CN105372195A - 一种微量紫外分光光度计质量检测方法和检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种微量紫外分光光度计质量检测方法和检测试剂盒。本发明首次采用系列鲑鱼精DNA标准物质对微量紫外分光光度计进行质量检验。其优点是灵敏度高，可检测低至10.7ng的DNA；线性范围广：可检测0ng/μL～2163ng/μL的DNA，跨越4个数量级；涵盖了市场上现有微量紫外分光光度计的测量范围；鲑鱼精DNA标准物质用紫外分光光度计国家标准装置验证证实准确度高。本发明解决了微量紫外分光光度计因仅有检测窗口、不能放入比色杯、波长不可调等限制，无法按照现有的分光光度计检定国家标准进行校准的问题。

Description

一种微量紫外分光光度计质量检测方法和检测试剂盒

技术领域：

本发明属于生物、化分析领域，具体涉及一种微量紫外分光光度计质量检测方法和检测试剂盒。

背景技术：

微量紫外分光光度计是一类样品用量少、体积微小的紫外分光光度计，和大型紫外分光光度计具有极大的差异，目前还没有合适的针对于微量紫外分光光度计进行质量检测的试剂盒及配套方法。

微量紫外分光光度计的特点是集成化程度高、灵敏度高，常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。主要分布在检验检疫实验室、临床检测实验室、血液制品中心等。鉴于各实验室逐渐以独立第三方身份发挥职责和作用，为提高实验室权威性、公正性及业务水平，增强客户的信赖性，扩大业务量，各实验室计量认证和实验室认可的需求越来越多，而微量紫外分光光度计是核酸和蛋白质定量测量必需的主要设备之一，检定校准的需求量越来越大。

现有技术对分光光度计的检定只针对于大型分光光度计。比如《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程，JJGl78-2007》是基于1cm光程的仪器起草的校准方法，针对仪器的波长最大允许误差、波长重复性、噪声与漂移、最小光谱带宽、透射比最大允许误差、透射比重复性、基线平直度、杂散光等性能指标进行校准。校准使用的标准器具包括汞灯，氧化钬、镨钕、镨铒滤光片，氧化钬溶液，干涉滤光片，重铬酸钾和高氯酸标准溶液，透射比滤光片，光谱中性滤光片，碘化钠和亚硝酸钾标准溶液等。校准时，需要将这些标准器放入仪器吸收池中，测定仪器性能指标。大型分光光度计具有检测池，放入比色杯进行检测，而且可以调节检测波长。

而微量紫外分光光度计高度集成，仅有检测窗口，没有检测池，不能放入比色杯，且波长不可调，因此JJGl78-2007规定的检测指标几乎均不能完成，其生产的各项技术指标也和JJGl78-2007规定的有显著差异，因此JJGl78-2007不适用于微量紫外分光光度计的检测校准。

因此，需要建立一种专门针对微量紫外分光光度计质量进行检测的方法，并提供配套试剂盒。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用于微量紫外分光光度计的质量检测的方法和配套试剂盒，实现微量紫外分光光度计线性范围，重复性、示值误差等相关参数的检验，以确定微量紫外分光光度计的质量状况。

本发明提供了一种微量紫外分光光度计质量检测的方法，用空白对照样品对待检微量紫外分光光度计进行基线校准；然后测定不同浓度的鲑鱼精DNA标准物质样品，记录各标准物质样品在不同波长下的紫外吸收信号强度和浓度值，利用不同浓度的鲑鱼精DNA标准值和仪器测量浓度值计算被检测微量紫外分光光度计的示值误差、重复性、线性范围。

所述不同浓度的鲑鱼精DNA标准物质的浓度范围为0ng/μL～2163ng/μL。

所述不同波长是230nm、260nm、280nm、340nm。

上述方法中，每个浓度的鲑鱼精DNA样本平行取样3次，每次平行读数3次。

所述示值误差为测量平均值和标准值之间的差值，按式(1)计算：

$\mathrm{\Δ}C=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{C}_i}{n}-C_0$ --------式(1)

