CN109320587A - 具有通乳效果的环二肽 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有通乳效果的环二肽，所述环二肽为L‑丝‑L‑酪环二肽，同时提供了具有通乳效果的药物和药物制剂。所述的药物制剂为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或眼用制剂，所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂，所述的半固体制剂包括软膏剂或栓剂，所述的液体制剂包括溶液剂、注射剂或喷雾剂，所述的眼用制剂包括滴眼剂或眼用凝胶剂。通过实验得出，本发明所述的环二肽具有良好的通乳效果，其作为通乳药物的活性成分具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于化学药物领域，具体涉及一种从穿山甲中得到的L-丝-L-酪环二肽所具有的通乳作用。
背景技术
“穿山甲，王不留，妇人吃了乳长流”这条民谚收载于李时珍的《本草纲目》，并作为通乳的重要经验应用。 穿山甲有较佳的促进乳汁分泌功效，常用于产后缺乳症。穿山甲能在机体缺乳的状况下对泌乳素进行调节，提高催乳激素水平及泌乳量，保护乳腺组织；同时穿山甲能显著提高小鼠及奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白的分泌；提示促进乳蛋白的分泌可能是是穿山甲通乳的重要机制。环二肽是具有多种药理活性的一类成分，其研究受到了越来越多的关注，二肽类成分能提高奶牛乳腺上皮细胞的活力及增殖能力，并能促进乳蛋白合成。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有通乳效果的环二肽。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种具有通乳效果的环二肽，所述环二肽为L-丝-L-酪环二肽。
一种具有通乳效果的药物，所述药物为L-丝-L-酪环二肽或其药学上可接受的衍生物及其盐类。
进一步地，所述的药物为药物制剂，其由L-丝-L-酪环二肽或其药学上可接受的衍生物及其盐类作为活性成分和药学上可接受的赋形剂组成。
本发明所述的药物制剂为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或眼用制剂，所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂，所述的半固体制剂包括软膏剂或栓剂，所述的液体制剂包括溶液剂、注射剂或喷雾剂，所述的眼用制剂包括滴眼剂或眼用凝胶剂。
进一步地，所述的环二肽通过人工合成获得。
有益效果：本发明提供了一种具有通乳效果的环二肽，所述环二肽为L-丝-L-酪环二肽，通过实验结果得出，本发明所述的环二肽能够提高乳腺上皮细胞的增殖率，促进与乳蛋白相关基因的表达，同时还能够提高抗乳凝作用。因此，其在人或动物方面所涉及产后乳少、无乳、乳汁不通等症方面起到重要的作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
1实验奶牛乳腺上皮细胞实验
1.1奶牛乳腺上皮细胞（BMEC）的制备
奶牛乳腺上皮细胞采用胶原酶消化法获得BMEC，-80℃保存。将第三代BMEC悬液中细胞的密度调整为1×104个/孔，接种于 96孔细胞培养板上，每孔接种 200 μL。每孔加入DMEM/F12完全培养液（10%胎牛血清），直至80%-90%细胞贴壁，然后置于无血清培养基中，饥饿培养24 h。
2试验结果
2.1 Ser和Tyr浓度筛选（MTT法）
第三代乳腺细胞贴壁处理24h后，用无FBS的DMEM/F12培养基饥饿过夜，然后分别添加0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 mmol/L的Ser，培养48h后筛选适宜的Ser浓度。Tyr的添加浓度为0、0.21、0.42、0.84、1.68mmol/L，培养48h后筛选适宜的Tyr浓度。每组6个重复，重复2次。
2.2丝酪环状二肽替代游离丝氨酸与酪氨酸对BMECs合成乳蛋白的影响
设计包括4个模式：L-丝-L-酪环二肽浓度分别代替0%、25%、50%和100%的游离Ser和Tyr，Ser和Tyr浓度为试验一筛选的浓度。
