CN105420166A - 一种植物乳杆菌增菌培养基及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种植物乳杆菌增菌培养基及其制备方法，将葡萄糖，乳糖，大豆分离蛋白，酵母浸粉，磷酸氢二钾，硫酸锰溶于无菌水中，经灭菌后再加入胡萝卜汁和甲硫氨酸，调节pH值为7.0-7.5；植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入该增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达(4.2-6.1)×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业培养基MRS，进行相同条件的处理的活菌数(2.9-4.0)×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
Description
技术领域
本发明属于益生菌制品制备技术领域，涉及一种益生菌培养基，特别涉及一种植物乳杆菌增菌培养基及其制备方法。
背景技术
随着人们生活水平的提高，益生菌食品的消费量逐年上升，益生菌添加到食品中的主要方式是直接添加菌体或以益生菌制剂的方式添加。越来越多的益生菌被用于替代抗生素的功能。其中乳酸菌(LacticAcidBacteria,LAB)是人体重要的的益生菌，具有调节人体胃肠道正常菌群、保持微生态平衡，提高食物消化率和生物价，降低血清胆固醇，抑制肠道内腐败菌的生长繁殖和腐败产物的产生等作用。
植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)是乳酸菌的一种，革兰氏染色阳性、厌氧或兼性厌氧、无芽孢、耐酸、耐胆盐，最适生长温度为30～37℃，常见于乳制品、肉类、蔬菜以及果汁中的乳酸菌，能通过胃肠并定植于肠道发挥有益作用。植物乳杆菌无论是在食品发酵，还是工业乳酸发酵以及医疗保健等领域中均有着广泛的应用。
在商业生产中益生菌培养基的生产制备过程中发挥着重要的作用，直接影响到菌体的密度和生产周期及生产成本。要得到高活菌数且高活力的直投式发酵剂，首先必须筛选适合乳酸菌大量生长的增菌培养基。目前，植物乳杆菌大都采用MRS作为基础培养基，然后配合其他的生长因子来培养植物乳杆菌。李想等以MRS培养基为基本培养基优化碳源、氮源、磷源最佳添加量为蔗糖2％、酵母膏2.5％、磷酸氢二钾0.2％；李疆等以MRS为基础培养基筛选出培养基的最优组合4.30g/L蔗糖，64.8mL/L麦芽汁，7.42g/L乳清粉，培养基初始pH值为6.25；熊涛等研究了在MRS基础培养基中优化培养基的配方，结果表明葡萄糖质量分数5.43％、蛋白胨质量分数0.98％、磷酸氢二钾质量分数0.59％，pH6.5，35℃培养18h后，活菌数能达到4.68×109cfu/mL。但用此MRS培养基价格昂贵，成分复杂，制作繁琐，不利于工业化生产。因此，选择价格低廉且活菌数高的适合保加利亚乳杆菌生长的增殖培养基是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种培养基廉价而且能使保加利亚乳杆菌大量生长，以实现高效浓缩型直投式发酵剂的工业化大规模生产的植物乳杆菌增菌培养基及其制备方法。
为达到上述目的，本发明的植物乳杆菌增菌培养基按100份质量份数计包括1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分离蛋白，10-20份的胡萝卜汁、1-2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氢二钾，0.004-0.01份的甲硫氨酸，0.004-0.01份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.0-7.5。
本发明的制备方法如下：按100份质量份数计取1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分离蛋白，1-2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氢二钾，0.004-0.01份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入10-20份的胡萝卜汁和0.004-0.01份的甲硫氨酸，调节pH值为7.0-7.5。
所述的大豆分离蛋白制备：将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉，将脱脂大豆粉与无菌蒸馏水按1:8-1:12的质量比混合，水浴锅中加热至40-60℃后添加1mol/L的盐酸溶液，调节pH值为4.2-5.0，待40-80分钟后于离心机中3000r/min-6000r/min离心15-20分钟，去除上清液，对所得沉淀蛋白进行喷雾干燥或真空冷冻干燥得到大豆分离蛋白。
所述的胡萝卜汁制备：取新鲜干净的胡萝卜用1mol/LNaOH溶液浸泡，加热煮沸1-3min，清洗、去皮、切块后水浴中煮沸5-10min，加入胡萝卜质量2倍的水打浆，打浆后加入浆料质量0.03％的果胶酶在50℃处理45-60min后过滤除杂，用6000r/min离心机离心得到胡萝卜汁。
所述的甲硫氨酸以甲硫氨酸溶液的形式加入即将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的溶液经0.22微米的过滤膜过滤除菌得到。
所述的过滤膜经121℃灭菌15min。
本发明提供的植物乳杆菌增菌培养基，在常用基础培养基上添加乳糖、大豆分离蛋白、胡萝卜汁，对植物乳杆菌有很好的增菌效果；且这些物质廉价易得，制作方法简单易行，利于大规模生产。
