CN105362454A

CN105362454A - 一种具有辅助降糖功能的组合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN105362454A
Application number: CN201410439667.1A
Authority: CN
Inventors: 张铁军; 田成旺; 任涛; 朱雪瑜; 申秀萍; 刘静
Original assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Current assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Priority date: 2014-09-01
Filing date: 2014-09-01
Publication date: 2016-03-02

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了一种具有辅助降糖功能的组合物及其制备方法。所述组合物是由鲜地黄提取物和相应辅料制得。所述鲜地黄提取物是先将鲜地黄辐照灭酶，再经闪式提取联合树脂纯化获得。所述组合物在药理实验中表现出显著提高胰岛素敏感性和降低血糖的作用，安全有效、质量可控、服用方便。

Description

一种具有辅助降糖功能的组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及中药组合物领域，具体涉及一种具有辅助降糖功能的组合物及其制备方法和用途。

背景技术

糖尿病一种慢性进行性疾患，近年来呈快速增长和日趋年轻化趋势，2010年我国糖尿病患者超过5000万人，平均年龄为45岁。糖尿病特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌及或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。其中Ⅱ型糖尿病占全部糖尿病人的90％以上。II型糖尿病普遍存在致病因素复杂，药物服用周期长，长期服药易产生不良反应等问题，因此如何有效预防糖尿病并提高糖尿病用药的安全有效性成为关注的热点之一。

鲜地黄作为我国常用药材之一，山东、山西、河南等全国许多省份均有种植，尤以河南产的地黄(四大怀药之一)最为出名。现代研究表明，鲜地黄中主要含有环烯醚萜、低聚糖类成分，其中梓醇为其环烯醚萜苷类代表成分之一。梓醇能活化肾上腺髓质的α1肾上腺受体(α1-AR)，通过磷脂酶C-蛋白激酶C(PLC-PKC)信号转导途径，促进肾上腺髓质释放β-内啡肽(β-endorphin)，后者可活化骨骼肌的吗啡μ型受体，促使葡萄糖转运体4(GLUT4)和AKT-Ser473磷酸化，加速骨骼肌对葡萄糖的吸收；β-endorphin也作用于肝表面的β-endorphin受体，抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)，降低葡萄糖异生速度，从而达到降糖的作用；梓醇还能抑制DNA聚合酶、抗自由基作用、抗细胞凋亡与减轻神经元缺血再灌注损。鲜地黄低聚糖节实验性糖尿病的糖代谢紊乱，降低四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖及调节肠道菌群功能的作用，对II型糖尿病大鼠的血糖有降低作用，并能降低TG。

鲜地黄作为鲜药，含水量较大(通常在80％以上)，易发霉和腐烂，给其储存和加工利用带来了较大困难。关于鲜地黄存放和样品制备的专利近年来也有不少的申请，如专利CN1377697A采用微波加热低温干燥的方式制得鲜地黄饮片；专利CN1364469A采用低温榨汁的方式制得鲜地黄制剂；专利CN1187998A采用高温切片干燥的方式制得鲜地黄饮片；专利CN101099789A采用乙醇回流联合树脂纯化的方式制得以梓醇为主的鲜地黄提取物；专利CN101041975A采用超滤的方式制得地黄寡糖等。这些专利虽在一定程度上提高了鲜地黄的存放周期，但也普遍存在着处理能力较小，活性成分一定程度损失等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有辅助降糖功能的组合物，所述组合物主要由鲜地黄提取物及相应的辅料组成。其中，鲜地黄提取物可采用全国各地生产的鲜地黄制备而得，其中优选为河南温县生产的鲜地黄。

再一方面，本发明提供一种具有辅助降糖功能的组合物的制备方法。

所述组合物的制备方法如下：

(1)取鲜地黄，经⁶⁰Co辐照灭酶，加体积百分比浓度为10％～75％乙醇溶液，常温闪式提取1～3次，每次提取5～30min，乙醇溶液的用量(体积)为鲜地黄重量的5～20倍，滤过，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；

