R⁴) фрагмент непосредственно рядом с двойной связью. Это происходит потому, что форма атома азота (например, являясь по своей природе более плоской по сравнению с CR⁴ фрагментом, который не находится непосредственно рядом с двойной связью), или присутствие двойной связи в X-содержащем кольце может помочь ориентировать R⁴ группу (если она присутствует) таким образом, что соединение в целом (например, с точки зрения ориентации заместителя R⁴) проявляет лучшие/улучшенные связывающие свойства по отношению к бактериальному ферменту FabI. Следовательно, эти соединения данного изобретения могут быть полезными в том смысле, что присутствие двойной связи может приводить к улучшенному связыванию с ферментом FabI или его ингибированию. Следовательно, соединения данного изобретения могут быть полезными соединениями (например, по сравнению с известными соединениями) благодаря этим свойствам, которые могут вследствие этого приводить к лучшей действенности, эффективности и т.п.

Соединения формулы (I) обычно могут быть получены реакцией промежуточного соединения формулы (II) с промежуточным соединением формулы (III) в по меньшей мере одном инертном растворителе и не обязательно в присутствии по меньшей мере одного подходящего связывающего реагента и/или подходящего основания, причем указанный способ дополнительно не обязательно включает перевод соединения формулы (I) в его соль присоединения и/или получение его стереохимически изомерных форм.

Может быть удобным активировать карбоновую кислоту формулы (III) путем добавления эффективного количества ускорителя реакции. Неограничивающие примеры таких ускорителей реакции включают карбонилдиимидазол, N,N'-дициклогексилкарбодиимид или 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимид, гидроксибензотриазол, гексафторфосфат бензотриазолил-окси-трис-(диметиламино)фосфония, гексафторфосфат тетрапирролидинфосфония, гексафторфосфат бромтрипирролидинфосфония или их функциональное производное.

Соединения формулы (I) также могут быть получены реакцией промежуточного соединения формулы (II) с промежуточным соединением формулы (IV), где Y представляет собой гидроксил или галоген. Реакцию можно проводить в инертном растворителе, таком как, например, дихлорметан или диметилформамид, и необязательно в присутствии подходящего основания, такого как, например, диизопропилэтиламин (DIPEA).

? /i=\ /=°

V\Xy^{NH + NH}

R^3N (II)(IV)

Соединения формулы (I), в которых А представляет собой -C(R²)=C(R¹)-, также могут быть получены реакцией промежуточного соединения формулы (V) с промежуточным соединением формулы (VI),

где X_a1 представляет собой подходящую уходящую группу, такую как подходящая галогенидная группа (например, хлор-, йод-и особенно бром-), а другие обозначения, как определено здесь и выше, в подходящих условиях реакции, например, в условиях реакции сочетания в присутствии металлического катализатора, (например, реакция сочетания в присутствии драгоценного металла, где драгоценный металл является, например, на основе палладия), особенно в условиях реакции Хека с использованием предпочтительно катализатора на основе палладия, такой как ацетат палладия, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), бис-(трифенилфосфин)палладия(П) дихлорид, [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(Н) дихлорид или подобные (предпочтительно, чтобы катализатором являл

- 5 043636 ся ацетат палладия), например, необязательно в присутствии подходящего растворителя (например, ацетонитрила или подобного ему), основания (например, аминного основания, такого как N,Nдиизопропиламин или подобного ему) и лиганда (например, трифенилфосфина, три-О-толилфосфина или подобного им). Реакцию можно проводить в запаянной трубке и/или в микроволновой печи.

Исходные материалы и некоторые промежуточные соединения являются известными соединениями, и их можно приобрести или получить согласно традиционным процедурам реакций, обычно известным в данном уровне техники.

Для соединений, в которых Z₁ представляет собой CH, промежуточные соединения (IV) и (VI) могут быть получены, как описано в данном документе, или согласно традиционным процедурам реакций, обычно известным в данном уровне техники. Это также может быть применимо в случае соответствующих промежуточных соединений, в которых Z₁ представляет собой N. Однако такие соединения могут быть также получены в соответствии со следующей схемой:

CAS 16298-03-6

Условия:

a) NBS, ACN, кипячение с обратным холодильником, 3 ч, 70%;

b) LiAlH4 1M в THF, THF, 5°С до комнатной температуры, в течение ночи, 20%;

с) PBr₃, DCM, комнатная температура, в течение ночи, 90%;

f) диметил малонат, NaOMe в МеОН, МеОН, комнатная температура, в течение ночи, 25%;

g) NaOH, МеОН, кипячение с обратным холодильником, 4 ч, HCl, кипячение с обратным холодильником, в течение ночи;

h) DIEA, Pd(OAc)₂, три-О-толилфосфин, ACN, DMF, микроволны, 180°С, 25 мин.

Соединения формулы (I), полученные в описанных здесь и выше способах, могут быть синтезированы в форме рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга, следуя известным из уровня техники процедурам разделения. Эти соединения формулы (I), которые получают в рацемической форме, могут быть переведены в соответствующие формы диастереомерной соли путем реакции с подходящей хиральной кислотой. Упомянутые формы диастереомерной соли затем разделяют, например, с помощью селективной или фракционной кристаллизации, а энантиомеры выделяют оттуда с помощью щелочи. Альтернативным образом для разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) применяют жидкостную хроматографию с использованием хиральной неподвижной фазы. Указанные чистые стереохимические изомерные формы также можно получить из соответствующих чистых стереохимических изомерных форм подходящих исходных материалов при условии, что реакция протекает стереоспецифично. Если необходим определенный стереоизомер, предпочтительно, чтобы указанное соединение было синтезировано стереоспецифическими способами получения. В этих способах преимущественно используют энантиомерно чистые исходные материалы.

Соединения, описываемые в данном документе, являются ингибиторами фермента FabI, как проиллюстрировано примерами ниже (включая фармакологический пример 1). С учетом этих ингибирующих фермент FabI свойств соединения, описываемые в данном документе, полезны в лечении бактериальных инфекций.

Например, эти соединения полезны в лечении бактериальных инфекций, таких как, например, инфекции верхних дыхательных путей (например, отит среднего уха, бактериальный трахеит, острый эпиглоттит, тиреоидит), нижних дыхательных отделов (например, эмпиема, абсцесс легкого), кардиологические (например, инфекционный эндокардит), желудочно-кишечные (например, секреторная диарея, абсцесс селезенки, забрюшинный абсцесс), ЦНС (например, церебральный абсцесс), глаза (например, блефарит, конъюктивит, кератит, эндофтальмит, пресептальный и орбитальный целлюлит, дакриоцистит), почек и мочевыводящих путей (например, эпидидимит, внутрипочечный и околопочечный абсцесс, синдром токсического шока), кожи (например, импетиго, фолликулит, кожные абсцессы, целлюлит, раневые инфекции, бактериальный миозит), а также костей и суставов (например, септический артрит, остеомиелит). Кроме того, соединения могут быть полезны в комбинации с известными антибиотиками.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства, особенно для применения в лечении бактериальных инфекций, в частности, бактериальных инфекций, вызываемых бактериями, экспрессирующими фермент FabI. В дальнейшем настоящие соединения могут применяться в производстве лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций, в частности, бактериальных инфекций, вызываемых бактерией, экспрессирующей фермент FabI.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет способ лечения бактериальных инфекций, который включает введение субъекту, нуждающемуся в нем, соединения формулы (I), ингибирующего фермент FabI.

- 6 043636

Субъект, нуждающийся в лечении, имеет бактериальную инфекцию или был в контакте с инфекционной бактерией, симптомы которой могут быть облегчены путем введения терапевтически эффективного количества соединений настоящего изобретения. Например, у субъекта, нуждающегося в лечении, может быть инфекция, против которой соединения формулы (I) могут быть введены в качестве лечения. В другом примере субъект, нуждающийся в лечении, может иметь открытую рану или ожог, для которых соединения формулы (I) могут быть введены в качестве лечения. Обычно субъект лечат против существующей у него бактериальной инфекции.

У субъекта может быть бактериальная инфекция, вызванная

Bacillus anthracis, Citrobacter sp., Escherichia coll,

Francisella tularensis, Haemophilus influenza, Listeria monocytogenes, Moraxella catarrhalis, Mycobacterium tuberculosis, Neisseria meningitidis, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Salmonella sp., Serratia sp., Shigella sp., Stenotrophomonas maltophilia, Staphylococcus aureus или Staphylococcus epi dermi di s.

Предпочтительно субъекту проводят лечение (профилактическое или терапевтическое), направленное против бактериальной инфекции, вызванной бактерией, которая экспрессирует фермент FabI.

Термин проводить лечение и лечение, как используется в данном документе, относится к лечебному, паллиативному и профилактическому лечению, включая реверсирование, облегчение, замедление прогресса заболевания, расстройства или состояния, к которым применим такой термин, или одного или нескольких симптомов такого заболевания, расстройства или состояния.

Терапевтически эффективное количество соединения данного изобретения представляет собой количество, которое при введении субъекту, нуждающемуся в лечении, улучшает прогноз для субъекта, например, замедляет возникновение и/или снижает тяжесть одного или нескольких симптомов у субъекта, ассоциируемых с бактериальной инфекцией. Количество раскрываемого соединения, необходимое для введения субъекту, будет зависеть от конкретного заболевания, способа введения и характеристик субъекта, таких как общее состояние здоровья, наличие других заболеваний, возраст, пол, генотип, вес тела и переносимость лекарственных средств. Специалист в данной области сможет определить необходимые дозы в зависимости от этих и других факторов.

Соединения могут быть испытаны в одном из нескольких биологических исследований для того, чтобы определить концентрацию соединения, которое необходимо для заданного фармакологического действия.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения формулы (I).

С целью получения фармацевтических композиций в соответствии с настоящим изобретением эффективное количество определенного соединения, в основной форме или в форме соли присоединения кислоты, в качестве активного ингредиента объединяют в однородной смеси с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, причем носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, желаемой для введения. Эти фармацевтические композиции находятся предпочтительно в стандартной лекарственной форме, пригодной предпочтительно для перорального введения, ректального введения, чрескожного введения или парентеральной инъекции.

Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любой из обычных жидких фармацевтических носителей, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, крепкие настои и растворы; или твердые фармацевтические носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за простоты их введения таблетки и капсулы представляют наиболее удобную пероральную стандартную лекарственную форму, и в таком случае, очевидно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентеральных инъекций фармацевтический носитель в основном будет содержать стерильную воду, хотя, с целью улучшения растворимости активного ингредиента, могут быть включены и другие компоненты. Растворы для инъекций могут быть получены путем использования фармацевтического носителя, содержащего физиологический раствор, глюкозу или их смесь. Суспензии для инъекций могут быть получены путем использования подходящих жидких носителей, суспендирующих агентов и т.п. В композициях, приемлемых для чрескожного введения, фармацевтический носитель может необязательно содержать средство для повышения проникновения и/или приемлемое смачивающее средство, необязательно объединенные с приемлемыми добавками любой природы в малых количествах, которые не оказывают значительного вредного эффекта на кожу. Упомянутые добавки могут быть выбраны с целью способствовать введению активного ингредиента в кожу и/или для облегчения приготовления желаемых композиций. Данные композиции для наружного применения можно вводить различными путями, например, в виде трансдермального пластыря, точечного нанесения или мази. Соли присоединения соединений формулы (I) вследствие их повышенной растворимости в воде по сравнению с соответствующей формой основания являются более приемлемыми при получении водных композиций.

- 7 043636

Особенно удобным является составление фармацевтических композиций данного изобретения в стандартной лекарственной форме для простоты введения и единообразия дозировки. Стандартная лекарственная форма, как используется в данном документе, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве стандартных доз, каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы для инъекций или суспензии, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т.п., а также их выделенные кратные количества.

В случае перорального введения фармацевтические композиции данного изобретения могут принимать форму твердой лекарственной формы, например, таблеток (как жевательных, так и в форме для проглатывания целиком), капсул или гелевых капсул, полученных традиционными способами с использованием фармацевтически приемлемых наполнителей и носителей, таких как связывающие агенты (например, предварительно желатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза и т.п.), наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, фосфат кальция и т.п.), смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния и т.п.), разрыхлители (например, картофельный крахмал, натрий гликолят крахмала и т.п.), смачивающие агенты (например, лаурилсульфат натрия) и т.п. Такие таблетки также могут иметь покрытие, полученное способами, известными в данном уровне техники.

Жидкие препараты для перорального приема могут принимать форму, например, растворов, сиропов или суспензий или могут быть составлены в виде сухого продукта для смешивания перед употреблением с водой и/или другим подходящим жидким носителем. Такие жидкие препараты могут быть получены традиционными способами, необязательно с другими фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие агенты (например, сироп сорбитола, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или гидрогенизированные пищевые жиры), эмульгаторы (например, лецитин или гуммиарабик), неводные носители (например, миндальное масло, жирные сложные эфиры или этиловый спирт), подсластители, ароматизаторы, маскирующие агенты и консерванты (например, метил- или пропил-пгидроксибензоаты или сорбиновая кислота).

