CN104024271A - 基质金属蛋白酶活性抑制肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于抑制基质金属蛋白酶的活性的肽及其用途。用于抑制本发明的基质金属蛋白酶的活性的肽在直接抑制基质金属蛋白酶的活性来改善皮肤状态方面发挥非常优秀的功效。并且，包含本发明的肽的组合物具有抑制透明质酸分解酶的活性、抑制脂肪细胞中的脂肪生成以及抑制血管形成等优秀的生物活性，因而能够利用于抗肥胖、抗癌以及抗炎症等各种疾病的治疗，且由于肽的大小较小，因而皮肤渗透度非常突出，从而能够利用于各种领域。本发明的肽的优秀的活性及稳定性能够非常有利地适用于医药、医药外品及化妆品。

Description

基质金属蛋白酶活性抑制肽及其用途
技术领域
本发明涉及用于抑制基质金属蛋白酶的活性的肽及其用途。
背景技术
基质金属蛋白酶(MMP，Matrix metalloproteinase)作为可使胶原蛋白(collagen)、蛋白聚糖(proteoglycan)及明胶(gelatin)等巨大生物分子分解的肽链内切酶(endopeptidase)，大致分类为胶原酶(collagenase)、明胶酶(gelatinase)、溶基质蛋白酶(stromelysin)及膜型基质金属蛋白酶(MT-MMP，membrane-type matrix metalloproteinase)。基质金属蛋白酶在均以酶原(proenzyme)的形态表达之后，其一部分被切割，来进行活性化(Bond,J.S.,et al.,Int.J.Biochem.,75,565-574(1985)；Chen,J.M.,Chen,W.T.,Cell,48,193～203(1987)；Harris,E.D.et al.,Coll Rel Res,4,493-512(1984))。
胶原酶作用于三股螺旋型间质胶原和明胶等，已知有3个类型，即成纤维细胞胶原酶、中性粒细胞胶原酶及胶原酶-3，据报告，切割第I型、第II型及第III型的胶原纤维(Collagen fibrils)(Goldberg,G.I.,et al,J.Biol.Chem.,261,6600-6605(1986)；Fini,M.E.,et al.,Biochemistry,26,6155-6165(1987))。并且，已知这三种胶原酶具有相互约50％以上的序列一致性(Borkakoti,et al.,Nature Struct.Biol.,1,106-110(1994)；EMBO,J.,13,1263-1269(1994))。
基质金属蛋白酶区分为三个部位，即前肽部位、催化性部位及C-末端部位。基质金属蛋白酶在均以没有活性的潜伏型生成而被分泌之后，N-末端的前肽部位的80个氨基酸被切割，且具有PRCGVPD序列的部位的半胱氨酸被去除并进行活性化(Van Wart,H.E.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,5578-5582(1990))。已知活性化的基质金属蛋白酶与作为天然抑制剂的基质金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue Inhibitor of Matrix Metalloproteinase)相结合来抑制活性，而这种结合通过催化性部位来调节(Murphy,et al.,J.Niol.Chem.,267,9612-9618(1992))。多种形态的基质金属蛋白酶具有基质特异性，在正常的细胞中，有必要分解细胞外基质(extracellular matrix)或其他胶原蛋白结构时，在代谢过程中被表达。基质金属蛋白酶介导的疾病有动脉硬化症、中枢神经系统炎症疾病、阿尔茨海默病、皮肤老化、类风湿性关节炎、骨关节炎、角膜溃疡、骨疾病、蛋白尿症、腹主动脉瘤、外伤性关节损伤引起的退行性软骨损失、神经系统脱髓鞘疾病、肝硬变、肾小球疾病、胚胎膜未成熟破裂、炎症性肠病、齿根膜疾病、老化相关黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、未成熟性视网膜病变、圆锥角膜、干燥综合征、近视、眼肿瘤、角膜移植排斥、血管新生、癌的浸润和转移等。类风湿性关节炎和骨关节炎的原因是自身免疫异常，但随着病的进展，关节软骨的细胞外基质被破坏。已知，在这种关节炎及关节外伤中，溶基质蛋白酶被识别为主要的酶，且在将原胶原酶转化为活性胶原酶方面起到重要的作用。因此，可通过抑制基质金属蛋白酶活性来阻止关节炎的进行，据报告，上述基质金属蛋白酶来源于渗透性白细胞或成纤维细胞或外来的微生物。
并且，通过炎症介质的刺激来分泌的胶原酶及从细菌分泌的胶原酶分解作为牙周组织的基质的胶原蛋白，从而发生牙龈退缩，并逐渐进行而引起牙周疾病。确认了从引起炎症的牙龈分离的成纤维细胞胶原酶及溶基质蛋白酶的活性，并确认了酶的水平与观察到的牙龈炎的程度相互关联(Overall,C.M.et al.,J.Periodontal Res.22,81-88(1987))。
基质金属蛋白酶与多种中枢神经系统(CNS)的发病有关。根据推定，基质金属蛋白酶使炎症性的单核细胞流入中枢神经，来破坏髓磷脂或者破坏血脑屏障(Blood-Brain Barrier)，在阿尔茨海默病中，被推定为参与β-淀粉样蛋白的积累(Yong,VW,et al.,Trends Neurosci21(2),75-80(1998))。并且，据报告，基质金属蛋白酶在患有阿尔茨海默病的脑中，其浓度高于正常的脑中的浓度(Leake A,Morris CM,&Whateley J.Neurosci Lett291(3),201-3(2000)，脑脊液中的明胶酶B水平与多发性硬化症及其他神经性疾病相关(Miyazaki,K,et al.,Nature362,839～841(1993))，也被报告为分解β-淀粉样蛋白使其蓄积方面做贡献(Backstrom JR,et al.,J neurosci16(24),7910-9(1996))。
并且，基质金属蛋白酶诱导皮肤老化，因而若将其抑制，则可期待皱纹治疗及预防作用，基质金属蛋白酶也因基膜分解作用而促进血管新生、癌的浸润和转移。因此，基质金属蛋白酶不仅通过基膜的分解来对癌的浸润和转移起到非常重要的作用，而且基质金属蛋白酶介导的疾病各种各样，因而需要开发可抑制基质金属蛋白酶的药剂。但是，就这种抑制剂而言，只有在长期使用时可以安全地使用，才可以用作理想的治疗剂，因而需要开发作为基质金属蛋白酶活性抑制剂毒性少的制剂。
并且，为了有效地治疗基质金属蛋白酶介导的各种疾病，正在活跃地研究基质金属蛋白酶抑制剂，且基质金属蛋白酶抑制剂的开发有效地用于各种疾病的治疗。
发明内容
要解决的问题
