CN105308064A - 用于诱导肥大细胞-特异性凋亡的肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明的肽不仅行使与天然的溶细胞性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)相同的功能或类似的功能，而且由于小的大小而具有非常优秀的皮肤渗透度。本发明的肽可以与抗原呈递细胞表面蛋白(CD80及CD86)有效地相结合来抑制T细胞的活化，以此可抑制炎症性细胞因子(例如，白细胞介素-2(IL-2)及γ-干扰素(IFN-γ))的表达。对此，本发明的包含肽的组合物对Th1-介导免疫疾病的预防、治疗或改善发挥非常优秀的功效。因此，本发明的肽的优秀的活性及稳定性可非常有效地适用于医药、医药外品及化妆品。

Description

用于诱导肥大细胞-特异性凋亡的肽及其用途
技术领域
本专利申请于2013年05月13日提交韩国特许厅申请号为10-2013-0053779的韩国专利申请的优先权，上述专利申请的全部内容在此引入本申请作为参照。
本发明涉及用于诱导肥大细胞特-异性凋亡的肽及其用途。
背景技术
一般情况下，被称过敏的过敏反应对抗原诱发非正常的免疫反应。根据格-库二氏(Gell&Coombs)分类法，上述过敏反应被分为以下四种，由免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏反应为I型、由抗体介导的过敏反应为II型、由免疫复合体介导的过敏反应为III型、由抗原呈递细胞和T细胞间的相互作用介导的过敏反应为IV型。周围常见的过敏疾病大致是由I型过敏反应诱发的疾病，由上述I型过敏反应诱发的疾病包括过敏性鼻炎、哮喘、过敏性皮肤炎等。众所周知的过敏原(allergen；抗原)包括如坚果类、卵类的食品及花粉、房尘螨或一部分医药品等。当流入这种过敏原时，过敏原与免疫球蛋白E相结合后附着于作为肥大细胞的免疫球蛋白E受体的FceRI的α-亚基，并与β-亚基和γ-亚基形成复合体，来实现受体的信号传输。通过上述过程诱导肥大细胞的脱颗粒来使作为诱发瘙痒症或炎症反应的介导因子的组胺(histamine)、β-氨基己糖苷酶(beta-hexosaminidase)、前列腺素(prostaglandin)、白细胞三烯(leukotriene)、白细胞介素(interleukin)-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α等的分泌活化。这种因子的作用也使B细胞的免疫球蛋白E的生产活化来成为使过敏反应恶化的因素。实际上，在过敏患者的情况下，具有血液免疫球蛋白E的数值较高的特征，从而对过敏原的流入容易引起过敏反应(AllergyAsthmaImmunolRes.，5(3):170-174(2013))。
根据观察到I型过敏反应的区域来分类疾病，在鼻腔的粘膜发生过敏的情况下，呈现为过敏性鼻炎，在呼吸道粘膜或支气管发生过敏的情况下，呈现为哮喘，而在皮肤发生的过敏反应为过敏性皮炎。
根据2010年报告的韩国国民健康营养调查结果(韩国国民健康营养调查，韩国保健福祉部)，韩国国内一岁以上过敏性皮炎的发病率为6.1％，在2011年青少年健康状况网上调查(青少年健康状况网上调查，韩国保健福祉部)中，13-18岁青少年的过敏性皮炎发病率为23.1％。通过通常的过敏原、免疫球蛋白E刺激开始发生病变，且因肥大细胞的脱颗粒而分泌的组胺的刺激所诱发的瘙痒症的患者因挠患处而导致作为皮肤常在菌的金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)等的形成2次流入。这种外部抗原的流入导致在患处追加诱发炎症反应来使病情恶化(AllergyAsthmaProc.，May-Jun；33(2012))。
作为过敏性皮炎的治疗剂，包括类固醇制剂、抗组胺剂及抗生剂等，上述类固醇制剂通过免疫抑制效果来呈现消炎作用，上述抗组胺剂用于从肥大细胞防止组胺的游离。然而，类固醇制剂存在如下缺点：在长时间使用类固醇制剂时，在涂抹类固醇制剂的部位长出毛或皮肤变薄，并且也产生细菌感染的副作用，而在停止使用时，症状急剧恶化。抗组胺剂的情况也是，在长时间使用抗组胺剂时，产生失眠、不安、食欲减退等副作用，而在长时间使用抗生剂时，也产生抗生剂耐性等副作用。因此，处于需要开发可以更加有效且使副作用最小化的治疗剂的趋势。
体内蛋白因高的生物体亲和性而具有可使副作用最小化的优点。但是，在将蛋白本身用于治疗剂的情况下，存在低稳定性和高生产成本的缺点。仅利用这种体内蛋白内的特定有效部位的肽制剂存在与体内蛋白的功效相同并可改善稳定性和生产成本问题的优点。因此，本研究人员进行了使用源于可抑制肥大细胞的活化的体内蛋白的肽的抗过敏效果的研究。
脑信号素3A(Semaphorin3A)为具有被称为信号素结构域(Semadomain)的富含半胱氨酸结构域(cysteine-richdomain)的脑信号系列的蛋白。脑信号蛋白最先在神经系统发育过程中公开为反抗性轴突诱导因子。属于分类3的脑信号作为分泌蛋白(secretedprotein)，存在脑信号素3A至脑信号3F的六个种类，且形成神经丛蛋白A(PlexinA)受体及神经纤毛(Neurophilin)受体和形成受体复合体来传输信号。如早期公开，脑信号素3A诱导神经生长因子(NGF，nervegrowthfactor)-敏感性神经元(neuron)的收缩，或者从活化的T细胞及树状细胞中表达来调节T细胞伸张或细胞因子的分泌。
在本说明书全文中，参照了多篇论文及专利文献，并表示了其引用。引用的论文及专利文献的所有公开内容作为参照插入于本说明书中，从而更加明确地说明本发明所属技术领域的水平及本发明的内容。
发明内容
要解决的问题
本发明人员努力开发维持与脑信号素3A(Semaphorin3A)相同功能或类似功能，且与天然的脑信号素3A蛋白相比，活性及稳定性优秀的物质。结果，在许多肽候选物质中筛查生理活性(例如，肥大细胞-特异性凋亡诱导、肥大细胞活性抑制、FcεRI蛋白的信号抑制效果等)优秀的源于脑信号素3A-的肽，由此完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供由序列表中序列1组成的肽。