Фармацевтически приемлемые подсластители, пригодные для фармацевтических композиций данного изобретения, включают по меньшей мере один интенсивный подсластитель, такой как аспартам, ацесульфам калия, цикламат натрия, алитам, подсластитель дигидрохалькон, монеллин, стевиозид сукралоза (4,1',6'-трихлор4,1',6'-тридеоксигалактосахароза) или предпочтительно сахарин, сахарин натрия или кальция, и необязательно по меньшей мере один объемный подсластитель, такой как сорбит, маннит, фруктоза, сахароза, мальтоза, изомальта, глюкоза, гидрогенизированный сироп глюкозы, ксилит, карамель или мед. Интенсивные подсластители обычно используют в малых количествах. Например, в случае сахарина натрия упомянутая концентрация может изменяться от примерно 0,04% до 0,1% (вес./об.) от конечного состава. Объемный подсластитель может быть эффективно использован в более высоких концентрациях, изменяющихся от примерно 10% до примерно 35%, предпочтительно от примерно 10% до 15% (вес./об.).

Фармацевтически приемлемые ароматизаторы, которые могут маскировать ингредиенты с горьким вкусом в составах с низкой дозировкой, предпочтительно являются фруктовыми ароматизаторами, такими как черешневый, малиновый, черносмородиновый или клубничный ароматизаторы. Комбинация двух ароматизаторов может дать очень хороший результат. В составах с высокой дозировкой могут потребоваться более сильные фармацевтически приемлемые ароматизаторы, такие как карамельно-шоколадный, мятный прохладный, Fantasy и т.п. Каждый ароматизатор может присутствовать в конечной композиции в концентрации, изменяющейся от примерно 0,05% до 1% (вес./об.). Преимущественно используют комбинации упомянутых сильных ароматизаторов. Предпочтительно использовать ароматизатор, который не подвергается какому-либо изменению или снижению вкуса и/или цвета в условиях составления препарата.

Композиции формулы (I) могут быть составлены для парентерального введения путем инъекции, предпочтительно внутривенной, внутримышечной или подкожной инъекции, например, болюсной инъекции или непрерывного внутривенного вливания. Составы для инъекции могут быть оформлены как стандартная доза, например, в ампулах или многодозовых контейнерах, включая добавленный консервант. Они могут быть оформлены как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать агенты для составления препарата, такие как изотонирующие, суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно активный ингредиент может быть представлен в порошковой форме для смешивания перед употреблением с подходящим носителем, например, стерильной, апирогенной водой.

Соединения формулы (I) могут быть составлены в ректальные композиции, такие как суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащие традиционные суппозиторные основы, такие как масло какао и/или другие глицериды.

Специалисты в лечении бактериальных заболеваний, связанных с ингибированием фермента FabI, могут легко определить терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) из результатов

- 8 043636 испытаний, представленных здесь и далее. В общем случае предполагается, что терапевтически эффективная доза будет составлять от примерно 0,001 мг/кг до примерно 50 мг/кг веса тела, более предпочтительно от примерно 0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг веса тела пациента, проходящего лечение. Может оказаться целесообразным вводить терапевтически эффективную дозу в виде двух или более субдоз с соответствующими интервалами в течение дня. Упомянутые субдозы могут быть составлены в формах стандартной дозы, причем каждая может содержать от примерно 0,1 мг до примерно 1000 мг, в частности, от примерно 1 до примерно 500 мг активного ингредиента на форму стандартной дозы.

Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного используемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, веса и общего физического состояния определенного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое может принимать пациент, как это хорошо известно специалистам в данной области. Кроме того, упомянутое терапевтически эффективное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от ответной реакции пациента, проходящего лечение, и/или в зависимости от оценки лечащего врача, предписывающего соединения данного изобретения. Диапазоны эффективного суточного количества, приведенные выше и далее, являются лишь рекомендательными.

Соединения формулы (I) могут обладать преимуществом в том, что они могут быть более действенными, менее токсичными, действующими более длительное время, более сильными, давать меньше побочных эффектов, легче всасываться и/или иметь улучшенную фармакокинетическую кривую (например, иметь более высокую биологическую доступность и/или более низкий клиренс), и/или обладать полезными фармакологическими, физическими или химическими свойствами по сравнению с соединениями, известными в данном уровне техники, как при применении в вышеперечисленных случаях, так и в других случаях. Соединения также могут демонстрировать такие преимущества ввиду наличия NR⁴фрагмента или CR⁴ фрагмента, который находится непосредственно рядом с двойной связью в Xсодержащем кольце.

Например, соединения формулы (I) могут обладать преимуществом в том, что они имеют хорошую или улучшенную термодинамическую стабильность (например, по сравнению с соединениями, известными в уровне техники; и, например, как определено с помощью известного способа и/или описанного здесь способа). Соединения формулы (I) могут также обладать преимуществом в том, что они имеют широкий спектр действия по сравнению с антибактериальными средствами (например, более широкий спектр антибактериального действия по сравнению с соединениями, известными в уровне техники; и, например, как определено известными испытаниями и/или описанными здесь испытаниями). Соединения формулы (I) могут также обладать преимуществом в том, что они имеют хорошие или улучшенные фармакокинетики in vivo и биодоступность при пероральном приеме. Они могут также обладать преимуществом в том, что они имеют хорошую или улучшенную in vivo эффективность. Например, соединения данного изобретения могут быть приспособлены для внутривенного состава/дозирования и, следовательно, могут демонстрировать улучшенную in vivo эффективность при внутривенном введении. Соединения также могут демонстрировать такие преимущества ввиду наличия NR⁴ фрагмента или CR⁴ фрагмента, который находится непосредственно рядом с двойной связью в X-содержащем кольце.

Экспериментальная часть.

Аббревиатуры.

DMF определяется как N,N-диметилформамид, DCM или CH2Cl2 определяется как дихлорметан, МеОН определяется как метанол, EtOH определяется как этанол, MgSO₄ определяется как сульфат магния и THF определяется как тетрагидрофуран, AcOEt или EtOAc определяется как этилацетат, DIPEA определяется как диизопропилэтиламин, EDCI определяется как N'(этилкарбонимидоил)-N,N-диметил-1,3-пропандиамин моногидрохлорид, НОВТ определяется как 1гидрокси-1H-бензотриазол, DIPA определяется как диизопропиламин, K2CO3 определяется как карбонат калия, TFA определяется как трифторуксусная кислота, NH4OH определяется как гидроксид аммония, NaHCO₃ определяется как гидрокарбонат натрия, Et2O определяется как диэтиловый эфир, Na2SO4 определяется как сульфат натрия, CH3CN определяется как ацетонитрил, NaOH определяется как гидроксид натрия, н-BuLi определяется как н-бутиллитий, i-PrOH определяется как изопропанол, Pd(OAc)2 определяется как ацетат палладия, DMA определяется как диметилацетамид, Et₃N определяется как триэтиламин.

Стереохимическое представление.

Соединения формулы (I) имеют по меньшей мере два асимметричных атома углерода, как показано ниже, где асимметричные атомы углерода идентифицируются по обозначению*:

н

Из-за напряжения в кольце в системе из двух кольцеобразных пятичленных колец можно получить только цис формы, но не транс формы.

- 9 043636

Соединения формулы (I), где система из двух кольцеобразных пятичленных колец имеет цис-конфигурацию

Н

Каждое из описанных выше цис соединений состоит из рацемической смеси двух энантиомеров, а обозначенные жирным связи или штриховые связи использовались для обозначения этих соответствующих стереохимических конфигураций.

В случае, когда такое цис соединение разделяется на два отдельных энантиомера, то стереохимическая конфигурация одного из этих энантиомеров обозначается как R* или S*, что указывает на относительную стереохимию. Соответственно один энантиомер, обозначенный как (R*,S*), может иметь либо абсолютную (R,S) конфигурацию, либо (c,R) конфигурацию. Если абсолютная стереохимия определенного хирального атома углерода в одном энантиомере известна, обозначенные жирным и штрихами связи были заменены на клинообразные связи для указания на то, что соединение является одним энантиомером, имеющим известную абсолютную стереохимию.

А. Синтез промежуточных соединений.

Пример А. 1.

промежуточного соединения (1)

Раствор 6-бром-3,4-дигидро-1H-[1,8]нафтиридин-2-она (1,0 г, 4,4 ммоль), трет-бутилакрилата (2,56 мл, 17,62 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (1,46 мл, 8,81 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) и DMF (7 мл) перемешивали и дегазировали, используя газ азот в течение 10 мин. Добавили три-о-толилфосфин (0,27 г, 0,88 ммоль) и ацетат палладия (II) (47% в пересчете на Pd) (0,099 г, 0,44 моль) и полученную смесь обрабатывали в микроволновой печи (1600 Вт, 180°С, 35 мин). Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния, растворяли в смеси DCM/метанол (8/2) (50 мл), фильтровали через тонкую подушку из целита и промывали дихлорметаном. Органический слой промывали водой, сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток растворяли в холодном этаноле (10 мл) и перемешивали при 5°С в течение 5 мин, осадок отфильтровывали, промывали холодным этанолом (3 мл) и сушили под вакуумом с получением 950 мг промежуточного соединения (1).

промежуточного соединения (2)

Промежуточное соединение (1) (4,1 г, 14,95 ммоль) растворяли в смеси трифторуксусной кислоты (23,2 мл) в DCM (41 мл). Реакционный состав перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растирали с диэтиловым эфиром, отфильтровывали и сушили под вакуумом с получением 3,97 г промежуточного соединения (2).

промежуточного соединения (3)

Промежуточное соединение (2) перетирали в течение ночи в смеси HCl в диоксане (4 М, 48 мл), твердое вещество отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили под вакуумом с получением 3,9 г промежуточного соединения (3).

Пример А.2.

а) Получение

промежуточного соединения (4)

Раствор трет-бутилового эфира аллил-проп-2-инил-карбамовой кислоты (CAS 147528-20-9, 45 г, 0,23 моль), карбонила кобальта (17,5 г, 46,1 ммоль) и 1,1,3,3-тетраметил-2-тиомочевины (36,6 г, 0,277 ммоль) в толуоле (1,8 л) перемешивали и нагревали при 70°С в течение 5 ч в автоклаве под давлением СО (2-3 бар). Полученную смесь фильтровали через тонкую подушку из целита и выпаривали до сухого состояния. Остаток растворяли в DCM и фильтровали через тонкую подушку из целита для получения прозрачного раствора. Его выпаривали до сухого состояния с получением 85,7 г неочищенного остатка. Его очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии на (силикагель 20-45 мкм, 1000 г, подвижная фаза (градиент DCM/AcOEt от 95/5 до 80/20). Очищенные фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 36,5 г промежуточного соединения (4).

промежуточного соединения (5)

- 10 043636

Смесь промежуточного соединения (4) (37,6 г, 0,168 моль) и 10% палладия на угле (7,5 г) в этилацетате (750 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре в течение 30 мин при давлении 3 бар в реакторе закрытого типа. Полученную смесь фильтровали через тонкую подушку из целита и выпаривали до сухого состояния с получением 38,2 г промежуточного соединения (5).

с) Получение

о ° / f₃c-s-o—/2% а^-0-0-\ (^cis> ⁰ н

промежуточного соединения (6)

H-BuLi 1,6 М в гексане (64 мл, 0,102 моль) добавили по каплям при -20°С, в атмосфере N₂, к раствору диизопропиламина (14,3 мл, 0,102 моль) в сухом THF (140 мл), затем смесь перемешивали при -20°С в течение 20 мин. Затем добавляли раствор промежуточного соединения (5) (19,1 г, 84,8 ммоль) в сухом THF (190 мл) при -78°С и перемешивали полученную смесь в течение 1 ч при -78°С. Добавляли раствор N-фенил-трифторметана сульфонимида (36,4 г, 0,102 моль) в сухом THF (110 мл) при -78°С, затем смеси дали согреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь выпаривали до сухого состояния. Остаток растворяли в DCM, промывали водным раствором NaHCO₃, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния с получением 27,7 г промежуточного соединения (6).

d) Получение

V о \ /—\ ЦТ А^-0-0 χ^- (^cis) н

промежуточного соединения (7)

Раствор промежуточного соединения (6) (9,3 г, 26,0 ммоль) и фенилборной кислоты (3,81 г, 31,2 ммоль) в растворе 2 М карбоната калия (26 мл) и диметилового эфира этиленгликоля (93 мл) продували N₂ в течение 10 мин, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (3,0 г, 2,6 ммоль). Реактор закрытого типа нагревали при 80°С, используя микроволновую печь с одной многорежимной камерой системы СЕМ Mars с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 30 мин. Полученный раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, а затем соляным раствором, сушили (MgSO4) и выпаривали до сухого состояния. Очистку остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (330 г, 15-40 мкм, гептан/EtOAc от 100/0 до 80/20). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 4,3 г промежуточного соединения (7).

е) Получение

\ /—xJL'^NH (^cis) Η

промежуточного соединения (8)

Трифторуксусную кислоту (44 мл) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (7) (14,5 г, 50,8 ммоль) в CH₂Cl₂ (44 мл). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем смесь охлаждали до 5°С. Медленно добавляли 3н. NaOH до получения щелочной среды, смесь дважды экстрагировали, используя CH₂Cl₂. Объединенный органический слой промывали 3н. NaOH, а затем водой сушили над MgSO₄ и выпаривали с получением 8,8 г рацемического промежуточного соединения (8). _________________________________________________

f) Получение	н н	промежуточного соединения (9)
и	и й	промежуточного соединения (10)

Промежуточное соединение (8) очищали и разделяли с помощью хиральной SFC на (CHIRALPAK AD-H 5 мкм 250x20 мм). Подвижная фаза (0,3% изопропиламин, 73% CO₂, 27% iPrOH). Чистые фракции собирали и растворитель удаляли с получением 3,9 г промежуточного соединения (10) (R*,S*) ([a]_D ²⁰= -53,19° (589 нм, конц-я 0,3365 вес./об.%, DMF, 20°С)) и 4 г промежуточного соединения (9) (S*,R*) ([«]d²⁰=+38,6° (589 нм, конц-я 0,285 вес./об.%, DMF, 20°С)).

