CN105358674A - 细胞培养基 - Google Patents

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CN105358674A CN201480039109.4A CN201480039109A CN105358674A CN 105358674 A CN105358674 A CN 105358674A CN 201480039109 A CN201480039109 A CN 201480039109A CN 105358674 A CN105358674 A CN 105358674A
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M·H·雷纳-布兰德斯
J·冯哈根
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Abstract

本发明涉及包含聚合物嵌入组分的细胞培养基。一些组分在干粉细胞培养基中表现稳定性差。另一些是吸湿性的。这样的组分可以嵌入到聚合物中以增加稳定性和减少结块。

Description

细胞培养基
技术领域
本发明涉及包含聚合物嵌入组分的干细胞培养基。一些组分在干粉细胞培养基中表现稳定性差，而另一些具有吸湿性。一些组分耗费大量时间完全溶解。这样的组分可以嵌入到聚合物中以增加稳定性和降低结块。
背景技术
细胞培养基在水溶液中可以提供一种环境，该环境可以支持和维持细胞生长和/或维持对某些产品的靶向生产而言外在的期望生理细胞条件。
细胞培养基由复杂的组分混合物构成，有时包含一百多种不同的组分，这取决于其需要支持生长和/或支持靶向生理状态的有机体的类型。
哺乳动物、昆虫或植物细胞繁殖所需的细胞培养基通常比支持细菌、酵母或真菌生长的培养基复杂得多。
最初开发的细胞培养基是复合培养基，其由多种组分的混合物组成，化学成分十分不清楚、表征差、并且难以以恒定质量生产，如血浆、血清、胚胎提取物和/或其他生物提取物或蛋白胨。因此，随着化学成分确知培养基的开发，取得了一个重大进步。化学成分确知培养基通常包括但并不仅限于氨基酸、维生素、糖、金属盐、抗氧化剂、螯合剂、生长因子、缓冲剂、激素和许多本领域专家已知的物质。
一些细胞培养基作为无菌水性液体提供。液体细胞培养基的缺点是其降低的保质期以及难于运输和储存。因而，目前许多细胞培养基作为细磨的干粉混合物提供。这些干粉培养基以旨在于水和/或水溶液中溶解的目的而被生产出来，并以溶解状态被设计为(常常与其它补充剂一起)向细胞提供用于生长和/或生产生物药物的大量营养基，和/或当特定营养素构成限制时，用作补料供给细胞。
从干粉制备和使用细胞培养基的一个限制因素是一些组分的稳定性差，其在干粉培养基储存过程中倾向于降解和/或氧化。一些组分是吸湿性的，这往往导致培养基的结块，引起稳定性和/或其它质量问题，从而限制其工业应用。另外，由吸湿性化合物吸取的水可能会导致增加的微生物生长以及相邻组分的降解。
因此，有利的是，寻找一种方法以提高敏感培养基组分的稳定性和减少吸湿组分的负面影响。
发明内容
已发现，可以通过将敏感的和/或吸湿的培养基组分嵌入(embed)聚合物基质中，而使其稳定化。通过嵌入其它组分和/或用其它组分包被和/或接触其它组分，吸湿组分对水的吸取可以降低，对氧化或降解敏感的组分可以表现出增加的稳定性，其中所述其它组分可以增加所述组分的稳定性而无论该不稳定性和/或质量降低是由氧化和/或吸湿性和/或是由范德华和/或静电力导致的聚集所引起，这从而也降低了由氧化的和/或湿的/潮的/粘性的组分可能造成的对相邻组分的影响。
因此，本发明涉及包含至少一种聚合物嵌入组分的干粉细胞培养基。
在优选实施方案中，聚合物是泊洛沙姆。
