CN105319301B - 一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，属于食品检测技术领域。包括以下步骤：(1)、靛蓝试样溶液的提取；(2)、靛蓝试样溶液的净化和浓缩；(3)、高效液相色谱仪的测定分析。本发明具有以下优点：(1)、建立了一种有效的食品添加剂靛蓝中非色素有机物的提取、净化和浓缩的方法，其中对试样溶液进行的净化和浓缩，有效地避免了因色素及可溶性有机物随目标检测物同时进入色谱系统所造成的色谱图干扰严重、洗脱驻留在色谱柱上色素及有机物时间过长、色谱柱及检测器寿命缩短等缺陷；(2)、确立了食品添加剂靛蓝中非色素有机物的高效液相色谱测定分析条件，其中建立的液相色谱梯度洗脱程序可以有效分离三种非色素有机物。
Description
技术领域
本发明属于食品检验技术领域，具体涉及一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法。
背景技术
食品添加剂靛蓝在食品生产加工中作为食品着色剂被广泛使用，产品中非色素有机物的含量是该产品的重要质量指标，其含量多少直接体现了靛蓝产品的品质优劣，因此，国际上许多国家及组织均对靛蓝中非色素有机物的含量进行了严格的限制，其中，国际食品法典委员会(FAO/WHO，1992)规定食品添加剂靛蓝中靛红-5-磺酸、5磺基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸总量不超过0.5％；美国食品化学品法典(FCC V)中规定靛红-5-磺酸不超过0.4％，5-磺基邻氨基苯甲酸不超过0.2％。
但遗憾的是我国食品添加剂靛蓝的国家安全标准尚未将非色素有机物限量指标列入。食品添加剂中非色素有机物的检测方法主要为柱色谱法、纸色谱法和薄层色谱法以及液相色谱法，但前三种方法因操作繁琐，影响因素多，测定精密度较差，实际检测工作中很难被广泛采用；尚未检索到国内用液相色谱法测定食品添加剂靛蓝中非色素有机物的报道，国外液相色谱相关测定方法提取简单且无净化步骤，色素及可溶性有机物随目标检测物同时进入色谱系统，造成了色谱图干扰严重、洗脱驻留在色谱柱上色素及有机物时间过长、色谱柱及检测器寿命缩短等缺陷。为了弥补上述方法弊端与缺陷，经过研究与试验，制定了一种专门针对食品添加剂靛蓝中非色素有机物的提取、净化、浓缩以及高效液相色谱测定分析方法。
发明内容
本发明的目的在于公开了一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，包括以下步骤：
(1)、靛蓝试样溶液的提取：用浓度为2.5％的氨水溶液溶解靛蓝试样并提取三种非色素有机物；
(2)、靛蓝试样溶液的净化和浓缩：用离子交换硅胶基SPE柱净化、浓缩三种非色素有机物；
(3)、靛蓝试样溶液测定：对净化和浓缩后的试样溶液用高效液相色谱仪进行测定，得到靛蓝试样中各成分的色谱图，记录色谱峰面积，并通过与标准品的标准峰面积进行比较来测定含量；高效液相色谱仪的色谱条件为：
a、色谱柱选自柱长250mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱；
b、保护柱选自柱长15mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱；
c、柱温：30℃；
d、流动相：A泵为0.05mol/L醋酸铵溶液，B泵为甲醇；
e、检测波长：245nm；
f、进样体积：10μL。
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步骤(1)的具体过程为：准确称取适量靛蓝试样，放入小烧杯中，用浓度为2.5％的氨水溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用浓度为2.5％的氨水溶液定容至刻度，摇匀，备用。
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，准确称取靛蓝试样0.5g，精确至0.001g。本技术方案中0.5g通常指0.5g左右，精确至0.001g通常指单次称量要精确到小数点后第三位。
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步骤(2)的具体过程为：依次用甲醇5mL、水5mL活化SPE柱，准确吸取步骤(1)获得的试样溶液10.0mL过此小柱；再依次用浓度为2.5％的氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗，吹干小柱后，用浓度为6％甲酸甲醇溶液1.0mL洗脱，洗脱液过0.22μm滤膜后，供步骤(3)测定。
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，步骤(3)中高效液相色谱仪的梯度洗脱程序为：
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，靛蓝试样中非色素有机物的含量测定按式(一)计算。
式(一)
式中：
X——试样中非色素有机物的含量，单位为质量百分数(％)；
A——样液中非色素有机物峰面积；
Cs——标准工作溶液中非色素有机物的浓度(g/mL)；
V——样液定容体积(mL)；
As——标准工作溶液中非色素有机物峰面积；
m——称取的试样量(g)。
10——样液浓缩倍数
上述技术方案所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其中，所述方法还包括标准品色谱图的建立，包括：