式中：

ΔC--------------示值误差；

C₀-------------标准值；

C_i--------------测定值；

n--------------测定次数。

所述标准值是鲑鱼精DNA样本的已知浓度值

所述重复性是在相同测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。重复性用多次测量结果的标准差表示，按式(2)计算标准偏差。

$s=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{(C_i-\stackrel{\‾}{C})}^2}{n-1}}$ --------式(2)

式中：

---------1～20次的算术平均数；

C_i--------每次的实测值；

n-------测定的次数；

i--------测定的序号，i＝1～6。

所述线性范围按如下方法得到：

选择空白对照样品(0ng/μL)进行仪器空白校准、然后测定不同浓度鲑鱼精DNA标准物质样本，在不同波长紫外线下进行测定各样本的吸光度对应的含量值，重复测定3次，计算其平均值。以系列标准物质的标称值和对应的吸光度值做标准曲线，按式(3)计算其相关系数r，得出待检微量紫外分光光度计线性范围。

$r=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{X}_i{Y}_i-\frac{\underset{i}{\overset{n}{\Σ}}{X}_i\underset{i}{\overset{n}{\Σ}}{Y}_i}{N}}{\left(\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{X}^2-\frac{\underset{i-1}{\overset{n}{\Σ}}{X}^2}{N}\right)\left(\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{Y}^2-\frac{\underset{i-1}{\overset{n}{\Σ}}{Y}^2}{N}\right)}$ 式(3)

式中：

r---------相关系数；

X---------标准物质的标称值；

Y---------对应的吸光度值；

N---------测量次数。

以下本发明的一次具体操作，具体步骤如下：

1)鲑鱼精DNA标准物质和对照样本的平衡。

将鲑鱼精DNA标准物质和对应的对照样品置于室温平衡20min。

2)测定不同浓度的鲑鱼精DNA标准物质

A打开仪器设备和工作软件，待自检通过后，选定单链DNA测量模式。

B用合适的移液器吸取对照样品2μL至于仪器检测窗口，按仪器说明书要求进行仪器空白校准。

C用合适的移液器按顺序分别吸取选择空白对照样品(0ng/μL)、鲑鱼精DNA标准物质(10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL)2μL至于仪器检测窗口，按仪器说明书要求依次进行测试230nm、260nm、280nm、340nm的吸光度。每个样本平行取样3次，每次平行读数3次。

3)数据处理及方法评价

A计算示值误差

B测量重复性

C求出线性范围

本发明用紫外分光光度计国家标准装置验证了本方法的准确度(见实施例3)。

本方法的创新点是：

1、首次采用系列鲑鱼精DNA标准物质对微量紫外分光光度计进行质量检验；

2、灵敏度高：可检测低至10.7ng的DNA；

3、方法线性范围广：可检测0ng/μL～2163ng/μL的DNA，跨越4个数量级；涵盖了市场上现有微量紫外分光光度计的测量范围。

4、准确度高：采用紫外分光光度计国家标准装置对方法进行了验证，得到的量值不确定度低，准确度高。

5、本方法解决了现有的《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程，JJGl78-2007》因微量紫外分光光度计的整体性，仅有检测窗口、不能放入比色杯、波长不可调等的限制而不能进行校准的问题，使微量紫外分光光度计可以进行计量校准。

本发明还提供了一种微量紫外分光光度计检测试剂盒，试剂盒中包括鲑鱼精DNA标准物质、对照样品，其特征为：

鲑鱼精DNA标准物质为单链的DNA样品，其标准值分别为：10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL。对照样品是鲑鱼精DNA浓度为0ng/μL的空白样品。

标准物质和对照样品每个体积50μL.