在另一个优选实施方案，组分是L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、氯化钙×2H2O、氯化胆碱、硝酸铁×9H2O、硫酸亚铁×7H2O、磷酸钠或磷酸二氢钠(NaH2PO4)一水合物。
在一个实施方案中，细胞培养基包含两种或更多种聚合物嵌入组分。
在一个实施方案中，通过热熔挤出(hotmeltextrusion)制备聚合物嵌入组分。
在另一个实施方案中，通过湿法制粒(wetgranulation)制备聚合物嵌入组分。
在一个实施方案中，细胞培养基是哺乳动物细胞培养基。
在另一个实施方案中，细胞培养基是化学成分确知的细胞培养基。
本发明还涉及一种用于生产根据本发明的细胞培养基的方法，其通过
a)提供一种或多种聚合物嵌入组分；
b)提供细胞培养基的其它组分，将其混合并研磨；
c)将步骤a)的聚合物嵌入组分加入步骤b)所得的研磨的混合物。
在优选的实施方案中，步骤b)在球磨机、针磨机、菲茨磨机(Fitzmill)或喷射磨机中进行，最优选在针磨机、菲茨磨机或喷射磨机中进行。
在另一个优选的实施方案中，来自步骤a)的混合物在研磨之前冷却至温度低于0℃。
本发明还涉及一种培养细胞的方法，其通过如下进行：
a)提供生物反应器；
b)将根据本发明的细胞培养基溶解在水中或水性缓冲液中，并将待培养细胞与其混合；
c)孵育步骤b)的混合物。
附图简述
图1和2示出CHOS性能测试。进一步的细节可在实施例2中找到。
发明详述
根据本发明的细胞培养基是维持和/或支持细胞体外生长和/或支持特定生理状态的组分的任何混合物。它可以是复合培养基或化学成分确知培养基。细胞培养基可包含维持和/或支持细胞体外生长所需的所有组分，或仅包含一些组分而其它组分分开添加。根据本发明的细胞培养基的实例为包含维持和/或支持细胞体外生长所需的所有组分的全培养基、以及培养基补充物或补料。在一个优选的实施方案中，细胞培养基是全培养基或缺少少数组分的培养基。
典型地，根据本发明的细胞培养基用于生物反应器中维持和/或支持细胞生长和/或支持特定的生理状态。
哺乳动物细胞培养基是维持和/或支持哺乳动物细胞体外生长的组分的混合物。哺乳动物细胞的例子是人或动物细胞，优选CHO细胞、COS细胞、IVERO细胞、BHK细胞、AK-1细胞、SP2/0细胞、L5.1细胞、杂交瘤细胞或人细胞。
化学成分确知培养基是不包含任何化学成分不确知的物质的细胞培养基。这意味着，用于培养基中的所有化学品的化学组成是已知的。化学成分确知培养基不包含任何酵母、动物或植物组织；它们不包含饲养细胞、血清、提取物或消化物、或可以向培养基贡献化学成分确知性差的蛋白和/或肽和/或水解物的其它组分。化学成分不确知的或确知性差的化学组分是化学组成和结构未被充分知晓的组分、以不太明确的且变化的组成存在的组分、或者仅可通过巨大的实验努力(相当于评价一个蛋白质如白蛋白或酪蛋白的化学组成和结构)才能明确的组分。
粉末细胞培养基或干粉培养基是典型地通过研磨法或冷冻干燥法获得的细胞培养基。这意味着，粉末细胞培养基是粒状的颗粒培养基，而不是液体培养基。术语“干粉”可以与术语“粉末”互换使用；然而，除非另有说明，在本文中“干粉”仅仅指粒状物质的总体外观，并不旨在表示该物质完全不含复合的或聚结的溶剂。
用根据本发明的培养基培养的细胞可以是原核细胞如细菌细胞或真核细胞如酵母、真菌、植物或动物细胞。细胞可以是正常细胞、永生化细胞、患病细胞、转化的细胞、突变细胞、体细胞、生殖细胞、干细胞、前体细胞或胚胎细胞，其中任何一个均可以是已建立的或转化的细胞系或可以从天然来源获得。
颗粒的尺寸是指该颗粒的平均直径。颗粒直径可以通过在硅油中的激光散射确定。
惰性气氛通过用惰性气体填充相应容器或装置产生。合适的惰性气体可以是稀有气体如氩气或优选氮气。这些惰性气体具有很小的反应性，可以防止不希望的化学反应发生。在根据本发明的方法中，产生惰性气氛意味着，氧浓度降低到低于10％(v/v)绝对值，如通过引入液氮或氮气。
不同类型的磨机是本领域技术人员所熟知。