Промежуточное соединение (9).

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ (м.д.) 7,43 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,32 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 7,20-7,26 (м, 1Н), 6,07 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 3,30-3,39 (м, 1Н), 2,77-2,94 (м, 4Н), 2,66 (дд, J=3,0, 11,1 Гц, 1Н), 2,58 (дд, J=3,0, 11,1 Гц, 1Н), 2,46 (д, J=15,7 Гц, 1Н).

Промежуточное соединение (10).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ (м.д.) 7,43 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,32 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 7,20-7,26 (м, 1Н), 6,07 (д, J=2,0 Гц, 1Н), 3,30-3,39 (м, 1Н), 2,77-2,94 (м, 4Н), 2,66 (дд, J=3,0, 11,1 Гц, 1Н), 2,58 (дд, J=3,0, 11,1 Гц, 1Н), 2,46 (д, J=15,7 Гц, 1Н).

Пример А.3.

а) Получение

/Α-Ά /° Г у—/ Д' N-Д , (cis) ^s ^/ о—Z_ Л \

промежуточного соединения (11)

Раствор промежуточного соединения (6) (44,4 г, 111,82 ммоль) и 3-тиофенилборной кислоты (17,17 г, 134,19 ммоль) в растворе 2 М карбоната калия (112 мл) и диметилового эфира этиленгликоля

- 11 043636 (444 мл) в открытой емкости продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (12,92 г, 223,65 ммоль). Раствор нагревали при 78°С, используя микроволновую печь с одной многорежимной камерой системы СЕМ Mars с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду и EtOAc. Полученную смесь фильтровали через подушку из целита. Органический слой отделяли, промывали водой, затем соляным раствором, сушили над MgSO₄ и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии на (силикагель 20-45 мкм, 1000 г, подвижная фаза (80% гептана, 20% AcOEt)). Очищенные фракции собирали и концентрировали с получением 16 г промежуточного соединения (11).

Ь) Получение

м S «--/^NH (^cis) Η

промежуточного соединения (12)

Трифторуксусную кислоту (14,37 мл, 186,47 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (11) (5,72 г, 18,65 ммоль) в CH₂Cl₂ (57 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. K₂CO₃ (10% водный раствор, 50 мл), а затем твердый K₂CO₃ добавляли при 0°С для подщелачивания раствора. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии на (силикагель 20-45 мкм, 1000 г, подвижная фаза (1% NH4OH, 93% DCM, 7% МеОН)). Очищенные фракции собирали и концентрировали с получением 12 г промежуточного соединения (12).

с) Получение	н	промежуточного соединения (13)
и	н	промежуточного соединения (14)

Промежуточное соединение (12) очищали и разделяли с помощью хиральной SFC на (CHIRALPAK

AD-H 5 мкм 250x20 мм). Подвижная фаза (0,3% изопропиламин, 80% СО₂, 20% метанол). Чистые фракции собирали и растворитель удаляли с получением 5,8 г промежуточного соединения (14) (R*,S*) ([a]_D ²⁰=-12,4° (589 нм, конц-я 0,5 вес./об.%, DCM, 20°С)) и 5,6 г промежуточного соединения (13) (S*,R*) ([a]D²⁰=+9,43° (589 нм, конц-я 0,35 вес./об.%, DCM, 20°С)).

Промежуточное соединение (13).

1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ (м.д.) 7,49 (да, J=2,5, 5,0 Гц, 1Н), 7,31 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 7,29 (д, J=2,5 Гц, 1Н), 5,88 (д, J=1,9 Гц, 1Н), 3,28-3,33 (уш.с, 1Н), 2,75-2,87 (м, 4Н), 2,61 (да, J=2,8, 10,7 Гц, 1Н), 2,54 (дд, J=3,3, 10,9 Гц, 1Н), 2,40-2,15(м, 2Н).

Промежуточное соединение (14).

1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.) 7,49 (дд, J=2,5, 5,0 Гц, 1Н), 7,31 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 7,29 (д, J=2,5 Гц, 1Н), 5,88 (д, J=1,9 Гц, 1Н), 3,28-3,33 (уш.с, 1Н), 2,75-2,87 (м, 4Н), 2,61 (дд, J=2,8, 10,7 Гц, 1Н), 2,54 (дд, J=3,3, 10,9 Гц, 1Н), 2,40-2,15 (м, 2Н).

Пример А.4.

промежуточного соединения (15)

Раствор промежуточного соединения (6) (108 г, 0,302 моль) и пиридин-4-борной кислоты (49,5 г, 0,363 моль) в 2 М водном карбонате калия (302 мл, 0,604 моль) и диметилового эфира этиленгликоля (1,1 л) продували, используя N₂, в течение 5 мин, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (34,9 г, 0,030 моль), смесь нагревали при 78°С, используя многорежимную микроволновую печь (СЕМ Mars 5) с мощностью в диапазоне от 0 до 800 Вт в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры, добавляли EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, а затем соляным раствором сушили над MgSO₄ и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии на (силикагель 15-40 мкм, 300 г, подвижная фаза (0,1% NH4OH, 97% DCM, 3% iPrOH). Очищенные фракции собирали и растворитель удаляли с получением 47,6 г промежуточного соединения 15.

Промежуточное соединение (16) очищали и выделяли с помощью хроматографии на Chiralpak AD (20 мкм, 2000 г, 110 мм) с объемной скоростью потока 750 мл/мин. Подвижная фаза представляла собой 100% метанол. Чистые фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 18,7 г промежуточного соединения (18) (R*,S*) ([a]_D ²⁰=+55,75° (589 нм, конц-я 0,339 вес./об.%, DMF, 20°С)) и 20,7 г промежуточного соединения (17) (S*,R*) ([a]_D ²⁰=-68,38° (589 нм, конц-я 0,253 вес./об.%, DMF, 20°С)).

- 12 043636

Промежуточное соединение (17).

¹H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ (м.д.) 8,52 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 7,41 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 6,50 (с, 1Н), 3,363,61 (м, 4Н), 2,81-3,02 (м, 3Н), 2,61-2,53 (м, 1Н), 1,36 (с, 9Н).

Промежуточное соединение (18).

¹H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.) 8,52 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 7,41 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 6,50 (с, 1Н), 3,363,61 (м, 4Н), 2,81-3,02 (м, 3Н), 2,61-2,53 (м, 1Н), 1,36 (с, 9Н).

Пример А.5

Получение

-^нс| R

промежуточного соединения (19)

Промежуточное соединение (18) (24,8 г, 86,6 ммоль) добавляли к HCl диоксане (4 М, 108 мл) при 5°С, затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Полученный осадок отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили под вакуумом при 70°С с получением 21,1 г промежуточного соединения (19).

Получение

н —Сфу¹⁴¹⁴ '^НС1н

промежуточного соединения (20)

Промежуточное соединение (20) получали аналогично, начиная с промежуточного соединения (17).

Пример А-6.

а) Получение

О \

промежуточного соединения (21)

Реакцию проводили на 4-х партиях по 0,5 г каждая 6-бром-3,4-дигидро-1Н-[1,8]нафтиридин-2-она. Раствор 6-бром-3,4-дигидро-1Н-[1,8]нафтиридин-2-она (0,5 г, 2,20 ммоль), бис-(пинаколато)дибора (0,67 г, 2,64 ммоль) и ацетата калия (0,648 г, 6,61 ммоль) в DMF (5 мл), и CH3CN (10 мл) перемешивали и дегазировали, используя азот, в течение 10 мин. Добавляли 1,1'-бис-(дифенилфосфин)ферроцендихлорпалладий (II) (0,161 г, 0,22 ммоль) и нагревали при 120°С, используя микроволновую печь (Biotage initiator 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 40 мин. Смесь выпаривали до сухого состояния, остаток растворяли в DCM и воде, фильтровали через тонкую подушку из целита. Органический слой фильтрата отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Остаток растворяли в EtOH, отфильтровывали и сушили с получением 0,36 г промежуточного соединения (21).

Ь) Получение

1 ° N N Ю Н

промежуточного соединения (22)

Промежуточное соединение (21) (1,0 г, 3,65 ммоль), трет-бутилпропионат (0,426 мл, 3,04 ммоль), оксид серебра(I) (1,06 г, 4,56 ммоль) и K2CO3 (0,84 г, 6,08 ммоль) в CH3CN (10 мл) и DMF (5 мл) продували газом N₂, затем добавляли ацетат палладия(П) (47% Pd) (0,034 г, 0,152 ммоль) и смесь нагревали при 100°С, используя однорежимную микроволновую печь (Biotage initiator 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 20 мин. Добавляли воду и EtOAc, смесь фильтровали через тонкую подушку из целита, органический слой отделяли, промывали водой, а затем соляным раствором сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Полученный остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, картридж 30 г, от CH₂Cl₂ до CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 98,5/1,5/0,1). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,037 г промежуточного соединения (22). ________________________________________________________________

с) Получение

lYI N N О Н

промежуточного соединения (23)

Промежуточное соединение (22) (0,053 г, 0,195 ммоль) растворяли в растворе TFA/DCM (0,37 мл/0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растирали с диэтиловым эфиром, отфильтровывали и сушили под вакуумом (80°С) с получением 0,032 г промежуточного соединения (23).

Пример А.7 ___________________________________________

а) Получение

промежуточного соединения (24)

Условия микроволновой обработки: Biotage, 90°C, 25 мин, медленно после 30 с предварительного

- 13 043636 перемешивания. Раствор бромбензола (0,228 мл, 2,64 ммоль), цис-2-трет-бутилокси-карбонилгексагидропирроло[3.4]пиррола (0,6 г, 2,82 ммоль) и трет-бутоксида натрия (0,624 г, 6,5 ммоль) в толуоле (хорошо осушенном с помощью молекулярных сит) (15 мл) перемешивали и дегазировали, используя азот, в течение 10 мин. Добавляли трис-(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (0,198 г, 0,216 ммоль) и 2(ди-трет-бутилфосфино)бифенил (0,065 г, 0,216 ммоль) и полученную смесь повторно облучали, следуя условиям микроволновой обработки, описанным выше. Добавляли воду и этилацетат, а органический слой отделяли, и затем высушивали (MgSO₄), отфильтровывали и концентрировали. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 40 г, гептан/EtOAc 80/20). Очищенные фракции собирали и концентрировали с получением промежуточного соединения (24). _______________________________________________________________

Ь) Получение

н н

промежуточного соединения (25)

TFA (4,54 мл, 58,95 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (24) (1,7 г, 5,9 ммоль) в DCM (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, добавляли воду и DCM, K₂CO₃ (10%-ный водный раствор) добавляли для подщелачивания, и органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO4) и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (25) в виде масла.

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.7, где бромбензол был заменен на 2-бромтиофен, 2-броманизол, 2-бром-1-метилбензол, 2-бром-1хлорбензол, 3-бромпиридин, 2-бромтиазол, 4-бром-1-хлорбензол или 3-бром-1-хлорбензол соответственно.

н	\ Р ^н f V- N Rp NH Н	0-<ф>^нн
промежуточное соединение (26)	промежуточное соединение (27)	промежуточное соединение (28)
н	н	н rV^NGK^NH Η
промежуточное соединение (29)	промежуточное соединение (30)	промежуточное соединение (31)
н а— н	н
промежуточное соединение (32)	промежуточное соединение (33)

Пример А.

а) Получение

°° / F3C-S-0—С N-C-O-+- (cis) ⁰ н

промежуточного соединения (34)

Реакцию проводили в атмосфере N2. н-BuLi (1,6 М в гексане) (3,33 мл, 5,33 ммоль) добавляли по каплям при -20°С к раствору DIPA (0,749 мл, 5,33 моль) в THF (8 мл), затем смесь перемешивали при 20°С в течение 20 мин. Затем добавляли раствор промежуточного соединения (4) (1,0 г, 4,44 ммоль) в THF (10 мл) при -78°С и перемешивали полученную смесь в течение 30 мин при -78°С. Добавляли раствор N-фенилтрифторметана-метансульфонимида (1,4 г, 4,88 моль) в THF (6 мл) при -78°С, затем смеси дали согреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь концентрировали и остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (40 г, 15-40 мкм, гептан/EtOAc 70/30). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (34).

Ь) Получение

Q-^T^M-C-Q—(Cis) Η

промежуточного соединения (35)

Реакция в атмосфере азота. Условия микроволновой обработки: Biotage initiator 60, 80°С, 20 мин. Раствор промежуточного соединения (34) (0,42 г, 0,881 ммоль) и тиофен-2-борной кислоты (0,135 г, 1,06 ммоль) в K2CO3 (2 М, 0,88 мл) и диметиловом эфире этиленгликоля (4 мл) продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,102 г, 0,088 ммоль). Смесь подвергали воздействию излучения в описанных выше условиях микроволновой обработки, охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, а затем соляным раствором сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (10 г, 15-40 мкм, гептан 100 до гептан/EtOAc 80/20). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (35).