本发明人为了开发用于抑制基质金属蛋白酶的活性的优秀的肽而努力，其结果，制备并筛选了各种肽。其结果，在多个候选肽中，选择了胶原蛋白分解抑制效果、氧化应激引起的细胞凋亡抑制效果、基质金属蛋白酶2活性抑制效果及透明质酸分解抑制效果等生物活性优秀且稳定性及皮肤渗透率优秀的肽，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供具有如下通式1的肽。
通式1
Xaa1-Xaa2-Pro-Cys-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Ser-Xaa6
本发明的再一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的皮肤状态(skin conditions)改善用化妆品组合物。
本发明的另一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的皮肤状态(skin conditions)改善用药剂学组合物。
本发明的还有一个目的在于，提供包含上述肽及透明质酸的皮肤填充剂(filler)。
本发明的又一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的肥胖的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的又一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的炎症的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的又一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的癌的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的又一个目的在于，提供包含上述肽作为有效成分的基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗用药剂学组合物。
以下发明的详细内容、发明要求保护范围及附图使本发明的其他目的及优点更加明确。
解决问题的手段
根据本发明的一实施方式，本发明提供具有如下通式1的肽。
通式1
Xaa1-Xaa2-Pro-Cys-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Ser-Xaa6
在上述通式中，Xaa1为Ser、Met、Tyr、Gly、Ala、Val、Leu或Ile，Xaa2为Ile、Leu、Val、Ser、Met、Tyr、Gly或Ala，Xaa3为Lys、Tyr或Phe，Xaa4为Leu、Ile、Val、Ser、Met、Tyr、Gly或Ala，Xaa5为Gln、Ser或Thr，Xaa6为Gly、Pro或Lys。
本发明人为了开发用于抑制基质金属蛋白酶的活性的优秀的肽而努力，其结果，制备并筛选了各种肽。其结果，在多个候选肽中，选择了胶原蛋白分解抑制效果、氧化应激引起的细胞凋亡抑制效果、基质金属蛋白酶2活性抑制效果及透明质酸分解抑制效果等生物活性优秀且稳定性及皮肤渗透率优秀的肽，从而完成了本发明。
根据更详细的观察结果，本发明人通过利用计算机的同源性检索(Homology Search)和对接方法(docking method)等，选定与已知的虚拟的基质金属蛋白酶的可结合部位，并将预测的部位的氨基酸序列最佳化，来合成了候选肽。就选定的多个肽而言，在2-氯三苯甲基树脂执行利用芴甲氧羰基-氨基酸(Fmoc-amino acid)的固相合成之后，利用三氯乙酸(trichloroacetic acid)来从树脂去除，再从无水醚获取了所需的肽。在合成的肽中，经过纯化及分析过程检查含量和纯度之后，经过多个生物学试验筛选生物活性最优秀的肽，来筛选了本发明的肽。
本发明的肽优选为具有如下特征的肽，在上述肽中，上述Xaa1为Ser、Met或Tyr，Xaa2为Ile或Leu，Xaa3为Lys、Tyr或Phe，Xaa4为Leu、Ile或Val，Xaa5为Gln、Ser或Thr，Xaa6为Gly、Pro或Lys，本发明的肽更优选为具有如下特征的肽，上述肽为选自包含序列表序列1至序列3的组中的肽。
在本说明书中，术语“肽”意味着通过肽键来使氨基酸残基相互结合而形成的线性分子。本发明的肽可根据该领域中已公知的化学合成方法，尤其根据固相合成技术(solid-phase synthesis techniques)来制成(Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-54(1963)；Stewart et al.,Solid Phase Peptide Synthesis,2nd.ed.,Pierce Chem.Co.:Rockford,111(1984))。
在本发明的肽中，为了选定氨基酸序列的部分部位并使其活性增加，可在N-末端或C-末端诱导变形。通过这种变形，本发明的肽可具有使向生物体内给药时的半衰期增加的高半衰期。
并且，本发明的肽的C-末端变形为羟基(hydroxyl group)(-OH)、氨基(amino group)(-NH2)、叠氮化合物(azide)(-NHNH2)等，肽的N-末端结合有选自包含乙酰基(acetyl group)、芴甲氧羰基(fluorenyl methoxy carbonyl group)、甲酰基(formyl group)、棕榈酰基(palmitoyl group)、肉豆蔻基(myristyl group)、硬脂酰基(stearyl group)及聚乙二醇(PEG，polyethylene glycol)的组中的保护基。
上述氨基酸的变形起到大大改善本发明的肽的稳定性的作用。在本说明书中，术语“稳定性”不仅意味着体内稳定性，还意味着储存稳定性(例如，常温储存稳定性)。上述保护基起到保护本发明的肽使其不受生物体内的蛋白质切割酶的攻击的作用。
根据本发明的优选的实例，本发明的肽在人体皮肤成纤维细胞(human primary dermal fibroblast)及成纤维细胞(fibroblast)中促进细胞的生长，并抑制氧化应激(oxidative stress)引起的细胞凋亡。并且，直接向细胞照射紫外线(UV)，来诱导细胞凋亡之后，当处理本发明的肽时，具有抑制细胞凋亡的功能。进而，本发明的肽不仅具有直接抑制基质金属蛋白酶的活性的功能，还具有抑制基于基质金属蛋白酶的胶原蛋白分解的功能。并且，本发明的肽对于皮肤美白起到重要作用的黑素体转移(melanosome transfer)抑制效果突出。这种结果意味着本发明的肽在改善皮肤状态方面具有非常优秀的功效。