(2)将步骤(1)制备的浓缩液在搅拌状态下加入1-5倍的水，水沉8-24小时，离心过滤，得到上清液和沉淀；

(3)取步骤(2)获得的上清液，使其以0.5-3BV/h的流速流过预处理好的大孔吸附树脂进行吸附，然后以0.5-3BV/h的流速，先用1-5倍水进行洗脱除杂，然后再用3-8BV的10％-30％乙醇溶液进行洗脱，收集并浓缩至干，获得鲜地黄提取物。

(4)将步骤(3)所得的鲜地黄提取物与一定比例的载体或辅料混合均匀，选择合适的剂型，制成药物组合物。

优选地，所述组合物还含有药学上可接受的载体或辅料。

优选地，所述组合物的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、混悬剂、滴丸剂、微丸剂、口含片、口崩片、胶丸、软胶囊、分散片、溶液剂。

优选地，所述组合物的剂型为颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液或滴丸剂。

还一方面，本发明提供一种本发明上述所述的组合物在制备用于预防或辅助治疗II型糖尿病药物或保健品中的应用。

本发明的组合物与传统工艺及以往专利相比，操作较为简单，但由于采用了⁶⁰Co照射技术，有效地破坏了β-葡萄糖苷酶的活性，同时制备过程均采用低温操作条件，主要活性成分的转移率均达到70％以上，具有显著的优势；并且经药理试验证明，本发明组合物具有显著提高胰岛素敏感性和降低血糖的作用，可作为预防或辅助治疗II型糖尿病的有效制剂。该组合物安全有效、质量可控、服用方便。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。

实施例1鲜地黄提取物的制备工艺

取鲜地黄药材20kg，经⁶⁰Co在10kGy强度下辐照5h，置于300升闪式提取器中，加入20倍量10％乙醇，提取20min，过滤，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；

向上述浓缩液中加入2倍药材量的水，边加水边搅拌，静置24小时，离心过滤，滤液和滤渣分别收集，备用；

称取HPD-100树脂20kg，置于树脂柱中，分别用95％乙醇和水进行预处理，然后加入上面得到的滤液，流速1BV/h，流出液弃去；然后用3BV的水洗脱，流速1BV/h，弃去水洗脱液；然后用5BV的20％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集20％乙醇洗脱液，减压浓缩，并进行减压干燥，得到的固体粉末，即得鲜地黄提取物。

实施例2鲜地黄提取物的制备工艺

取鲜地黄药材20kg，经⁶⁰Co在20kGy强度下辐照3h，置于300升闪式提取器中，加入5倍量30％乙醇，提取3次、每次提取5min，过滤，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；

向上述浓缩液中加入1倍药材量的水，边加水边搅拌，静置12小时，离心过滤，滤液和滤渣分别收集，备用；

称取HPD-300树脂15kg，置于树脂柱中，分别用95％乙醇和水进行预处理，然后加入上面得到的滤液，流速1BV/h，流出液弃去；然后用3BV的水洗脱，流速1BV/h，弃去水洗脱液；然后用5BV的30％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩，并进行减压干燥，得到的固体粉末，即得鲜地黄提取物。

实施例3鲜地黄提取物的制备工艺

取鲜地黄药材20kg，经⁶⁰Co在30kGy强度下辐照1h，置于300升闪式提取器中，加入10倍量50％乙醇，提取2次，每次10min，过滤，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；

向上述浓缩液中加入5倍药材量的水，边加水边搅拌，静置8小时，离心过滤，滤液和滤渣分别收集，备用；

称取AB-8树脂20kg，置于树脂柱中，分别用95％乙醇和水进行预处理，然后加入上面得到的滤液，流速1BV/h，流出液弃去；然后用3BV的水洗脱，流速1BV/h，弃去水洗脱液；然后用5BV的20％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集50％乙醇洗脱液，减压浓缩，并进行减压干燥，得到的固体粉末，即得鲜地黄提取物。