- 14 043636

с) Получение

промежуточного соединения (36)

Смесь промежуточного соединения (35) (0,226 г, 0,776 ммоль) в TFA (0,7 мл) и DCM (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем реакционную смесь выливали в K₂CO₃(10%-ный водный раствор) и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (36).

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.8Ъ/А.8с, где тиофен-2-борная кислота была заменена на 2-метоксифенил-борную кислоту или муравьиную кислоту соответственно.

промежуточного соединения (37)

Пример А.9.

Условия микроволновой обработки: Biotage 60, 120°С, 30 мин. Смесь цис-2-третбутилоксикарбонил-гексагидропирроло[3,4]пиррола (0,027 г, 0,13 ммоль), 2-бромпропана (0,018 мл, 0,19 ммоль) и триэтиламина (0,088 мл, 0,64 моль) в DMF (0,2 мл) подвергали воздействию излучения в описанных выше условиях микроволновой обработки. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, водный слой дважды экстрагировали, используя EtOAc, объединенную органическую фазу промывали водой и соляным раствором, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (37).

промежуточного соединения (38)

TFA (0,62 г, 8,02 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (37) (0,204 г, 0,8 ммоль) в DCM (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, добавляли воду и DCM, 10%-ный K₂CO₃ добавляли для подщелачивания, твердый NaCl добавляли до насыщения, и органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (38) в виде масла.

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.9, где 2-бромпропан был заменен на пропаргил бромид, бензилсульфонил хлорид или метансульфонат соответственно.

пФ	н	^н
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (39)	соединение (40)	соединение (41)

Пример А.10.

а) Получение	_HO^Y ? / 7\ 1 \ (^cis)	промежуточного
	A-^{n н}	соединения (44)

Реакция в атмосфере N₂. BuLi (1,6 М в гексане) (4,8 мл, 7,70 ммоль) добавляли по каплям при -78°С к раствору тиазола (0,5 мл, 7,05 моль) в Et₂O (5 мл), затем смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли раствор промежуточного соединения (5) (1,44 г, 6,41 ммоль) в Et₂O (7 мл), затем смесь перемешивали и давали нагреться до комнатной температуры в течение 2 ч. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, затем соляным раствором, сушили над MgSO₄ и выпаривали до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (50 г, 15-40 мкм, гептан/EtOAc 80/20 до гептан/EtOAc 50/50). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (44).

промежуточного соединения (45)

Смесь промежуточного соединения (44) (1,05 г, 3,38 ммоль) в HCl (37% в Н₂О) (7 мл) в запаянной трубке нагревали при 140°С, используя микроволновую печь (Biotage Initiator EXP 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 1 ч. Реакционную смесь выливали в K₂CO₃ (10%-ный водный раствор), органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния с получением 0,2 3 г остатка (1). Водный слой выпаривали до сухого состояния, твердое вещество суспендировали в DCM и перемешивали в течение 10 мин. Суспензию фильтровали и фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением 0,29 г остатка (2). Остатки (1) и (2) объединяли для очистки, которую проводили с

- 15 043636 помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 30 г, от CH2Cl₂ до CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 90/10/1). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,41 г промежуточного соединения (45).

Пример А.11.

а) Получение

'уфн-с-'Д- (CIS)

промежуточного соединения (46)

Трифторид диэтиламиносеры (1,24 мл, 10,12 ммоль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (5) (0,570 г, 2,53 ммоль) в DCM (6 мл), охлаждали на ледяной бане при 5°С, смесь перемешивали в течение 1 ч при 5°С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Смесь охлаждали при 0°С и добавляли насыщенный NaHCO₃. Органический слой экстрагировали, используя CH₂Cl₂, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали с получением промежуточного соединения (46).

Ь) Получение

ы /\ 1 /^н (as) Η

промежуточного соединения (47)

TFA (0,39 г, 5,12 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (46) (0,146 г, 0,51 ммоль) в DCM (1,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, добавляли воду и DCM, K₂CO₃ (10%-ный водный раствор) добавляли для подщелачивания, и органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (47) в виде масла.

Пример А.12.

а) Получение

¥ о \ /—\ ΖΙΓ /Ν^-с—о—4— (cis) н

промежуточного соединения (48)

Смесь промежуточного соединения (7) (0,3 г, 1,05 ммоль) и 10%-ного сухого Pd/C (0,06 г) в МеОН (15 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре и атмосферном давлении в течение 2 ч. Полученную смесь фильтровали через тонкую подушку из целита, промывали, используя DCM, и фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (48).

Ь) Получение

\ /—\ Т /^nh (^cis) Η

промежуточного соединения (49)

Смесь промежуточного соединения (48) (0,286 г, 0,995 ммоль) и TFA (0,9 мл) в DCM (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем реакционную смесь выливали в K₂CO₃(10% водный раствор) и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (49).

Пример А.13.

а) Получение

С| _Н __/ θ / \ /—(хУс·⁰ \ Η

промежуточного соединения (50)

Реакция в атмосфере N2. Условия микроволновой обработки: Biotage initiator 60, 80°С, 20 мин. Раствор промежуточного соединения (38) (0,45 г, 1,26 ммоль) и 2-хлорфенилборной кислоты (0,236 г, 1,51 ммоль) в K2CO3 (2 М, 1,2 6 мл) и диметиловом эфире этиленгликоля (5 мл) продували N2 в течение 10 мин, затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,146 г, 0,126 ммоль). Смесь подвергали воздействию излучения в описанных выше условиях обработки, охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду и DCM, органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью препаративной жидкостной хроматографии на (силикагель 15 мкм, 150x30,0 мм). Подвижная фаза (100% DCM). Целевые фракции собирали и растворитель выпаривали с получением промежуточного соединения (50).

Ь) Получение

\ /—Cl Х (^cis) Η

промежуточного соединения (51)

Смесь промежуточного соединения (50) (0,3 г, 0,938 ммоль) и TFA (0,9 мл) в DCM (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем реакционную смесь выливали в K₂CO₃(10%-ный водный раствор) и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (51).

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.13, где 2-хлорфенилборная кислота была заменена на 2-метилфенилборную кислоту, 1-метил-1Нпиразол-5-борный пинаколовый эфир, фуран-2-борную кислоту, 2-фторфенил-борную кислоту, фуран-3борную кислоту, 2-цианофенилборную кислоту, 5-диметилизоксазол-4-борную кислоту, пиридин-3борную кислоту, 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборан-2-ил)-1Н-пиразол, бензилцинк бромид, 2-хлорпиридин-3-борную кислоту, пинаколат пиримидил-5-борной кислоты, пинаколовый эфир 1-BOC- 16 043636 пиразол-4-борной кислоты, 5-метилфуран-2-борную кислоту или 4-метокси-3-пиридинилборную кислоту, соответственно.

\ /—у ₇ ^nh (cis)	ы /—\Т/^nh (^cis> ^Νγ Хф/	Г 2--у Т NH (cis)
Η	\ А	н
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (52)	соединение (53)	соединение (54)
у 2—(cis)	1 \--у ф NH (cis)	Ρ^Ν н \ /—\J(/^nh (cis)
Η	Η	Η
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (55)	соединение (56)	соединение (57)
/ ΐ №®\ / —W^NH (^cis)	\ % (cis)	^/-у 1 _Z ^NH (^cis)
\ Η	Η	Η
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (58)	соединение (59)	соединение (60)
ы у--у ф NH (CIS)	{ \—(Th (cis)	ы С /—\I/^NH ^s)
/ \ н	Ύι	Η
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (61)	соединение (62)	соединение (63)
ы /—у ^(cis)	£ ₂\ J2 /NH (^cis)
Η	н	о—
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение (64)	соединение (65)	соединение (66)

Пример А.14.

а) Получение

_s О , |Г (I \-c-o—Т (cis) H

промежуточного соединения (67)

Промежуточное соединение (34) (2,798 ммоль), палладий(П)ацетат (47% Pd) (0,14 ммоль), K₂CO₃(4,198 ммоль), триметилуксусную кислоту (0,84 ммоль) и трициклогексилфосфония тетрафторборат (0,196 ммоль) продували N₂ в запаянной трубке. Добавляли тиазол (4,198 ммоль) и DMA (10 мл) и реакционную смесь нагревали при 100°С в течение ночи. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой и соляным раствором, сушили над MgSO₄ и выпаривали до сухого состояния. Полученный остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (картридж 30 г, 15-40 мкм, гептан/EtOAc 80/20 до гептан/EtOAc 60/40). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (67).

b) Получение

<04

промежуточного соединения (68)

Раствор промежуточного соединения (67) (0,24 г, 0,821 ммоль) в TFA (0,8 мл) и DCM (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем реакционную смесь выливали в K₂CO₃(10%-ный водный раствор) и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая 0,1 г промежуточного соединения (68).

Пример А.15.

а) Получение

н \_ /—(^cis) Η

промежуточного соединения (69)

Pd(OAc)₂ (1/3 мг, 0,0056 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (34) (0,1 г, 0,28 ммоль), 1,3-бис-(дифенилфосфин)пропана (4,6 мг, 0,011 ммоль) и ацетата калия (0,041 г, 0,42 ммоль) в EtOH (0,25 мл) и THF (2 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали в атмосфере монооксида углерода под давлением 5 бар в течение 18 ч в автоклаве из нержавеющей стали с получением промежуточного соединения (69).

b) Получение

н у --у Т NH (CIS) 'Ί ^/Н

промежуточного соединения (70)

Раствор промежуточного соединения (69) (0,2 г, 0,711 ммоль) в HCl (4 М в диоксане) (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем выпаривали до сухого состояния, получая 0,13 г промежуточного соединения (70).

Пример А.16.

- 17 043636

а) Получение

о ft / /—\ JL ,^n-c-o—С (cis) но \ н

промежуточного соединения (71)

Pd(OAc)2 (25 мг, 0,112 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (34) (2,0 г, 5,6 ммоль), 1,3-бис-(дифенилфосфин)пропана (92 мг, 0,22 ммоль) и ацетата калия (0,82 г, 8,4 ммоль) в EtOH (5 мл) и THF (40 мл) в атмосфере азота, затем смесь перемешивали в атмосфере монооксида угле рода под давлением 5 бар при 100°С в течение 18 ч в автоклаве из нержавеющей стали. Реакционную смесь выливали в воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, а затем соляным раствором, сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 40 г, гептан/EtOAc 90/10 до гептан/EtOAc 70/30). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,61 г промежуточного соединения (71).

Ь) Получение

/гфтг· ^(cis>

промежуточного соединения (72)

Смесь промежуточного соединения (71) (0,3 г, 1,18 ммоль), диметиламина в THF (2 М, 1,18 мл, 2,37 ммоль), EDCI (0,27 г, 1,42 ммоль), HOBt (0,19 г, 6.21 ммоль) и триэтиламина (0,25 мл, 1,78 ммоль) в DCM (3 мл) и THF (3 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду и DCM, органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая 0,37 г промежуточного соединения (72).

с) Получение

н / /Г NH (cis) -д Аг

промежуточного соединения (73)

Раствор промежуточного соединения (72) (0,37 г, 1,32 ммоль) в HCl (4 М в диоксане) (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем реакционную смесь выливали в K₂CO₃(10% водный раствор) и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO4) и выпаривали до сухого состояния, получая промежуточное соединение (73).

Пример А.17.

а) Получение

° /-^Р\ θ / —\Т/С-О-Л (cis) h₂n '-Д ' ' Η

промежуточного соединения (74)

Смесь промежуточного соединения (71) (0,3 г, 1,18 ммоль), 1,1,1,3,3,3-гексаметилдисилазана (0,23 г, 1,42 ммоль), EDCI (0,27 г, 1,42 ммоль), HOBt (0,19 г, 6,21 ммоль) и триэтиламина (0,25 мл, 1,78 ммоль) в DCM (3 мл) и THF (3 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду и DCM, органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Полученный остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 10 г, от CH₂Cl₂ до CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 94/6/0.1). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,16 г промежуточного соединения (74).

Ь) Получение

/Н (cis) h₂n Η

промежуточного соединения (75)

Раствор промежуточного соединения (74) (0,16 г, 0,634 ммоль) в HCl (4 М в диоксане) (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем выпаривали до сухого состояния, получая 0,1 г промежуточного соединения (75).

Пример А.18.

а) Получение

^N-C-O-^- (cis)

промежуточного соединения (76)

Раствор промежуточного соединения (34) (0,2 г, 0,56 ммоль), бис-(пинаколато)дибора (0,171 г, 0,67 ммоль) и ацетата калия (0,165 г, 1,68 ммоль) в диоксане (2 мл) перемешивали и дегазировали, используя N2, в течение 10 мин. Добавляли 1,1’-бис-(дифенилфосфин)ферроцендихлорпалладий(П) (0,041 г, 0,056 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 100°С, используя микроволновую печь (Biotage Initiator EXP 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 20 мин. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой, затем соляным раствором, сушили над MgSO₄ и выпаривали до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (10 г, 15-40 мкм, гептан/EtOAc 85/15 до гептан/EtOAc 70/30). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (76).