根据本发明的再一个实施方式，提供包含本发明的肽作为有效成分的皮肤状态(skin conditions)改善用化妆品组合物。
根据本发明的另一个实施方式，提供包括将包含本发明的肽作为有效成分的组合物给药到对象(subject)的步骤的皮肤状态改善方法。
根据本发明的优选的实例，在本发明中，皮肤状态的改善为皱纹改善、皮肤弹性改善、皮肤老化防止、皮肤保湿改善、伤口消除、皮肤再生或美白。
根据本发明的还有一个实施方式，提供包含本发明的肽作为有效成分的皮肤状态(skin conditions)改善用药剂学组合物。
根据本发明的优选的实例，在本发明中，皮肤状态的改善为伤口消除或皮肤再生。
根据本发明的又一个实施方式，提供包含本发明的肽及透明质酸的皮肤填充剂(filler)。
根据本发明的又一个实施方式，提供包括将包含本发明的肽及透明质酸的组合物给药到对象(subject)的步骤的皮肤剥脱方法。
就本发明的肽而言，当通过抑制透明质酸分解酶的活性来适用于填充剂产品时，在提高填充剂产品的长期稳定性方面呈现优秀的效果。
根据本发明的又一个实施方式，提供包含本发明的肽作为有效成分的肥胖的预防或治疗用药剂学组合物。
根据本发明的又一个实施方式，提供包括将包含本发明的肽作为有效成分的组合物给药到对象(subject)的步骤的肥胖的预防或治疗方法。
本发明的肽对牙周细胞进行处理时，在抑制炎症相关蛋白质的表达的抗炎症效果呈现优秀的功效。
根据本发明的又一个实施方式，提供包含本发明的肽作为有效成分的炎症的预防或治疗用药剂学组合物。
本发明的又一个实施方式，提供包括将包含本发明的肽作为有效成分的组合物给药到对象(subject)的步骤的炎症的预防或治疗方法。
本发明的肽对脂肪细胞进行处理时，由于抑制脂肪合成的功能卓越，因而可利用于肥胖的预防或治疗。
根据本发明的又一个实施方式，提供包含本发明的肽作为有效成分的癌的预防或治疗用药剂学组合物。
根据本发明的又一个实施方式，提供包括将包含本发明的肽作为有效成分的组合物给药到对象(subject)的步骤的癌的预防或治疗方法。
本发明的肽由于在血管内皮细胞中抑制管形成(tube formation)而具有抑制血管生成的功能，因而可应用于各种癌的治疗。
根据本发明的又一个实施方式，提供基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗用药剂学组合物，其包含本发明的肽作为有效成分，上述基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗用药剂学组合物的特征在于，上述基质金属蛋白酶-活性相关疾病为关节炎、糖尿病性视网膜病变、增生性瘢痕、银屑病、粘膜及上皮组织的溃疡、自身免疫性炎症、作为与基膜的分解相关的疾病的狼疮、自身免疫性神经障碍、肌细胞破坏、青光眼或过多的血管新生。
根据本发明的又一个实施方式，提供基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗方法，其包括将包含本发明的肽作为有效成分的组合物给药的对象(subject)的步骤，上述基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗方法的特征在于，上述基质基质金属蛋白酶-活性相关疾病为关节炎、糖尿病性视网膜病变、增生性瘢痕、银屑病、粘膜及上皮组织的溃疡、自身免疫性炎症、作为与基膜的分解相关的疾病的狼疮、自身免疫性神经障碍、肌细胞破坏、青光眼或过多的血管新生。
本发明的肽具有抑制基质金属蛋白酶(MMP)的活性、抑制胶原蛋白分解、抑制透明质酸分解、抑制黑素体转移(melanosome transfer)、抑制脂肪细胞(adipocyte cell)中的脂肪(lipid)生成以及抑制血管生成等各种生物活性，因而可有用地利用于与其相关的疾病治疗。
并且，本发明的肽的分子量非常小于其他蛋白质的分子量，因而皮肤渗透率非常优秀。因此，在将本发明的组合物局部地涂敷于皮肤的情况下，可有效地改善皮肤状态。
因此，本发明的肽能够以适当的形态利用于各种领域的医药品及化妆品的用途，本发明的组合物可制备成药剂学组合物和化妆品组合物。
根据本发明的优选的实例，本发明的组合物为包含(a)本发明的上述肽的药剂学有效量以及(b)药剂学上允许的载体的药剂学组合物。
在本说明书中，术语“药剂学有效量”意味着充分达成上述肽的功效或活性的量。
包含在本发明的药剂学组合物的药剂学上允许的载体是在制剂时通常利用的，其包含乳糖(lactose)、葡萄糖(dextrose)、蔗糖(sucrose)、山梨糖醇(sorbitol)、甘露醇(mannitol)、淀粉、阿拉伯胶(acacia gum)、磷酸钙(calcium phosphate)、藻酸盐(alginate)、明胶(gelatin)、硅酸钙(calcium silicate)、微晶纤维素(microcrystalline cellulose)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、纤维素(cellulose)、水、糖浆(syrup)、甲基纤维素(methyl cellulose)、羟基苯甲酸甲酯(methyl hydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙酯(propyl hydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁(magnesium stearate)及矿物油(mineral oil)等，但并不局限于此。本发明的药剂学组合物除了上述成分之外，还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、保鲜剂等。在药剂学上允许的适合的载体及制剂详细记载于雷明顿药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)(19th ed.,1995)。
本发明的药剂学组合物以口服或非口服方式进行给药，优选地，能够以非口服方式进行给药，在以非口服方式进行给药的情况下，能够以肌肉注入、静脉内注入、皮下注入、腹腔注入、局部给药、经皮给药等方式进行给药。
本发明的药剂学组合物的适当的给药量可根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性等因素而开多种处方。另一方面，本发明的药剂学组合物的1天给药量优选为0.0001～1000μg。