本发明的再一目的在于，提供Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的另一目的在于，提供自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的还有一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的又一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法。
本发明的又一目的在于，提供Th2-介导的免疫疾病额预防或治疗方法。
本发明的又一目的在于，提供自身免疫疾病的预防或治疗方法。
本发明的又一目的在于，提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗方法。
通过详细的发明内容、发明要求保护范围及附图，本发明的其他目的及优点将变得更加明确。
解决问题的手段
根据本发明的一实施方式，本发明提供由序列表中序列1的氨基酸序列组成的肽。
本发明人员努力开发维持与脑信号素3A相同功能或类似功能，且与天然的脑信号素3A蛋白相比，活性及稳定性优秀的物质。结果，在许多肽候选物质中筛查生理活性(例如，肥大细胞-特异性凋亡诱导、肥大细胞活性抑制、FcεRI蛋白的信号抑制效果等)优秀的源于脑信号素3A-的肽。
脑信号(semaphorins)为包含分泌及膜-结合蛋白的巨大蛋白家族，上述分泌及膜-结合蛋白的特征在于，由500个氨基酸残基组成。其中，脑信号素3A作为属于分类3脑信号家族的分泌蛋白，不仅被誉为起到神经的轴突引导作用，而且还被誉为起到通过神经纤毛(neuropilins)及神经丛蛋白(blexins,PLXNs)受体经由细胞-排斥指示(cell-repellingcues)介导来调节包括细胞移动、形态发生(morphogenesis)及组织重构(remodeling)的产生过程等多种细胞内功能。结构上，存在于脑信号内的脑信号结构域(Semadomain)作为蛋白相互作用模块，对轴突诱导(axonguidance)过程期间行使着很重要的功能，并且上述脑信号结构域也存在于干细胞成长因子受体、性蛋白及病毒蛋白。上述脑信号结构域由保存性高的一系列的半胱氨酸残基实现特征化，并且通过上述半胱氨酸残基之间(四个)的双硫键来使蛋白质在结构上得到稳定。
另一方面，脑信号素3A基因的敲除(knockout)诱导非正常骨头及软骨的发达，且在内软骨性骨化中报告出与脑信号素3A-相关的信号分子(signalingmolecules)(脑信号素3A、神经纤毛-1及神经丛蛋白PLXNA1及PLXNA2)的表达，这意味着在骨骼的发达及神经分布中的潜在性作用。
本发明人员基于与人类脑信号素3A的功能相关的部位来合成呈现出上述特性的多个源于脑信号素3A-的肽。更仔细地观察如下，随机部分合成脑信号素3A蛋白的多个部位来第一次探索可以与受体蛋白相结合的部位之后，使预测部位的氨基酸序列最优化来选择性地制备本发明的肽，并且在这些候选肽中筛查活性最为优秀的肽，由此制备本发明的序列表中序列1的肽。
根据本发明的一实例，本发明的序列表中序列1的肽源于人类脑信号素3A(GenBankAccessionNumber，NP_006071；序列表中序列2)，并在表1中进行例示。
本发明的肽不仅具有天然人类脑信号素3A的功能(例如，抗过敏活性)，而且还有效地表现出肥大细胞-特异性凋亡诱导及肥大细胞活性抑制(参照：图2a～图2c及图3a～图3b)。并且，本发明的肽用于抑制形成FcεRI受体的复合体(参照：图4a至图4c)。
根据本发明的一实例，本发明的肽诱导肥大细胞(mastcells)-特异性凋亡(apoptosis)。
根据本发明的一实例，本发明的肽减少通过肥大细胞来分泌的组胺的量，并且抑制细胞内β-氨基己糖苷酶(beta-hexosaminidase)的活性。
根据本发明的一实例，本发明的肽抑制FcεRI信号传导。可通过抑制形成FcεRI受体的复合体来实现上述FcεRI信号传导的抑制，可通过阻碍细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38或Lyn的磷酸化来确认抑制形成FcεRI受体的复合体。
在本说明书中，术语“肽”意味着通过肽键来使氨基酸残基相互结合而形成的线性的分子。本发明的肽可根据该领域公知的化学合成方法，尤其根据固相合成技术(solid-phasesynthesistechniques)来制成(Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-54(1963)；Stewart,etal.,SolidPhasePeptideSynthesis,2nd.ed.,PierceChem.Co.:Rockford,111(1984))。
本发明的肽自身虽然比天然的脑信号素3A蛋白具有更优秀的稳定性，但可通过氨基酸的变形来进一步提高稳定性。
根据本发明，本发明的肽与天然的脑信号素3A蛋白相比具有非常卓越的热稳定性。天然脑信号素3A蛋白很难制备，且具有高生产成本，而且在温度及长期保管方面具有低稳定性。然而，本发明的肽可以以非常低廉的价格批量合成，并且在高温等环境中的物理化学性稳定，因而可最大程度防止生理活性的降低，而且还增加在体内外的残存期间，由此，上述肽进一步提高的治疗效果(参照：图5)。因此，本发明的肽可有效适用于如医药品、医药外品及化妆品的需要长期储存的产品。
根据本发明的一实例，肽的N-末端或C-末端可变形为羟基(-OH)、氨基(-NH2)、叠氮化物(-NHNH2)等。
根据本发明的优选实施例，上述肽的N-末端结合有保护基，上述保护基选自包含乙酰基、芴甲氧羰基、甲酰基、棕榈酰基、肉豆蔻基、硬脂酰基及聚乙二醇(PEG，polyethyleneglycol)的组。
上述氨基酸的变形起到大大改善本发明的肽的稳定性的作用。在本说明书中，术语“稳定性”不仅意味着“体内”稳定性，还意味着储存稳定性(例如，常温储存稳定性)。上述保护基起到保护本发明的肽使其不受生物体内的蛋白质切割酶攻击的作用。
根据本发明的再一实施方式，本发明提供包含上述肽作为有效成分的Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
根据本发明的另一实施方式，本发明提供包含上述肽作为有效成分的自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的组合物包含上述本发明的由脑信号素3A-介导的肽作为有效成分，因而为了避免本说明书的过度复杂性而省略两者间的相同内容的记载。