Ь) Получение

_s /ДА а / J мТТо-г (^cis) ⁿ'n мн \ н

промежуточного соединения (77)

- 18 043636

Раствор промежуточного соединения (76) (0,45 г, 1,34 ммоль) и 2-бром-5-метил-1,3,4-тиадиазола (0,288 г, 1,61 ммоль) в K₂CO₃ (2 М, 1,34 мл, 2,69 ммоль) и диметиловом эфире этиленгликоля (5 мл) перемешивали и дегазировали с помощью N₂ в течение 10 мин. Добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,155 г, 0,134 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 150°С, используя однорежимную микроволновую печь (Biotage Initiator EXP 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 5 мин. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали соляным раствором, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (картридж 30 г, 15-40 мкм, DCM до DCM/MeOH/NH4OH: 98/2/0, 1). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением промежуточного соединения (77).

с) Получение

ы УГ 6--/ NH (cis) ⁿ'n / Η

промежуточного соединения (78)

Раствор промежуточного соединения (77) (0,14 г, 0,455 ммоль) в HCl (4 М в диоксане) (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем реакционную смесь выливали в 10%-ный водный K2CO3 и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния, получая 81 мг промежуточного соединения (78).

Пример А.19.

а) Получение

ы _YI^N-C-O—(CIS) ^н

промежуточного соединения (79)

BuLi (1,6 М в гексане) (4,2 мл, 6,66 ммоль) добавляли по каплям к раствору 1-метилимидазола (0,53 мл, 6,66 моль) в THF (5 мл) в атмосфере азота при -78°С, затем полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до -78°С, добавляли раствор промежуточного соединения (5) 91,0 г, 4,44 ммоль) в THF (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при -78°С, затем давали охладиться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли воду и EtOAc, органический слой отделяли, промывали водой и соляным раствором, сушили над MgSO₄и выпаривали до сухого состояния. Полученный остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 30г, от CH₂Cl₂ до CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0,1). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 0,54 г промежуточного соединения (79).

Ь) Получение

промежуточного соединения (80)

Смесь промежуточного соединения (79) (0,54 г, 1,76 ммоль) в HCl (37% в Н₂О) (5 мл) в запаянной трубке нагревали при 140°С, используя однорежимную микроволновую печь (Biotage Initiator EXP 60) с мощностью в диапазоне от 0 до 400 Вт в течение 1 ч. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния с получением 0,47 г промежуточного соединения (80).

Пример А.20.

а) Получение

F₃C-S-Q~^^ / (^cis) н \

промежуточного соединения (81)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, петролейный эфир/этилацетат 1/1, УФ/фосфомолибденовая кислота). н-бутиллитий, 2,5М в гексане (4,28 мл, 10,7 ммоль), по каплям добавляли (5 мин) к раствору диизопропиламина (1,51 мл, 10,7 ммоль) в THF (16 мл) при -20°С. Смесь перемешивали 15 мин при -20°С и затем охлаждали до -78°С. Раствор промежуточного соединения (95) (2,00 г, 8,88 ммоль) в THF (20 мл) добавляли (5 мин) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч. Раствор 2-[N,N-бис-(трифторметилсульфонил)амино]пиридина (3,50 г, 9,77 ммоль) в THF (12,5 мл) добавляли (5 мин) при -78°С. Смеси затем дали снова нагреться до комнатной температуры и перемешивали 17 ч. Смесь нагревали при 50°С в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические слои сушили (сульфатом натрия), фильтровали и концентрировали. К полученному остатку (6,07 г) добавляли дихлорметан (50 мл), затем смесь отфильтровывали с получением 1,30 г белого твердого вещества, фильтрат концентрировали и затем очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/EtOAc 100/0 до 60/40). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 1,02 г промежуточного соединения (81).

Ь) Получение

о .о X/*—СД-У' / ^(cis)н \

промежуточного соединения (82)

Реакцию проводили в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной

- 19 043636 хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 8/2, УФ/фосфомолибденовая кислота). 5-ацетил-2тиенилборную кислоту (0,057 г, 0,336 ммоль) и 2 М водный карбонат калия (0,280 мл, 0,560 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (81) (0,100 г, 0,280 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (5 мл). Смесь продували аргоном и добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,032 г, 0,028 ммоль). Затем смесь нагревали при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (10 мл) и EtOAc (10 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (10 мл), затем соляным раствором (10 мл), сушили (сульфатом натрия), фильтровали и выпаривали под вакуумом до сухого состояния. Очистку остатка проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2). Целевые фракции собирали и растворитель выпаривали с получением 0,076 г промежуточного соединения (82).

с) Получение

II н (^cis) Η

промежуточного соединения (83)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 9/1, УФ). HCl, 4 М в диоксане (3,33 мл, 13,3 ммоль), добавляли к раствору промежуточного соединения (82) (0,444 г, 1,33 ммоль) в диоксане (9 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 ч и затем концентрировали до сухого состояния, получая 0,370 г промежуточного соединения (83).

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.20Ь/А.20с, где 5-ацетил-2-тиенилборная кислота была заменена на 4-метилтиофен-2-борную кислоту, 2-хлортиофен-3-борную кислоту, 4-метил-3-тиофен-борную кислоту, 2-ацетил-3-тиофен-борную кислоту, 5-цианотиофен-2-борную кислоту, 5-хлортиофен-2-борную кислоту, пинаколовый эфир 5-метилтиофен-2-борной кислоты, пинаколовый эфир 3-метилтиофен-2-борной кислоты или пинаколовый эфир 3-метокситиофен-2-борной кислоты соответственно.

Η	(cis)	f \\ JC NH H	(cis)	L /—\ Ji ^Xnh\ H	(cis)
промежуточное соединение (84)	промежуточное соединение (85)	промежуточное соединение (86)
	(cis)	N<±,s /-J% Lz—\ JL /^NH H	(cis)	Cl _s ΐ T У-f TC ,NH H	(cis)
промежуточное соединение (87)	промежуточное соединение (88)	промежуточное соединение (89)
Η	(cis)	ы [ί><τ> \ H	(cis)	Г f У NH о— н	(cis)
промежуточное	промежуточное	промежуточное
соединение	(90)	соединение	(91)	соединение	(92)

Пример А.21.

а) Получение

—/ (^cis)

промежуточного соединения (93)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 9/1, фосфомолибденовая кислота). Метиллитий 1,6 М в диэтиловом эфире (3,29 мл, 5,26 ммоль) добавляли к суспензии йодида меди(I) (0,794 г, 4,17 ммоль) в THF (5,0 мл) при 0°С. Через 1 ч через трубочку добавляли раствор промежуточного соединения (81) (0,355 г, 0,993 ммоль) в THF (2,1 мл) при 0°С, промывая с помощью THF (2,1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь гасили с помощью насыщенного раствора NH₄Cl (14 мл) и сушили до сухого состояния. Очистку остатка проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: пентан/этилацетат 95/5). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 0,180 г промежуточного соединения (93).

b) Получение

—f NH (cis) H

промежуточного соединения (94)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 9/1, фосфомолибденовая кислота). HCl (4 М в диоксане) (2,02 г, 8,06 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (93) (0,180 г, 0,806 ммоль) в 1,4-диоксане (4,3 мл), раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 65 ч, затем концентрировали до сухого состояния, получая 0,141 г промежуточного соединения (94) (110%).

- 20 043636

Пример А.22.

а) Получение

/^-С\ ° / /т/X^- (^cis) н

промежуточного соединения (95)

Реакцию проводили в безводных условиях, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 50/50, проявитель: УФ/фосфомолибденовая кислота. Раствор промежуточного соединения (4) (6,93 г, 31,0 ммоль) в THF (180 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре (атмосферном давлении) с палладием на углероде, 10%-ное (вес.) нанесение (1,65 г), в качестве катализатора в течение 15 ч. Катализатор отфильтровывали на clarcel, осадок на фильтре промывали дихлорметаном (50 мл) и объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении до сухого состояния. Очистку полученного остатка (7,26 г) проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 80/20 до 50/50). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 6,70 г промежуточного соединения (95).

Ь) Получение

/\ 1 n-c-o—е— (as) н

промежуточного соединения (96)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 6/4, DCIP). Комплекс лантан трихлорид литий 0,6 М в THF (3,70 мл, 2,22 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (95) (0,500 г, 2,22 ммоль) в THF (15 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем охлаждали до 0°С. Раствор этилмагний бромида, 0,1 М в THF (2,66 мл, 2,66 ммоль), добавили по каплям и реакционной смеси дали нагреться до комнатной температуры, перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного хлорида аммония (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Очистку полученного остатка (0,635 г) проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 9/1 до 7/3). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали. Очистку полученного остатка (0,410 г) проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 0,235 г промежуточного соединения (96).

с) Получение

н /—^(cis) Η

промежуточного соединения (97)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием 'll ЯМР. HCl в диоксане (4М, 2,30 мл, 9,20 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (96) (0,235 г, 0,920 ммоль) в диоксане (2 мл).

Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 18 ч.

После охлаждения до комнатной температуры осадок отфильтровывали на стеклообразной фритте и промывали диэтиловым эфиром (20 мл) с получением 0,126 г твердого вещества. Фильтрат выпаривали до сухого состояния с получением 0,077 г остатка.

Твердое вещество и остаток объединяли и растворяли в диоксане (2 мл). Добавляли 4 М HCl в диоксане (2,30 мл, 9,20 ммоль) и смесь перемешивали при 60°С в течение 24 ч, затем при 100°С в течение 72 ч. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния с получением 0,158 г промежуточного соединения (97).

Пример А.23.

а) Получение

но—С I n-c-o—(cis) н

промежуточного соединения (98)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 1/1, фосфомолибденовая кислота). Боргидрид натрия (0,893 г, 23,6 ммоль) порциями в течение 30 мин добавляли к раствору промежуточного соединения (95) (2,66 г, 11,8 ммоль) в МеОН (60 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°С, а затем концентрировали до сухого состояния. Остаток разбавляли этилацетатом (200 мл) и промывали водой (100 мл), 1 М водной соляной кислотой (100 мл) и соляным раствором (100 мл). Органический слой высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали с получением 2,27 г промежуточного соединения (98).

Ь) Получение

° ° / —s—о -/jf/Vc-o “С (^cis) ⁰ УЛ

промежуточного соединения (99)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 1/1, фосфомо

- 21 043636 либденовая кислота). Метансульфонилхлорид (0,930 мл, 11,9 ммоль) по каплям добавляли к раствору промежуточного соединения (98) (2,27 г, 9,98 ммоль) и триэтиламина (4,17 мл, 29,9 ммоль) в DCM (50 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем концентрировали до сухого состояния. Остаток разбавляли этилацетатом (200 мл) и промывали водой (100 мл), соляным раствором (100 мл), 1 М водной соляной кислотой (100 мл) и снова соляным раствором (100 мл). Органический слой высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Очистку полученного остатка (2,52 г) проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2 до 5/5). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 2,39 г промежуточного соединения (99).

с) Получение

промежуточного соединения (100)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2, нингидрин/фосфомолибденовая кислота). Промежуточное соединение (99) (0,300 г, 0,982 ммоль) растворяли в DMF (3 мл) и смесь охлаждали до 0°С. Добавляли пиррол (0,102 мл, 1,47 ммоль) и гидрид натрия, 60%ную дисперсию в минеральном масле (0,0589 г, 1,47 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 18 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали водой (2x50 мл), а затем соляным раствором (3x50 мл). Органический слой высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Очистку полученного остатка (0,2 90 г) проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 98/2 до 95/5, а затем до 90/10). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 0,175 г промежуточного соединения (100).

d) Получение

оА|о« I*

промежуточного соединения (101)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 6/4, фосфомолибденовая кислота). 4 М HCl в диоксане (1,58 мл, 6,33 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (100) (0,175 г, 0,633 ммоль) в диоксане (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч и концентрировали до сухого состояния, получая 0,135 г промежуточного соединения (101).

Следующие соединения были получены с использованием такой же процедуры, как и в примере А.23с/А.23б, где пиррол был заменен на тетразол, пиразол, 1,2,4-триазол, 1,2,3-триазол или фенол соответственно.

Пример А.24.

а) Получение

АА о . —о—6 JT N-c-o—е— (cis) н

промежуточного соединения (109)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2, нингидрин/фосфомолибденовая кислота). 25%-ный (вес.) раствор метоксида натрия в метаноле (0,449 мл, 1,96 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (99) (0,300 г, 0,982 ммоль) в МеОН (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 20 ч. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния. Остаток разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали водой (50 мл), а затем соляным раствором (50 мл). Органический слой высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Очистку полученного остатка проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: петролейный эфир/этилацетат 100/0 до 97/3, а затем до 1/1). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали с получением 0,182 г промежуточного соединения (109).

- 22 043636

промежуточного соединения (110)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, элюент: петролейный эфир/этилацетат 8/2, нингидрин/фосфомолибденовая кислота). 4 М HCl в диоксане (1,88 мл, 7,54 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения (109) (0,182 г, 0,754 ммоль) в диоксане (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч, а затем при 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали до сухого состояния с получением 0,139 г промежуточного соединения (110).

Некоторые из промежуточных соединений, используемые в получении конечных соединений, можно приобрести, например.

В. Получение конечных соединений.

Пример В.1.

промежуточного соединения (14)

Смесь промежуточного соединения (3) (9,4 г, 44,3 ммоль), промежуточного соединения (9) (8,5 г, 44,3 ммоль), гидроксибензотриазола (6,0 г, 4 4,3 ммоль), триэтиламина (15,4 мл, 0,111 ммоль) в CH2Cl2 (160 мл) и THF (160 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду (175 мл), осадок отфильтровывали, промывали водой/EtOH (50 мл). Твердое вещество суспендировали в EtOH (50 мл) и перемешивали 15 мин. Полученную суспензию отфильтровывали и сушили под вакуумом при 70°С с получением 7,3 г соединения (14) в виде белого порошка (т.пл. =266°С), ([a]_D ²⁰=-105,1° (589 нм, конц-я 0,1275 вес./об.%, CH2CL 20°С).