实施例4鲜地黄提取物的制备工艺

取鲜地黄药材20kg，经⁶⁰Co在10kGy强度下辐照5h，置于300升闪式提取器中，加入12倍量75％乙醇，提取30min，过滤，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，得到浓缩液；

向上述浓缩液中加入1倍药材量的水，边加水边搅拌，静置16小时，离心过滤，滤液和滤渣分别收集，备用；

称取D-101树脂10kg，置于树脂柱中，分别用95％乙醇和水进行预处理，然后加入上面得到的滤液，流速1BV/h，流出液弃去；然后用3BV的水洗脱，流速1BV/h，弃去水洗脱液；然后用5BV的10％乙醇洗脱，流速1BV/h，收集20％乙醇洗脱液，减压浓缩，并进行减压干燥，得到的固体粉末，即得鲜地黄提取物。

实施例5组合物的制备

取实施例1所制备的鲜地黄提取物20g和0.5g硬脂酸镁，混合均匀，灌装胶囊，即制得含有鲜地黄提取物的胶囊剂型的组合物。

实施例6组合物的制备

取实施例2所制备的鲜地黄提取物8g和蔗糖40g，混合均匀，制粒，干燥，即制得含有鲜地黄提取物的颗粒剂型的药物组合物；或将制得的颗粒经进一步压片，即制得含有鲜地黄提取物的片剂剂型的组合物。

实施例7组合物的制备

取实施例3制得的鲜地黄提取物250g，葡萄糖100g，糊精200g，以稀淀粉糊为粘合剂制粒，分装，即得含有鲜地黄提取物的颗粒剂型的组合物。

实施例8组合物的制备

取实施例4所制备的鲜地黄提取物20g，混合均匀，加入40g熔融的聚乙二醇6000中，搅拌均匀，保温90℃状态下倒入滴丸装置中，以30d/min的滴速滴入10℃的液体石蜡中，制成滴丸，即制得含有鲜地黄提取物的滴丸剂型的药物。

实施例9药理试验1

1.实验材料

盐酸二甲双胍片：天津太平洋制药有限公司，批号：120219；

鲜地黄提取物，自制，为实施例1的样品；

葡萄糖：天津市光复科技发展有限公司，批号：20091211；

卓越型(ACCU-CHEK)罗氏血糖仪及检测试纸条：RocheDiagnosticsGmbh；

KK-Ay小鼠，SPF级，雌雄各半，4-5周龄，北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2009-0004，合格证编号：11401300003066；

C57BL/6J小鼠，SPF级，雌雄各半，4-5周龄，12只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2009-0004，合格证编号：11401300003065

2.实验方法

试验选用4～5周龄的KK-Ay小鼠进行试验，选用C57BL/6J小鼠雌雄各5只作为对照组。将KK-Ay小鼠按血糖值随机分为7组，分别为模型组、鲜地黄提取物组、二甲双胍组组。

(1)给药一次对KK-Ay小鼠空腹血糖的影响

于试验当天上午禁食(禁食4h但不禁水)，试验当天测定给药前血糖后，各药物组灌胃给予相应药液(ig，0.2mL/10g)，对照组及模型组灌胃给予等量去离子水。分别测定给药后1h、2h、3h、4h各组小鼠血糖水平。将各给药组血糖值与模型组进行统计学检验。

(2)多次给药对KK-Ay小鼠空腹血糖的影响

各药物组灌胃给予相应药液(ig，0.2mL/10g)，每日给药一次，连续给药50天，对照组及模型组灌胃给予等量去离子水。

测定指标及方法：

动物空腹血糖(给药后2h)：分别于连续给药的第1、2、4、5、6周给药后2h，小鼠尾部静脉针刺取血，用血糖仪测定各组动物的血糖值(给药前动物禁食4小时)。

动物空腹血糖(给药后24h)：分别于连续给药的第1、2、4、5、6周给药后24h，小鼠尾部静脉针刺取血，用血糖仪测定各组动物的血糖值(测定前动物禁食4小时)。

胰岛素耐量：于连续给药的第43天测定各组小鼠胰岛素耐量。动物不禁食，测定各组小鼠给胰岛素前血糖，各组小鼠皮下注射给予5U/kg的胰岛素溶液，测定给予胰岛素后0.5、2、4.5h各组小鼠的血糖值。