本发明中所用的鲑鱼精DNA标准物质用高精度的电感耦合等离子发射光度法确定量值，方法为：

将鲑鱼精DNA样品进行硝酸消解，消解条件为：160℃，闷罐消解16h，然后定重后待测；利用磷酸二氢钠标准物质为标准，配制标准溶液，利用电感耦合等离子发射光度仪测定系列磷元素标准物质和消解后的鲑鱼精DNA样品中磷元素的质量浓度值，从而得到鲑鱼精DNA标准物质的质量浓度值。

另外确定了特性量值的鲑鱼精DNA标准物质用分光光度计国家标准进行了其特性量值的验证分析，结果见实例3。

本试剂盒的优点是：

1、弥补了现有紫外分光度计校准方法和标准器具不能对微量紫外分光光度计进行校准的缺限；

2、灵敏度高：可检测低至1ng/μL的DNA；

3、检测范围广：可检测0ng/μL～2163ng/μL的DNA，跨越4个数量级；

4、操作简便、需要的检测仪器设备常规；

5、标准品准确度高。

附图说明：

图1鲑鱼精DNA标准物质各组分紫外吸收谱图；

图2鲑鱼精DNA浓度和紫外吸收信号一致性；

图3微量紫外分光度计测定鲑鱼精DNA的线性范围；

图4微量紫外分光度计测定鲑鱼精DNA的线性范围；

图5ICP-OES磷含量和强度标准曲线；

图6ICP-OES定量测定鲑鱼精DNA标准物质结果的溯源性说明；

图7鲑鱼精DNA标准物质ICP-OES和紫外分光光度计国家标准装置测定结果比较。

具体实施方式

实施例1鲑鱼精DNA与紫外吸收信号的关系

一、实验目的：

研究鲑鱼精DNA浓度与紫外吸收信号是否具有线性关系，以证明可用微量紫外分光光度计对鲑鱼精DNA进行定量，从而也证明可以利用鲑鱼精DNA标准物质对微量紫外分光光度计进行质量检验。

二、仪器设备：

微量紫外分光光度计Nanodrop2000(Thermo,美国)；移液器0.5μL-10μL(eppendorf芬兰)

三、材料与方法：

1.空白对照样本为18.2mΩ.cm的超纯水，其鲑鱼精DNA浓度为0ng/μL。

2.鲑鱼精DNA标准物质，浓度分别为：10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL。鲑鱼精DNA标准物质的溶解溶剂为18.2mΩ.cm的超纯水。

3.打开微量紫外分光度计，选择核酸→DNA→单链DNA，在样品名称处输入正确的样品名称。

4.用合适的仪器取空白样品1μL-2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，反复清洗3次，然后按BLANK(空白)键。

5.取空白样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取空白样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次。

6.取标称值为10.7ng/μL鲑鱼精DNA样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次。

7.取标称值为103.9ng/μL鲑鱼精DNA样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次。

8.取标称值为508.1ng/μL鲑鱼精DNA样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次。

9.取标称值为1048ng/μL鲑鱼精DNA样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次。

10.取标称值为2163ng/μL鲑鱼精DNA样品2μL,滴到微量紫外分光度计检测窗口，盖上盖，按SAMPLE(样品)键，读取样品浓度值，连续取样3次，每次重复读数3次，具体测量结果见表1。

11.各浓度紫外吸收光谱图见图1.

12.标准曲线的绘制：以鲑鱼精DNA浓度为横坐标，以紫外吸收强度为纵坐标进行曲线绘制，所得到的标准曲线见图2。

四、实验结果

表1微量紫外分光光度计测定空白对照样本和鲑鱼精DNA标准物质的吸光度、浓度值.

由表2可知，仪器测定浓度和吸光度值呈正比关系。

由图2可知，鲑鱼精DNA浓度与紫外吸收信号成正比，线性相关系数为1.000000，鲑鱼精DNA浓度与紫外吸收信号呈正比。

五、实验结论

鲑鱼精DNA浓度与紫外吸收强度具有线性关系，证明可以用微量紫外分光光度计对鲑鱼精DNA进行定量，从而也证明可以用具有准确量值的鲑鱼精DNA标准物质对微量紫外分光光度计进行质量检验。

