CN105432471A - 虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法 - Google Patents

虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；步骤二、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；步骤三、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；步骤四、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；本发明得到的虎皮兰组培苗繁殖系数高达30-50倍，生根率95％以上，成活率100％，有效解决虎皮兰工厂化育苗的问题。

Description

虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法
技术领域
本发明属于一种组织培养和植物繁殖领域，特别涉及一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法。
背景技术
虎皮兰为龙舌兰科虎皮兰属多年生草本植物，味甘微辛，性平，无毒。能清热解毒，活血消肿，肺热咳嗽，疮疡肿毒，跌打损伤，毒蛇咬伤，烫火伤。虎皮兰叶中含大量麻质纤维，可用于造纸和优质纤维品的开发。虎皮兰能净化室内环境，具有吸收室内甲醛，又能增加室内空气中的负氧浓度，具有较高的经济价值。虎皮兰常见的繁殖方式有扦插法，分株法等。繁殖系数低，性状容易消失，影响观赏质量采用花蕾愈伤组织分化培养能有效保留其性状，达到快速繁殖的目的。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，能够快速有效地提高虎皮兰的繁殖速度和质量，实现虎皮兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、0.2-2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8；
步骤二、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、0.5-2.0mg/L的玉米素、0.2-1.0mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8；
步骤三、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、0.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8；
步骤四、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.1-1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。
优选的是，所述步骤一中，将外植体置于诱导培养基之前需经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体15-20分钟，将冲洗后的外植体置于添加2-3滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡8-10分钟，取出后用无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
优选的是，所述步骤四之后，还包括：
步骤五：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
优选的是，在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，黑暗条件下培养25-35天；
在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；
在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；
在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，天培养30天。
优选的是，所述外植体在消毒后且置于诱导培养基之前还经过了预处理，具体为：
将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：10-15份香蕉泥、1-5份琼脂、3-6份芒果叶提取物、3-6份千年健提取物和1000份水。
优选的是，带根植株的表面角质形成后在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、3-5份的竹醋液和100份的水。
优选的是，所述营养剂中还加入有1-2重量份的含有氮、磷、钾的复合肥。
本发明至少包括以下有益效果：
1、利用虎皮兰的花蕾进行愈伤组织分化，有效保留其性状，短时间内培育出大量的种苗，虎皮兰的组培采用花蕾相对于叶片来说，其诱导率更高，而相对于子和肧的组织培养，其优势是不会产生形状分离，保持母株的优良形状。
2、在分化培养基中添加玉米素和吲哚丁酸属于化学合成物，较便宜，可大大降低组织培养中的消耗，达到降低成本的目的。
3、在壮苗培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸促使苗长高和叶的伸展。
4、采用本技术方案所得到的虎皮兰组培苗繁殖系数高达30-50倍，生根率95％以上，成活率100％，有效解决虎皮兰工厂化育苗的问题。
5、外植体的预处理为在微波发生器中反应，同时结合诱导膏，能进一步提高外植体的诱导率及生根率。微波发生器的输出功率不宜超过500瓦，微波强度过反而会影响外植体的诱导率。
6、在带根植株表面涂覆营养剂可加强植株根系的生命力，使根系更加发达。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：取虎皮兰的花蕾作外植体经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体15分钟，将冲洗后的外植体置于添加2滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡8分钟，取出后用无菌水冲洗3次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，黑暗条件下培养25天。
步骤三、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、0.5mg/L的玉米素、0.2mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，培养30天。
步骤四、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.1-1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，天培养30天。
步骤六：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
实施例2
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：取虎皮兰的花蕾作外植体经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体20分钟，将冲洗后的外植体置于添加3滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡10分钟，取出后用无菌水冲洗5次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，黑暗条件下培养35天。
步骤三、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、2.0mg/L的玉米素、1.0mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，培养30天。
步骤四、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，天培养30天。
步骤六：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗7天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
实施例3
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：取虎皮兰的花蕾作外植体经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体18分钟，将冲洗后的外植体置于添加2滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡9分钟，取出后用无菌水冲洗4次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，黑暗条件下培养30天。
步骤三、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、1mg/L的玉米素、0.5mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，培养30天。
步骤四、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.4mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.8mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，天培养30天。
步骤六：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗5天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
实施例4
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体，将外植体消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体15分钟，将冲洗后的外植体置于添加2滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡8分钟，取出后用无菌水冲洗3次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、所述外植体在消毒后还经过了预处理，具体为：
将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：10份香蕉泥、1份琼脂、3份芒果叶提取物、3份千年健提取物和1000份水。
