CN105362257B - 一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物 - Google Patents

Abstract

一种用于制备抗皮肤真菌感染的中药提取组合物，涉及一种中药提取组合物，其包括以下重量份数的原料组分：桂皮醛40~60份、丁香酚20~40份以及月桂氮酮10~30份；较佳地，还包括重量份为30~80份的吐温80；较佳地，本发明包括以下重量份数的原料组分：桂皮醛45~55份、丁香酚25~35份以及月桂氮酮15~25份；所述的真菌为浅部真菌；本发明提供了一种原料天然，对多种皮肤癣菌抗菌引起的体癣、股癣、花斑癣、阴道炎等皮肤真菌病作用及疗效显著，毒副作用小，不易产生抗药性，药物活性组分可迅速渗透到皮肤内的一种用于制备抗皮肤真菌感染的中药提取组合物。

Description

一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物

技术领域

本发明属于一种中药提取组合物，特别涉及一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物。

背景技术

皮肤真菌病，是由浅部真菌感染引起的各种皮肤癣菌病如体癣、股癣、花斑癣、手足癣、头癣及阴道炎等，浅部真菌包括红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、糠秕孢子菌、念珠菌等。目前治疗皮肤癣菌首选药物均为化学合成的西药外用制剂及复方制剂，如达克宁、克霉唑、特比萘芬、酮康唑以及复方制剂如派瑞松、曲咪新、曲安奈德益康唑、复方酮康唑等，多数抑菌剂均有一定的抗真菌作用，可缓解症状，但治愈率较低，复发率高。中药提取组合物抗皮肤真菌作用强，不易产生耐药性，对多种皮肤癣菌有杀菌作用，抗菌强度优于西药制剂。开发中药提取组合物抗皮肤真菌感染制剂具有很好的临床应用价值及前景。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种原料天然，对多种皮肤

癣菌抗菌引起的体癣、股癣、花斑癣、阴道炎等皮肤真菌病作用及疗效显著，毒副作用小，不易产生抗药性，药物活性组分可迅速渗透到皮肤内的一种用于制备抗皮肤真菌感染的的中药提取组合物。

本发明的技术方案是：

一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物，其特征在于其包括以下重量份数的原料组分：桂皮醛40~60份、丁香酚20~40份以及月桂氮酮10~30份；

较佳地，还包括重量份为30~80份的吐温80；

较佳地，桂皮醛45~55份、丁香酚25~35份以及月桂氮酮15~25份；

一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物，其特征在于所述的真菌为浅部真菌；

进一步地，浅部真菌包括红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、糠秕孢子菌、念珠菌。

较佳地，本发明的中药提取组合物可制备成油性软膏、乳剂型软膏、搽剂和洗剂。

本发明药物组合物中：

本发明所述的桂皮醛为樟科植物肉桂的树皮，枝、叶经蒸馏所得的挥发油中提取的主要活性成分，占桂皮油的80％以上，具有广谱的抗真菌作用，主要的药理作用有镇痛解痉，解热，增强血液循环，降低血糖，抗菌、抗肿瘤的作用，对多种细菌及真菌有抑菌作用。

本发明所述的丁香酚为丁香油的主要成分约占80-87％，对多种细菌和真菌有抑制作用，可止痒、解热、抗氧化、促进透皮吸收、驱蚊等。

本发明所述的月桂氮酮是一种高效、无毒、无刺激性、安全的渗透吸收促进剂，对亲水性和亲油性化合物均有明显的助渗作用；对皮肤有较强的渗透力，因而可溶解某些药物，使药物向人体皮肤渗透而达到治疗目的；同时还用于消炎止痛、驱虫、抗病毒及抗肿瘤药物的外用剂型，促进血液循环增加药物的吸收和提高疗效。

本发明所述的吐温80是一种常用的药物辅料，在中国药典中明确记载了吐温80作为增溶剂、乳化剂、湿润剂和分散剂的使用，根据中国药典中的叙述，吐温80会降低或抑制部分抗菌剂的抑菌活性。