本发明的药剂学组合物可根据本发明所属技术领域的普通技术人员容易实施的方法，利用药剂学上接受的载体和/或赋形剂进行制剂化，由此制备为单位容量形态，或者装入至大容量容器内而制备。此时，剂型可以是油性或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态，或者也可以是浸膏剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可包含分散剂或稳定剂。
根据本发明的优选的实例，本发明的组合物为包含(a)本发明的上述肽的化妆品学有效量(cosmetically effective amount)以及(b)化妆品学上允许的载体的化妆品组合物。
在本说明书中，术语“化妆品学有效量”意味着充分达成上述本发明的组合物的皮肤改善功效的量。
本发明的化妆品组合物也能够以在该领域中通常所制备的任何剂型制成，例如，能够以溶液、悬浮液、乳浊液、糊剂、凝胶、乳霜、乳液、粉、皂、含有表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳浊液粉底、蜡粉底及喷雾剂等剂型化，但并不局限于此。更详细地，能够以柔肤化妆水、营养化妆水、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、洁面霜、洁面泡沫、卸妆水、面膜、喷雾剂或粉的剂型制备。
本发明的剂型为糊剂、乳霜或凝胶的情况下，作为载体成分，可利用动物性油、植物性油、蜡、石蜡、淀粉、胺黄树胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。
本发明的剂型为粉或喷雾剂的情况下，作为载体成分，可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉，尤其喷雾剂的情况下，还可包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚等推进剂。
本发明的剂型为溶液或乳浊液的情况下，作为载体成分，利用溶剂、增溶剂或乳浊剂，例如有水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酯、聚乙二醇或山梨糖醇酐的脂肪酸酯。
本发明的剂型为悬浮液的情况下，作为载体成分，可利用水、乙醇或丙二醇等液状稀释剂、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯等悬浮剂、微晶纤维素、甲基氢氧化铝、膨润土、琼脂或胺黄树胶等。
本发明的剂型为含有表面活性剂的卸妆油的情况下，作为载体成分，可利用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。
包含在本发明的化妆品组合物的成分除了作为有效成分的肽和载体成分之外包含通常用于化妆品组合物的成分，例如，可包含抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、颜料及香料等常规的助剂。
效果
归纳本发明的特征及优点如下：
(a)本发明的抑制基质金属蛋白酶的活性的肽在直接抑制基质金属蛋白酶的活性来改善皮肤状态方面发挥非常优秀的功效。
(b)包含本发明的肽的组合物具有抑制透明质酸分解酶的活性、抑制脂肪细胞中的脂肪生成以及抑制血管生成等优秀的生物活性，因而能够利用于抗肥胖、抗癌及抗炎症等各种疾病的治疗。
(c)本发明的肽由于其大小较小，因而其皮肤渗透度非常突出。
(d)上述本发明的肽的优秀的活性及稳定性能够非常有利地适用于医药、医药外品及化妆品。
附图说明
图1a为按照不同浓度处理本发明的肽之后，呈现人体皮肤成纤维细胞中的细胞生长效果的图表。
图1b为按照不同浓度处理本发明的肽之后，呈现成纤维细胞的细胞生长效果的图表。
图2为处理本发明的肽之后，呈现成纤维细胞的细胞生长效果的显微镜照片。
图3a为呈现本发明的肽的氧化应激引起的成纤维细胞的凋亡抑制效果的图表。
图3b为将紫外线(UV)处理于人体皮肤成纤维细胞并诱导细胞凋亡之后，处理本发明的肽来呈现紫外线(UV)引起的细胞凋亡抑制效果的显微镜照片。
图3c为示出通过基于本发明的肽的胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化(phosphorylation)呈现图3b的效果的数据。
图4a为按照不同浓度处理本发明的肽时，表示基质金属蛋白酶2(MMP2)的活性抑制的明胶酶谱(Zelatin zymography)数据。
图4b为按照不同浓度处理本发明的肽时，在成纤维细胞中表示基质金属蛋白酶2(MMP2)的活性抑制的明胶酶谱数据。
图4c为表示按照不同浓度处理本发明的肽时，直接抑制金属蛋白酶2(MMP2)的活性的明胶酶谱数据。
图5a为促进基于金属蛋白酶2(MMP2)的胶原蛋白(collagen)分解之后，按照不同浓度处理本发明的肽时，表示抑制胶原蛋白分解的情况的数据。
图5b为在通过胰岛素样生长因子类1诱导胶原蛋白的表达之后，处理金属蛋白酶2(MMP2)来促进胶原蛋白分解，再按照不同浓度处理本发明的肽时，表示抑制胶原蛋白分解的情况的数据。
图6a为处理本发明的肽时，表示抑制透明质酸的分解的情况的明胶酶谱数据。
图6b、图6c及图6d为在填充剂产品放入透明质酸分解酶并人为地诱导分解之后，按照不同浓度处理各个肽时，根据不同时间表示抑制填充剂产品的透明质酸分解程度的数据。
图6e中，在填充剂产品添加透明质酸分解酶和序列表序列2肽之后，在鼠的背皮肤注射，并以1天至7天的间隔检查对于填充剂产品是否长期停留在皮肤内的效果，其结果可以确认将序列表序列2肽放入填充剂产品而注射的试样与仅注射填充剂产品的产品相比，透明质酸分解抑制效果卓越，并且可以确认在生物体内长期维持。
图7a为处理本发明的肽时，本发明的肽抑制黑素体转移，来呈现优秀的美白效果的数据。
图7b为处理本发明的肽时，将抑制黑素体转移的情况表现为细胞形状的数据。
图8为表示通过本发明的肽来抑制炎症相关蛋白质的表达的抗炎症功能的RT-PCR数据。
图9为处理本发明的肽时，表示抑制脂肪合成的数据。
图10为处理本发明的肽时，表示对作为血管生成细胞的人脐静脉内皮细胞处理时抑制血管生成的情况的数据。
具体实施方式
以下，通过实施例对本发明进行更为详细的说明。这些实施例仅用于更加具体地说明本发明，本发明的范围并不根据本发明的要旨而受这些实施例的限制，这对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。
实施例
合成例1：SIPCKLQSG(序列表序列1)的合成