针磨机，也称为离心冲击磨机，凭借在高速旋转盘上的突出针提供分解能量来磨碎固体。针磨机例如由MunsonMachinery(USA),PremiumPulman(India)或Sturtevant(USA)出售。
喷射磨机使用压缩气体来加速颗粒，使其在处理室中彼此撞击。喷射磨机如由Sturtevant(USA)或PMT(Austria)出售。
由Fitzpatrick(USA)商业化的菲茨磨机使用带有刀片的转子研磨。
连续运行的方法是非分批运行的方法。如果研磨方法是连续运行的，意味着培养基成分在一定时间内被持续和稳定地供入磨机。
根据本发明的细胞培养基典型地包含至少一种或多种糖组分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素或维生素前体、一种或多种盐、一种或多种缓冲剂组分、一种或多种辅因子和一种或多种核酸组分。
培养基还可以包含丙酮酸钠、胰岛素、植物蛋白、消化物或提取物、脂肪酸和/或脂肪酸衍生物和/或普朗尼克(pluronic)产品组分(基于环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物)，特别是泊洛沙姆(Poloxamer)188，有时称为普朗尼克F68或KolliphorP188或LutrolF68，和/或表面活性成分，如化学制备的非离子表面活性剂。一个合适的非离子表面活性剂的实例是以伯羟基封端的双官能嵌段共聚物表面活性剂，也称为泊洛沙姆，如可以以商品名获得自德国BASF。
糖组分指所有的单或二糖，如葡萄糖、半乳糖、核糖或果糖(单糖的例子)或蔗糖、乳糖或麦芽糖(二糖的例子)。糖组分还可以是寡糖或多糖。
根据本发明的氨基酸的实例是酪氨酸，蛋白生成性(proteinogenic)氨基酸，尤其是必需氨基酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸，色氨酸和缬氨酸，以及非蛋白生成性氨基酸如D-氨基酸。
酪氨酸指L-或D-酪氨酸，优选L-酪氨酸。
半胱氨酸指L-或D-半胱氨酸，优选L-半胱氨酸。
维生素的实例是维生素A(视黄醇，视黄醛，各种类视黄醇和四种类胡萝卜素)、维生素B1(硫胺素)、维生素B2(核黄素)、维生素B3(烟酸，烟酰胺)、维生素B5(泛酸)、维生素B6(吡哆醇，吡哆胺，吡哆醛)、维生素B7(生物素)、维生素B9(叶酸，甲酰四氢叶酸)、维生素B12(氰钴胺素，羟钴胺素，甲基钴胺素)、维生素C(抗坏血酸)、维生素D(麦角钙化醇，胆钙化醇)、维生素E(生育酚类，生育三烯酚类)和维生素K(叶绿醌，甲萘醌类)。维生素的前体和类似物也包括在内。
盐的实例是包含无机离子的组分，如碳酸氢盐，钙，氯化物，镁，磷酸，钾和钠或微量元素如Co,Cu,F,Fe,Mn,Mo,Ni,Se,Si,Ni,Bi,V和Zn。实例是五水合硫酸铜(II)(CuSO4.5H2O)、氯化钠(NaCl)、氯化钙(CaCl2.2H2O)、氯化钾(KCl)、硫酸铁(Ⅱ)、无水磷酸二氢钠(NaH2PO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)、六水合氯化镁(MgCl2.6H2O)、七水合硫酸锌。
缓冲剂的实例是CO2/HCO3(碳酸盐)、磷酸盐、HEPES、PIPES、ACES、BES、TES、MOPS和TRIS。
辅因子的实例是硫胺素衍生物、生物素、维生素C、NAD/NADP、钴胺素、维生素B12、黄素单核苷酸及衍生物、谷胱甘肽、血红素、核苷酸磷酸和衍生物。
根据本发明的核酸组分可以是核苷碱基(nucleobase)如胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶，核苷如胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷和胸苷，和核苷酸如一磷酸腺苷或二磷酸腺苷或三磷酸腺苷。