本发明的技术效果如下：

本发明提供的抗皮肤真菌感染的的中药提取组合物中，以桂皮醛为主，对各种浅部真菌均有很好的抗菌作用；桂皮醛与丁香酚配伍组合后，有协同抗菌作用，抗真菌作用进一步加强；本发明以月桂氮酮为溶解剂，可将药物迅速渗入到皮肤结构内，达到直接杀菌或抑菌目的，提高疗效，安全性好。

本配方主要以中药提取的单体成分组合而成，单一成分有利于药物作用机制、药理学、药效学、毒理学的研究，符合中药现代化的发展方向，有利于中药提取组合物的成药性研究和药物注册上市。

具体实施方式

本发明的组合物可进一步制备为软膏剂或溶液洗剂。

可以选择的，将本发明的组合物制备为药物制剂时，还可以增加不同的药用辅料，如增加稳定剂、增溶剂、润湿剂、乳化剂等，而根据制剂要求，根据药物配伍增加不同的药用辅料，是本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可获得的。

实施例1 油性软膏

桂皮醛：4.0g（40重量份）

丁香酚：2.0g（20重量份）

月桂氮酮：1.0g（10重量份）

吐温：3.0g（30份）

将桂皮醛、丁香酚和月桂氮酮溶解在吐温中，溶解后形成药物组分溶液，然后逐渐加入到油包水的基质中，搅拌均匀即得油性软膏即可。

实施例2 乳剂型软膏

桂皮醛：2.5g（50重量份）

丁香酚：1.25g（25重量份）

月桂氮酮：1.0g（20重量份）

吐温：4.0g (50重量份)

将桂皮醛、丁香酚和月桂氮酮溶解在吐温中，溶解后形成药物组分溶液，然后逐渐加入到水包油的基质中，搅拌均匀即得水包油的乳剂型软膏。

实施例3 搽剂

桂皮醛：3.0g（60重量份）

丁香酚：2.0g（40重量份）

月桂氮酮：1.5g（30重量份）

吐温：8 g（80重量份）

用吐温将桂皮醛、丁香酚和月桂氮酮溶解，形成药物组分溶液;将步骤中药物组分溶液加入到50-75%乙醇中即可。

实施例4 洗剂

桂皮醛：2.4g（48重量份）

丁香酚：1.5g（30重量份）

月桂氮酮：1.3g（26重量份）

吐温80：3.75g（37.5重量份）

用吐温将桂皮醛、丁香酚和月桂氮酮溶解，形成药物组分溶液；将步骤中的药物组分溶液加入到无菌注射用水中，混合均匀，形成洗剂。

病例1：

王某，68岁，男，患足癣五年，角质层增厚，粗糙，脱屑，干燥，每到冬季，易发生皲裂，足屑直接镜检可见菌丝，真菌培养絮状表皮癣菌生长。每天在患处擦拭实施例1药膏早晚各1次，坚持1个月，临床症状消失，真菌镜检及培养均转阴，达到临床及真菌学治愈。

病例2：宋某，39岁，男，患股癣6个月，皮肤已增厚、因瘙痒难忍，而影响工作和睡眠，皮屑直接镜检可见菌丝，真菌培养红色毛癣菌生长。每天在患处擦拭实施例2乳膏，每天三次，1周后症状减轻，继续使用，2周后痊愈。

病例3：杜某某，45岁，男，在腰围和腋窝处出现丘疹疱，并逐渐向周围扩展蔓延，形成多环状，病程2个多月，曾用多种西药治疗未见好转。取皮屑直接镜检可见菌丝，真菌培养须癣毛癣菌生长，临床诊断，体癣。使用实施例3搽剂，每天早晚各一次，擦拭患处，2个星期后临床症状消失，真菌学治愈。

病例4：韩某，50岁，女，外阴瘙痒，分泌增多，夜间难以入睡，病程一年多，多种药物治疗无效。取阴道分泌物，做真菌直接镜检，可见大量芽生孢子及菌丝，真菌培养白念珠菌生长，诊断，念珠菌性阴道炎。使用实施例4洗剂每天早晚各冲洗患处1次，一周后，瘙痒症状明显减轻，继续使用二周后，症状完全消失，真菌镜检及培养均转阴，快速达到临床及真菌学治愈。

实验例1：单体药物试验

分别检测桂皮醛、丁香酚、月桂氮酮、对皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、石小孢子菌、絮状表皮癣菌、白念珠菌）的抗菌活性，以克霉唑的抗菌活性做对照。

菌株来源：均来自河北医科大学第二医院真菌室，保存菌株。

药物来源：桂皮醛（纯度≥98％）由武汉合中生化制造有限公司提供；丁香酚（纯度99.6％）由中国生物制品所提供；月桂氮酮由北京索莱宝科技有限公司提供；克霉唑由湖北兴银河生物化工有限公司提供。

药基配制 采用试管药基法，将桂皮醛、丁香酚、克霉唑、月桂氮酮分别溶于95%乙醇内，配制成10%的药物母液，然后将母液经0.2um过滤后，分别再溶于高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂）内趁热（60℃左右）充分混合，总容量为2.0g/Lx1000ml,再将药基倍比稀释成1mg/ml^-1、0.5mg/ml^-1、0.25mg/ml^-1、0.125mg/ml^-1、0.0625mg/ml^-1、0.0312mg/ml^-1、0.0156mg/ml^-1、0.0078mg/ml^-1、0.0039mg/ml^-1、0.0019mg/ml^-1。分装试管（每管5 ml），放置斜面，编号备用。

菌株接种：挑取已转种活化的菌株，加入到0.9%氯化钠溶液中，用无菌研磨器将菌丝团研磨成单位细胞，再用血细胞计数板将菌悬液浓度调节为1x10⁶CFU/ml,每个试管内接种100ul菌悬液，每个浓度接种2管，除上述药物外，同时分别用葡萄糖蛋白胨琼脂基及含乙醇的葡萄糖蛋白胨琼脂基做为空白对照1和空白对照2。置25℃恒温箱内，每日观察生长情况，并记录，7天后判读结果。

MIC值的判读：将每管生长的情况与阳性及阴性对照管相比较，以最低药物浓度无培养物生长的药基管为MIC终点。

MFC值测定： 取葡萄糖蛋白胨液基2ml，分别加入抑菌实验无菌生长的试管中2h,震荡后取出100ul,接种于葡萄糖蛋白胨琼脂基内，25℃孵育7天,以最低浓度无生长为MFC终点。

质控：分别设立阳性及阴性对照，按上述方法和程序重复一次。

统计学处理：数据采用SPSS13.0软件分析。

实验结果见表1

表1 中药提取组合物单体成分对皮肤癣菌抑菌情况（mg·ml^-1）

结果显示，中药提取组合物中的主要成分桂皮醛对皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、石膏小孢子菌、絮状表皮癣菌、白念珠菌）MIC值在0.0156-0.03125，MFC值在0.03125-0.0625。丁香酚对皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、石膏小孢子菌、絮状表皮癣菌、白念珠菌）MIC值在0.03125-0.0625，MFC值在0.0625-0.125，桂皮醛和丁香酚对皮肤癣菌均有抗菌活性，其中抗菌作用桂皮醛强于丁香酚。二者抗皮肤癣菌作用均强于对照组克霉唑。月桂氮酮在1％浓度下，对皮肤癣菌无抗菌活性。

实验例2组合药物试验：

检测桂皮醛、丁香酚和月桂氮酮组合后对皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、絮状毛癣菌、白念珠菌）的抗菌活性，以克霉唑的抗菌活性做对照。

菌株来源：均来自河北医科大学第二医院真菌室，保存菌株。

药物来源：桂皮醛（纯度≥98％）由武汉合中生化制造有限公司提供。丁香酚（纯度99.6％）由中国生物制品所提供。月桂氮酮由北京索莱宝科技有限公司提供。克霉唑由湖北兴银河生物化工有限公司提供。

药基配制：采用试管药基法，将桂皮醛、丁香酚、月桂氮酮各1g混合后溶于95%乙醇内，配制成10%的药物母液，然后将母液经0.2um过滤后，分别再溶于高压灭菌后的葡萄糖蛋白胨琼脂基（4%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂）内趁热（60℃左右）充分混合，各种药物总容量为2.0g/L x1000ml,再将药基倍比稀释成1mg/ml^-1、0.5mg/ml^-1、0.25mg/ml^-1、0.125mg/ml^-1、0.0625mg/ml^-1、0.03125mg/ml^-1、0.0156mg/ml^-1、0.0078mg/ml^-1、0.0039mg/ml^-1、0.0019mg/ml^-1。分装试管，（每管5ml），放置斜面，编号备用。