将700mg的氯三苯甲基氯树脂(Chloro trityl chloride resin；CTL resin，Nova biochem Cat No.01-64-0021)放入反应容器，并添加10ml的亚甲基氯(MC，methylene chloride)来搅拌3分钟。除去溶液，并放入10ml的二甲基甲酰胺(DMF，Dimethyl Formamide)来搅拌3分钟之后，再次除去溶剂。向反应器放入10ml的二氯甲烷(DCM，Dichloromethane)溶液，并放入200mmole的芴甲氧羰基-Gly-OH(Fmoc-Gly-OH)(巴亨公司(Bachem)，瑞士(Swiss))及400mmole的N，N-二异丙基乙胺(DIEA，N，N-Diisopropylethylamine)之后进行搅拌并使它们均匀溶解，再搅拌1小时并进行反应。反应后进行清洗，将甲醇和DIEA(2:1)溶解在DCM进行10分钟反应，并用过量的DCM/DMF(1:1)进行清洗。除去溶液，并放入10ml的DMF搅拌3分钟之后，再次除去溶剂。将10ml的脱保护溶液(20％的哌啶(Piperidine)/DMF)放入反应容器，在常温下搅拌10分钟之后除去溶液。放入相同量的脱保护溶液，再维持10分钟的反应之后去除溶液，并分别用DMF清洗2次，每次3分钟，用MC清洗1次，每次3分钟，并用DMF清洗1次，每次3分钟，来制备了Gly-氯三苯甲基氯树脂(Gly-CTL Resin，Gly-Chlorotrityl chloride Resin)。向新的反应器放入10ml的DMF溶液，并放入200mmole的芴甲氧羰基-Ser(tBu)-OH(Fmoc-Ser(tBu)-OH)(Bachem，Swiss)、200mmole的羟基苯并三唑(HoBt)及200mmole的苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(Bop)之后进行搅拌来使它们均匀溶解。以分馏的方式向反应器分两次放入400mmole的N，N-二异丙基乙胺(DIEA，N，N-Diisopropylethylamine)2次之后，最小限度地搅拌了5分钟，直到所有固体溶解为止。将溶解的氨基酸混合溶液放入有脱保护的树脂的反应容器，并在常温下搅拌1小时并进行反应。除去反应液，用DMF溶液搅拌3次，每次5分钟，之后进行除去。取出少量的反应树脂，并利用茚三酮试验(Nihydrin test)检查反应程度。与上述方法相同地，用脱保护溶液进行2次脱保护反应，来制备了Ser(tBu)-Gly-氯三苯甲基氯树脂(Ser(tBu)-Gly-CTL Resin)。用DMF和MC充分清洗，再次执行一次茚三酮试验之后，与上述方法相同地，执行了以下的氨基酸附着实验。通过选定的氨基酸序列，以Fmoc-Gln(Trt)、Fmoc-Leu、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Cys(Trt)、Fmoc-Pro、Fmoc-Ile以及Fmoc-Ser(tBu)的顺序进行了链式反应。用脱保护溶液使Fmoc-保护基反应2次，每次10分钟之后，通过清洗来进行除去。放入乙酸酐和DIEA、羟基苯并三唑(HoBt，Hydroxybenzotriazole)执行1小时乙酰化之后，用DMF、MC及甲醇分别将制成的肽基树脂清洗3次，慢慢将氮空气流出，来进行干燥之后，在五氧化二磷(P2O5，Phosphorus pentoxide)条件下用真空进行减压，等完全干燥之后，放入30ml的泄漏溶液[三氟乙酸(Trifluroacetic acid)95％、蒸馏水2.5％、茴香硫醚(Thioanisole)2.5％]之后，在常温下偶尔摇晃，并维持2小时反应。对树脂进行过滤，并用少量的三氟乙酸(TFA，Trifluroacetic acid)溶液清洗树脂之后将其与母液合起来。利用减压来蒸馏，使得整体容积剩一半左右，并添加50ml的凉的醚诱导沉淀之后，进行离心分离来收集沉淀，并用更凉的醚清洗2次。除去母液，并在氮条件下充分干燥，合成了提纯之前的0.7g的NH2-Ser-Ile-Pro-Cys-Lys-Leu-Gln-Ser-Gly-COOH肽1(收率：93％)。当利用分子量测定仪来测定时，可获得分子量932(理论值：932.12)。利用如上所述的方法，还合成了序列2肽及序列3肽。
表1
试验例1：分析利用合成肽的人体皮肤成纤维细胞(human primary dermal fibroblast)的生长功效
为了分析对在合成例1中合成的序列肽的生长因子的类似功效及抑制功效，参照力吉那欧等方法(Rizzino,et al.Cancer Res.48:4266(1988))，并通过利用人体皮肤成纤维细胞的磺酰罗丹明B(SRB，Sulforhodamine B，西格马(Sigma))比色法来进行测定。
分别利用250ml容量的组织培养用烧瓶，来在包含5％胎牛血清(FBS，fetal bovine serum，西格马(Sigma))和1％间充质干细胞生长添加剂(MSCGS，Mesenchymal Stem Cell Growth Supplement，科学(Science)，美国)的间充质干细胞培养基(MSCM，Mesenchymal stem cell medium，吉博克(Gibco)公司，美国)培养了人体皮肤成纤维细胞。用1％胰蛋白酶溶液从培养容器底面除去培养的细胞株之后，进行离心分离来仅收集了细胞沉淀物。用1％胰蛋白酶溶液从培养容器底面除去培养的细胞株之后，进行离心分离来仅收集了细胞沉淀物。再次将其悬浮于不含有胎牛血清的间充质干细胞培养基培养液之后，以每孔有3×103细胞的方式放入96孔组织培养用平板，并在37℃、5％CO2条件下培养了24小时。24小时后，用完全除了血清之外的相同的培养液交换培养基之后，以灭菌状态将用于找出标准的试料和合成肽溶解在蒸馏水之后，分别以10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml及10μg/ml的浓度在与上述相同的条件下培养了72小时。培养结束后，除去培养上清液，并利用乙醇将细胞固定化，在结束细胞固定之后，用磷酸盐缓冲液(PBS，phosphate buffer saline)清洗了3次。除去清洗溶液之后，用比色磺酰罗丹明B溶液进行处理，并用1％乙酸(acetic acid)充分清洗之后，用显微镜观察细胞，观察到生存细胞的状态，并在590nm的紫外线条件下测定了吸光度，从而测定了细胞的生存状态。
如图1a及图1b所示，在本发明的序列表序列1中，序列3肽以浓度依赖性方式大大促进了人体皮肤成纤维细胞和成纤维细胞(fibroblast)的生长。并且，如图2所示，可通过显微镜确认本发明的序列表序列1至序列3肽的处理通过以浓度依赖性方式诱导成纤维细胞的生长来大大改变细胞的形状及形态。
试验例2：合成肽抑制氧化应激(oxidative stress)引起的细胞凋亡的效果
