CN105285420A - 牛膝多糖作为饲料添加剂的用途及相应饲料 - Google Patents

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王红权
赵玉蓉
贺建华
禹利君
邬静
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Abstract

一种牛膝多糖作为饲料添加剂的用途及相应饲料，牛膝多糖作为饲料添加剂添加在仔猪日常饲料中，能显著增强肠上皮细胞紧密连接主要相关基因的表达，抑制仔猪肠道病原菌的侵染，降低仔猪黄白痢发病率，提高仔猪的生长速度；具有绿色、天然、无耐药、无残留，功能多、兼顾生长和抗疾病等特性；能较大地降低仔猪黄白痢发病率、降低仔猪养殖成本，适合产业化生产。

Description

牛膝多糖作为饲料添加剂的用途及相应饲料
技术领域
本发明属于饲料添加剂领域，涉及一种中草药饲料添加剂，具体涉及一种牛膝多糖以饲料添加剂的形式添加在仔猪日粮(仔猪日常饲料)中以抑制病原菌侵染制、降低仔猪黄白痢发病率。
背景技术
仔猪黄白痢又称新生猪腹泻，是仔猪黄痢和仔猪白痢的合称，都是由致病性大肠杆菌等引起的一种急性传染病。目前已分离的仔猪黄痢、白痢的血清型众多，各血清型疫苗之间有效的交叉保护性差，给本病防治造成了很大的难度。国内的仔猪黄白痢的发病率达20％-60％，出现混合感染和继发感染时，病死率可达60％以上，给养猪业造成了严重的危害。随着畜牧业集约化程度的提高和饲料工业的发展，全球范围内，由于抗生素的乱用，耐药菌株增多，导致此病也在日益恶化，多呈季节流行性和地方流行性。针对仔猪黄白痢、生长受阻等应激，国内外做了大量研究，主要是抗生素、高锌、益生素、寡糖、酶制剂、酸化剂等方面的研究。近年来也有许多研究表明，植物多搪具有促进机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗炎、降低血脂等一系列生物学活性，在一量剂量范围内具有改善动物生产性能等作用。
我国地域辽阔，中草药资源十分丰富，开发利用中草药饲料添加剂具有得天独厚的条件。牛膝多糖是从苋科植物牛膝中提取、分离、纯化得到的一种生物活性多糖，其相对分子质量为1300-1400，水溶性好，具有安全性高、作用稳定、副作用小、适用面广、对机体损害小和可注射又可服用等优点，已作为一种中草药应用于肿瘤等疾病的防制。其主要具有免疫调节作用、抑菌、抗肿瘤、抗衰老、抗凝血、降糖、治疗哮喘等生物学功能，尤以提高机体免疫力和抗病、抑菌能力作用明显，并可望在调控新陈代谢、提高动物健康水平和畜产品品质方面发挥重要作用，具有宽广的药物开发及应用前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术中仔猪抗应激能力差，易感染病原菌，黄白痢发病率和死亡率高的问题，提供一种中草药牛膝多糖作为饲料添加剂的用途及相应饲料。该中草药牛膝多糖作为饲料添加剂添加到仔猪日粮中，能显著促进仔猪生长，抑制病原菌对仔猪肠道组织的侵染，降低仔猪黄白痢发病率，增强仔猪肠上皮细胞紧密连接主要相关基因的表达。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：牛膝多糖在制备仔猪用抑制肠道病原菌侵染剂和仔猪用降低黄白痢发病率药剂中的应用。
本发明采用的另一种技术方案是：牛膝多糖在制备抑制肠道病原菌侵染和降低黄白痢发病率的饲料中的应用。
本发明同时提供一种仔猪用饲料，该饲料中添加有牛膝多糖，该牛膝多糖的添加量为每1千克饲料添加0.5-1.5克。
上述提及的牛膝多糖为市购产品，可为市面上流通或贮藏的按不同工艺技术生产的各种形态的牛膝多糖。使用时，可将牛膝多糖应用于被法规许可添加于仔猪饲料或饲料添加剂中的载体或者基质。
当牛膝多糖添加到仔猪日常饲料中时，可采用的添加方式包括将其以固体混合的方式直接与仔猪日常饲料混合，搅匀，或是加水溶解后以喷雾形式均匀喷洒在仔猪日常饲料中或是其他添加方法。如果适当的话，牛膝多糖可以和通常的仔猪饲料添加剂一起添加，如维生素、矿物质、微量元素等。
本发明通过将牛膝多糖作为饲料添加剂添加在仔猪日常饲料中，具有显著增强仔猪肠上皮细胞紧密连接主要相关基因表达，抑制病原菌对仔猪肠道组织的侵染，降低仔猪黄白痢发病率，促进仔猪生长的优点。
具体实施方式
以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
实施例1牛膝多糖对仔猪生长性能的影响
试验饲料及分组：选取母猪胎次相同、产活仔数相同的8窝仔猪(调整为每窝12头，与母猪同笼)，随机分为两个处理组，分别为对照组和牛膝多糖添加组(本发明饲料组)，每个处理4个重复，每个重复为一窝(或笼)，分别饲喂基础日粮和本发明饲料日粮。仔猪的基础日粮配制参照NRC(1998)猪的营养需要(≤5kg)。本发明饲料日粮为每1千克基础日粮中用1.0克牛膝多糖替代基础日粮中相应质量的玉米粉。配制试验饲料时，每种饲料原料采用锤片式粉碎机粉碎(筛片孔径为1mm)，按比例混合并搅拌均匀，制成直径2mm、长度3mm的硬颗粒，在室温下风干后4℃冰箱贮存备用。