根据本发明冷冻指冷却至0℃以下的温度。
本发明的主旨是提供一种稳定储存的粉末细胞培养基，其可被容易地加工而没有组分的结块或降解。当通过混合粉末和溶剂而使干粉培养基溶解在适宜的溶剂中时，粉末溶解并形成液体细胞培养基，如全培养基、培养基补充物、培养基亚组或补料——具有所需且均匀浓度的培养基组分。
原则上，所有细胞培养基组分均可以嵌入聚合物。典型地，对降解或氧化或其它化学改性敏感的组分、溶解度应进行改善的组分和/或吸湿性组分被嵌入聚合物。此类培养基组分的实例是L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、氯化钙×2H2O、氯化胆碱、硝酸铁×9H2O、硫酸亚铁×7H2O、磷酸钠或磷酸二氢钠(NaH2PO4)一水合物。
表1示出DMEMF12培养基组分的列表。针对所有组分，示出聚合物嵌入的效果。
在表1中，“Solu”意味着，如果根据本发明将组分嵌入并以其嵌入形式用于培养基组合物中，则与非嵌入形式相比，所述组分的溶解度提高。
在表1中，“Stab”意味着，如果根据本发明将组分嵌入并以其嵌入形式用于培养基组合物中，则与非嵌入形式相比，所述组分的稳定性提高。
在表1中，“Oxid”意味着，如果根据本发明将组分嵌入并以其嵌入形式用于培养基组合物中，则与非嵌入形式相比，所述组分的抗氧化稳定性提高。
在表1中，“Hygros”意味着，如果根据本发明将组分嵌入并以其嵌入形式用于培养基组合物中，则与非嵌入形式相比，所述物质从周围环境中吸取和持有水分子的能力降低。换句话说，嵌入组分具有较小的吸湿性。
在表1中，“NA”表示“不适用”。这意味着，对于该表中陈述为NA的组分，根据本发明的嵌入不导致任何明显的效果。
嵌入聚合物中意味着，组分部分或完全被聚合物包被或分散在聚合物基质中。所述组分可以作为颗粒或在分子水平上分散在聚合物基质中，从而形成固溶体(solidsolution)。
用于根据本发明嵌入组分的合适聚合物是水溶性聚合物。
合适的聚合物的例子是水溶性纤维素衍生物，如乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚(乙烯醇)、部分水解的聚乙烯醇、乙酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、偏苯三酸乙酸纤维素、聚乙二醇-聚丙二醇(例如，泊洛沙姆(TM))、卡波姆、聚卡波非(polycarbophil)、壳聚糖；天然树胶，如瓜耳胶、阿拉伯树胶、黄蓍胶、或黄原胶，和聚维酮(povidone)；蜡，如聚乙二醇；或甲基丙烯酸的聚合物，例如尤特奇(Eudragit)(R)RL和尤特奇(R)RS；或聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚膦嗪、聚唑烷、聚(羟基烷基羧酸)、角叉菜胶(carrageenate)藻酸盐、卡波姆、藻酸铵、藻酸钠、或其混合物。
在一个优选的实施方案中，聚合物是聚乙二醇(PEG)/聚丙二醇(PPG)嵌段共聚物，聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物。
聚乙二醇(PEG)/聚丙二醇(PPG)嵌段共聚物也称为泊洛沙姆。优选用作根据本发明的聚合物的泊洛沙姆，CAS号9003-11-6，具有通式Ⅰ
I
其中x和z独立地优选为2至130，y优选为15至67。
它们是可商购的(或例如，普朗尼克(R)溶液、凝胶或固体，例如普朗尼克(R)F-127)。可替代地，泊洛沙姆可根据本领域已知的方法从原料制备(见，例如，美国专利号3,579,465和3,740,421)。
关于泊洛沙姆的更多信息可见于HagersHandbuchderPharmazeutischenPraxis,卷9“StoffeP-Z”,1994,282至284页。