植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入该增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达(4.2-6.1)×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业培养基MRS，进行相同条件的处理的活菌数(2.9-4.0)×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
具体实施方式
实施例1：
本实施例的植物乳杆菌增菌培养基按100份质量份数计包括1份的葡萄糖，1份的乳糖，1.5份的大豆分离蛋白，10份的胡萝卜汁、1份的酵母浸粉，0.2份的磷酸氢二钾，0.4份质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液，0.004份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.0。
本实施例的制备方法如下：
首先，将0.22微米的过滤膜在121℃灭菌15min，然后将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液后经过滤膜过滤除菌得到甲硫氨酸溶液。
按100份质量份数计取1份的葡萄糖，1份的乳糖，1.5份的大豆分离蛋白，1份的酵母浸粉，0.2份的磷酸氢二钾，0.004份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入10份的胡萝卜汁和0.4份甲硫氨酸溶液，调节pH值为7.0。
植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入本实施例的增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达4.2×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业MRS培养基，进行相同条件的处理的活菌数3.0×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
实施例2：
本实施例的植物乳杆菌增菌培养基按100份质量份数计包括2.5份的葡萄糖，0.5份的乳糖，1份的大豆分离蛋白，10份的胡萝卜汁、2份的酵母浸粉，0.25份的磷酸氢二钾，0.8份质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液，0.006份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.1。
本实施例的制备方法如下：
首先，将0.22微米的过滤膜在121℃灭菌15min，然后将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液后经过滤膜过滤除菌得到甲硫氨酸溶液。
按100份质量份数计取2.5份的葡萄糖，0.5份的乳糖，1份的大豆分离蛋白，2份的酵母浸粉，0.25份的磷酸氢二钾，0.006份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入10份的胡萝卜汁和0.8份甲硫氨酸溶液，调节pH值为7.1。
本实施例的大豆分离蛋白制备如下：将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉，将脱脂大豆粉与无菌蒸馏水按1：8的质量比混合，水浴锅中加热至40℃后添加1mol/L的盐酸溶液，调节pH值为4.2，待40分钟后于离心机中3000r/min离心20分钟，去除上清液，对所得沉淀蛋白进行喷雾干燥或真空冷冻干燥得到大豆分离蛋白。
本实施例的胡萝卜汁制备：取新鲜干净的胡萝卜用1mol/LNaOH溶液浸泡，加热煮沸2min，清洗、去皮、切块后水浴中煮沸7min，加入胡萝卜质量2倍的水打浆，打浆后加入浆料质量0.03％的果胶酶在50℃处理50min后过滤除杂，用6000r/min离心机离心得到胡萝卜汁。
植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入本实施例的增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达5.0×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业MRS培养基，进行相同条件的处理的活菌数3.2×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
实施例3：
本实施例的植物乳杆菌增菌培养基按100份质量份数计包括2份的葡萄糖，1.5份的乳糖，2份的大豆分离蛋白，15份的胡萝卜汁、2.5份的酵母浸粉，0.3份的磷酸氢二钾，0.5份质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液，0.008份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.3。
本实施例的制备方法如下：
首先，将0.22微米的过滤膜在121℃灭菌15min，然后将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液后经过滤膜过滤除菌得到甲硫氨酸溶液。
按100份质量份数计取2份的葡萄糖，1.5份的乳糖，2份的大豆分离蛋白，2.5份的酵母浸粉，0.3份的磷酸氢二钾，0.008份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入15份的胡萝卜汁和0.5份甲硫氨酸溶液，调节pH值为7.3。
本实施例的大豆分离蛋白制备如下：将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉，将脱脂大豆粉与无菌蒸馏水按1：12的质量比混合，水浴锅中加热至50℃后添加1mol/L的盐酸溶液，调节pH值为4.5，待60分钟后于离心机中4000r/min离心18分钟，去除上清液，对所得沉淀蛋白进行喷雾干燥或真空冷冻干燥得到大豆分离蛋白。