(ⅰ)标准品溶液的制备：准确称取标准品靛红-5-磺酸钠0.2742g或靛红-5-磺酸0.2500g、5-磺基邻氨基苯甲酸0.2500g、邻氨基苯甲酸0.2500g，放入小烧杯中，用0.05mol/L醋酸铵溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用；
用移液枪准确移取1.00mL上述溶液于另一10mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用；对应靛红-5-磺酸酸、5-磺基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸标准使用溶液的浓度均为250μg/mL；
(ⅱ)将标准品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到标准品的色谱图；高效液相色谱仪的色谱条件为：
a、色谱柱选自柱长250mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱；
b、保护柱选自柱长15mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱；
c、柱温：30℃；
d、流动相：A泵为0.05mol/L醋酸铵溶液，B泵为甲醇；
e、检测波长：245nm；
f、进样体积：10μL；
g、梯度洗脱程序为：
本发明具有以下有益效果：
1、本发明建立了一种有效的食品添加剂靛蓝中非色素有机物的提取、净化和浓缩的方法。
2、本发明对试样溶液进行的净化和浓缩，有效地避免了因色素及可溶性有机物随目标检测物同时进入色谱系统造成的色谱图干扰严重、洗脱驻留在色谱柱上色素及有机物时间过长、色谱柱及检测器寿命缩短等缺陷。
3、本发明确立了一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的高效液相色谱测定分析条件。
4、本发明建立的液相色谱梯度洗脱程序可以有效分离三种非色素有机物。
附图说明：
1、图1为非色素有机物标准品色谱图，其中1为5-磺基邻氨基苯甲酸，2为靛红-5-磺酸，3为邻氨基苯甲酸。
具体实施方式：
为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明公开的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法作进一步的说明。
本发明中所用试剂材料和仪器设备：
1、高压液相色谱分析用水指GB/T 6682中规定的一级水。
2、醋酸铵：色谱纯；甲醇：色谱纯；甲酸：色谱纯；氨水：优级纯；
3、醋酸铵溶液(0.05mol/L)：称取醋酸铵3.8540g，溶于适量水中，稀释至1L。
4、2.5％的氨水溶液：量取氨水2.5mL，用水稀释至100mL。
5、6％甲酸甲醇溶液：量取甲酸6mL，用甲醇稀释至100mL。
6、标准品：纯度≥96％
a.5-磺基邻氨基苯甲酸(2-氨基-5-磺基苯甲酸)。
b.靛红-5-磺酸或其钠盐。
c.邻氨基苯甲酸。
7、离子交换硅胶基SPE柱：Bond Elut SAX阴离子交换柱，100mg/3mL，或性能相当者。
8、高效液相色谱仪：装有梯度洗脱附件，配有紫外检测器，配有自动进样器。
9、分析天平：感量分别为0.001g和0.0001g。
10、正压固相萃取装置：带有氮吹功能。
实施例1：
一、标准溶液的制备：
准确称取标准品靛红-5-磺酸钠0.2742g(或靛红-5-磺酸0.2500g)、5-磺基邻氨基苯甲酸0.2500g、邻氨基苯甲酸0.2500g(均精确至0.0001g)，放入小烧杯中，用0.05mol/L醋酸铵溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用。
用移液枪准确移取1.00mL上述溶液于另一10mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用。对应靛红-5-磺酸酸、5-磺基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸标准使用溶液的浓度均为250μg/mL(2.5×10-4g/mL)。
二、靛蓝试样溶液的制备：
1、提取：
称取0.503g试样，放入小烧杯中，用浓度为2.5％的氨水溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用浓度为2.5％的氨水溶液定容至刻度，摇匀，备用。
2、净化和浓缩：
依次用甲醇5mL、水5mL活化SPE柱，准确吸取提取液10.0mL过此小柱。再依次用2.5％的氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗，吹干小柱后，用6％甲酸甲醇溶液1.0mL洗脱，洗脱液过0.22μm滤膜后，供高效液相色谱测定。
3、测定：
3.1色谱条件：
a、色谱柱选自柱长250mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱。
b、保护柱选自柱长15mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；或性能相当的色谱柱。
c.柱温：30℃。
d.流动相：A泵：0.05mol/L醋酸铵溶液，B泵：甲醇。
e.流动相流速：如表1所示。
f.检测波长：245nm。
g.进样体积：10μL。
h.梯度洗脱：如表1所示。
表1梯度洗脱程序
3.2色谱测定：