为了观察在合成例1中合成的序列是否呈现氧化应激引起的细胞凋亡抑制效果，利用作为成纤维细胞的NIH3T3细胞和人体皮肤成纤维细胞来进行了实验。以与如上所述的方法相同的方法来培养了上述两个细胞，以每孔有3×103细胞的方式放入96孔组织培养用平板，并在37℃、5％CO2条件下培养了24小时。培养后，为了用完全除了血清之外的相同的培养液交换培养基并向细胞施加氧化应激，以15μM的浓度将甲萘醌(menadione，西格马(Sigma))处理在细胞。之后，按照不同浓度处理各个肽，并培养48小时，从而观察了细胞的凋亡。与上述细胞增殖实验相同地，通过磺酰罗丹明B试剂将生存的细胞染色之后，在590nm的紫外线条件下测定了吸光度，从而确认了细胞的凋亡。
图3a为对成纤维细胞处理15μM的甲萘醌并施加氧化应激之后，按照不同浓度(1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)处理本发明的肽来观察细胞凋亡抑制效果的数据，可见，当按照不同浓度处理本发明的肽时，抑制氧化应激引起的细胞凋亡。
图3b为利用人体皮肤成纤维细胞来观察了本发明的肽抑制氧化应激引起的细胞凋亡的效果的数据。按照不同浓度处理各个肽之后，分别以20mJ/cm2、30mJ/cm2的强度照射紫外线(UV)，再确认了细胞的状态。利用磺酰罗丹明B试剂来染色了细胞，并利用光学显微镜来确认了细胞的状态。根据结果，当以20mJ/cm2和30mJ/cm2的强度向细胞照射紫外线(UV)时，可以观察到诱导了细胞的凋亡，当按照不同浓度处理各个肽时，可以观察到抑制紫外线(UV)引起的细胞凋亡。
图3c为为了观察本发明的肽抑制氧化应激引起的细胞凋亡的效果信号而执行了免疫印迹法(western blot)的结果。其结果，当按照各个不同时间(15分钟、30分钟、60分钟)来处理本发明的肽时，可以确认促进胞外信号调节激酶(ERK，extracellular signal-regulated kinases)的磷酸化。
其结果可以确认，在本发明的序列表序列1中，序列3肽抑制人体皮肤成纤维细胞及成纤维细胞因氧化应激而被诱导的凋亡(图3a及3b)，通过免疫印迹法确认了上述效果因基于各个肽的胞外信号调节激酶的磷酸化促进而产生(图3c)。
试验例3：合成肽抑制基质金属蛋白酶2(Matrix metalloprotease2)的活性的效果
利用对于上述合成的序列肽的明胶酶谱(gelatin zymography)来观察了基质金属蛋白酶2的活性抑制效果。为了验证基质金属蛋白酶2的活性抑制效果，分别观察了基质金属蛋白酶2存在时的各个肽抑制基质金属蛋白酶2的活性的效果和利用成纤维细胞来抑制基质金属蛋白酶2的活性的效果。
为了观察肽直接抑制基质金属蛋白酶2活性的效果，按照不同浓度(0.1μg/ml、1μg/ml)混合基质金属蛋白酶2和本发明的肽，并在常温条件下使它们反应1小时之后，执行明胶酶谱并测定了基质金属蛋白酶2的活性。执行将明胶(2mg/ml)作为基质的蛋白质电泳(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE，sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis))之后，在2.5％聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)处理30分钟，再次在缓冲剂(50mM Tris-HCl、0.2M NaCl、5mM CaCl2、1％Triton X-100)中，于37℃温度下处理了24小时。处理后，用考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue)R250(西格马(Sigma))染色了凝胶，并用脱色缓冲液(5％甲醇、7.5％乙酸、蒸馏水)进行了处理。之后，观察因明胶水解而产生的带，从而观察了基质金属蛋白酶2的活性。
为了观察利用成纤维细胞的肽抑制基质金属蛋白酶2活性的效果，以每孔有3×104细胞的方式在24孔组织培养用平板培养了成纤维细胞24小时。利用无血清培养基培养了细胞24小时之后，按照各个不同的浓度(10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)处理了本发明的肽24小时。从底面去除培养结束的细胞并进行离心分离来仅回收上清液之后，利用明胶酶谱来确认了细胞内的基质金属蛋白酶2的活性。
其结果，当按照不同浓度处理本发明的肽时，可通过明胶酶谱确认基质金属蛋白酶2的活性被抑制(图4a及图4c)。并且，在观察利用NIH3T3成纤维细胞的肽抑制基质金属蛋白酶2活性的过程中，也可以确认当按照不同浓度处理各个肽时的与如上所述的结果相同的结果(图4b)。
试验例4：肽抑制基质金属蛋白酶2的胶原蛋白(collagen)分解的效果
以每孔有3×104细胞的方式在24孔组织培养用平板中培养了人体皮肤成纤维细胞24小时。之后，放入含有5％血清的培养基而培养42小时，并用20ng/ml的基质金属蛋白酶2和肽处理了6小时。对细胞进行离心分离来仅回收上清液之后，利用胶原蛋白试剂盒(collagenkit)来确认了胶原蛋白的合成量。并且，以如上所述的培养条件放入胰岛素样生长因子类1(IGF-1，insulin-like growth factor type1)而人为地诱导胶原蛋白合成之后，放入基质金属蛋白酶2和肽并培养4小时，再利用胶原蛋白试剂盒来观察了是否抑制胶原蛋白分解。
图5a示出了进行各个肽是否具有抑制基于基质金属蛋白酶2(MMP2)的诱导胶原蛋白分解的功能的实验的结果。可以确认当处理基质金属蛋白酶2时，在细胞内胶原蛋白的分解被诱导，并且可以确认当同时处理各个肽时，胶原蛋白分解被抑制。并且，在将胰岛素样生长因子类1处理在细胞内并诱导胶原蛋白合成之后，当处理基质金属蛋白酶2和各个肽时，当观察胶原蛋白分解抑制效果时，在各个序列肽3个类型中，都可以确认胶原蛋白分解抑制效果(图5b)。
试验例5：在合成肽的填充剂产品中观察透明质酸分解抑制效果
在市场销售的填充剂产品中人为地放入100μg浓度的透明质酸分解酶并诱导填充剂产品中透明质酸的分解之后，处理200μg的肽来观察7天，由此确认了填充剂产品中透明质酸分解效果(图6a、图6b、图6c及图6d)。进行了利用凝胶渗透色谱柱(GPC Column)的分析方法和利用大鼠(rat)的体内(in vivo)实验。作为对照组，在填充剂产品中利用了透明质酸分解酶，而作为处理组，在填充剂产品中利用了处理透明质酸分解酶及各个肽的物质。向大鼠皮肤注射，来向生物体内注射填充剂时，观察了基于肽的填充剂中透明质酸的分解抑制效果(图6e)。