步骤三、置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，黑暗条件下培养25天。
步骤四、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、0.5mg/L的玉米素、0.2mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，培养30天。
步骤六、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.1mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为22℃，光照强度为1500lux，光照时间为8小时/天，天培养30天。
步骤七：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基，在角质表面涂覆厚度为1mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、3份的竹醋液和100份的水。在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
实施例5
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体，将外植体消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体20分钟，将冲洗后的外植体置于添加3滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡10分钟，取出后用无菌水冲洗5次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、所述外植体在消毒后还经过了预处理，具体为：
将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：15份香蕉泥、5份琼脂、6份芒果叶提取物、6份千年健提取物和1000份水。
步骤三、置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，黑暗条件下培养35天。
步骤四、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、2.0mg/L的玉米素、1.0mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，培养30天。
步骤六、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，天培养30天。
步骤七：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗7天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基，在角质表面涂覆厚度为3mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、5份的竹醋液和100份的水。在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
实施例6
一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体，将外植体消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体18分钟，将冲洗后的外植体置于添加2滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡9分钟，取出后用无菌水冲洗4次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
步骤二、所述外植体在消毒后还经过了预处理，具体为：
将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：11份香蕉泥、4份琼脂、4份芒果叶提取物、4份千年健提取物和1000份水。
步骤三、置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、1.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、1.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8。在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，黑暗条件下培养26天。
步骤四、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、1.1mg/L的玉米素、0.8mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8。在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，培养30天。
步骤五、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.4mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8。在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为23℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，培养30天。
步骤六、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.7mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为9小时/天，天培养30天。
步骤七：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗5天，待带根植株的表面角质形成后取出，带根植株的表面角质形成后，洗净根部培养基，在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、4份的竹醋液和100份的水。在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
为了说明本发明的效果，发明人提供比较实验如下：
对比例1：虎皮兰叶片进行培育进行组培，其它条件与实施例6相同。
实验：
按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6和对比例1进行虎皮兰的组织培养，考察不同条件的诱导率和生根率，见表1。
表1
诱导率/％ 生根率/％
实施例1 94 95
实施例2 94 95
实施例3 95 96
实施例4 97 97
实施例5 97 98
实施例6 98 99
对比例1 87 90
从表1可知，采用花蕾相较于叶片进行组织培养虎皮兰，采用花蕾组培诱导率和生根率都相较于采用叶片要显著提高。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (7)

1.一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、0.2-2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8；
步骤二、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、0.5-2.0mg/L的玉米素、0.2-1.0mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8；
步骤三、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、0.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8；
步骤四、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.1-1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。
2.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，将外植体置于诱导培养基之前需经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体15-20分钟，将冲洗后的外植体置于添加2-3滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡8-10分钟，取出后用无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
3.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤四之后，还包括：
步骤五：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。
4.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，
在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，黑暗条件下培养25-35天；
在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；
在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；
在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，天培养30天。
5.如权利要求2所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述外植体在消毒后且置于诱导培养基之前还经过了预处理，具体为：
将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：10-15份香蕉泥、1-5份琼脂、3-6份芒果叶提取物、3-6份千年健提取物和1000份水。
6.如权利要求3所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，带根植株的表面角质形成后在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、3-5份的竹醋液和100份的水。
7.如权利要求6所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述营养剂中还加入有1-2重量份的含有氮、磷、钾的复合肥。
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