根据本发明的一实例，本发明的Th2-介导的免疫疾病虽然包括过敏性鼻炎(allergicrhinitis)、支气管哮喘(bronchialasthma)、过敏性皮炎(atopydermatitis)、接触性皮炎(contactdermatitis)、过敏性结膜炎(allergicconjuntivitis)、荨麻疹(urticaria)、血管水肿(vascularedema)、食物过敏、物理性过敏、过敏性肺肠炎、职业性过敏疾病及药物过敏，但并不局限于此。
根据本发明的一实例，通过使Lyn激酶-介导的通路的活化来诱发本发明的自身免疫疾病，通过使Lyn激酶磷酸化来触发上述使Lyn激酶-介导的通路的活化。
根据本发明的一实例，本发明的自身免疫疾病虽然包括肥胖、高血脂症、糖尿病、粥状动脉硬化症及代谢综合征，但并不局限于此。
根据本发明的还有一实施方式，本发明提供包含上述肽作为有效成分的肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的组合物包含上述本发明的脑信号素3A-介导的肽作为有效成分，因此，为了避免本说明书的过度复杂而省略两者间的相同内容的记载。
根据本发明的一实例，本发明的药剂学组合物诱发肥大细胞-特异性凋亡(apoptosis)。
根据本发明的一实例，本发明的肥大细胞-诱发的炎症性疾病虽然包括哮喘、过敏性皮炎、疥疮、间质性膀胱炎(interstitialcystitis)、肥胖、多发性硬化症、冠心病(CAD，coronaryarterydisease)、关节炎及炎性肠病(IBD，boweldisease)，但并不局限于此。
另一方面，本发明的多个组合物可利用为(a)呈现上述脑信号素3A蛋白的活性的肽的药剂学有效量；以及(b)包含药剂学上允许的载体的药剂学组合物。
在本说明书中，术语“药剂学有效量”意味着实现与上述脑信号素3A相关的肽的功效或活性的充分的量。
包含在本发明的药剂学组合物的药剂学上接受的载体是在制剂时通常利用的，其包含乳糖(lactose)、葡萄糖(dextrose)、蔗糖(sucrose)、山梨糖醇(sorbitol)、甘露醇(mannitol)、淀粉、阿拉伯胶(acaciagum)、磷酸钙(calciumphosphate)、藻酸盐(alginate)、明胶(gelatin)、硅酸钙(calciumsilicate)、微晶纤维素(microcrystallinecellulose)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、纤维素(cellulose)、水、糖浆(syrup)、甲基纤维素(methylcellulose)、羟基苯甲酸甲酯(methylhydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙酯(propylhydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁(magnesiumstearate)及矿物油(mineraloil)等，但并不局限于此。本发明的药剂学组合物除了上述成分之外，还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、保鲜剂等。适合的药剂学上容许的担体及制剂详细记载在雷明顿的制药科学(Remington'sPharmaceuticalSciences，19thed.,1995)中。
本发明的药剂学组合物可进行口服用药或非口服用药，并且，在非口服用药的情况下，可通过静脉内注射、皮下注射、肌肉注射、口腔注射、局部用药、经皮用药等来用药。
本发明的药剂学组合物的适当用药量可根据制剂化方法、用药方式、患者的年龄、体重、性别、病况、食物、用药时间、用药路径、排泄速度及反应感应性来以多种方式给予处方。另一方面，本发明的药剂学组合物的优选的用药量为每日0.0005-1000mg/kg。
本发明的药剂学的组合物是根据本发明所属技术领域的普通技术人员容易实施的方法，利用药剂学上容许的担体和/或赋形剂进行制剂化，从而制备成单位容量形态或者放入大容量容器内而进行制备。此时，剂型可以是油或者水性媒质中的溶液、悬浮液或者乳化剂形态，或者也可以是提取物、粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊或者胶状(例如，水凝胶)形态，并且可以额外包含分散剂或者稳定剂。
并且，本发明的组合物可利用为(a)与上述本发明的脑信号素3A相关的肽的美容学有效量(cosmeticallyeffectiveamount)：以及(b)包含美容学上允许的载体的化妆品组合物。
在本说明书中，术语“美容学有效量”意味着实现上述本发明的组合物的美容学功效的充分的量。
本发明的化妆品组合物还可以制备成在该本发明属于技术领域中通常制备的任意剂型。例如，可以剂型化成溶液、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、乳霜、乳液、散粉、肥皂、含表面活性剂洗面液、油、粉末粉底、乳浊液粉底、蜡粉底及喷剂等，但是不局限于这些。更详细的，可以制备成柔软化妆水、营养化妆水、营养乳霜、按摩乳霜、精华素、眼霜、洗面霜、洁面泡沫、洁肤水、面膜、喷剂或者散粉的剂型。
本发明的剂型是糊剂、乳霜或者凝胶时，作为担体成分可以利用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、皂土、二氧化硅、滑石粉或者氧化锌等。
本发明的剂型是散粉或者喷剂时，作为担体成分可以利用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或者聚酰胺散粉，特别是喷剂时，可以额外包含如含氯氟烃、丙烷/丁烷或者二甲醚的推进剂。
本发明的剂型是溶液或者乳浊液时，作为担体成分利用溶剂、溶解化剂或者乳浊化剂，比如说存在水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、丙三醇脂肪族酯、聚乙二醇或者甘油酯的脂肪酸酯。
根据本发明的又一实施方式，本发明提供肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法，上述肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法包括：步骤(a)，在包含脑信号素3A-编码核苷酸序列的细胞中处理试验物质；以及步骤(b)，分析上述细胞内的脑信号素3A蛋白的表达或活性，若上述试验物质使上述脑信号素3A蛋白超表达或增加上述脑信号素3A蛋白的活性，来抑制FcεRI受体的复合体的形成，则判断上述试验物质为肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂。