1H ЯМР (500 МГц, ДМСОЧ) δ (м.д.) 10,64 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 8,33 (дд, J=1,7, 9,6 Гц, 1Н), 8,04 (д, J=17,3 Гц, 1Н), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,31-7,42 (м, 3 Н), 7,23-7,28 (м, 1Н), 6,99 (т, J=15,0 Гц, 1Н), 6,20 (д, J=6,0 Гц, 1Н), 3,38-4,04 (м, 5Н), 3,09-3,21 (м, 1Н), 2,85-3,04 (м, 3Н), 2,55-2,67 (м, 3Н).

Пример В.2.

Смесь промежуточного соединения (14) (5,8 г, 30,32 ммоль), промежуточного соединения (3) (7,72 г, 30,32 ммоль), 1-гидроксибензотриазола (4,92 г, 30,38 ммоль), EDCI (6,97 г, 30,38 ммоль), триэтиламина (14,71 мл, 106,12 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл) и THF (100 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь выливали в воду. Осадок отфильтровывали, дважды промывали, используя EtOH, и сушили под вакуумом при 65°С. Этот осадок перекристаллизовывали из EtOH, отфильтровывали и сушили под вакуумом при 62°С с получением 9.02 г соединения (44) в виде белого порошка (т.пл.=264°С), ([a]D²⁰=+170,12° (589 нм, конц-я 0,2075 вес./об.%, C^Clz, 20°С).

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ (м.д.) 10,63 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 8,32 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 8,03 (д, J=10,6 Гц, 1Н), 7,52 (дд, J=2,8, 4,8 Гц, 1Н), 7,41 (уш.с, 1Н), 7,36 (дд, J=4,8, 9.3 Гц, 2Н), 6,98 (дд, J=9,1, 15,7 Гц, 1Н), 6,01 (уш.с, 1Н), 3,35-4,03 (м, 5Н), 2,94-3,21 (м, 2Н), 2,90 (кв, J=7,9 Гц, 3Н), 2,52-2,62 (м, 2Н).

Пример В.3. _____________

промежуточного соединения (40)

Смесь промежуточного соединения (19) (21,1 г, 81,4 ммоль), промежуточного соединения (3) (17,3 г, 61,8 ммоль), 1-гидроксибензотриазола (11,0 г, 81,4 ммоль), EDCI (15,6 г, 81,4 ммоль) и триэтиламина (47 мл, 0,339 ммоль) в CH₂Cl₂ (350 мл) и THF (350 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. К смеси добавляли воду. Осадок отфильтровывали, промывали водой/EtOH, а затем EtOH, и сушили под вакуумом при 70°С с получением 12,7 г соединения (40) в виде белого порошка (т.пл.=271°С), ([a]D²⁰=+116, 08° (589 нм, конц-я 0,2145 вес./об.%, C^Ch, 20°С).

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.) 10,63 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 8,52 (д, J=5,6 Гц, 2Н), 8,33 (д, J=6,1 Гц, 1Н), 8,03 (д, J=13,6 Гц, 1H), 7,41-7,46 (д, J=15,7 Гц, 2Н), 7,38 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,98 (дд, J=11,6, 15,7 Гц, 1Н), 6,53 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 3,37-4,04 (м, 5Н), 2,86-3,22 (м, 5Н), 2,58-2,70 (м, 2Н).

промежуточного соединения (41)

Соединение (41) было получено аналогично путем взаимодействия промежуточного соединения (20) с промежуточным соединением (3), следуя такой же процедуре.

- 23 043636

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-06) δ (м.д.) 10,63 (д, J=5,1 Гц, 1Н), 8,52 (д, J=5,6 Гц, 2Н), 8,33 (д, J=6,1 Гц, 1Н), 8,03 (д, J=13,6 Гц, 1Н), 7,41-7,46 (д, J=15,7 Гц, 2Н), 7,38 (д, J=4,0 Гц, 1Н), 6,98 (дд, J=11,6, 15,7 Гц, 1Н), 6,53 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 3,37-4,04 (м, 5Н), 2,86-3,22 (м, 5Н), 2,58-2,70 (м, 2Н).

(Md²⁰=-115,85° (589 нм, конц-я 0,183 вес./об.%, C^Ch, 20°С)).

Пример В.4. ______________________________________________

а) Получение

>^,JUca н н

промежуточного соединения (111)

Реакцию проводили в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (силикагель, CH₂Cl₂/метанол/триэтиламин 95/5/0,1, УФ/фосфомолибденовая кислота). 1-(3-Диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид (.HCl) (1,70 г, 8,87 ммоль) добавляли к смеси промежуточного соединения (3) (2,02 г, 7,39 ммоль), неочищенного цис-гексагидро-циклопента[с]пиррол5(Ш)она (1,85 г, максимально 8,89 ммоль), 1-гидроксибензотриазола моногидрата (1,36 г, 8,87 ммоль) и N-этилдиизопропиламина (6,32 мл, 36,9 ммоль) в DMF (75 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении, разбавляли дихлорметаном (150 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO₃ (100 мл). Водный слой снова проэкстрагирова ли дихлорметаном (2x150 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором (400 мл), высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол 100/0 до 94/6). Фракции продукта собирали и растворитель выпари вали. Щелочные водные слои снова проэкстрагировали дихлорметаном (3x300 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором (900 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до сухого состояния. Очистку полученного остатка проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: дихлорметан/метанол 100/0 до 94/6). Фракции продукта собирали и растворитель выпаривали. Целевые остатки объединяли с получением 1,58 г промежуточного соединения (111).

Ь) Получение

'-- но

промежуточного соединения (71)

Реакцию проводили в безводных условиях в атмосфере аргона, наблюдая за ее ходом с использованием тонкослойной хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 95/5, УФ/фосфомолибденовая кислота). Комплекс лантан трихлорид литий хлорид 0,6 М в THF (2,38 мл, 1,43 ммоль) добавляли к суспензии промежуточного соединения (111) (0,464 г, 1,43 ммоль) в THF (18 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем охлаждали до 0°С. Раствор фенилмагний бромида, 0,1 М в THF (3,57 мл, 3,57 ммоль), добавили по каплям. Реакционную смесь перемешивали и позволили нагреться снова до комнатной температуры в течение 3 дней. Дополнительно по каплям добавили 1,0 М раствор фенилмагний бромида в THF (2,85 мл, 2,85 ммоль, 2 эквивалента). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного хлорида ам мония (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x30 мл). Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до сухого состояния. Полученный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (элюент: CH₂Cl₂/МеОН 100/0 до 95/5). Растворитель из собранных фракций продукта выпаривали. Остаток растирали с диэтиловым эфи ром (2x3 мл) и затем сушили под вакуумом с получением 0,077 г соединения (71).

Пример В.5

промежуточного соединения (73)

Смесь промежуточного соединения (23) (0,032 г, 0,097 ммоль), промежуточного соединения (8) (0,032 г, 0,145 ммоль), EDCI (0,022 г, 0,0116 ммоль), HOBt (0,016 г, 0,116 ммоль) и триэтиламина (0,049 мл, 0,349 ммоль) в DCM (1 мл) и THF (1 мл) перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду, смесь экстрагировали, используя DCM, органический слой отделяли, промывали водой, сушили (MgSO₄) и выпаривали до сухого состояния. Остаток перекристаллизовывали из EtOH, твердое вещество отфильтровывали, промывали EtOH и сушили (вакуум, 70°С) с получением 0,015 г соединения (73).

В табл. F-1 перечислены соединения, которые были получены согласно одному из приведенных выше примеров.

- 24 043636

Таблица F-1

(cis) Соед. № 1; Прим. B.l	Соед. № 2; Прим. В.1
(cis) Соед. № 3; Прим. B.l	V-s Соед. № 4; Прим. В.1
X JL/\ N N о ρ η h (cis) Соед. № 5; Прим. B.l	о S Η Η ό Соед. № 6; Прим. B.l
N N О [\| ^H H (cis) Соед. № 7; Прим. B.l	a \|\|V ^H h Соед. № 8; Прим. B.l
c Соед. № 9; Прим. B.l	5¼ (cis) Соед. № 10; Прим. B.l
Соед. № 11; Прим. B.l	^N·^ (cis) Соед. № 12; Прим. B.l
Соед. № 13; Прим. B.l ( [a] _D ²⁰=+l04, 17 ° (589 нм, конц-я 0,096 вес./об.%, СН₂С1₂, 20°С)	Соед. № 14; Прим. B.l
N-\ (Cis) Соед. № 15; Прим. В.1	Соед. № 16; Прим. B.l

- 25 043636

Соед. № 17; Прим. B.l	Соед. № 18; Прим. B.l
сД-^ХХ ^Vo (cis)	^S^xx
Соед. № 19; Прим. B.l	Соед. № 20; Прим. B.l
о >'	^’W· O-^ (cis)
Соед. № 21; Прим. B.l	Соед. № 22; Прим. B.l
	H. JL ^x /X а ^{н н}
Соед. № 23; Прим. B.l	Соед. № 24; Прим. B.l
H Α^^ΐχ^/ΐχ/χ^ \ n? ΤΧλ Jx АЛ N N N^{H H} ° \ (cis)	ДА». (cis)
Соед. № 25; Прим. B.l	Соед. № 26; Прим. B.l
Ν=^ (cis)	(cis)
Соед. № 27; Прим. B.l	Соед. № 28; Прим. B.l
W Wo (Cis)
Соед. № 29; Прим. B.l	Соед. № 30; Прим. B.l

- 26 043636

J/Oca ^Η (cis) ^н Соед. № 31; Прим. В.1	^Vs _(cis) Соед. № 32; Прим. В.1
vAXV·· qp	N N'^O _F ^z Η Η
Соед. № 33; Прим. В.1	(cis) Соед. № 34; Прим. В.1

Соед. № 35; Прим. В.1	Cl Соед. № 36; Прим. В.1
	о н X ϋΟ' ΓΧΐ О ^н ^н
Соед. № 37; Прим. В.1	Соед. № 38; Прим. В.1
X (cis)	рХП».
Соед. № 39; Прим. В.1	Соед. № 40; Прим. В.З
	Хи», н н
Соед. № 41; Прим. В.З	Соед. № 42; Прим. В.1
1 JL Η Η (cis)	рАХ».
Соед. № 43; Прим. В.1	Соед. № 44; Прим. В.2
	° (cis)

- 27 043636

- 28 043636

С. Идентификация соединения.

C1. ЖХМС.

Для охарактеризования соединений настоящего изобретения с помощью ЖХМС применяли следующие способы.

Общая методика А.

ЖХ измерения осуществляли с применением системы СЭЖХ (сверхэффективной жидкостной хроматографии) Acquity (Waters), включающей бинарный насос с дегазатором, автодозатор, диодноматричный детектор (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже, колонку поддерживают при температуре 40°С. Поток из колонки направляли на МС-детектор. MS-детектор был оборудован электрораспыляющим источником ионизации. Напряжение капиллярной иглы составляло 3 кВ, и температуру в Quattro (тройном квадрупольном масс-спектрометре компании Waters) поддерживали равной 130°С. В качестве газа-распылителя применяли азот. Сбор и обработку данных проводили с помощью системы обработки данных Waters-Micromass MassLynx-Openlynx.

Общая методика В.

ВЭЖХ измерения осуществляли с применением системы Alliance HT 2795 (Waters), включающей четвертичный насос с дегазатором, автодозатор, диодно-матричный детектор (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже, колонку поддерживают при температуре 30°С. Поток из колонки разделялся для MS-спектрометра. MS-детектор выполняли с источником ионизации электрораспылением. Напряжение капиллярной иглы составляло 3 кВ, и температуру источника в LCT (Time of Flight Zspray™ масс-спектрометр компании Waters) поддерживали равной 100°С. В качестве газа-распылителя применяли азот. Сбор и обработку данных проводили с помощью системы обработки данных WatersMicromass MassLynx-Openlynx.

Метод 1.

В дополнение к общей методике А: обращенно-фазную СЭЖХ проводили на колонке Waters Acquity C18 ВЕН (с мостиковым гибридом этилсилоксан/диоксид кремния) (1,7 мкм, 2,1x100 мм) с объемной скоростью потока 0,35 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ ацетат аммония/5% ацетонитрил; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) использовали для осуществления условия градиента от 90% А и 10% В (удерживание в течение 0,5 мин) до 8% А и 92% В, удерживание в течение 2 мин, и возвращение к начальным условиям через 0,5 мин, удерживание в течение 1,5 мин. Использовали

- 29 043636 объем вводимой пробы 2 мкл. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,2 с с использованием времени задержки 0,1 с между сканированиями.

Метод 2.

В дополнение к общей методике А: обращенно-фазную СЭЖХ проводили на колонке Waters Acquity C18 ВЕН (с мостиковым гибридом этилсилоксан/диоксид кремния) (1,7 мкм, 2,1x100 мм) с объемной скоростью потока 0,343 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ ацетат аммония/5% ацетонитрил; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) использовали для осуществления условия градиента от 84,2% А и 15,8% В (удерживание в течение 0,49 мин) до 10,5% А и 89,5% В, удерживание в течение 2,18 мин и возвращение к начальным условиям через 0,73 мин, удерживание в течение 0,73 мин. Использовали объем вводимой пробы 2 мкл. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,2 с с использованием времени задержки 0,1 с между сканированиями.