血清GSP测定：于给药后第50天(末次给药)给药后1小时，，眼眶静脉丛取血，分离血清，分装，于-20℃冰箱冷冻保存备用。用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定血清GSP(糖化血清蛋白)。

血清GHb测定：于给药后第50天(末次给药)给药后1小时，眼眶静脉丛取血，分离血清，分装，于-20℃冰箱冷冻保存备用。用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定血清GHb(糖化血红蛋白)。

血清胰岛素含量测定：于给药后第50天(末次给药)给药后1小时，眼眶静脉丛取血，分离血清，分装，于-20℃冰箱冷冻保存备用。用小鼠胰岛素超敏ELISA试剂盒测定血清胰岛素含量。

3.实验结果

(1)给药一次对KK-Ay小鼠血糖的影响

试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠血糖水平显著升高；与模型组比较，鲜地黄提取物给药后1-4小时均能显著降低小鼠血糖水平。

表1鲜地黄提取物给药一次对KK-Ay小鼠血糖的影响

(2)给药多次对KK小鼠的影响

动物空腹血糖(给药后2h)：试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠空腹血糖均显著升高；鲜地黄提取物在全部测定点药后2h均能显著降低小鼠血糖，有显著的降血糖作用。

表2鲜地黄提取物多次给药对KK-Ay小鼠空腹血糖的影响(给药后2h)

动物空腹血糖(给药后24h)：试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠空腹血糖均显著升高；鲜地黄提取物在4、5、6周能显著降低小鼠血糖，有显著的降血糖作用。

表3鲜地黄提取物多次给药对KK-Ay小鼠空腹血糖的影响(给药后24h)

胰岛素耐量：试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠给予胰岛素后血糖仍显著升高；与模型组比较，鲜地黄提取物给予胰岛素后270min血糖值显著下降，显著增加胰岛素敏感性。

表4鲜地黄提取物给药43天对KK-Ay小鼠胰岛素耐量的影响

血清GSP、GHb测定：试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠血清糖化血红蛋白(GHb)、糖化血清蛋白(GSP)显著增加；与模型组比较，鲜地黄提取物组小鼠糖化血红蛋白(GHb)、糖化血清蛋白(GSP)均显著下降。

表5鲜地黄提取物多次给药对KK-Ay小鼠血清GHb、GSP的影响

实施例10药理试验2

1.实验材料

盐酸二甲双胍片：天津太平洋制药有限公司，批号：120219；

鲜地黄提取物，自制，为实施例2的样品；

葡萄糖：天津市光复科技发展有限公司，批号：20091211；

卓越型(ACCU-CHEK)罗氏血糖仪及检测试纸条：RocheDiagnosticsGmbh；

ICR种小鼠，SPF级，雄，体重18-20g，120只，由北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：SCXK(京)2012-0001)

2.实验方法与结果

给药途径：口服；给药方式：灌胃；给药体积：小鼠：20ml/kg。

(1)给药一次对小鼠糖耐量的影响

试验选用4～6周龄，体重18～22g的ICR雄性小鼠60只，挑选血糖值适中(禁食12h但不禁水)的小鼠40只进行试验。将小鼠按血糖值随机分为10组，分别为对照组、模型组、鲜地黄提取物组、二甲双胍组组。于试验前1天晚上约8：30禁食(禁食12h但不禁水)，试验当天各药物组灌胃给予相应药液(ig，0.2ml/10g)，对照组及模型组灌胃给予等量去离子水。给药后30分钟，对照组灌胃给予去离子水(0.2ml/10g)，其余各组灌胃给予2.5g/kg的葡萄糖(12.5％葡萄糖溶液，0.2ml/10g)，分别测定给药前、给予葡萄糖后30min、60min、120min各组小鼠血糖水平。将各给药组血糖值与模型组进行统计学检验，并计算血糖曲线下面积(AUC)。