本发明的肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法包含脑信号素3A蛋白，上述脑信号素3A蛋白包含上述本发明的脑信号素3A-介导的肽，因此为了避免本说明书的过度复杂而省略两者间的相同内容的记载。
根据本发明的肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂的筛查方法，首先，使包含脑信号素3A编码核苷酸序列的细胞与所要分析的试验物质相接触。优选地，虽然本发明的包含靶的核苷酸序列的细胞不受特殊限制，但脑信号素3A蛋白的超表达可诱导肥大细胞的凋亡，因此应当除去脑信号素3A蛋白的超表达。在提及本发明的筛查方法的过程中使用的术语“试验物质”意味着为了检查是否对脑信号素3A基因或蛋白的活性产生影响或是否抑制形成基于脑信号素3A蛋白的FcεRI受体的复合体而在筛查中使用的未知的物质。上述试验物质包含化学物质、肽及天然提取物，但并不局限于此。通过本发明的筛查方法来分析的试验物质为单一化合物或化合物的混合物(例如，细胞或组织培养物)。可从合成或天然化合物文库中获得试验物质。这种化合物的文库已公知于本发明所属技术领域。可从MaybridgeChemicalCo.(英国)、Comgenex(美国)、BrandonAssociates(美国)、Microsource(美国)及Sigma-Aldrich(美国)等公司商业性地购买合成化合物文库，可从PanLaboratories(美国)及MycoSearch(美国)公司商业性地购买天然化合物文库。可通过本发明所属技术领域公知的多种组合文库方法来获得试验物质，例如，可通过生物学文库，空间可寻址并行的固相或液相文库(spatiallyaddressableparallelsolidphaseorsolutionphaselibraries)、需要反褶积的合成文库方法、“1-珠1-化合物”文库方法、还有利用亲和性色谱法筛查的合成文库方法来获得。在DeWittetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90，6909，1993；Erbetal.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，11422，1994；Zuckermannetal.，J.Med.Chem.37，2678，1994；Choetal.，Science261，1303，1993；Carelletal.，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33，2059，1994；Carelletal.，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33，2061；Gallopetal.，J.Med.Chem.37，1233，1994等中公开有分子库的合成方法。
接着，在处理试验物质的细胞中测定本发明的靶(例如，脑信号素3A)的表达量及活性。能够以如下所述的方式实施表达量及活性的测定，测定结果，在本发明的标记的核苷酸序列的表达或活性增加的情况下，或者在抑制基于超表达的脑信号素3A的FcεRI受体的复合体形成的情况下，上述试验物质可以被判定为肥大细胞-诱发的炎症性疾病的改善或治疗用物质。
根据本发明的一实例，在上述步骤(b)中，可通过测定基于超表达脑信号素3A的FcεRI受体的复合体形成来实施脑信号素3A的活性分析，更具体地，可通过阻碍细胞外信号调节激酶1/2、p38或Lyn的磷酸化来确认上述FcεRI受体的复合体抑制。
本发明的筛选方法可以通过各种方法来执行，特别是通过本技术领域的专业人员已知的各种结合测定法进行的高通量方法。
在本发明的筛查方法中，试验物质或脑信号素3A基因或蛋白可以被标记为可检测标记(detectablelabel)。本发明的蛋白抗原或候选抗体可以用可检测标记物标记。例如，所述可检测标记物包括但不限于化学标记物(例如生物素)、酶标记物(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、过氧化物酶、萤光素酶、β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶)、放射活性标记物(例如C14、I125、P32和S35)、荧光标记物(例如香豆素、荧光素、FITC(荧光素异硫氰酸酯)、罗丹明6G、罗丹明B、TAMRA(6-羧基-四甲基-罗丹明)、Cy-3、Cy-5、德克萨斯红、AlexaFluor、DAPI(4,6-二咪基-2-苯基吲哚)、HEX、TET、Dabsyl和FAM)、发光标记物、化学发光标记物、FRET(荧光共振能量转移)标记物或金属标记物(例如金和银)。
在利用标记有可检测标记的脑信号素3A基因、蛋白或试验物质的情况下，可检测从标记中产生的信号来分析是否发生脑信号素3A基因或蛋白和试验物质之间的结合。当使用碱性磷酸酶时，可以使用溴氯吲哚磷酸(BCIP)、硝基四氮唑蓝(NBT)、萘酚-AS-B1-磷酸盐和ECF(增强化学发光物)作为底物；在使用辣根过氧化物酶的情况下，可以使用氯萘酚、氨基乙基咔唑、二氨基联苯胺、D-萤光素、光泽精(双-N-甲基吖啶硝酸酯)、试卤灵苯甲基醚、发光氨、Amplex红试剂(10-乙酰基-3,7-二羟基吩噁嗪，Pierce)、HYR(对苯二胺-HCL和邻苯二酚)、TMB(3,3,5,5-四甲基联苯胺)、ABTS(2,2-吖嗪-二[3-乙基苯并噻唑啉磺酸酯])、OPD(邻苯二胺)和萘酚/派洛宁作为底物。
根据本发明的又一实施方式，本发明提供Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗方法，上述Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗方法包括向对象(subject)用药包含上述肽作为有效成分的组合物的步骤。
根据本发明的又一实施方式，本发明提供自身免疫疾病的预防或治疗方法，上述自身免疫疾病的预防或治疗方法包括向对象用药包含上述肽作为有效成分的组合物的步骤。