Метод 3.

В дополнение к общей методике В: обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на колонке Waters Xbridge C18 (3,5 мкм, 4,6x100 мм) с объемной скоростью потока 0,8 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 100% 7 мМ ацетат аммония; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) использовали для соблюдения условия градиента от 80% А до 20% В (удерживание в течение 0,5 мин) до 90% В за 4,5 мин, 90% В в течение 4 мин, и повторное уравновешивание при исходных условиях в течение 3 мин. Использовали объем вводимой пробы 5 мкл. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,4 с с использованием времени задержки 0,3 с между сканированиями.

Метод 4.

В дополнение к общей методике В: обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на колонке Waters Atlantis C18 (5 мкм, 3,9x100 мм) с объемной скоростью потока 0,8 мл/мин. Три подвижные фазы (подвижная фаза А: 100% 7 мМ ацетат аммония; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил; подвижная фаза С: 0,2% муравьиная кислота +99,8% особо чистая вода) использовали для соблюдения условия градиента от 50% А и 50% С (удерживание в течение 1,5 мин) до 10% А, 80% В и 10% С за 4,5 мин, удерживание 4 мин, и повторное уравновешивание при исходных условиях в течение 3 мин. Использовали объем вводимой пробы 5 мкл. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,4 с с использованием времени задержки 0,3 с между сканированиями.

Метод 5.

ВЭЖХ измерения осуществляли с применением системы ВЭЖХ 1100/1200 (Alliance), включающей четвертичный насос с дегазатором, автодозатор, диодно-матричный детектор (DAD) и колонку, как указано в соответствующих способах ниже, колонку поддерживают при комнатной температуре. МСдетектор (MS-Agilent простой квадрупольный) был оборудован электрораспыляющим APCI источником ионизации. В качестве газа-распылителя применяли азот. Сбор и обработку данных проводили с помощью системы обработки данных Chemstation.

Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на колонке Nucleosil C18 (3 мкм, 3x150 мм) с объемной скоростью потока 0,42 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: вода/TFA (0,1%); подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) использовали для соблюдения условия градиента от 98% А в течение 3 мин, до 100% В за 12 мин, 100% В в течение 5 мин, затем возврат к 98% А за 2 мин, и повторное уравновешивание при исходных условиях с 98% А в течение 6 мин. Использовали объем вводимой пробы 2 мкл. Напряжение капиллярной иглы составляло 3 кВ, коронный разряд удерживали при 1 мкА и температуру источника поддерживали при 250°С. Для фрагментатора использовали изменяющееся напряжение. Массспектры получали при ионизации электрораспылением и ХИАД в положительном режиме, путем сканирования от 100 до 1100 а. е. м.

- 30 043636

Таблица С.1

ЖХ/МС данные

№ соед.	Вр. уд.	МН⁺	Метод	№ соед.	Вр. уд.	МН⁺	Метод
2	5, 12	419	3	41	1,98	387	2
3	2,53	392	2	42	2,12	310	2
6	2,84	412	1	43	2,76	400	2
7	2,43	411	2	44	2, 63	392	2
9	2,74	420	2	45	2,58	392	2
10	2,53	392	2	46	2,16	382	2
11	2,74	400	2	47	2,24	421	2
12	1,96	387	2	48	5, 4	353	4
13	3,23	392	1	49	1,85	408	2
14	2, 63	386	2	50	1,78	388	2
15	2,92	426	2	51	1,84	376	2
17	2, 64	403	2	52	13,46	324	5
18	2, 65	423	2	53	14,13	338	5
19	2,44	376	2	54	14,38	404	5
21	2, 66	404	2	57	2,59	390	2
22	2,4	376	2	58	11,35	380	5
23	2,22	405	2	59	15,16	426	5
26	1,5	353	2	60	14,79	406	5
30	1,78	351	2	61	2,35	417	2
31	8,79	342	5	62	13,58	434	5
32	2,07	393	2	63	15, 03	406	5
33	2,12	453	2	64	1, 6	381	2
34	2,1	348	2	67	14,01	417	5
35	2,72	423	2	68	15, 62	426	5
36	2,73	423	2	69	15, 09	406	5
37	11,2	379	5	71	13, 1	404	5
38	11,4	379	5	72	14,51	422	5
39	12,26	379	5	73	2,78	384	2
40	1,99	387	2

С2. Точки плавления.

Для некоторых соединений точки плавления получали с помощью столика Кофлера, состоящего из нагреваемой пластины с линейным температурным градиентом, скользящего указателя и температурной шкалы в градусах Цельсия.

Для ряда соединений точки плавления определяли с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Точки плавления измеряли с градиентом температуры 10°С/мин, начиная с 25°С. Максимальная температура составляла 350°С.

Для ряда соединений точки плавления определяли с помощью прибора определения точек плавления Buchi B-560. Нагревающей средой был металлический блок. Плавление образца наблюдали визуально с помощью увеличительной линзы и сильного светового контраста. Точки плавления измеряли с градиентом температуры либо 3, либо 10°С/мин. Максимальная температура составляла 300°С.

Остальные точки плавления определяли с использованием открытых капиллярных трубок.

Таблица С.2

Данные для точек плавления № соед. Точка плавления

274,95°С

Метод

ДСК № соед. Точка Метод плавления

249,0- Buchi

- 31 043636

D. Фармакологические примеры.

D.1. Ингибирование фермента FabI: исследование ингибирования фермента FabI Staphylococcus aureus.

Исследование ингибирования фермента FabI проводили на половине площади, 384-луночном микротитровальном планшете. Соединения оценивали в 40-мкл пробах смесей, содержащих 100 мМ NaADA, pH 6,5 (ADA=N-[2-ацетамидо]-2-иминодиуксусная кислота), 250 мкМ кротонил-СоА, 625 мкМ NADH и 50 мкг/мл S. aureus ATCC 29213 FabI. Ингибиторы обычно варьировали в интервале от 50 до 0,39 мкМ. Реакционные смеси инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре и реакцию прекращали добавлением 200 мМ Трис буфера (pH 9,0) для создания pH-сдвига. За составом NADH наблюдали путем измерения изменений поглощения при 340. Путем сравнения измеренных показателей с показателями отрицательного (отсутствие соединения) и положительного (отсутствие фермента) контрольных образцов определяли ингибирование ферментной активности соединений в процентах. Наиболее подходящую кривую устанавливали методом наименьших квадратов. Из нее получали значение IC₅₀ (выраженное в мкг/мл), приводящее к 50%-ному ингибированию ферментной активности.

- 32 043636

Таблица D.1

	Значения S.	aureus FabI IC₅₀
№ соед.	Fabl 1С₅₀ цг/мл		№ соед.	Fabl 1С₅₀ цг/мл
1	0,32		35	1,25
2	0,78		36	0, 93
3	0,29		37	3,37
4	0,70		38	2,08
5	~0, 6		39	0,56
6	3,73		40	0,39
8	0,50		41	0,44
9	0,75		42	0, 83
10	0,53		43	0, 60
11	0,48		44	0,46
12	0,44		45	0,45
13	0,39		46	0,54
14	0,40		47	0,43
15	0,48		48	2,93
17	0,38		49	0,44
18	0,44		51	0,54
19	~0, 62		52	0,50
20	1,07		53	0,36
21	0, 65		54	1,84
22	0,58		57	0, 62
23	0,41		59	0,76
24	0,58		60	0,59
25	0,51		61	0,54
26	0,41		62	0,44
27	0, 6		63	0, 63
29	1,04		64	1, 62
30	2, 66		67	0, 63
31	1,42		68	0, 99
32	0,46		71	2,55
33	3, 06		72	0,43
34	1, 67		73	0, 80

D.2. In vitro способ испытания антибактериального действия соединений против различных штаммов бактерий.

Приготовление бактериальных суспензий для определения чувствительности.

Использовали следующие бактерии: Staphylococcus aureus ATCC 29213, устойчивые к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC 700788 и Escherichia coli ATCC 35218. Используемые в данном исследовании бактерии выращивали в течение ночи в колбах, содержащих 100 мл бульона Mueller-Hinton (Difco кат. № 0757-17) в стерильной деионизированной воде, при встряхивании, при 37°С. Приготовленный раствор хранили при -70°С до момента использования.

Бактерии инкубировали на пластине из трипсинового соевого агара, содержащей 5% овечьей крови (Becton Dickinson кат. № 254053) в течение 18-24 ч при 35°С в аэробных условиях (первое прохождение). Для второго прохождения свежий бульон Mueller-Hinton засевали, используя 5-10 колоний, и выращивали в течение ночи при 35°С до появления помутнения (достигая фазы внесения) в аэробных условиях. Бактериальную суспензию затем доводят до плотности 0,5 по McFarland и далее разбавляют 1:100 в среде бульона Mueller Hinton. Это используют в качестве посевного материала.

Результаты (для STA ATCC 29213) представлены в табл. D2 ниже.

Испытание антибактериальной чувствительности.

Определение.

Исследования MIC (минимальных ингибирующих концентраций) проводили способом микроразбавления бульона в 96-луночном формате (микротитровальный планшет с плоским дном) с конечным объемом, составляющим 0,1 мл бульона Mueller Hinton, содержащим двукратные серии разбавлений соединений с посевом бактерий 5x105 КОЕ/мл (стандартный размер посевного материала согласно директивам CLSI). Ингибиторы обычно варьируют в интервале от 63 до 0,49 мкМ. Конечная концентрация ДМСО в исследовании составляла 1,25% (максимально допустимая концентрация ДМСО=6%). В исследованиях, где испытывали действие человеческой сыворотки на активность соединения против S. aureus, человеческую сыворотку добавляли при конечной концентрации 10%. Пластины инкубировали при 35°С в течение 16-20 ч. В конце инкубирования бактериальный рост количественно оценивали флуорометрически. Для этого во все лунки добавляли резазурин и планшеты повторно инкубировали. Время инкуби

- 33 043636 рования зависит от типа бактерии. Изменение цвета с синего на розовый говорит о росте бактерий. Флуоресценцию измеряли в контролируемом компьютером флуорометре (Fluoroskan Ascent FL, Labsystems) при длине волны возбуждения, равной 540 нм, и длине волны эмиссии, равной 590 нм. Достигнутый соединениями процент ингибирования роста рассчитывали согласно стандартным методам. IC₅₀ (выраженное в мкг/мл) определяли как 90% концентрацию ингибирования бактериального роста. Одновременно испытывали набор соединений сравнения в целях подтверждения контроля качества.

Результаты представлены в табл. D2 (STA+10% HS) ниже.

Исследование цитотоксичности.

Цитотоксичность соединений оценивали, используя исследование МТТ. Человеческие клетки HelaM, выращенные в 96-луночных планшетах, подвергали серии разбавлений испытываемых соединений (конечный объем, равный 0,2 мл) и инкубировали в течение 72 ч при 37°С и в 5% CO₂. Ингибиторы обычно варьируют в интервале от 25 до 0,8 мкМ. Конечная концентрация ДМСО в исследовании составляла 0,5%. МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид, тетразол) добавляли и восстанавливали до фиолетового формазана только в живых клетках. Солюбилизация кристаллов формазана была достигнута путем добавления 100 мкл 2-пропанола. Жизнеспособность клеток определяли путем измерения поглощения восстановленного формазана, дающего фиолетовую окраску, при 540 нм и 690 нм. Поглощение, измеряемое при 690 нм, автоматически вычиталось из поглощения при 540 нм для устранения эффекта неспецифического поглощения. Достигнутый соединениями процент цитотоксичности рассчитывали согласно стандартным методам. Цитотоксичность выражали как СС₅₀ - концентрацию, которая вызывает 50%-ное снижение жизнеспособности клеток.

Результаты представлены в табл. D2 (ТОХ HELAM) ниже.

Таблица D2

Данные представительных примеров

Соед. №	STA (361.159) IC90 дг/мл	STA + 10% HS (361.169) IC90 дг/мл	ТОХ HELAM (222.125) СС50 дг/мл
1	0, 09	0, 17	>3,8547
2	1, 02	1,09	>19,4696
3	0, 03	0, 06	>3,25636
5	0, 64	1,14	7,92
8	1, 15	1,52	>10,5122
9	0, 33	0, 69	4,77
10	0, 08	0, 13	>3,915
11	0, 37	1,76	6, 19
12	0, 33	0,53	>9,70744
13	0, 31	0,43	>9,68257
14	0, 19	0, 19	>9,68257
15	0, 74	0,72	>9,78279
17	0, 37	0,38	>10,1103
18	0,21	0,37	>10,6233
19	0, 18	0, 12	>9,43038
21	0, 13	0,29	>4,0346
22	0,23	0,25	>9,43038
23	0, 67	0,79	>10,3108
24	4, 05	2,44	>3,9549
26	1, 11	1,11	>3,8646

Пример Е.

E.1. Термодинамическая растворимость/растворимость в водном растворе.

Изучение зависимости кривой растворимости от pH проводили при температуре окружающей среды в течение 4-дневного периода. Исследование растворимости при насыщении проводили с целью определить максимальную растворимость в определенном буферном растворе. Соединение добавляли к соответствующему буферному раствору до достижения точки насыщения. Затем колбу встряхивали в течение 4 дней при температуре окружающей среды. По прошествии 4 дней растворы фильтровали и впрыскивали в СЭЖХ, и концентрацию определяли, используя обычный метод ВЭЖХ.