实施例2确定微量紫外分光光度计测量鲑鱼精DNA含量的线性范围及定量限和检测灵敏度

一、实验目的：

研究微量紫外分光光度计测量鲑鱼精DNA含量的线性范围及定量限和检测灵敏度，以证明可用微量紫外分光光度计对鲑鱼精DNA进行定量。

二、仪器设备：

微量紫外分光光度计1Nanodrop2000(Thermo,美国)；

微量紫外分光度计2GeneQuant(AmershamBiosciences,美国)；

微量紫外风光度计3Biophotometer(Eppendorf芬兰)，

微量紫外分光光度计4NanoQ(博奥生物有限公司中国)；

移液器0.5μL-10μL(eppendorf芬兰)

三、材料与方法

1、空白样本(0ng/μL)

2、鲑鱼精DNA标准物质，浓度分别为：10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL。

3、操作同实施实例1中的3和10

为了确定微量紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA浓度的线性范围，将不同浓度的鲑鱼精DNA样本由低到高依次测定。

四、实验结果：

1.微量紫外分光度计测定鲑鱼精DNA的线性范围

不同型号微量分光光度计测定空白对照样本和鲑鱼精DNA标准物质的结果见表2.

表2不同型号微量分光光度计测定空白对照样本和鲑鱼精DNA标准物质的结果.

注：仪器显示：++++++，表明浓度超过了仪器测量范围。

由表2数据可以看出，Biophotometer、Genequant两种类型的微量紫外分光光度计测量范围较小，只能测量浓度为0ng/μL-103.9ng/μL样本，样本浓度超过103.9ng/μL时，仪器不再显示样本浓度值，表明超过了其测量范围。Nanodrop2000、NanoQ两种类型的微量紫外分光光度计的测量范围较大，能够测量浓度值0.0ng/μL-2163ng/μL样本。因此可以用具有确定浓度的标准物质检验微量紫外分光光度计的测量范围等技术指标。

鲑鱼精DNA浓度与紫外吸收强度的关系见图3，由图3可知，在测试的范围内紫外吸收强度与DNA浓度不完全成正比。实验中某些类型微量紫外分光光度计当浓度超过100ng/μL时，吸光度值达到最大，随着DNA浓度值增加，吸光度值不再增加，即紫外吸收强度值与DNA浓度已经不再是线性关系，不能利用紫外吸收强度值定量判定样品浓度；而另一些类型的微量紫外分光光度计当浓度到达2163ng/μL时，紫外吸收强度值与DNA浓度还是线性关系，还可以定量判定样品浓度。因此可以用已知浓度的鲑鱼精DNA标准物质判定不同型号的微量紫外分光光度计的定量线性范围，将微量紫外分光光度计在线性范围内能够测定的鲑鱼精DNA标准物质最低浓度和最高浓度定为仪器的定量线性范围，实验室在用的微量紫外分光光度计的定量线性范围有两类，即0ng/μL-103.9ng/μL和0ng/μL～2163ng/μL两种，见图4。

2.微量紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA的定量限

根据上述的线性范围，最低浓度10.7ng/μL，加样量为0.001mL。由此，计算出微量紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA的定量限为10.7ng。

3.微量紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA的检测灵敏度

由于仪器对空白样品测试显示结果为(0-2)ng/μL，因此可显示的可检测的最低信号值对应的浓度为2ng/μL，加样量为0.001mL。由此，计算出微量紫外分光光度计测定鲑鱼精DNA的检测限为2ng。

五、实验结论

微量紫外分光光度计对鲑鱼精DNA定量测定在一定范围内呈线性关系，实验室在用的微量紫外分光光度计的定量线性范围有两类，即0ng/μL-103.9ng/μL和0ng/μL～2163ng/μL两种；定量限均为10.7ng；灵敏度均为2ng。

实施例3电感耦合等离子发射光度法测定鲑鱼精DNA质量浓度

一、实验目的：

研究利用电感偶合等离子光谱方法测定鲑鱼精DNA标准物质含量，从而确定其特性量值，证明鲑鱼精DNA标准物质特性量值的可信度和溯源性。

二、仪器设备

电感耦合等离子发射光谱仪：ThermoiCAP6000型，Thermo公司(美国)；超纯水系统：MilliporeQS型，Millipore公司(美国)；分析天平：0.0001g,0.00001g梅特勒(瑞士)。