试验例6：观察合成肽抑制黑素体转移(melanosome transfer)的效果
为了观察黑素体转移，利用HaCaT角质细胞来进行了吞噬试验(Phagocytosis assay)。作为用于吞噬的物质，利用了附着有荧光(fluoroscence)物质的生物粒子(bioparticle)。以每孔有3×103细胞的方式在96孔组织培养用平板培养24小时之后，用无血清培养基培养了6小时。之后，为了诱导吞噬，处理1μg/ml的胰蛋白酶，并处理了1μg/ml的肽48小时。其结果，通过荧光显微镜确认了生物粒子被吞噬到角质细胞内。
如图7a及图7b所示，可以确认本发明的肽抑制了黑素体转移。
试验例7：合成肽在牙周细胞中的抗炎症效果
为了观察牙周炎细胞中的抗炎症效果，利用人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblast cell)(美国模式培养物集存库(ATCC，American type culture collection)公司，美国(USA))来对在上述合成例中合成的肽进行了实验。以每孔有5×101细胞的方式在6孔组织培养用平板培养了人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblast cell)24小时。为了在牙周细胞中诱导炎症，以10μg/ml的浓度处理了脂多糖(LPS，Lipopolysaccharide/西格马(Sigma)，美国(USA))之后，以1μg/ml的浓度一起处理本发明的肽并培养4小时，再从处理对照组和诱导物质以及诱导物质和肽的培养细胞中提取mRNA，并利用白介素-6(IL-6，interleukin-6)、白介素-1beta(IL-1beta，Interleukin-1beta)、环氧酶-2(COX-2，cyclooxygenase-2)的引物来执行了反转录聚合酶链式反应。使用的各个引物的核苷酸序列如下：IL-6(正向5‘-agaggagacttcacagagga-3'、反向5’-atctctctgaaggactctgg-3')、IL-1beta(正向5‘-ccgtggaccttccaggatca-3'、反向5’-gatccacactctccagctgc-3')、COX-2(正向5‘-cccccacagtcaaagacact-3'、反向5’-ccccaaagatagcatctgga-3')、Actin(正向5‘-gatctcaaagacaaccaactagtg-3'、反向5’-ctccagctgaagactcctcccag-3')。
如图8所示，当用脂多糖对人牙周膜成纤维细胞诱导炎症时，可以观察到作为炎症性细胞因子的IL-6、IL-1beta、COX-2的表达增加，当同时处理本发明的肽时，可以确认上述3种炎症性细胞因子的表达明显抑制(图8)。
试验例8：合成肽在脂肪细胞(adipocyte cell)中抑制脂肪(lipid)生成的效果
为了观察在上述合成例中合成的肽抑制脂肪生成(adipogenesis)的效果，利用作为前脂肪细胞(Pre-adipocyte)的3T3-L1细胞(美国模式培养物集存库(ATCC，American type culture collection)公司，美国(USA))来进行了实验。以每孔有3×104细胞的方式在24孔组织培养用平板24小时培养了作为第8代(passage8)的前脂肪细胞3T3-L1。在对照组中，为了使前脂肪细胞分化为脂肪细胞，利用DMI培养基(0.5mM IBMX、0.25μM地塞米松(Dexametasone)及1μg/ml胰岛素(insulin))来进行培养，在处理组中，在DMI培养基以1μg/ml的浓度处理了各个肽。之后，培养10天并诱导了分化。
如图9所示，在DMI培养基中培养10天之后，通过显微镜观察时，对照组中可以确认前脂肪细胞分化为脂肪细胞，并且可以确认在细胞上生成脂肪。相反，在处理各个肽的组中，可以确认脂肪生成与对照组相比明显减少。
试验例9：基于合成肽的血管生成抑制效果
为了观察合成的上述肽抑制血管生成的效果，利用作为血管内皮细胞的人脐静脉内皮细胞(HUVEC，Human Umbilical Vein Endothelial Cells，美国模式培养物集存库(ATCC，American type culture collection)公司，美国(USA))来观察了管形成(tube formation)。为了基质胶凝固(Matrigel solidification)，以每孔有50ul的方式添加于96孔组织培养用平板，并在37℃温度下放置30分钟之后，在凝固的基质胶添加包含0.2％血清的培养基(非生长添加剂培养基(Non-growth supplement medium))来培养了HUVEC细胞。此时，与1μg/ml的浓度一起处理各个肽并在37℃温度下进行培养。在5小时后，利用光学显微镜来观察管形成。
如图10所示，当与对照组进行比较时，可以确认通过处理各个肽来抑制管形成。这意味着合成的各个肽具有血管形成抑制效果。
实施例1：纳米化肽的制备
准确地对50mg的从上述合成例中获得的肽进行称量之后，在500ml的蒸馏水中充分搅拌来进行了溶解。将配合物溶液与5g的卵磷脂、0.3ml的油酸钠(sodium oleate)、50ml的乙醇及少量的油相一起混合之后，用蒸馏水将总量调成1L，再通过微射流机，利用高压进行乳化，从而制备了尺寸为100nm左右的纳米体。制成的纳米体以最终浓度为约50ppm单独或复合地用作化妆品制备用。
剂型例1：柔肤化妆水
按照常规的化妆水制备方法，来制备了包含有上述实施例1中制得的肽纳米体，且由以下成分组成的柔肤化妆水。
表2
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.001
1，3-丁二醇 6.0
甘油 4.0
聚乙二醇1500 1.0
透明质酸钠 1.0
聚山梨酯20 0.5
乙醇 8.0
防腐剂、色素 适量
二苯甲酮-9 0.05
香料 微量
纯化水 余量
合计 100
剂型例2：营养霜
按照常规的营养霜制备方法，来制备了包含有上述实施例1中制得的肽纳米体，且由以下成分组成的营养霜。
表3
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.001
白芒花籽油 3.0
鲸蜡硬脂醇 1.5
硬脂酸 1.5
甘油硬脂酸酯 1.5
液体石蜡 10.0
蜂蜡 2.0
聚山梨酯60 0.6
倍半油酸山梨坦 2.5
角鲨烷 3.0
1，3-丁二醇 3.0
甘油 5.0
三乙醇胺 0.5
生育酚乙酸酯 0.5
防腐剂、色素 适量
香料 适量
纯化水 余量
合计 100
剂型例3：营养化妆水
按照常规的化妆水制备方法，来制备了包含有上述实施例1中制得的肽纳米体，且由以下成分组成的营养化妆水。