血糖曲线下面积(AUC)＝(给药前血糖+0.5h血糖)×0.5/2+(0.5h血糖+1h血糖)×0.5/2+(1h血糖+2h血糖)×1/2

实验结果如表6所示。

表6鲜地黄提取物给药一次对正常小鼠糖耐量的影响(n＝10)

试验结果显示，与对照组比较，模型组小鼠灌胃给予葡萄糖后血糖水平显著升高；与模型组比较，鲜地黄提取物于造模后2小时能显著降低小鼠血糖水平，结果表明鲜地黄提取物灌胃给药一次对小鼠糖耐量有一定的改善作用。

(2)多次给药对小鼠糖耐量的影响

实验动物及分组情况同上，各药物组灌胃给予相应药液(ig，0.2ml/10g)，每日给药一次，连续给药8天，对照组及模型组灌胃给予等量去离子水。于给药第7天晚上约8:30禁食(禁食12h但不禁水，更换干净垫料及笼具)，第8天给药后30分钟，对照组灌胃给予去离子水(0.2ml/10g)，其余各组灌胃给予2.5g/kg的葡萄糖(12.5％葡萄糖溶液，0.2ml/10g)，分别测定给药前、给予葡萄糖后30min、60min、120min各组小鼠血糖水平。将各给药组血糖值与模型组进行统计学检验，并计算血糖抑制率、血糖曲线下面积(AUC)及血糖曲线下面积改善率。

表7鲜地黄提取物多次给药对正常小鼠糖耐量的影响(n＝10)

结果显示，与对照组比较，模型组小鼠灌胃给予葡萄糖后血糖水平显著升高；与模型组比较，鲜地黄提取物组小鼠造模后0.5h、1h血糖水平均显著下降，并且血糖曲线下面积均显著减少。

Claims

1.一种具有辅助降糖功能的组合物，所述组合物主要由鲜地黄提取物及药学上可接受的载体或辅料组成。

2.根据权利要求1所述的一种具有辅助降糖功能的组合物，其特征在于，鲜地黄提取物可采用全国各地生产的鲜地黄制备而得，其中优选为河南温县生产的鲜地黄。

3.如权利要求1或2所述的一种具有辅助降糖功能的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取鲜地黄，经⁶⁰Co辐照灭酶，加体积百分比浓度为10％～75％乙醇溶液，常温闪式提取1～3次，每次提取5～30min，乙醇溶液的用量为鲜地黄重量的5～20倍，滤过，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到浓缩液；所述倍数为体积比；

(3)取步骤(2)获得的上清液，使其以0.5-3BV/h的流速流过预处理好的大孔吸附树脂进行吸附，然后以0.5-3BV/h的流速，先用1-5倍水进行洗脱除杂，然后再用3-8BV的10％-30％乙醇溶液进行洗脱，收集并浓缩至干，获得鲜地黄提取物；

(4)步骤(3)所得的鲜地黄提取物与一定比例的载体或辅料混合均匀，制成药物组合物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂选自HPD-100、HPD-300、AB-8或D-101型大孔吸附树脂。

5.根据权利要求1或2所述的一种具有辅助降糖功能的组合物，其特征在于，所述组合物为固体口服制剂、液体口服制剂。

6.根据权利要求1或2所述的一种具有辅助降糖功能的组合物，其特征在于，所述组合物为胶囊、颗粒、片剂、滴丸、口服溶液剂。

7.权利要求1或2所述的组合物可用于制备预防和/或辅助治疗II型糖尿病的药物或保健品。