根据本发明的又一实施方式，本发明提供肥大细胞-诱发的炎症疾病的预防或治疗方法，上述肥大细胞-诱发的炎症疾病的预防或治疗方法包括向对象用药包含上述肽作为有效成分的组合物的步骤。
由于本发明的方法利用上述组合物，因此，为了避免本说明书的过度复杂性而省略两者间的相同内容的记载。
发明的效果
归纳本发明的特征及优点如下：
(i)本发明的肽不仅可起到与天然的脑信号素3A功能相同或类似的功能，而且由于小的大小而具有非常优秀的渗透度。
(ii)本发明的肽不仅可诱导肥大细胞-特异性凋亡，而且还抑制肥大细胞活性(例如，减少组胺的分泌量及抑制β-氨基己糖苷酶活性)。
(iii)并且，本发明的肽抑制FcεRI信号传导，更具体地，抑制形成FcεRI受体的复合体，这表现为阻碍细胞外信号调节激酶1/2、p38或Lyn的磷酸化。
(iv)因此，本发明的肽的优秀活性及稳定性可有效地适用于医药、医药外品及化妆品。
附图说明
图1为表示通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽的高性能液相色谱法分析结果的图表。
图2a为表示对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理的肥大细胞的凋亡促进效果的流量细胞计数法(Flowcytometry)的结果。
图2b为表示对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1肽进行处理的肥大细胞凋亡促进效果的蛋白印迹法(Bc12)结果。
图2c为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时所呈现的肥大细胞的凋亡促进效果为细胞特异性反应的角质细胞及纤维芽细胞的细胞毒性实验结果。
图3a为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时的肥大细胞中减少的组胺分泌的酶联免疫吸附(ELISA)测定结果。
图3b为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时的肥大细胞中减少的β-氨基己糖苷酶分泌的活性实验结果。
图4a为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时的阻碍肥大细胞的免疫球蛋白E受体信号的细胞外信号调节激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平确认实验结果，揭示有通过密度测定法(densitometry)来使谱带强度数值化的图表结果。
图4b为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时的阻碍肥大细胞的免疫球蛋白E受体信号的受体相关蛋白Lyn的磷酸化水平确认实验结果。
图4c为示出在对通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽进行处理时所呈现的肥大细胞的免疫球蛋白E受体信号基于抑制形成受体复合体的免疫沉淀法分析结果。
图5为通过本发明的合成例来制备的序列表中序列1的肽的热稳定性结果。
具体实施方式
以下，通过实施例对本发明进行更为详细的说明。这些实施例仅用于更加具体地说明本发明，本发明的范围并不根据本发明的要旨而受这些实施例的限制，这对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。
实施例
合成例1：Trp-Val-Pro-Tyr-Gln-Ala-Arg-Val-Pro-Tyr-Pro-Arg(序列1)的合成
将700mg的氯三苯甲基氯树脂(Chlorotritylchlorideresin；CTLresin，NovabiochemCatNo.01-64-0021)放入反应容器，并添加10ml的亚甲基氯(MC，methylenechloride)来搅拌3分钟。除去溶液，并放入10ml的二甲基甲酰胺(DMF，DimethylFormamide)来搅拌3分钟之后，再次除去溶剂。向反应器放入10ml的二氯甲烷(DCM，Dichloromethane)溶液，并放入200mmole的芴甲氧羰基-Ala(pbf)-OH(Fmoc-Ala(pbf)-OH)(巴亨公司(Bachem)，瑞士(Swiss))及400mmole的N，N-二异丙基乙胺(DIEA，N，N-Diisopropylethylamine)之后进行搅拌使它们均匀溶解，再搅拌1小时并进行反应。反应后进行清洗，将甲醇和DIEA(2:1)溶解在DCM进行10分钟反应，并用过量的DCM/DMF(1:1)进行清洗。除去溶液，并放入10ml的DMF搅拌3分钟之后，再次除去溶剂。将10ml的脱保护溶液(20％的哌啶(Piperidine)/DMF)放入反应容器，在常温下搅拌10分钟之后除去溶液。放入相同量的脱保护溶液，再维持10分钟的反应之后去除溶液，并分别隔3分钟用DMF清洗2次，用MC清洗1次，并用DMF清洗1次，来制备了Arg(pbf)-氯三苯甲基氯树脂(Ala(pbf)-CTLResin)。向新的反应器放入10ml的DMF溶液，并放入200mmole的芴甲氧羰基-γ-三苯甲基-L-谷氨酰胺(Fmoc-Pro-OH)(Bachem，Swiss)、200mmole的羟基苯并三唑(HoBt)及200mmole的苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(Bop)之后进行搅拌来使它们均匀溶解。以分馏的方式向反应器分两次放入400mmole的N，N-二异丙基乙胺(DIEA，N，N-Diisopropylethylamine)2次之后，最小限度地搅拌5分钟，直到所有固体溶解为止。将溶解的氨基酸混合溶液放入有脱保护的树脂的反应容器，并在常温下搅拌1小时并进行反应。除去反应液，用DMF溶液隔5分钟搅拌3次之后进行除去。取出少量的反应树脂，并利用茚三酮试验(Nihydrintest)检查反应程度。与上述方法相同地，用脱保护溶液进行2次脱保护反应，来制备了甘氨酸(trt)-Arg(pbf)-氯三苯甲基氯树脂(Pro-Arg(pbf)-CTLResin)。用DMF和MC充分清洗，再次执行一次茚三酮试验之后，与上述方法相同地，执行了以下的氨基酸附着实验。通过选定的氨基酸序列，以Fmoc-Tyr(tBu),Fmoc-Pro,Fmoc-Val,Fmoc-Arg(pbf),Fmoc-Ala,Fmoc-Gln(Trt),Fmoc-Tyr(tBu),Fmoc-Pro,Fmoc-Val及Fmoc-Trp(Boc)顺序进行了链式反应。用脱保护溶液使Fmoc-保护基隔10分钟反应2次之后，通过均匀清洗来进行除去。放入乙酸酐和DIEA、羟基苯并三唑(HoBt，Hydroxybenzotriazole)执行1小时乙酰化之后，用DMF、MC及甲醇分别将制成的肽基树脂清洗3次，慢慢将氮空气流出来进行干燥之后，在五氧化二磷(P2O5，Phosphoruspentoxide)条件下用真空进行减压，等完全干燥之后，放入30ml的泄漏溶液[三氟乙酸(TFA，Trifluroaceticacid)95％、蒸馏水2.5％、茴香硫醚(Thioanisole)2.5％]之后，在常温下偶尔摇晃，并维持2小时反应。对树脂进行过滤，并用少量的溶液清洗树脂之后将其与母液合起来。利用减压来蒸馏，使得整体容积剩一半左右，并添加50ml的凉的醚诱导沉淀之后，进行离心分离来收集沉淀，并用更凉的醚清洗2次。除去母液，并在氮条件下充分干燥，提纯之前合成了0.85g的NH2-Trp-Val-Pro-Tyr-Gln-Ala-Arg-Val-Pro-Tyr-Pro-Arg-OH肽1(收率：89.9％)。当利用分子量测定仪来测定时，可获得分子量1531.8(理论值：1531.795)。
表1
试验例1：确认使用合成肽的活化的肥大细胞凋亡效果
为了确认根据合成例1制备的序列表中序列1的肽的抗过敏效果，针对活化的肥大细胞的肽的细胞凋亡效果的进行实验。
首先，利用组织培养用烧瓶(SPL，韩国)来在包含10％胎牛血清(FBS，fetalbovineserum,西格玛(Sigma)公司)的杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM，Dulbecco’smodifiedEagle'smedium，Gibco公司，美国)培养RBL-2H3老鼠肥大细胞株(韩国细胞株银行，韩国)。用1％胰蛋白酶溶液来从培养容器底部取下培养的细胞株后进行离心分离来仅收集细胞沉淀物。将上述细胞沉淀物在杜尔伯科改良伊格尔培养基培养液中重新进行悬浮后，在6-孔组织培养用烧瓶(SPL，韩国)中，每孔放入1×105细胞后，在37℃、5％的CO2条件下培养24小时。在24小时之后，利用相同的培养液交换培养基并进行活性条件实验的情况下，对免疫球蛋白E及HAS进行处理，并在10％蒸馏水中以灭菌状态溶解用于掌握标准的试样和本发明的肽后，以1μg/ml及10μg/ml的浓度，并以与上述相同条件培养72小时。在完成培养后，去除培养上层液，并利用1％胰蛋白酶溶液从培养容器的底部取下培养的细胞株之后，通过离心分离来收集细胞沉淀物。利用膜联蛋白V-PI染色试剂盒(AnnexinV-PIstainingkit；BDpharm免疫球蛋白En)来使细胞染色后，利用作为流式细胞术的流式细胞荧光分选技术(FACS)来测定FL1及FL2的强度。计算细胞凋亡中的膜联蛋白V-阳性细胞的数量(参照:图2a)。为了追加确认细胞凋亡效果，获得以与实验相同的条件进行处理的细胞，并通过蛋白印迹法来确认作为促凋亡蛋白(pro-apoptoticprotein)的B细胞淋巴瘤(Bc12)的表达量(参照:图2b)。
另一方面，为了确认细胞凋亡效果是否为肥大细胞-特异性反应而利用作为人类角质细胞株的角质形成细胞和作为老鼠纤维芽细胞株的小鼠胚胎成纤维细胞细胞来实施细胞毒性实验。在96-孔组织培养用烧瓶中，以每孔放入5×103细胞后，在37℃、5％的CO2条件下培养24小时。在24小时后，利用相同培养液交换培养基，之后在10％蒸馏水中以灭菌状态溶解用于掌握标准的试样和合成肽后，以1μg/ml及10μg/ml的浓度，并以与上述相同条件培养72小时。在完成培养后，以1/10体积(volume)处理细胞毒性检测(MTT)试剂(5mg/ml；SIGMA，USA)，并用二甲基亚砜(DMSO)溶解追加培养4小时来生成的甲瓒(formazan)后，在540nm中利用分光光度计(spectrophotometer；分子器件(Moleculardevices)公司，美国)来测定吸光度(参照:图2c)。
图2a表示对进行肽处理后的凋亡过程中的肥大细胞的数量进行测定的流式细胞荧光分选技术(FACS)结果。从图2a中可以确认，本发明的肽均在非活化状态或活化状态的肥大细胞(10μg/ml处理菌)中增加膜联蛋白V-阳性细胞的数量来有效地诱导细胞凋亡。
图2b为用蛋白印迹法来确认作为进行肽处理后的细胞内促凋亡蛋白的B细胞淋巴瘤的表达量的结果。从图2b中可以确认，本发明的肽在非活化状态或活化状态的肥大细胞中均诱导细胞凋亡来阻碍B细胞淋巴瘤的表达量。
图2c示出对作为进行肽处理后的人类角质细胞株的角质形成细胞及作为老鼠纤维芽细胞株的小鼠胚胎成纤维细胞的细胞毒性实验结果。从图2c中可以确认，本发明的肽对肥大细胞之外的其他皮肤细胞未呈现细胞毒性。
综合上述实验例1的结果可知，本发明的肽具有诱导肥大细胞特异性细胞凋亡的活性，上述活性在非活化状态和基于免疫球蛋白E(SIGMA，USA)及人血清白蛋白(过敏原；SIGMA，USA)处理的活化状态中均得到确认，但上述活性在活化状态的肥大细胞中更加显著。
试验例2：确认合成肽的肥大细胞活性抑制功效
通过16小时的免疫球蛋白E(1μg/ml)处理来实现敏感化的RBL-2H3细胞培养中去除以往的培养基，并使用台罗德缓冲液(tyrodebuffer)进行交换后，处理在合成例1中合成的肽(1μg/ml及10μg/ml)和作为阳性对照组的槲皮素(quercetin，40μM；西格玛公司，美国)后，培养20分钟。之后，以1μg/ml浓度处理用作过敏原的HAS后，培养1小时。结果，为了测定从肥大细胞分泌的组胺的量，回收细胞培养液并用组胺酶联免疫吸附测定试剂盒(IBLinternational)进行确认(参照：图3a)。并且，为了测定β-氨基己糖苷酶的活性，使上述β-氨基己糖苷酶与作为基质的p-NAG(N-acetyl-glucosamine；SIGMA，USA)发生反应后，在405nm中利用分光光度计测定作为发色的程度的吸光度(参照：图3b)。
图3a为测定在进行肽处理后从肥大细胞分泌的组胺的量的结果。从图3a中可以确，作为用于减少通过免疫球蛋白E和HAS的刺激增加的组胺的分泌量的阳性对照组的槲皮素的活性，而在本发明的肽处理组中，也具有以浓度-依赖性的方式减少组胺的分泌量的活性(或倾向)。在β-氨基己糖苷酶活性测试中，也可确认上述抑制活性(参照：图3b)。