聚乙烯基吡咯烷酮聚合物是市售可得的，如来自德国BASF的
聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物是市售可得的，如来自德国BASF的
聚合物中培养基组分的嵌入可以通过多种方法来完成。
当聚合物应以包衣的形式应用时，包被可以通过如下实现：以溶液/悬浮液形式应用成膜聚合物(加上或不加上其它成分如稳定剂)，使用本领域中已知的任何常规包衣技术，如在常规包衣锅(coatingpan)或流化床处理器中喷雾包衣、浸渍包衣(dipcoating)或压制包衣(compressioncoating)。
在一个优选实施方案中，培养基组分分散在由聚合物形成的基质中。
这样的分散可以通过如热熔挤出、喷雾干燥、固体分散、流化床造粒、固体分散或共冻干等工艺制备。
挤出可以简单地定义为在受控条件下对其施力使其通过孔或模以形成新物质(挤出物)的方法，所述受控条件例如温度、混合、进料速率和压力。在热熔挤出中，聚合物是在熔融状态。挤出后，热熔挤出物是固体，其包含聚合物和分散的培养基组分。
如果通过热熔挤出将组分嵌入聚合物，聚合物应该具有低于200℃的熔点。优选，聚合物具有低于150℃的熔点，最优选低于75℃。
发现，当使用泊洛沙姆，如泊洛沙姆188(LutrolF68)作为聚合物时，可以适宜地应用热熔挤出(HME)方法。
对于共冻干，在第一步，将待共冻干的所有组分溶解在溶剂中。各组分可以溶解在一种溶剂中。可替代地，各组分可以分别溶解在溶剂中，然后可以混合得到的两种或更多种不同组分的溶液。典型地，待混合的所有溶液具有相同的溶剂。合适的溶剂是在其中所有组分都是可溶的那些溶剂。合适的溶剂的实例是有机溶剂或水或其混合物。优选的是水。
一旦选定溶剂并溶解组分后，将所得混合物冷冻并冻干。有时将其它溶剂加入到混合物中，以促进冻干。典型地，冻干在低于-20℃的温度进行，优选在约-80℃进行。典型地，通过应用减压，除去液体。
对于喷雾干燥，培养基组分和聚合物溶解在溶剂中。合适的溶剂的实例是有机溶剂或水或其混合物。优选的是水。然后将溶液放入喷雾干燥装置，以便通过在适宜产生粉末的条件下，例如在受控的温度和湿度下，将溶液喷雾到装置的室中直到粉末形成，从而将溶液转化成其相应的粉末。
在典型的喷雾干燥方法中，溶液被吸入装置，经旋转型或喷嘴型雾化器被雾化成喷雾。然后所得雾化的液体喷雾与气体(例如，氮气或更优选空气)混合，在足以促进生产粉末产品的条件下喷雾到干燥室中。
对于固体分散，混合培养基组分和聚合物并加热以便至少聚合物熔融。在彻底混合后，混合物再次冷却，得到含有聚合物和培养基组分的固体。
然后优选将热熔挤出、冷冻干燥、喷雾干燥、固体分散、流化床造粒或其它嵌入步骤后得到的固体研磨，如在球磨机中研磨，以产生均匀尺寸的颗粒。所得到的包含至少一种嵌入聚合物中的培养基组分的颗粒通常具有低于200μm的颗粒大小。优选低于100μm的颗粒大小。有利的颗粒大小为15μm至100μm。
可以理解的是，聚合物嵌入组分可以是单一类型的组分或两种或更多种组分的混合物。还可以理解的是，聚合物嵌入组分的聚合物可以是单一类型的聚合物或两种或多种聚合物的混合物。在一个优选的实施方案中，各聚合物嵌入组分仅包含一种培养基组分和一种聚合物。聚合物嵌入组分可另外包含稳定剂或增塑剂，但在一个优选实施方案中，聚合物嵌入组分仅包含培养基组分和聚合物。
典型地，聚合物嵌入组分包含按重量计0.01至99％之间的培养基组分和按重量计99.99至1％之间的聚合物。优选地，其包含按重量计10至90％之间的培养基组分和按重量计90至10％之间的聚合物。
本发明的粉末细胞培养基优选通过混合除聚合物嵌入组分之外的所有组分并研磨这些组分而生产。组分的混合对于通过研磨制备干粉细胞培养基的技术领域中的技术人员是已知的。优选地，在研磨之前彻底混合所有组分，使得该混合物的所有部分具有几乎相同的组成。组合物的均匀性越高，所得到的培养基就均一细胞生长而言将具有越高的质量。聚合物嵌入组分优选在研磨后加入到混合物中，特别是当聚合物嵌入组分是包衣的组分时。如果组分分散在聚合物基质中，其也可以在研磨之前与其它组分混合，然后研磨混合物。