本实施例的胡萝卜汁制备：取新鲜干净的胡萝卜用1mol/LNaOH溶液浸泡，加热煮沸1min，清洗、去皮、切块后水浴中煮沸5min，加入胡萝卜质量2倍的水打浆，打浆后加入浆料质量0.03％的果胶酶在50℃处理45min后过滤除杂，用6000r/min离心机离心得到胡萝卜汁。
植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入本实施例的增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达5.4×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业培养基MRS，进行相同条件的处理的活菌数3.1×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
实施例4：
本实施例的植物乳杆菌增菌培养基按100份质量份数计包括3份的葡萄糖，1份的乳糖，2.5份的大豆分离蛋白，20份的胡萝卜汁、1.5份的酵母浸粉，0.4份的磷酸氢二钾，1份质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液，0.01份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.5。
本实施例的制备方法如下：
首先，将0.22微米的过滤膜在121℃灭菌15min，然后将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的甲硫氨酸溶液后经过滤膜过滤除菌得到甲硫氨酸溶液。
按100份质量份数计取3份的葡萄糖，1份的乳糖，2.5份的大豆分离蛋白，1.5份的酵母浸粉，0.4份的磷酸氢二钾，0.01份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入20份的胡萝卜汁和1份甲硫氨酸溶液，调节pH值为7.5。
本实施例的大豆分离蛋白制备如下：将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉，将脱脂大豆粉与无菌蒸馏水按1：10的质量比混合，水浴锅中加热至60℃后添加1mol/L的盐酸溶液，调节pH值为5.0，待80分钟后于离心机中6000r/min离心15分钟，去除上清液，对所得沉淀蛋白进行喷雾干燥或真空冷冻干燥得到大豆分离蛋白。
本实施例的胡萝卜汁制备：取新鲜干净的胡萝卜用1mol/LNaOH溶液浸泡，加热煮沸3min，清洗、去皮、切块后水浴中煮沸10min，加入胡萝卜质量2倍的水打浆，打浆后加入浆料质量0.03％的果胶酶在50℃处理60min后过滤除杂，用6000r/min离心机离心得到胡萝卜汁。
植物乳杆菌经三次活化后，以3％的接种量接入本实施例的增菌培养基中，37℃培养18h，活菌数高达6.1×109cfu/mL以上，与实验室常用乳杆菌培养的商业培养基MRS，进行相同条件的处理的活菌数4.0×109cfu/mL相比活菌数有了较大的提高，增菌效果非常显著。
Claims (6)
1.一种植物乳杆菌增菌培养基，其特征在于：按100份质量份数计包括1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分离蛋白，10-20份的胡萝卜汁、1-2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氢二钾，0.004-0.01份的甲硫氨酸，0.004-0.01份的硫酸锰，余量为无菌水，初始pH值为7.0-7.5。
2.一种植物乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于：按100份质量份数计取1-3份的葡萄糖，0.5-1.5份的乳糖，1-2.5份的大豆分离蛋白，1-2.5份的酵母浸粉，0.2-0.4份的磷酸氢二钾，0.004-0.01份的硫酸锰溶于无菌水中，经121℃，15min灭菌后再加入10-20份的胡萝卜汁和0.004-0.01份的甲硫氨酸，调节pH值为7.0-7.5。
3.根据权利要求2所述的植物乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于：所述的大豆分离蛋白制备：将大豆粉经6号抽提溶剂油喷淋脱脂，然后去除6号溶剂油，得到脱脂大豆粉，将脱脂大豆粉与无菌蒸馏水按1:8-1:12的质量比混合，水浴锅中加热至40-60℃后添加1mol/L的盐酸溶液，调节pH值为4.2-5.0，待40-80分钟后于离心机中3000r/min-6000r/min离心15-20分钟，去除上清液，对所得沉淀蛋白进行喷雾干燥或真空冷冻干燥得到大豆分离蛋白。
4.根据权利要求2所述的植物乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于：所述的胡萝卜汁制备：取新鲜干净的胡萝卜用1mol/LNaOH溶液浸泡，加热煮沸1-3min，清洗、去皮、切块后水浴中煮沸5-10min，加入胡萝卜质量2倍的水打浆，打浆后加入浆料质量0.03％的果胶酶在50℃处理45-60min后过滤除杂，用6000r/min离心机离心得到胡萝卜汁。
5.根据权利要求2所述的植物乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于：所述的甲硫氨酸以甲硫氨酸溶液的形式加入即将甲硫氨酸制成质量浓度为1％的溶液经0.22微米的过滤膜过滤除菌得到。
6.根据权利要求5所述的植物乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于：所述的过滤膜经121℃灭菌15min。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160323 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |