CN105340974B

CN105340974B - 一种生物拌种剂及应用

Info

Publication number: CN105340974B
Application number: CN201510719483.5A
Authority: CN
Inventors: 黄大野; 朱志刚; 饶犇; 曹春霞; 程贤亮; 姚经武; 刘晓艳; 杨自文
Original assignee: Hubei Biopesticide Engineering Research Center
Current assignee: Hubei Biopesticide Engineering Research Center
Priority date: 2015-10-30
Filing date: 2015-10-30
Publication date: 2018-01-09
Anticipated expiration: 2035-10-30
Also published as: CN105340974A

Abstract

本发明公开了一种生物拌种剂及应用，所述的生物拌种剂包括多粘芽孢杆菌、氨基寡糖素和生化黄腐酸钾，本发明提供的拌种剂对作物种子进行包衣后，使得种子周围土壤形成一个有利于种子萌发和生长的环境，起到促生、壮苗和抗病的作用。三种主要成分配伍具有协同作用，更有利于促进种子萌发和植株生长。本发明生物拌种剂制备简单，不需要特殊加工，成本低廉。更为重要的是无毒，无污染，生产、运输和储存和使用方便，特别适合有机种植，具有极好的应用前景。

Description

一种生物拌种剂及应用

技术领域

本发明属于农药技术领域，具体涉及一种生物拌种剂及应用。

背景技术

采用拌种剂对种子进行处理是防病促生的一项经济、简便且有效的措施。具有打破休眠、提供营养、调节生长发育等多种作用。据统计，国内外种子处理剂正以每年6％的速度增长，占农化市场的4％，年销售总额突破30亿美元，2020年将增至56亿美元。国际市场上先正达和拜耳两大巨头大力开发、推广种子处理剂，种子处理剂已成为这两家公司增长最快的业务部门。国外公司已经把种子处理技术应用到蔬菜种子等经济作物上，利润惊人。

中国种子处理剂市场虽然增长较快，但目前仍然处于较小的基数水平，国内种子处理剂市场需求巨大，按每年15亿亩良种包衣计算，年均需要15～20万吨，目前国产仅1.6万吨(占10％的市场份额)，种子处理剂发展空间巨大。

国内的拌种剂多以化学成分为主，而生物种拌种剂较少，实际在种子阶段，危害种子的病菌都是弱寄生菌，用生物农药完全可以解决这个问题。从安全性上来讲，使用化学拌种剂肯定会影响种子发芽率，

也容易造成环境污染和农药残留，同时也不不利于土壤微生物类群的改善，因此，开发出新型生物拌种剂是种子处理技术未来的方向。

使用多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、氨基寡糖素和生化黄腐酸钾作为拌种剂主剂，协同防治作物病害与促进生长。目前没有多粘芽孢杆菌(P.polymyxa)、氨基寡糖素和生化黄腐酸钾三种物质组合作为拌种剂主剂的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物拌种剂，其主效成分为多粘芽孢杆菌、氨基寡糖素和生化黄腐酸钾。

本发明还有一个目的在于提供了一种生物拌种剂在制备拌种剂中的应用，包括以本发明所述的生物拌种剂为主效成分制备成其他的拌种剂。

本发明还有一个目的在于提供了一种生物拌种剂的应用，包括在促进植物生长中的应用；促进种子萌发中的应用；增强植物抗病性中的应用；防治土传病害的应用。包括在同时促进种子萌发、植物生长和增强植物抗病性中的应用。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种生物拌种剂，其主效成分包含多粘芽孢杆菌、氨基寡糖素和生化黄腐酸钾，优选的，包括：

一种生物拌种剂，包括：

一种生物拌种剂在制备拌种剂中的应用，所述的应用包括利用该生物拌种剂为主效成分制成拌种剂。

一种生物拌种剂在制备拌种剂中的应用，所述的拌种剂包括：

所述的多粘芽孢杆菌的活芽孢数≥1.5×10¹⁰cfu/g。

所述的润湿剂为十二烷基磺酸钠；

所述的分散剂为NNO或木质素磺酸钠。

所述的粘着剂为黄原胶或羧甲基纤维素钠。

所述的填料为硅藻土、滑石粉或白炭黑。

所述的着色剂为玫瑰红或胭脂红。

所述组分在砂磨机中研磨混合均匀即可。

一种拌种剂，包括(优选配方)：

一种拌种剂，包括：

一种生物拌种剂的应用，包括在促进植物生长中的应用；促进种子萌发中的应用；增强植物抗病性中的应用；包括在同时促进种子萌发、植物生长和增强植物抗病性中的应用。包括将拌种剂与种子混合拌种后搅拌均匀，摊开晾干即可。

优选的，将拌种剂与种子按1:25-1:200(质量比)进行拌种，拌种时拌种剂与水混合重量比为1:3-1:10，先将拌种剂与水混匀，再与种子充分搅拌均匀，摊开晾干。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供的拌种剂对作物种子进行包衣后，使得种子周围土壤形成一个有利于种子萌发和生长的环境，起到促生、壮苗和抗病的作用。三种主要成分配伍具有协同作用，更有利于促进种子萌发和植株生长和病害防治。

本发明生物拌种剂制备简单，不需要特殊加工，成本低廉。更为重要的是无毒，无污染，生产、运输和储存和使用方便，特别适合有机种植，具有极好的应用前景。

附图说明

图1为实施例4所述的拌种剂配方制备的拌种剂及拌种的大豆。

图2是实施例4中拌种后的大豆与对照的小区促生试验对比结果。

图3是实施例4中拌种后的大豆与对照的大田促生试验对比结果。

图4是实施例5中拌种后的黄瓜种子。

图5是实施例5中拌种后的黄瓜与对照的温室盆栽促生试验对比结果。

图6是实施5例中拌种后的黄瓜与对照的温室盆栽防病试验对比结果。

图7是实施例6中拌种后的辣椒。

图8是实施例6中拌种的辣椒与对照的温室盆栽促生试验对比结果。

图9是实施例6中拌种的辣椒与对照的温室盆栽防病试验对比结果。

图10是实施例7中拌种的玉米与对照的温室盆栽促生试验对比结果。

图11是实施例8中拌种的小麦与对照的温室盆栽促生试验对比结果。

具体实施方式

本发明技术方案种，所述试剂，如未特别说明，均购自生化商店，所述技术方案，如未特殊说明，均为本领域常规技术。

实施例1：

本发明提供的配方与单方相比，具有协同作用：

1)4g多粘芽孢杆菌粉(湖北康欣农用药业有限公司，以下同)，活芽孢数为2.0×10¹⁰cfu/)

加入1L清水配制成4000μg/ml溶液

2)0.2g氨基寡糖素加入1L清水配制成200μg/ml溶液；

3)0.5g生化黄腐酸钾加入1L清水配制成500μg/ml溶液；

4)将4g多粘芽孢杆菌母粉，0.2g氨基寡糖素和0.5g生化黄腐酸钾加入到1L清水配制成混合溶液。

将黄瓜种子浸种于上述4种溶液中，以浸种清水的种子作为对照，每个处理3次重复，每个重复100粒种子，浸种12h后统计发芽率，随后将发芽种子播入穴盘中，每个处理三次重复，每个重复24粒种子，温室常规管理，播种20d后统计各处理与清水对照的株高、根长和鲜重。

室内发芽率和温室盆栽试验结果表明，与对照相比，四个处理能提高黄瓜发芽率、株高、根长和鲜重，三种不同促生物质组合对黄瓜的促生效果要明显高于单一一种物质的促生效果(表1)。

表1促生因子单剂和组合对黄瓜的促生作用

处理	发芽率(％)	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(cm)
					多粘芽孢杆菌	85.32	21.50	11.33	2.37
氨基寡糖素	83.45	19.47	10.43	2.14
					生化黄腐酸钾	82.56	17.30	9.65	1.98
三种组合	93.93	26.3	15.44	3.23
					对照	81.7	14.7	7.21	1.32

实施例2：

多粘芽孢杆菌和氨基寡糖素的协同防病作用：

菌土制备：将黄瓜立枯病菌活化并放入PD培养基进行发酵，7d后收集菌丝，菌丝体与育苗土1：1000(质量比)混合均匀制备带菌土，7d后装入穴盘中备用。

称取4g多粘芽孢杆菌母粉加入1L清水配制成4000μg/ml溶液，0.2g氨基寡糖素加入1L清水配制成200μg/ml溶液，称取4g多粘芽孢杆菌母粉和0.2g氨基寡糖素加入1L清水配制成混合溶液。将黄瓜种子浸种于上述3种溶液中，以浸种清水的种子作为对照，每个处理3次重复，每个重复100粒种子，浸种12h后播种于上述带菌土的穴盘中，温室常规管理，10d后统计各浸种处理和对照出苗率，并计算发病率和防效。

盆栽试验结果表明，多粘芽孢杆菌和氨基寡糖素组合防效比单一因子防效有明显提高，具有明显的协同防治作用。

表2多粘芽孢杆菌和氨基寡糖素对黄瓜立枯病的协同防病作用

处理	发病率(％)	防效(％)
			多粘芽孢杆菌	40.86	51.17
氨基寡糖素	49.18	41.22
			多粘+寡糖	27.67	66.93
对照	83.67	-

实施例3：

多粘芽孢杆菌的发酵：

1.一级种子培养：在5000ml三角瓶中装有一级种子培养基2000ml，121℃湿热灭菌30min。取多粘芽孢杆菌冻干管菌种，接种于该一级种子培养基中，30℃培养12h。经检查，菌种未见染菌，菌体形态较好，可以进行下一步操作；

2.二级种子培养：在400L发酵罐中装有二级种子培养基300L，121℃灭菌30min，接入培养好的一级种子3000ml，在30℃培养12h。经检查，菌种未见污染和菌体形态较好的话，可以进行下一步操作；

3.发酵：在40m³发酵罐中装有发酵培养基30m³，121℃灭菌30min，接入长好的二级种子300L。控制罐压0.02Mpa-0.04Mpa，在28℃培养45h，当芽孢形成有90％时放罐。

4.发酵过程中采用以下补料控制方法：

补料：当发酵至12h开始流加由葡萄糖60％，水40％配制成的碳源葡萄糖补料培养基，至发酵40h时停止；pH控制：根据需要用质量百分浓度20％的氨水流加调节pH，使发酵液液控制在pH6.0-6.5之间；使用降膜蒸发器浓缩发酵液：将发酵液加热到60℃时进入降膜蒸发器进行浓缩，在真空度-80kpa下进行蒸发。然后依次进入二效和三效蒸发器，当发酵液浓缩至含固量达到15％-20％时，开始出料。

多级低温喷雾流化干燥造粒：这里使用了多级低温喷雾流化干燥设备，进风温度控制在180℃，出口温度控制在60℃。浓缩后的发酵液经过喷雾干燥之后成粒出塔。

本例所述多粘芽孢杆菌培养基配方由下述原料及重量百分比组成：

一级种子培养基配方：葡萄糖2％，牛肉膏1％，蛋白胨2.5％，氯化钠0.5％，培养基pH调为7.5，其余为水。

二级种子培养基配方：葡萄糖0.5％，酵母抽提物2.5％，蛋白胨0.5％，磷酸氢二钾0.02％，氯化钠0.5％，硫酸镁0.02％，培养基pH调为7.5，其余为水。

发酵培养基配方：葡萄糖1.5％，豆粕2.5％，玉米浆1％，酵母粉2.5％，蛋白胨1％，麦芽浸粉1％，磷酸氢二钾0.01％，硫酸镁0.1％，硫酸锰0.002％，培养基pH7.5，其余为水。

实施例4：

一种生物拌种剂，包括：7.5kg多粘芽孢杆菌母粉，氨基寡糖素0.1kg，生化黄腐酸钾0.1kg，十二烷基磺酸钠0.1kg，木质素磺酸钠0.4kg，黄原胶0.4kg，白炭黑1.6kg，玫瑰红0.01kg。将上述组分搅拌均匀，称取1kg拌种剂，将拌种剂与水以1:5均匀混合，并按拌种剂与种子以质量比1:50称取大豆并拌种，搅拌均匀后摊开晾干，待晾干后备用(图1)。

2015年4月在湖北省农业科学院内试验地进行、小区试验，包衣处理60粒种子，设为三次重复，以不包衣种子作为对照，播种20d后统计株高、根长和鲜重(图2)。大田实验于2015年5月在内蒙古大兴安岭扎兰河农场进行，包衣播种20亩地，以不包衣种子作为对照，播种后2个月后，处理和对照随机取样60株，设为三次重复，测定株高、根长和鲜重。

小区和大田试验结果表明使用拌种剂对大豆拌种后具有明显促生作用，小区试验拌种后大豆株高、根长和鲜重分别增加101.64％、93.31％和111.83％(图2)。大田试验株高、根长和鲜种分别增加37.37％、50.00％和45.57％(图3)(表2)。

表3拌种剂对大豆的促生作用

处理	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(g)
				小区试验	拌种	12.3	7.5	19.7
对照	6.1	3.9	9.3
				大田试验	拌种	37.9	14.7	80.5
对照	27.6	9.8	55.3

实施例5：

一种拌种剂，包括：7.0kg多粘芽孢杆菌母粉，氨基寡糖素0.1kg，生化黄腐酸钾0.2kg，十二烷基磺酸钠0.2kg，NNO 0.4kg，黄原胶0.4kg，硅藻土2.0kg，玫瑰红0.01kg。将上述组分搅拌均匀，称取1kg拌种剂，将拌种剂与水以1:5均匀混合，并按拌种剂与种子以质量比1:25称取黄瓜种子并拌种，搅拌均匀后摊开晾干，待晾干后备用(图4)。

发芽率试验在实验室进行，每个重复100粒种子，共三次重复，以不包衣种子作为对照，在垫有纱布培养皿中催芽，2d后统计对照和处理的发芽率。

2013年7月在湖北省农业科学院温室大棚进行促生盆栽试验，对黄瓜进行拌种，每个重复24粒种子，三次重复，以不包衣种子作为对照，播种于穴盘中，温室常规管理，20d后统计株高、根长和鲜重(图5)。

2013年8月进行拌种防治黄瓜立枯病盆栽试验，将黄瓜立枯病菌活化并放入PD培养基进行发酵，7d后收集菌丝，菌丝体与育苗土1：1000(质量比)混合均匀制备带菌土，放置7d后装入穴盘中备用，将上述拌种后的黄瓜种子播种于穴盘中，以不拌种的黄瓜作为对照。每个处理3次重复，每个重复36粒种子，10d后统计拌种处理和对照的出苗数，并计算发病率和防效(图6)。

表4拌种剂对黄瓜的促生作用

处理	发芽率(％)	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(g)
					拌种	93.00	24.13	14.32	2.53

对照

82.00

15.37

7.43

1.65

表5黄瓜拌种对立枯病的防效

处理	发病率(％)	防效(％)
			拌种	24.67	68.50
对照	78.33	-

实施例6：

一种生物拌种剂，包括：7.0kg多粘芽孢杆菌母粉，氨基寡糖素0.1kg，黄腐酸钾0.2kg，十二烷基磺酸钠0.2kg，NNO 0.4kg，黄原胶0.4kg，硅藻土2.0kg，玫瑰红0.01kg，将上述组分搅拌均匀，称取1kg拌种剂，将拌种剂与水以1:7均匀混合，按拌种剂与种子以质量比1:50称取辣椒种子并拌种，待晾干后备用(图7)。

发芽率试验在实验室进行，每个处理300粒种子，共三次重复，以不包衣种子作为对照，在垫有湿纱布培养皿中催芽，4d后统计对照和处理的发芽率。

2013年9月在湖北省农业科学院温室大棚进行盆栽试验，对辣椒进行拌种，每个重复32粒种子，三次重复，以不包衣种子作为对照，播种于穴盘中，温室常规管理，20d后统计株高、根长和鲜重(图8)。

2013年10月进行拌种防治辣椒盆栽试验，将辣椒疫霉菌活化并放入转接到含有燕麦培养基的平板上培养，连续光照培养6d后刷取游动孢子备用。将上述拌种后的辣椒种子播种于穴盘中，以不拌种的辣椒作为对照，每个穴盘灌1ml辣椒疫霉菌孢子悬浮液。每个处理3次重复，每个重复18粒种子，20d后统计拌种处理和对照的出苗数，并计算发病率和防效(图9)。

表6拌种剂对辣椒的促生作用

处理	发芽率(％)	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(g)
					拌种	89.13	12.30	9.83	1.85
对照	83.24	7.95	6.63	1.21

表7辣椒拌种对疫病的防效

处理	发病率(％)	防效(％)
			拌种	25.93	67.44
对照	79.63	-

实施例7：

采用实施例4方法制备拌种剂，将拌种剂与水以1:5均匀混合，并按拌种剂与种子以质量比1:50称取玉米并拌种，搅拌均匀后摊开晾干，待晾干后备用。2015年5月在湖北省农业科学院内温室，包衣处理96粒种子，设为三次重复，以不包衣种子作为对照，播种40d后统计株高、根长和鲜重(图10)

盆栽试验结果表明使用拌种剂对玉米拌种后具有明显促生作用，拌种后玉米株高、根长和鲜重分别增加10.91％、33.17％和24.14％(表8)。

表8拌种剂对玉米的促生作用

处理	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(g)
				拌种	71.27	20.78	12.60
对照	64.26	13.89	10.15

实施例8：

采用实施例4方法制备拌种剂，将拌种剂与水以1:5均匀混合，并按拌种剂与种子以质量比1:100称取小麦并拌种，搅拌均匀后摊开晾干，待晾干后备用。2015年6月在湖北省农业科学院内温室，包衣处理72粒种子，设为三次重复，以不包衣种子作为对照，播种40d后统计株高、根长和鲜重(图11)

盆栽试验结果表明使用拌种剂对小麦拌种后具有明显促生作用，拌种后小麦株高、根长和鲜重分别增加9.06％、46.17％和48.39％(表10)。

表9拌种剂对小麦的促生作用

处理	株高(cm)	根长(cm)	鲜重(g)
				拌种	30.20	15.45	3.22
对照	27.69	10.57	2.17

Claims

1.一种生物拌种剂，包括：

2.根据权利要求1所述的生物拌种剂，包括：

3.权利要求1所述的生物拌种剂在制备拌种剂中的应用。

4.根据权利要求1所述的拌种剂，包括：

5.权利要求1或权利要求4所述的拌种剂在促进种子萌发中的应用。

6.权利要求1或权利要求4所述的拌种剂在增强植物抗病性中的应用。

7.权利要求1或权利要求4所述的拌种剂在同时促进植物生长和增强植物抗病性中的应用。

8.根据权利要求5或6或7所述的应用，所述的种子为黄瓜、辣椒、玉米、小麦或大豆的种子。