研磨可以用任何类型的适于生产粉末细胞培养基的研磨机进行。典型的例子是球磨机、针磨机、菲茨磨机或喷射磨机。优选的是针磨机、菲茨磨机或喷射磨机，非常优选的是针磨机。
本领域技术人员知道如何运行这些磨机。
在针磨机的情况下，具有约40cm盘直径的大型磨机设备典型地例如以每分钟1-6500转运行，优选每分钟1-3000转。
研磨可以在标准研磨条件下进行，产生10至300μm之间、最优选25至100μm之间颗粒大小的粉末。
优选，进行研磨的混合物的所有组分都是干燥的。这意味着，如果其含有水，其仅含有结晶水，但不超过10％，优选不超过5％，最优选不超过2％重量计的未结合或未配位的水分子。
在一个优选的实施方案中，研磨在惰性气氛中进行。优选的惰性保护气体是氮气。
在另一个优选的实施方案中，混合物的所有组分在研磨之前冷冻。可以通过任何手段在研磨前冷冻这些成分，确保成分冷却至低于0℃的温度，最优选低于-20℃。在一个优选的实施方案中，用液氮完成冷冻。这意味着用液氮处理成分，例如在导入磨机之前将液氮倒入储存成分的容器。在一个优选的实施方案中，容器是进料器。如果容器是进料器，则优选液氮在进料器的导入成分的一侧导入或接近该侧导入。
典型地，用液氮处理成分2至20秒。
优选，以进入磨机的所有成分在低于0℃的温度、最优选在低于-20℃的温度的方式，完成成分的冷却。
在一个优选的实施方案中，所有成分放在一个容器中，从该容器将混合物转移到进料器，最优选转移到计量螺杆进料器。在进料器中成分有时被进一步混合——这取决于进料器类型——并被进一步冷却。然后将冷冻的混合物从进料器转移到磨机，使得在磨机中被研磨的混合物优选仍具有低于0℃的温度，更优选低于-20℃。
典型地，混合时间(指成分混合物在进料器中的停留时间)超过一分钟，优选15至60分钟。
计量螺杆进料器，也称为剂量搅龙(dosagesnail)，典型地以每分钟10至200转的速度运行，优选以每分钟40至60转运行。
典型地，磨机的温度维持-50至+30℃之间。在一个优选的实施方案中，温度维持在约10℃。
在研磨期间的氧水平优选低于10％(v/v)。
方法可以例如分批或连续运行。在一个优选的实施方案，根据本发明的方法通过以下方式连续进行：在一定时间内，持续将成分混合物装入进料器用于冷却，并持续将来自该进料器的冷却混合物加入磨机。
对于使用经研磨的粉末培养基，可以将溶剂，优选水(最特别是蒸馏和/或去离子水或纯化水或注射用水)或水性缓冲液加入到培养基，混合组分直到培养基完全溶解于溶剂中。
水或水性缓冲液还可包含盐水、提供合适pH范围的可溶性酸或碱离子(通常范围在pH1.0和pH10.0之间)、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和醇或其它极性有机溶剂。
也可以向细胞培养基和溶剂的混合物中添加其它物质，如用于调节pH值的缓冲剂物质、胎牛血清、糖等。然后使得到的液体细胞培养基与待生长或维持的细胞接触。
本发明还涉及培养细胞的方法，其通过如下进行：
a)提供生物反应器；
b)将待培养的细胞与已溶解在水或水性缓冲液中的根据本发明的细胞培养基混合；
c)孵育步骤b)的混合物。
生物反应器是合适细胞培养的任何装置，如可以培养细胞的容器、器皿或罐。生物反应器通常在使用前消毒。通常在合适的条件下，如合适的温度等条件下完成孵育。本领域技术人员知道用于支持或维持细胞生长/培养的合适孵育条件。
与标准培养基相比，包含一种或多种聚合物嵌入组分的本发明细胞培养基在储存时显示出更好的稳定性。
另外，与相当的标准培养基相比，因为给吸湿组分提供了防护，包含一种或多种聚合物嵌入组分的本发明细胞培养基的流动性更好。
本发明进一步提供以下附图和实施例进行举例说明，但是并不限于此。