Результаты. ____________________________________________________

	Соед. № 14	Соед. № 1	Соед. № 41	Соед. № 2
Буфер pH 2	<0, 01	<0,002	1,18	<0, 01
10% ΗΡ-β-CD	0, 076	НО	НО	НО

- 34 043636

буфер pH 2
20% ΗΡ-β-CD буфер pH 2	0,20	НО	НО	НО
Буфер pH 4	<0, 01	<0,002	<0, 01	<0, 01
10% ΗΡ-β-CD буфер pH 4	0, 069	0, 177	1,1	0, 11
20% ΗΡ-β-CD буфер pH 4	0, 18	0, 308	>1,15	0,28
Буфер pH 7,4	<0, 01	<0,002	0, 13	<0, 01
10% ΗΡ-β-CD буфер pH 7,4	0, 089	0, 100	0,49	0, 14
20% ΗΡ-β-CD буфер pH 7,4	0,20	0, 417	0,56	0,33

НО означает не определяли.

E.2. Антимикробный спектр действия.

Минимальные ингибирующие концентрации (MICs) определяли в соответствии с методологией Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) по сравнению с аэробными бактериями (CLSI M07-A8) (см. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. CLSI document M07-A8, Vol. 29, No. 2.) способом микроразбавления бульоном среды Mueller-Hinton с измененным катионным содержанием (СА-МНВ) для большинства организмов, за исключением Haemophilus influenza, где использовали бульон тестирующей среды Haemophilis (HTM). Описание индивидуальных организмов может быть найдено в таблице. Где возможно, испытывали стандартные штаммы ATCC.

Плотность посевного материала для испытания чувствительности стандартизировали с получением конечного посевного материала с приблизительно 5х10⁵ КОЕ/мл. MIC бульона определяли как наиболее низкую концентрацию лекарственного средства, которая предотвращает видимый рост после 16-24 ч (зависит от вида) инкубирования при 35°С-37°С.

Описание индивидуальных исследуемых организмов

Организм	Характеристики	MIC исследуемой среды
Staphylococcus aureus	ATCC 29213; эталонный штамм MS SA	МНВ
Staphylococcus aureus	ATCC 43300; эталонный штамм MRSA	МНВ
Staphylococcus aureus	NRS119; LZD-R; SCCmec IV; происхождение: США	МНВ
Staphylococcus aureus	NRS120; LZD-R; SCCmec IV; происхождение: США	МНВ
Staphylococcus aureus	NRS121; LZD-R; SCCmec IV; происхождение: США	МНВ
Escherichia coll	ATCC 25922; эталонный штамм	МНВ
Escherichia coli	Tol С мутант	МНВ
Haemophilus influenzae	ATCC 49247; эталонный штамм	бульон НТМ
Moraxella catarrhalis	ATCC 8176; b-лактамаза негативный	МНВ

Исходные растворы соединений готовили в ДМСО с концентрацией 1 мг/мл. Линезолид готовили в ДМСО с концентрацией 2 мг/мл. Исходные растворы всех соединений разводили в СА-МНВ с получени ем диапазона двукратных разбавлений, в зависимости от чувствительности исследуемого организма.

Результаты (если имеются). __________________________________________

Организм	Соединение №№ и MIC90 (цг/мл)
14	1	44	2	41	10	22	12
S. aureus ATCC 29213	0, 03	0, 016	0, 03	0,25	0, 03	0, 015	0, 06	0, 125
S. aureus ATCC 43300	0, 03	0, 016	0, 03	0,5	0, 03	0, 03	0, 125	0, 125

- 35 043636

S. aureus NRS119	0, 03	0, 03	0, 03		0, 06
S. aureus NRS120	0, 03	0, 016	0, 03		0, 06
S. aureus NRS121	0, 03	0, 016	0, 06		0, 06
Мутант E. coll tolC	0,25	<0, 03	>8	0,25	1	0, 125	1	0,25
E. coll ATCC 25922	4	>32	>8	>8	8	>8	>8	>8
H. influenza ATCC 49247	0,25		>8	>8	0,5	>8	4	1
M. catarrhalis ATCC 8176	0, 015		0,25		0, 12

E.3. In vivo фармакокинетика и био доступность при пероральном приеме.

Фармакокинетика in vivo и биодоступность при пероральном приеме соединения примеров были исследованы/исследуются в самцах мышей Swiss (кормленых) после однократного внутривенного (i.v.) болюсного и перорального (р.о.) введения. Для растворов составов i.v. и р.о. соединение было растворено/растворяют в 20% растворе ΗΡ-β-CD. pH состава составляло/составляет примерно pH 4. Все i.v. составы были изотоническими.

Результаты.

	Соед. № 14	№ соед. 1	Соед. № 10	Соед. № 44	№ соед. 12
i.v.
Доза (мг/кг)	2,5	2,5	2,5	2,5	2,5
η	3	3	3	3	3
Co (нг/мл)	2929	2921	4154	4524	2333
Клиренс плазмы Cl (л/ч/кг)	0,33	0,35	0, 64	0, 49	2,2
Vd_z (л/кг)	1,3	1,5	1,2	0, 9	3,7
AUCo-inf (нг.ч/мл)	7464	7074	3992	5037	1124
Время полужизни (tl/₂) (Ч)	2,7	2,9	1,3	1,3	1,1
р.о.
Доза (мг/кг)	10	5	10	10	10
η	3	3	3	3	3
Стах (НГ/МЛ)	2950	1720	3537	2670	275
Тщах (И )	2, 0	2,0	1, 0	1,0	1,0
AUCo-inf (нг.ч/мл)	21394	12158	12376	14527	914 AUCo-last
Время полужизни (ti/₂) (ч)	3,2	3,1	2,2	2,8	n.d.
Биодоступность при пероральном приеме (%)	72	86	81	59	21

Е.4. Эффективность In vivo.

Концепция изучения in vivo эффекта антибактериального соединения путем лечения внутрибрюшинно инфицированных мышей была введена в 1911 г. при изучении действия оптохина против пневмококков (Morgenroth and Levy, 1911). Популярность модели объясняется простотой применения при короткой продолжительности экспериментов, воспроизводимыми инфекциями и простыми конечными точками.

Метод.

Для инфицирования самок белых мышей Swiss использовали штамм Staphylococcus aureus АТСС 29213. Бактериальную культуру бульона сердечно-мозгового экстракта (BHI) высевали за день до инфицирования, инкубировали при 37°С в течение ночи и разбавляли свежим BHI бульоном до необходимой концентрации. Ер. (внутрибрюшинное) введение ~5х10⁸-5х10⁹ колониеобразующих единиц (CFU) выполняли любой в из боковых нижних квадрантов живота. После инфицирования мышей держали в клетках под ежедневным наблюдением с целью обнаружения признаков инфекции или смерти. Для лечения мышей использовали как путь р.о., так и путь i.v., и каждую мышь индивидуально обрабатывали путем

Claims

введения через желудочный зонд или путем i.v. введения. В этой модели испытывали как растворы (р.о. и i.v.), так и суспензии (р.о.). Параметром, используемым для наблюдения за развитием инфекции и действия лечения, была смерть или выживание животных в течение 3 дней после инфицирования. Поскольку смерть может наступить в результате токсического эффекта, была включена контрольная группа из 3 мышей, которых обрабатывали, используя наиболее высокую дозу исследуемого соединения (в исследованиях, где применялись суспензии).

Результаты.

Антибактериальное действие in vivo в моделях с перитонитом инфекции S. aureus (ATCC 29213) после перорального внутривенного введения с использованием растворов.

Соединение Путь заражения Посевной материал (журналь- ная запись 10) Состав Путь обработки Доза обработки (мг на кг) % выживаемости

44 IP 8, 9 Р-р 20%CD+lHCl РО, QD 1; 5 57; : 100

14 IP 8,7 20%CD+2H2T IV, QD 2,5; 5 75; : 100

В контрольной группе мышей наблюдалась смертность 80 и 100% в каждом из соответствующих испытаний.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) ? /^|=СУ° ^(|)

R³ где А представляет собой -С=С- или ^r2 связь представляет собой одинарную связь или двойную связь;

X представляет собой углерод или азот, и, если X представляет собой азот, то связь представляет собой одинарную связь;

Z1 представляет собой CH или N;

R¹ представляет собой водород, C_1-4алкил или галоген;

R² представляет собой водород, C_1-4алкил или галоген;

R³ представляет собой водород, C_1-6алкил, гидроксил или галоген;

R⁴ представляет собой водород; галоген; C_1-6алкил; С_2-6алкенил; С_2-6алкинил; C_1-6алкилокси; C_1-4алкилоксикарбонил; аминокарбонил; моно- или ди(С_1-4алкил)аминокарбонил; арил; арилокси; арилкарбонил; арилсульфонил; гетероарил; C_1-6алкил, замещенный цианогруппой; C_1-6алкил, замещенный арилом или арилоксигруппой; или C_1-6алкил, замещенный гетероарилом;

арил является фенилом; фенилом, замещенным одним, двумя или тремя заместителями, каждый из них в отдельности выбирается из галогена, гидроксила, C_1-4алкила, C_1-4алкокси, полигалогенС_1-4алкила, полигалогенС_1-4алкокси, циано-, нитро- и аминогруппы;

гетероарил представляет собой фуранил, тиофенил, пирролил, пиразолил, имидазолил, изоксазолил, тиазолил, триазолил, тетразолил, изотиазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, бензо[1,3]диоксолил, бензофуранил, бензотиазолил, индолил, 2,3-дигидро-1Ниндолил, тетрагидротиофенил или хинолинил, где каждый гетероарил может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из них в отдельности выбирается из галогена, цианогруппы, C_1-4алкила, C_1-4алкокси, С_1-4алкилкарбонила или фенила;

или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты.
2. Соединение по п.1, где Z₁ представляет собой СН;

R¹ представляет собой водород или C_1-4алкил;

R² представляет собой водород или C_1-4алкил.
3. Соединение по п.1 или 2, где А представляет собой -С=С- или связь представляет собой одинарную связь или двойную связь;

X представляет собой углерод или азот, и, если X представляет собой азот, то связь ^⁷⁷⁷⁷^ представляет собой одинарную связь;

R¹ является водородом;

R² является водородом;

- 37 043636

R³ является водородом, гидроксилом или галогеном;

R⁴ является водородом; галогеном; С_1-6алкилом; С1_-6алкилокси; С1_-4алкилоксикарбонилом; аминокарбонилом; моно- или ди(C_1-4алкил)аминокарбонилом; арилом; арилокси; арилсульфонилом; гетероарилом; C_1-6алкилом, замещенным цианогруппой; C_1-6алкилом, замещенным арилом или арилоксигруппой; или С_1-6 алкилом, замещенным гетероарилом;

арил является фенилом; фенилом, замещенным одним заместителем, выбранным из галогена, C_1-4алкила, C_1-4алкилокси- и цианогруппы;

гетероарил является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, изоксазолилом, тиазолилом, триазолилом, тетразолилом, тиадиазолилом, пиридинилом или пиримидинилом, где каждый гетероарил может быть замещен одним заместителем, выбранным из галогена, цианогруппы, C_1-4алкила, С_1-4алкокси или C_1-4алкилкарбонила;

или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты.
4. Соединение по любому из пп.1-3, где R¹ является водородом и R² является водородом.
5. Соединение по любому из пп.1-4, где R³ представляет собой водород.
6. Соединение по любому из пп.1-5, где R⁴ является арилом.
7. Соединение по любому из пп.1-5, где R⁴ является гетероарилом.
8. Соединение по любому из пп.1-5, где R⁴ является С_1-6алкилом, замещенным арилом.
9. Соединение по любому из пп.1-8, где X представляет собой азот, а связь представляет собой одинарную связь.
10. Соединение по любому из пп.1-9,

где А представляет собой
11. Соединение, выбранное из следующих:

- 38 043636

- 39 043636

- 40 043636

- 41 043636

или его фармацевтически приемлемая соль.
12. Фармацевтическая композиция для лечения бактериальных инфекций, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1 11.
13. Способ получения фармацевтической композиции по п.12, где терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-11 тщательно перемешивают с фармацевтически приемлемым носителем.
14. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-11 в качестве лекарственного средства для лечения бактериальных инфекций.
15. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-11 для лечения бактериальных инфекций.

- 42 043636
16. Применение по п.15, где бактериальная инфекция вызвана бактерией, которая экспрессирует фермент Fabl.
17. Способ получения соединения формулы (I) по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, включающий реакцию промежуточного соединения формулы (II) с промежуточным соединением формулы (III)

(II) (III) где А, X, R³, R⁴ и Ζι такие, как определены в п.1, и с последующим превращением соединения формулы (I) в фармацевтически приемлемую соль присоединения кислоты путем взаимодействия соединения формулы (I) с кислотой.
18. Способ получения соединения формулы (I) по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты, где в соединении формулы (I) А представляет собой -C(R²)=C(R¹)-, включающий реакцию промежуточного соединения формулы (V) с промежуточным соединением формулы (VI)

(I) где X_ai представляет собой уходящую группу, представляющую собой галогенидную группу, и X, Z_b R¹, R², R³ и R⁴ такие, как определены в п.1;

и с последующим превращением соединения формулы (I) в фармацевтически приемлемую соль присоединения кислоты путем взаимодействия соединения формулы (I) с кислотой.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2