综合上述试验例2的结果，本发明的肽对根据肥大细胞活化来分泌的组胺及β-氨基己糖苷酶具有阻碍效果，而且这意味着上述阻碍效果可伴随着对之后的炎症反应及瘙痒症的抑制效果。
试验例3：确认作为合成肽的免疫球蛋白E受体的FcεRI信号传导抑制效果
为了确认根据合成例1来制备的肽的肥大细胞活性抑制机理，调查作为肥大细胞刺激源的免疫球蛋白E所结合的作为受体的FcεRI蛋白的信号抑制效果。在60mm大小的培养用烧瓶(SPL，韩国)中放入1.5×106细胞后，在37℃，5％的CO2条件下培养24小时。之后，在细胞中放入免疫球蛋白E(1μg/ml)后处理24小时来使其敏感化，并且在10％蒸馏水中以灭菌状态溶解用于掌握标准的试样和合成肽后，以10μg/ml的浓度处理20分钟，并以1μg/ml的浓度对作为过敏原的HAS进行5分钟或30分钟的处理，来刺激细胞。通过胰蛋白酶处理来获得结束所有处理后的细胞后，利用蛋白印迹法来确认作为参与FcεRI信号传导的分子的细胞外信号调节激酶1/2、p38及Lyn的磷酸化程度(参照：图4a及图4b)。
并且，为了确认基于本发明的肽的FcεRI信号传导抑制效果是否通过抑制作为免疫球蛋白E受体的FceRI的子链结合产生，在相同实验条件下对HAS刺激进行10分钟的处理后所获得的细胞中实施利用免疫球蛋白E抗体的免疫沉淀法(immunoprecipitation)。利用免疫沉淀法进行一次性分离后，以FceRIγ子链抗体实施蛋白印迹法来确认与免疫球蛋白E相结合的γ子链的蛋白量(参照：图4c)。
图4a为对进行肽处理后在肥大细胞表面的表达的免疫球蛋白E受体FcεRI的信号蛋白的磷酸化水平进行观察的结果。从图4a中可以确认，本发明的肽具有阻碍作为FcεRI信号传导蛋白的细胞外信号调节激酶1/2及p38的磷酸化水平的功效。并且，确认在肽处理组中，以浓度-依赖性的方式显著阻碍作为其他信号蛋白的Lyn的磷酸化水平(参照：图4b)。
图4c为对进行肽处理后免的疫球蛋白E受体(FcεRI)的子链间的结合进行观察的结果。免疫球蛋白E受体由包括α子链、β子链、γ子链的复合体构成，其中，若在α子链中实现免疫球蛋白E的结合，则复合体呈β子链、γ子链聚集的形态。对此，为了确认基于本发明的肽的FcεRI受体的复合体形成抑制活性，实施使用免疫球蛋白E抗体的免疫沉淀法后实施对于γ子链的蛋白印迹法。结果，确认本发明的肽具有显著抑制FcεRI受体的复合体形成的活性。
综合上述试验例3的结果，本发明的肽抑制形成存在于肥大细胞表面来干预细胞活性的FcεRI受体的复合体，由此呈现阻断FcεRI信号传导的功效。
试验例4：制备的肽的热稳定性
将通过合成例1制备的肽和从国家生物标准和控制学会(NIBSC)(英国)购买的标准生长因子(脑信号素3A)制备成0.1mg/ml的浓度的磷酸缓冲溶液。将所准备的溶液分别以1ml放入玻璃瓶后，放置在37℃温度中。在0天、5天、10天、20天、30天、50天及70天时，对放置于37℃温度的溶液进行采样，并利用离心分离去除改性的肽或蛋白，采集上层液并利用高效液相色谱法(HPLC)来进行定量(参照：图5)。
实施例1：纳米化肽的制备
准确称量在上述合成例中获得的肽50mg后，利用500ml的蒸馏水来进行充分搅拌和溶解。.将配合物溶液与5g的卵磷脂、0.3ml的油酸钠(sodiumoleate)、50ml的乙醇及少量的油相一起混合之后，用蒸馏水调好量，使得总量达到1，通过微射流机，利用高压进行乳化，从而制备了尺寸为100nm左右的纳米体。制成的纳米体以最终浓度为约50ppm单独或复合地用作化妆品制备用。
剂型例1：柔肤化妆水
按照常规的化妆水制备方法，来制备了包含有上述实施例中制得的肽纳米体，且由以下组成成分组成的柔肤化妆水。
表2
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.001
1，3-丁二醇 6.0
甘油 4.0
PEG 1500 1.0
透明质酸钠 1.0
聚山梨酯20 0.5
乙醇 8.0
防腐剂、色素 适量
二苯甲酮-9 0.05
香料 微量
纯净水 余量
合计 100
剂型例2：保湿霜
按照常规的营养乳霜制备方法，来制备了包含有上述实施例中制得的肽纳米体，且由以下组成成分组成的保湿霜。
表3
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.001
白芒花籽油 3.0
鲸蜡硬脂醇 1.5
硬脂酸 1.5
甘油硬脂酸酯 1.5
液体石蜡 10.0
蜂蜡 2.0
聚山梨酯60 0.6
倍半油酸山梨坦 2.5
角鲨烷 3.0
1，3-丁二醇 3.0
甘油 5.0
三乙醇胺 0.5
生育酚乙酸酯 0.5
防腐剂、色素 适量
香料 适量
纯净水 余量
合计 100
剂型例3：保湿化妆水
按照常规的化妆水制备方法，来制备了包含有上述实施例中制得的肽纳米体，且由以下组成成分组成的保湿化妆水。
表4
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.002
1，3-丁二醇 4.0
甘油 4.0
鲸蜡硬脂醇 0.8
甘油硬脂酸酯 1.0
三乙醇胺 0.13
生育酚乙酸酯 0.3
液体石蜡 5.0
角鲨烷 3.0
澳洲坚果油 2.0
聚山梨酯60 1.5
倍半油酸山梨坦 0.5
羧乙烯聚合物 1.0
防腐剂、色素 适量
香料 适量
纯净水 余量
合计 100
剂型例4：精华素
按照常规的精华素制备方法，来制备了包含有上述实施例中制得的肽纳米体，且由以下组成成分组成的精华素。
表5
以上，详细记述了本发明的特定的部分，对于该领域的普通技术人员来说，明确的是，这种详细记述仅为优选实施例，本发明的范围并不受其限制。因此，本发明的实质范围由所附的发明要求保护范围和与其等同的技术方案定义。

Claims (30)

1.一种肽，其特征在于，由序列表中序列1的氨基酸序列组成。
2.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽源于人类脑信号素3A蛋白。
3.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽诱导肥大细胞-特异性凋亡。
4.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽具有减少借助肥大细胞来分泌的组胺含量的活性。