三、材料与方法：

1.鲑鱼精DNA标准物质，浓度分别为：10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL；磷酸二氢铵国家一级标准物质(GBW06502)；电子级硝酸：69％-70％。

2.鲑鱼精DNA消解：采用闷罐消解法对鲑鱼精DNA标准物质样品进行了消解处理。

方法为：准确称取1.0000g的样品，于聚四氟乙烯的消解罐中，加入1ml浓硝酸摇匀，160℃消解12h-14h,同法制备试剂空白溶液。

3.电感偶合等离子光谱方法测定鲑鱼精DNA标准物质浓度测量。

采用磷酸二氢铵国家一级标准物质(GBW06502)作为标准进行实验测试。将磷酸二氢铵国家一级标准物质(GBW06502)配制成不同浓度的标准溶液作为标准，测定消解后的鲑鱼精DNA标准物质样品和相对应的空白溶液。以配制的磷酸二氢铵国家一级标准物质(GBW06502)不同溶液标准浓度和相对的仪器的响应强度数据制作标准曲线对鲑鱼精DNA样品进行定量测量。具体的电感耦合等离子发射光谱测量条件见表3：

表3鲑鱼精DNA电感耦合等离子发射光谱定量分析条件

四、实验结果

1、电感耦合等离子发射光谱定量测定鲑鱼精DNA标准物质浓度的标准曲线

以配制的磷酸二氢铵国家一级标准物质(GBW06502)不同溶液标准浓度和相对的仪器的响应强度数据制作标准曲线，见图5。

由图5可知，磷含量和相对应的仪器响应强度呈良好的线性关系，相关系数>0.999，表明电感耦合等离子发射光谱对磷定量其浓度值和相对应的响应强度线性相关性很好，依据标准曲线，可以对消解后的鲑鱼精DNA标准样品进行定量测量。

2、电感耦合等离子发射光谱定量测定鲑鱼精DNA标准物质浓度的结果

电感耦合等离子发射光谱定量测定鲑鱼精DNA标准物质浓度的结果见表4

表4鲑鱼精DNA标准物质电感耦合等离子发射光谱定量测定结果

由表4可知利用电感耦合等离子发射光谱可以很好的测定鲑鱼精DNA浓度，测量精度较好，RSD小于1.7％。

3、电感耦合等离子发射光谱定量测定鲑鱼精DNA标准物质结果的溯源性说明

测量结果通过磷元素可以有效的溯源到国际基本单位，见图6。

五、实验结论

利用电感耦合等离子发射光谱可以很好的对鲑鱼精DNA标准物质进行定量测量。

实施例4鲑鱼精DNA标准物质特性量值的紫外分光光度计国家标准装置验证

一、实验目的

1、用紫外分光光度计国家标准装置验证鲑鱼精DNA标准物质特性量值的准确性，验证本发明中检测试剂盒的准确性。

二、仪器设备

紫外分光光度计国家标准装置(Lambda950)

三、材料与方法

1、鲑鱼精DNA标准物质，由中国计量科学研究院研制。

2、空白参考溶液(0.0ng/μL)

3、采用紫外分光光度计国家标准装置，对待侧鲑鱼精DNA样品进行定量

将紫外分光光度计国家标准装置调试完全后，用空白对照样本进行仪器零点调整。用完成零点调整后的紫外分光光度计国家标准装置对空白对照样本、鲑鱼精DNA样本依次测量，由于该国家标准吸光度值最大为3A，因此需要对高浓度样品进行稀释，稀释倍数见表3。记录各样品在260nm处吸光度值。

以260nm吸光度值为依据，扣除空白样本的吸光度值，计算鲑鱼精DNA各样品的浓度值。

四、实验结果

紫外分光光度计国家标准装置测定鲑鱼精DNA样品结果见表5。

表5紫外分光光度计国家标准装置测定鲑鱼精DNA样品结果

以表4和表5数据分别为纵坐标和横坐标进行作图，见图7，由图7和表2、表3数据可知两组数据一致性良好，两组测量值的线性相关系数为1.0，两种方法测量结果一致性良好，说明标准物质特性量值准确，可以用于微型分光光度计的计量校准。