以上和以下引用的所有申请、专利、和出版物和2013年7月11日提交的相应EP申请13003514.0的全部公开内容，在此通过引用并入本文。
表1
实施例
以下实施例代表本发明的实际应用。
1.制备嵌入泊洛沙姆的碳酸氢钠
使用UnilabH00533Hotmelt，通过热熔挤出，制备泊洛沙姆嵌入碳酸氢钠。
Educts：
2500g碳酸氢钠，约100和200μm之间的颗粒形式。
1000g泊洛沙姆(BASF，德国)，作为喷雾液体的熔融形式。
说明：
2Hüttlin-3组分喷嘴，1.2mm直径
4X1mm聚四氟乙烯管
喷雾空气挡板：2.3mm
小气候(microclimate)：稳定40℃
管：100℃
容器：130℃
喷雾空气：130℃
2.嵌入泊洛沙姆中的碳酸氢钠和L-谷氨酰胺的CHOS性能测试
泊洛沙姆嵌入组分根据实施例1的步骤制备。
CHOS细胞接种在CellventoCHO100(EMDMillipore，美国)中，其带有天然的(native)和嵌入的碳酸氢钠和L-谷氨酰胺并在4℃储存4周。
图1和2示出CHOS性能测试。

Claims (13)

1.干粉细胞培养基，其包含至少一种聚合物嵌入组分。
2.根据权利要求1所述的细胞培养基，其特征在于，聚合物是聚乙二醇(PEG)/聚丙二醇(PPG)嵌段共聚物，聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物。
3.根据权利要求1或2所述的细胞培养基，其特征在于，聚合物是泊洛沙姆。
4.根据权利要求1至3中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，组分是L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、氯化钙×2H2O、氯化胆碱、硝酸铁×9H2O、硫酸亚铁×7H2O、磷酸钠或磷酸二氢钠(NaH2PO4)一水合物。
5.根据权利要求1至4中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，细胞培养基包含两种或更多种聚合物嵌入组分。
6.根据权利要求1至5中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，细胞培养基是哺乳动物细胞培养基。
7.根据权利要求1至6中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，细胞培养基是化学成分确知细胞培养基。
8.根据权利要求1至7中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，所述聚合物嵌入组分通过热熔挤出而制备。
9.根据权利要求1至7中的一项或多项所述的细胞培养基，其特征在于，所述聚合物嵌入组分通过湿法制粒而制备。
10.一种用于生产细胞培养基的方法，其通过
a)提供一种或多种聚合物嵌入组分，
b)提供细胞培养基的其它组分，将其混合并研磨，
c)将聚合物嵌入组分与步骤b)的经研磨的混合物混合。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤b)在球磨机、针磨机、菲茨磨机或喷射磨机中进行。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的方法，其特征在于，来自步骤a)的混合物在研磨之前冷却至低于0℃的温度。
13.一种培养细胞的方法，其通过如下进行：
a)提供生物反应器，
b)将根据权利要求1的一项或多项细胞培养基溶解在水中或水性缓冲液中，
c)将待培养细胞与步骤b)得到的培养基混合，
c)孵育步骤c)的混合物。
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