菌株接种：挑取已转种活化的菌株，加入到0.9%氯化钠溶液中，用无菌研磨器将菌丝团研磨成单位细胞，再用血细胞计数板将菌悬液浓度调节为1x10⁶CFU/ml,每个试管内接种100ul菌悬液，每个浓度接种2管，除上述药物外，同时分别用葡萄糖蛋白胨琼脂基及含乙醇的葡萄糖蛋白胨琼脂基做为空白对照1和空白对照2。置25℃恒温箱内，每日观察生长情况，并记录，7天后判读结果。

MIC值的判读： 将每管生长的情况与阳性及阴性对照管相比较，以最低药物浓度无培养物生长的药基管为MIC终点。

MFC值测定： 取葡萄糖蛋白胨液基2ml，分别加入抑菌实验无菌生长的试管中2h,震荡后取出100ul,接种于葡萄糖蛋白胨琼脂基内，25℃孵育7天,以最低浓度无生长为MFC终点。

质控：分别设立阳性及阴性对照，按上述方法和程序重复一次。

统计学处理：数据采用SPSS13.0软件分析。

实验结果：见表2

表2 中药单体组合对皮肤癣菌抗菌情况（mg·ml^-1）

结果显示，桂皮醛、丁香酚、月桂氮酮三者结合后，对皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、絮状毛癣菌、白念珠菌）MIC值在0.078-0.039，MFC在0.0156-0.078，抗菌活性明显优于单体桂皮醛、丁香酚，三者联合后显示进一步增强了疗效，同时也优于克霉唑对照组，说明桂皮醛、丁香酚、月桂氮酮三者结合起到协同增效的作用。

实验例3电镜检测

将实施例4用无水乙醇溶解，配制成10%药物母液，加入到葡萄糖蛋白胨液基（4%葡萄糖、1%蛋白胨）中，使用10%乙醇葡萄糖蛋白胨液基（4%葡萄糖，1%蛋白胨，10%乙醇）做对照，葡萄糖蛋白胨液基（4%葡萄糖，1%蛋白胨）做空白对照，分别将液基装在无菌试管内，每管5ml。

取活化7天的皮肤癣菌（红色毛癣菌、白念珠菌），加入到0.9%氯化钠溶液中，用研磨器将菌块研开再用血细胞计数板将菌悬液浓度调节为1x10⁶-1x10⁷CFU/ml，分别将菌悬液加入到药基，10%乙醇葡萄糖蛋白胨液基和葡萄糖蛋白胨液基中，每毫升液基中含菌悬液100ul，放置25℃恒温箱内培养7天，然后离心（2500r/min）10min,弃去上清液，取出菌块，SEM用2.5%戊二醛固定，TEM用4%戊二醛固定。

样品制备：将固定后的标本送电镜室，常规制备SEM和TEM样品，分别在Hilachi(日立)S-520扫描电镜和H-500透视电镜下观察。

实验结果：

SEM：药物作用7天后，菌丝形态呈不规则，粗细不一，胞壁破裂，不完整，部分菌丝呈碎片状，变性死亡。

TEM:药物作用7天后，胞浆内水肿，细胞器消失，呈空泡状，胞壁缺损。

对照组：SEM和TEM红色毛癣菌菌丝粗细一致胞浆光滑，形态规则结构完整。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物，其特征在于其包括以下重量份数的原料组分：桂皮醛40~60份、丁香酚20~40份、月桂氮酮10~30份以及30~80份的吐温80；

所述的真菌为浅部真菌；

所述的浅部真菌包括红色毛癣菌、石膏样毛癣菌、絮状毛癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、糠秕孢子菌。

2.根据权利要求1所述的一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物，其特征在于其包括以下重量份数的原料组分：桂皮醛45~55份、丁香酚25~35份以及月桂氮酮15~25份。

3.根据权利要求1~2任一所述的一种用于制备抗皮肤真菌感染药物的中药提取组合物，其特征在于可制备成油性软膏、乳剂型软膏、搽剂和洗剂。