从表中数据可看出，用紫外分光光度计国家标准装置验证鲑鱼精DNA标准物质特性量值结果为：一致性良好。

五、实验结论

本发明提供的检测试剂盒中鲑鱼精DNA标准物质经紫外分光度计国家标准装置验证表明特性量值准确，可以用于微量紫外分光光度计的质量检验。

Claims (10)

1.一种用于检测微量紫外分光光度计质量的试剂盒，其特征是具有不同浓度的鲑鱼精DNA标准物质样品。

2.权利要求1所述的试剂盒，所述鲑鱼精DNA为单链的DNA，浓度为0ng/μL～2163ng/μL；其中鲑鱼精DNA的含量为0ng/μL的样品是空白对照样品。

3.权利要求1所述的试剂盒，所述鲑鱼精DNA标准物质样品分别为：0ng/μL、10.7ng/μL、103.9ng/μL、508.1ng/μL、1048ng/μL、2163ng/μL；每个所述标准物质的体积为50μL。

4.权利要求1所述的试剂盒，所述鲑鱼精DNA标准物质用高精度的电感耦合等离子发射光度法确定质量浓度值。

5.权利要求4所述的试剂盒，所述确定质量浓度值的具体步骤如下：

将鲑鱼精DNA样品进行硝酸消解，消解条件为：160℃，闷罐消解16h，然后定重后待测；利用磷酸二氢钠标准物质为标准，配制标准溶液，利用电感耦合等离子发射光度仪测定系列磷元素标准物质和消解后的鲑鱼精DNA样品中磷元素的质量浓度值，从而得到鲑鱼精DNA标准物质的质量浓度值。

6.一种微量紫外分光光度计质量检测方法，用空白对照样品对待检微量紫外分光光度计进行基线校准，然后测定不同浓度的鲑鱼精DNA标准物质样品，记录各标准物质样品在不同波长下的紫外吸收信号强度和浓度值，利用不同浓度的鲑鱼精DNA标准值和仪器测量浓度值计算被检测微量紫外分光光度计的示值误差、重复性、线性范围。

7.权利要求6所述的方法，所述鲑鱼精DNA标准物质为单链的DNA，鲑鱼精DNA的浓度值为0ng/μL～/2163ng/μL，其中浓度值为0ng/μL的样品是空白对照样品。

8.权利要求6所述的方法，所述波长是230nm、260nm、280nm、340nm。

9.权利要求6所述的方法，每个浓度的鲑鱼精DNA样本平行取样3次，每次平行读数3次。

10.权利要求6所述的方法，所述示值误差为测量平均值和标准值之间的差值，按式(1)计算：

$\mathrm{\Δ}C=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{C}_i}{n}-C_0$ --------式(1)

式中：

ΔC--------------示值误差；

C₀-------------标准值；

C_i--------------测定值；

n--------------测定次数；

所述重复性按式(2)计算标准偏差。

$s=\sqrt{\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{(C_i-\stackrel{\‾}{C})}^2}{n-1}}$ --------式(2)

式中：

---------1～20次的算术平均数；

C_i--------每次的实测值；

n-------测定的次数；

i--------测定的序号，i＝1～6。

所述线性范围按如下方法得到：

选择空白对照样品(0ng/μL)进行仪器空白校准、然后测定不同浓度鲑鱼精DNA标准物质样本，在不同波长紫外线下进行测定各样本吸光度对应的浓度值，重复测定3次，计算其平均值。以系列标准物质的标称值和对应的吸光度值做标准曲线，按式(3)计算其相关系数r，得出待检微量紫外分光光度计线性范围。

$r=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{X}_i{Y}_i-\frac{\underset{i}{\overset{n}{\Σ}}{X}_i\underset{i}{\overset{n}{\Σ}}{Y}_i}{N}}{(\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{X}^2-\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{X}^2}{N})(\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{Y}^2-\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\Σ}}{Y}^2}{N})}$ 式(3)

式中：

r---------相关系数；

X---------标准物质的标称值；

Y---------对应的吸光度值；

N---------测量次数。