分别向液相色谱仪注入10μL标准品溶液和靛蓝试样溶液，用紫外检测器检测，记录色谱峰面积，并与相应的标准峰面积进行比较定量，测定数据见表2，标准品色谱图见图1，其中1为5-磺基邻氨基苯甲酸，2为靛红-5-磺酸，3为邻氨基苯甲酸。
表2高效液相色谱检测数据
3.3结果计算和表述：
试样中非色素有机物的含量按式(一)计算。
式(一)
式中：
X——试样中非色素有机物的含量，单位为质量百分数(％)；
A——样液中非色素有机物峰面积；
Cs——标准工作溶液中非色素有机物的浓度(g/mL)；
V——样液定容体积(mL)；
As——标准工作溶液中非色素有机物峰面积；
m——称取的试样量(g)。
10——样液浓缩倍数
将表2中的测定数据按式(一)计算，得到试样中5-磺基邻氨基苯甲酸含量为：
试样中靛红-5-磺酸含量为：
试样中邻氨基苯甲酸含量为：
试样中三种非色素有机物总含量按下式计算：
X＝X1+X2+X3＝0.298
实施例2：
按照实施例1的过程，本发明进行了6组平行实验，结果如表3所示：
表36组平行实验结果
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (6)
1.一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，包括以下步骤：
(1)、靛蓝试样溶液的提取：用浓度为2.5％的氨水溶液溶解靛蓝试样并提取三种非色素有机物；所述三种非色素有机物为靛红-5-磺酸钠或靛红-5-磺酸、5-磺基邻氨基苯甲酸和邻氨基苯甲酸；
(2)、靛蓝试样溶液的净化和浓缩：用离子交换硅胶基SPE柱净化、浓缩三种非色素有机物；
(3)、靛蓝试样溶液测定：对净化和浓缩后的试样溶液用高效液相色谱仪进行测定，得到靛蓝试样中各成分的色谱图，记录色谱峰面积，并通过与标准品的标准峰面积进行比较来测定含量；高效液相色谱仪的色谱条件为：
a、色谱柱选自柱长250mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；
b、保护柱选自柱长15mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；
c、柱温：30℃；
d、流动相：A泵为0.05mol/L醋酸铵溶液，B泵为甲醇；
e、检测波长：245nm；
f、进样体积：10μL；
g、梯度洗脱程序为：
2.根据权利要求1所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其特征在于，步骤(1)的具体过程为：准确称取适量靛蓝试样，放入小烧杯中，用浓度为2.5％的氨水溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用浓度为2.5％的氨水溶液定容至刻度，摇匀，备用。
3.根据权利要求2所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其特征在于：准确称取靛蓝试样0.5g，精确至0.001g。
4.根据权利要求1所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其特征在于，步骤(2)的具体过程为：依次用甲醇5mL、水5mL活化SPE柱，准确吸取步骤(1)获得的试样溶液10.0mL过此小柱；再依次用浓度为2.5％的氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗，吹干小柱后，用浓度为6％甲酸甲醇溶液1.0mL洗脱，洗脱液过0.22μm滤膜后，供步骤(3)测定。
5.根据权利要求1所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其特征在于，靛蓝试样中非色素有机物的含量测定按式(一)计算
式中：
X——试样中非色素有机物的含量，单位为质量百分数％；
A——样液中非色素有机物峰面积；
Cs——标准工作溶液中非色素有机物的浓度g/mL；
V——样液定容体积mL；
As——标准工作溶液中非色素有机物峰面积；
m——称取的试样量g；
10——样液浓缩倍数。
6.根据权利1、2、3、4或5所述的一种食品添加剂靛蓝中非色素有机物的测定方法，其特征在于：所述方法还包括标准品色谱图的建立，包括：
(ⅰ)标准品溶液的制备：准确称取标准品靛红-5-磺酸钠0.2742g或靛红-5-磺酸0.2500g、5-磺基邻氨基苯甲酸0.2500g、邻氨基苯甲酸0.2500g，放入小烧杯中，用0.05mol/L醋酸铵溶液溶解后，全部移入100mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用；
用移液枪准确移取1.00mL上述溶液于另一10mL容量瓶中，并用0.05mol/L醋酸铵溶液定容至刻度，摇匀，备用；对应靛红-5-磺酸酸、5-磺基邻氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸标准使用溶液的浓度均为250μg/mL；
(ⅱ)将标准品溶液注入高效液相色谱仪进行测定，得到标准品的色谱图；高效液相色谱仪的色谱条件为：
a、色谱柱选自柱长250mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；
b、保护柱选自柱长15mm，内径4.6mm，填料5μm的Agilent ZORBAX SB-C18柱；
c、柱温：30℃；
d、流动相：A泵为0.05mol/L醋酸铵溶液，B泵为甲醇；
e、检测波长：245nm；
f、进样体积：10μL；
g、梯度洗脱程序为：
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