2.3测定指标与方法
2.3.1乳腺上皮细胞增殖率
BMEC的增殖率RGR采用MTT法测定。RGR=试验组OD490/对照组OD490×100%。
2.4.2乳蛋白及其相关基因mRNA的表达
主要包括细胞总RNA的提取、细胞总RNA的检测、cDNA的合成、引物设计与合成和实时荧光定量PCR。
表1的引物是由上海生物工程技术服务有限公司合成。冻干状的引物用RNase-Free水配制成100 μmol/L的贮存液，于-20℃贮存，使用时将贮存液稀释10倍，制成浓度为10 μmol/L的供试液。
乳蛋白基因包括：β-酪蛋白（CSN2）、αs1-酪蛋白（CSN1S1）、ĸ-酪蛋白（CSN3），乳蛋白合成相关基因包括：Ⅱ型小肽转运载体基因（PEPT2）、氨肽酶氮基因（APN）相对表达量，内参基因为 GAPDH、β-ACTIN和RN18S1，基因表达采用实时荧光定量 PCR 法进行检测。
表1引物序列
F：上游引物；R：下游引物。αs1-酪蛋白（CSN1S1）、β-酪蛋白（CSN2）、ĸ-酪蛋白（CSN3）、β-乳球蛋白（LGB）Ⅱ型小肽转运载体基因（PEPT2）、氨肽酶氮基因（APN）。
2.4.2数据处理
试验一数据采用SAS（SAS 9.0）软件的回归统计程序进行一次线性和二次曲线回归分析。试验二数据通过SAS（SAS 9.0）的方差分析（ANOVA）进行显著性检验和多重比较。
3结果
3.1不同浓度Ser或Tyr对细胞增殖率的影响
每种氨基酸的筛选都重复了2次试验，每次试验的每处理组6个重复。
表2不同Ser浓度对细胞增殖率的影响
表3不同Tyr浓度对细胞增殖率的影响
表2、表3的结果得出，Ser、Tyr浓度对RGR的影响呈显著的一元二次曲线增加，Tyr以0.42 mmol/L的细胞增殖率较大；Ser以0.25~1.0 mmol/L较好，但环二肽中二者的摩尔数相等，因此最终选取0.4mmol/L的Ser和0.4mmol/L的Tyr用于后续试验。
3.2 L-丝-L-酪氨酸环二肽替代游离Ser和Tyr对BMECs乳蛋白合成相关基因表达的影响
表4 L-丝-L-酪氨酸环二肽物替代游离Ser和Tyr对BMECs增殖率和乳蛋白合成相关基因表达的影响
同列数据肩标相同或无字母表示差异不显著( P＞0.05) ，不同字母表示差异显著( P＜0.05)。
表4的结果得出，L-丝-L-酪氨酸环二肽物替代25%的游离Ser和Tyr可显著增加αs1-酪蛋白（CSN1S1）、β-酪蛋白（CSN2）、ĸ-酪蛋白（CSN3）、Ⅱ型小肽转运载体基因（PEPT2）的基因表达量，对氨肽酶氮基因（APN）表达的促进效果趋于显著。
2抗乳凝实验
取新鲜羊乳，向羊乳中添加L-丝-L-酪氨酸环二肽使其浓度均为1 g/L；取2 mL乳样置于试管，置于35℃水浴锅中，保温10 min，然后添加0.2mL备用的羔羊凝乳酶溶液，迅速摇匀并记时，然后缓慢转动试管，直到试管壁上出现絮状的挂壁现象为止，记录从滴加凝乳酶到乳样出现絮状沉淀的时间。
表5 羊乳乳凝时间（n=6）
注： **与空白组比较，P＜0.01
从抗乳凝实验、实验奶牛乳腺上皮细胞实验可以看出L-丝-L-酪环二肽具有通乳的效果，本发明的环二肽可作为药物有效成分，进一步制备通乳药物。
Claims (5)
1.一种具有通乳效果的环二肽，其特征在于，所述环二肽为L-丝-L-酪环二肽。
2.一种具有通乳效果的药物，其特征在于，所述的药物为L-丝-L-酪环二肽或其药学上可接受的衍生物及其盐类。
3.一种具有通乳效果的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂由L-丝-L-酪环二肽或其药学上可接受的衍生物及其盐类作为活性成分和药学上可接受的赋形剂组成。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或眼用制剂，所述的固体制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂，所述的半固体制剂包括软膏剂或栓剂，所述的液体制剂包括溶液剂、注射剂或喷雾剂，所述的眼用制剂包括滴眼剂或眼用凝胶剂。
5.根据权利要求1所述的一种具有通乳效果的环二肽，其特征在于，所述环二肽通过人工合成获得。
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