试验方法：试验在同一栋封闭猪舍内进行。本发明饲料组的仔猪从7日龄开始喂饲本发明饲料日粮至35日龄，为期28天，自由采食、饮水，免疫消毒程序按猪场常规方法进行。以重复笼为单位饲喂，每天观察记录试验猪的采食、排粪等情况。
试验结果：从表1可知，本发明饲料组的仔猪喂饲添加有牛膝多糖的饲料后，平均日增重显著提高，黄白痢发病率显著降低。表明：牛膝多糖能显著促进仔猪生长，显著降低仔猪黄白痢发病率。
表1牛膝多糖对仔猪生长性能的影响
基础饲料组 本发明饲料组
平均初始重(kg) 3.31±0.22 3.28±0.27
平均日增重(kg) 0.273±0.003b 0.325±0.028a
黄白痢发病率(％) 4.251±0.711a 1.261±0.457b
注：同行数据中标有不同字母者为差异显著(P＜0.05)，下同。
实施例2牛膝多糖对沙门氏菌侵染IPEC-1(仔猪小肠上皮细胞)的影响
沙门氏菌准备：将LB固体培养基上分离培养获得的单个沙门氏菌菌落，接种到5ml液体LB培养基中，37℃，225r/min震荡培养过夜后，取10μl含有沙门氏菌的液体LB培养基接种到5ml液体LB培养基中，37℃过夜，使得沙门氏杆菌达到指数生长期。
沙门氏杆菌侵染试验，将IPEC-1细胞接种于24孔细胞培养板，每孔含5×104个细胞，每组设3个平行孔，待细胞贴壁后，分别每天更换原来的培养基(对照组)和含牛膝多糖(100μg/ml)的培养基，培养2天。将之前准备的沙门氏菌1000r/min，离心10min，弃去上清，用5ml的DMEM/F12培养液(不含青/链霉素)重新悬浮细菌。每孔接种100μl含沙门氏菌的DMEM/F12培养基，并将培养板800r/min，离心10min，从而将细菌沉淀至培养板底充分与IPEC-1细胞接触。在37℃，5％CO2细胞培养箱中孵育60min。60min后移去培养基，用PBS洗涤2遍，每孔加入1ml含有100μg/mlGentamicin，在37℃，5％CO2细胞培养箱中孵育120min以除去未侵染进细胞内的沙门氏菌。用PBS洗涤3遍后，每孔加入200ul1％TritonX-100，在37℃的孵箱中裂解5min,再于每孔加入800μlPBS充分混匀。再将获得的裂解液稀释1×103后，取100μl接种于固体LB培养基，培养过夜后计数培养板上的菌落数。由表2可以得知，牛膝多糖能够显著减少沙门氏菌对IPEC-1细胞的侵染。
表2牛膝多糖对沙门氏菌侵染IPEC-1细胞的影响
对照组 牛膝多糖组
培养板上的菌落数(个) 48.75±3.59a 14.25±6.69b
实施例3牛膝多糖对IPEC-1细胞紧密连接主要相关基因表达的影响
将IPEC-1细胞接种于6孔细胞培养板，每孔含1×106个细胞，每处理设3个平行孔，待细胞贴壁后，吸弃原培养基，分别每天更换原来的培养基(对照组)和含牛膝多糖(100μg/ml)的培养基，待细胞生长覆盖培养板底部大于90％后弃上清，用冰冷的PBS洗细胞2次，每孔加1mlTrizol裂解细胞，然后按常规方法提取RNA、cDNA反转录、实时荧光PCR,采用2-(△△Ct)计算各基因mRNA的相对表达量。由表3可以得知，牛膝多糖能显著上调IPEC-1细胞紧密连接主要相关基因表达，说明牛膝多糖有利于改善肠道上皮组织的屏障功能。
表3牛膝多糖对IPEC-1细胞紧密连接主要相关基因表达的影响
对照组 牛膝多糖组
闭锁小带蛋白(ZO-1) 1.01±0.14b 1.89±0.11a
闭锁蛋白(Occludin) 1.09±0.08b 2.35±0.13a
密封蛋白(Claudin-1) 1.08±0.10b 2.07±0.09a

Claims (6)

1.牛膝多糖在制备仔猪用抑制肠道病原菌侵染剂中的应用。
2.牛膝多糖在制备仔猪用降低黄白痢发病率药剂中的应用。
3.牛膝多糖在制备抑制肠道病原菌侵染和降低黄白痢发病率的饲料中的应用。
4.一种仔猪用饲料，其特征在于，该饲料中添加有牛膝多糖，该牛膝多糖的添加量为每1千克该饲料添加0.5-1.5克。
5.如权利要求4所述的仔猪用饲料，其特征在于，所述仔猪用饲料是将牛膝多糖是直接添加于仔猪日常饲料中，混合，搅匀得到。
6.如权利要求4所述的仔猪用饲料，其特征在于：所述仔猪用饲料是将牛膝多糖溶于水后，再把溶有牛膝多糖的水均匀喷洒在仔猪日常饲料中，得到。
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CN111838441A (zh) * 2020-08-25 2020-10-30 青岛普兴生物科技有限公司 一种用于减少仔猪腹泻的生物制剂

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