表4
成分 含量(重量％)
肽纳米体 0.002
1，3-丁二醇 4.0
甘油 4.0
鲸蜡硬脂醇 0.8
甘油硬脂酸酯 1.0
三乙醇胺 0.13
生育酚乙酸酯 0.3
液体石蜡 5.0
角鲨烷 3.0
澳洲坚果油 2.0
聚山梨酯60 1.5
倍半油酸山梨坦 0.5
羧乙烯聚合物 1.0
防腐剂、色素 适量
香料 适量
纯化水 余量
合计 100
剂型例4：精华素
按照常规的精华素制备方法，来制备了包含有上述实施例1中制得的肽纳米体，且由以下成分组成的精华素。
表5
以上，详细记述了本发明的特定的部分，对于该领域的普通技术人员来说，明确的是，这种详细记述仅为优选实施例，本发明的范围并不受其限制。因此，本发明的实质范围由所附的发明要求保护范围和与其等同的技术方案定义。

Claims (27)

1.一种肽，其特征在于，具有如下通式1：
通式1
Xaa1-Xaa2-Pro-Cys-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Ser-Xaa6，
在上述通式中，Xaa1为Ser、Met、Tyr、Gly、Ala、Val、Leu或Ile，Xaa2为Ile、Leu、Val、Ser、Met、Tyr、Gly或Ala，Xaa3为Lys、Tyr或Phe，Xaa4为Leu、Ile、Val、Ser、Met、Tyr、Gly或Ala，Xaa5为Gln、Ser或Thr，Xaa6为Gly、Pro或Lys。
2.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述Xaa1为Ser、Met或Tyr，Xaa2为Ile或Leu，Xaa3为Lys、Tyr或Phe，Xaa4为Leu、Ile或Val，Xaa5为Gln、Ser或Thr，Xaa6为Gly、Pro或Lys。
3.根据权利要求2所述的肽，其特征在于，上述肽为选自包含序列表序列1至序列3的组中的肽。
4.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽具有细胞生长促进功效。
5.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制氧化应激引起的细胞凋亡。
6.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制基质金属蛋白酶2的活性。
7.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制胶原蛋白分解。
8.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制透明质酸分解。
9.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制黑素体转移。
10.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制脂肪细胞中的脂肪生成。
11.根据权利要求1所述的肽，其特征在于，上述肽抑制血管生成。
12.一种皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分。
13.根据权利要求12所述的皮肤状态改善用化妆品组合物，其特征在于，上述皮肤状态的改善为皱纹改善、皮肤弹性改善、皮肤老化防止、皮肤保湿改善、伤口消除、皮肤再生或美白。
14.一种皮肤状态改善用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分。
15.根据权利要求14所述的皮肤状态改善用药剂学组合物，其特征在于，上述皮肤状态的改善为伤口消除或皮肤再生。
16.一种皮肤填充剂，其特征在于，包含：
(a)权利要求1至11中任一项所述的上述肽；以及
(b)透明质酸。
17.一种肥胖的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分。
18.一种炎症的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分。
19.一种癌的预防或治疗用药剂学组合物，其特征在于，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分。
20.一种基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗用药剂学组合物，包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分，其特征在于，上述基质金属蛋白酶-活性相关疾病为关节炎、糖尿病性视网膜病变、增生性瘢痕、银屑病、粘膜及上皮组织的溃疡、自身免疫性炎症、作为与基膜的分解相关的疾病的狼疮、自身免疫性神经障碍、肌细胞破坏、青光眼或过多的血管新生。
21.一种皮肤状态改善方法，其特征在于，包括将包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分的组合物给药到对象的步骤。
22.根据权利要求21所述的皮肤状态改善方法，其特征在于，上述皮肤状态的改善为皱纹改善、皮肤弹性改善、皮肤老化防止、皮肤保湿改善、伤口消除、皮肤再生或美白。
23.一种皮肤剥脱方法，其特征在于，包括将包含(a)权利要求1至11中任一项所述的上述肽以及(b)透明质酸的组合物给药到对象的步骤。
24.一种肥胖的预防或治疗方法，其特征在于，包括将包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分的组合物给药到对象的步骤。
25.一种炎症的预防或治疗方法，其特征在于，包括将包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分的组合物给药到对象的步骤。
26.一种癌的预防或治疗方法，其特征在于，包括将包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分的组合物给药到对象的步骤。
27.一种基质金属蛋白酶-活性相关疾病的预防或治疗方法，包括将包含权利要求1至11中任一项所述的上述肽作为有效成分的组合物给药到对象的步骤，其特征在于，上述基质金属蛋白酶-活性相关疾病为关节炎、糖尿病性视网膜病变、增生性瘢痕、银屑病、粘膜及上皮组织的溃疡、自身免疫性炎症、作为与基膜的分解相关的疾病的狼疮、自身免疫性神经障碍、肌细胞破坏、青光眼或过多的血管新生。
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