5.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制细胞内的β-氨基己糖苷酶的活性。
6.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽诱发FcεRI信号传导的抑制。
7.根据权利要求6所述的肽，其特征在于，通过抑制形成FcεRI受体的复合体来实现上述FcεRI信号传导的抑制。
8.根据权利要求6所述的肽，其特征在于，上述FcεRI信号传导的抑制阻碍细胞外信号调节激酶1/2、p38或Lyn的磷酸化。
9.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽的N-或C-末端还包含选自由乙酰基、芴甲氧羰基、甲酰基、棕榈酰基、肉豆蔻基、硬脂酰基及聚乙二醇组成的组中的保护基。
10.一种Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分。
11.根据权利要求10所述的Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述Th2-介导的免疫疾病为过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性皮炎、接触性皮炎、过敏性结膜炎、荨麻疹、血管水肿、食物过敏、物理性过敏、过敏性肺肠炎、职业性过敏疾病或药物过敏。
12.一种自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分。
13.根据权利要求12所述的自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，通过使Lyn激酶-介导的通路的活化来诱发上述自身免疫疾病。
14.根据权利要求13所述的自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，通过增加Lyn激酶的磷酸化来触发上述Lyn激酶-介导的通路的活化。
15.根据权利要求12所述的自身免疫疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述自身免疫疾病为肥胖、高血脂症、糖尿病、粥状动脉硬化症或代谢综合征。
16.一种肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分。
17.根据权利要求16所述的肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述药剂学组合物诱发肥大细胞-特异性凋亡。
18.根据权利要求16所述的肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，上述肥大细胞-诱发的炎症性疾病为哮喘、过敏性皮炎、疥疮、间质性膀胱炎、肥胖、多发性硬化症、冠心病、关节炎或炎症性肠病。
19.一种肥大细胞-诱发的炎症疾病治疗剂的筛查方法，其特征在于，
包括：
步骤(a)，在包含脑信号素3A-编码核苷酸序列的细胞中处理试验物质；以及
步骤(b)，分析上述细胞内的脑信号素3A蛋白质的表达或活性，
若上述试验物质使上述脑信号素3A蛋白超表达或增加上述脑信号素3A蛋白的活性，来抑制FcεRI受体的复合体的形成，则判断上述试验物质为肥大细胞-诱发的炎症性疾病治疗剂。
20.根据权利要求19所述的肥大细胞-诱发的炎症疾病治疗剂的筛查方法，其特征在于，上述试验物质诱发肥大细胞-特异性凋亡。
21.根据权利要求19所述的肥大细胞-诱发的炎症疾病治疗剂的筛查方法，其特征在于，上述肥大细胞-诱发的炎症性疾病为哮喘、过敏性皮炎、疥疮、间质性膀胱炎、肥胖、多发性硬化症、冠心病、关节炎或炎症性肠病。
22.一种Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，包括如下步骤：向对象用药包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分的组合物。
23.根据权利要求22所述的Th2-介导的免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述Th2-介导的免疫疾病为过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性皮炎、接触性皮炎、过敏性结膜炎、荨麻疹、血管水肿、食物过敏、物理性过敏、过敏性肺肠炎、职业性过敏疾病或药物过敏。
24.一种自身免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，包括如下步骤：向对象用药包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分的组合物。
25.根据权利要求24所述的自身免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，通过使Lyn激酶-介导的通路的活化来诱发上述自身免疫疾病。
26.根据权利要求25所述的自身免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，通过增加Lyn激酶的磷酸化来触发上述Lyn激酶-介导的通路的活化。
27.根据权利要求24所述的自身免疫疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述自身免疫疾病为肥胖、高血脂症、糖尿病、粥状动脉硬化症或代谢综合征。
28.一种肥大细胞-诱发的炎症疾病的预防或治疗方法，其特征在于，包括如下步骤，向对象用药包含权利要求1至9中任一项所述的肽作为有效成分的组合物。
29.根据权利要求28所述的肥大细胞诱-发的炎症疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述组合物诱发肥大细胞-特异性凋亡。
30.根据权利要求28所述的肥大细胞-诱发的炎症性疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述肥大细胞-诱发的炎症性疾病为哮喘、过敏性皮炎、疥疮、间质性膀胱炎、肥胖、多发性硬化症、冠心病、关节炎或炎症性肠病。
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