CN105272542A - 一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，属于菌菇培养基技术领域。步骤：将黄豆粉、葡萄糖、纤维素、维生素、柠檬酸钠、乙酸钠、酵母膏、反丁烯二酸、蛋白胨、麦精、干酪素、硫酸镁、磷酸氢二钾、碳酸钙、蒸馏水，混合均匀；调节混合液的pH；再进行灭菌，即可。本发明提供的真姬菇培养基，能够有效地促进真姬菇的生长，通过加入干酪素和反丁烯二酸的协同作用，能够同时促进真姬菇的生长以及菌体内多糖的含量。

Description

一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法

技术领域

本发明公开一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，属于菌菇培养基技术领域。

背景技术

真姬菇又名玉蕈、斑蕈，因具有独特的蟹香味，又称蟹味菇。属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、离褶菌族、玉蕈属。其味比平菇鲜，肉比滑菇厚，质比香菇韧，口感甚佳，还具有独特的蟹香味。真姬菇的蛋白质中氨基酸种类齐全，包括8种人体必需氨基酸，还含有数种多糖体，其子实体的热水和有机溶剂提取物有清除人体自由基的作用，这意味着常食真姬菇有抗癌、防癌、提高免疫力、预防衰老、延长寿命的功效。该菇营养丰富，据分析每100克鲜菇中含粗蛋白3.22克、粗脂肪0.22克、粗纤维1.68克、碳水化合物4.56克、灰分1.32克，磷、铁、锌、钙、钾、钠的含量非常丰富，维生素B1、B2、B6、C的含量也较一般菇类高，是一种非常珍贵的食用菌。

真姬菇的培养特征是菌丝体白色，棉毛状，气生菌丝不旺盛，不分泌黄色液滴，不形成菌皮。在培养基中可产生节孢子和厚垣孢子。真姬菇子实体丛生，每丛15～50株不等，有时散生，散生时数量少而菌盖大。菌盖幼时半球形，边缘内卷后逐渐平展，直径4～15厘米，近白色至灰褐色，中央带有深色大理石状斑纹。菌褶近白色，与菌柄成圆头状直生，密集至稍稀。菌柄长3～10厘米，粗0.3～0.6厘米，偏生或中生。孢子阔卵形至近球形，显微镜下透明，成堆时白色。

而目前国内的栽培都采用袋装或瓶装的固体基质栽培(如木屑、玉米芯、米糠、麸皮等)，原料混合搅拌后用手工或半自动装瓶机把混合原料装入塑料袋或瓶中，进入灭菌锅灭菌，灭菌采用常压灭菌或高压灭菌，常压灭菌100℃保持6～8小时，高压灭菌升温至121℃(1.5大气压)，保持2小时，灭菌完成后自然冷却至常温，在接种室或接种箱内接入真姬菇菌种，放入培养房或大棚中在常温或空调房中进行培养，菌丝发满后继续培养至熟，去掉棉塞、颈圈或开盖，在大棚或空调房内栽培。固体栽培真姬菇技术，由于原料来源的不同，各批次质量差异较大，营养成分不一，需灭菌时间长，同时存在栽培周期长，品质不稳定，易染菌等不足。

CN102090264A公开了一种合成真姬菇液体培养基，对液体栽培真姬菇的培养基配方、装瓶、灭菌、接种、培养和栽培的全过程进行控制，满足真姬菇生长、发育到形成成熟的子实体的环境和营养条件，培养25-30天，栽培15-20天即可形成成熟的子实体。CN101293791A公开了一种真姬菇工厂化生产液体菌种培养基，每升培养基中各组份的含量为：黄豆粕粉2～5g、玉米粉2～5g、蔗糖20～30g、硫酸镁0.3～1g、磷酸二氢钾0.5～2g、消泡剂0.1～0.5ml。其制备方法，称取蔗糖、硫酸镁、磷酸二氢钾，混匀后加入沸水搅拌至完全溶解；称取黄豆粕粉和玉米粉，加入冷水搅拌溶解后去除泡沫；将制得的溶液混匀制成混合液，定容至所需体积；用盐酸调整混合液pH值后加入消泡剂；分装混合液后高压蒸汽灭菌；该专利解决了目前多以酵母膏、蛋白胨等作为氮源、以单糖作为碳源的高成本；以及以马铃薯、麸皮等煮出液作为培养基，操作工艺复杂、营养不够丰富，不适应工厂化生产需求的问题。

但是，采用上述液态培养基对真姬菇进行培育时，存在着真姬菇的多糖等营养物质成分较低的问题。

发明内容

本发明提供了一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，通过该方法制备得到的培养基可以提高液体培养真姬菇的产量，同时可以提高真姬菇中的多糖等营养物质的含量。

技术方案：

一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，包括如下步骤：

第1步、按重量份计，将黄豆粉8～16份、葡萄糖10～20份、纤维素6～12份、维生素1～3份、柠檬酸钠0.5～1份、乙酸钠0.3～0.6份、酵母膏0.2～0.4份、反丁烯二酸0.2～0.4份、蛋白胨0.3～0.6份、麦精0.2～0.3份、干酪素0.2～0.4份、硫酸镁0.2～0.3份、磷酸氢二钾0.1～0.3份、碳酸钙0.1～0.3份、蒸馏水100～140份，混合均匀；

第2步、调节第1步所得的混合液的pH；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，即可。

所述的纤维素选自羟乙基甲基纤维素（HEMC）或者甲基纤维素（MC）中的一种或者两种的混合物。

所述的维生素选自维生素B1、维生素B6或者维生素B12中的一种或者几种的混合物。

所述的第2步中，采用醋酸对混合液的pH进行调节。

所述的pH的范围是5.0～5.5。

所述的第3步中，灭菌的方法是将混合液在压力为0.15～0.2MPa的条件下110～120℃灭菌20～30分钟。

有益效果

本发明提供的真姬菇培养基，能够有效地促进真姬菇的生长，通过加入干酪素和反丁烯二酸的协同作用，能够同时促进真姬菇的生长以及菌体内多糖的含量。

具体实施方式

实施例1

第1步、将黄豆粉8Kg、葡萄糖10Kg、羟乙基甲基纤维素6Kg、维生素B11Kg、柠檬酸钠0.5Kg、乙酸钠0.3Kg、酵母膏0.2Kg、反丁烯二酸0.2Kg、蛋白胨0.3Kg、麦精0.2Kg、干酪素0.2Kg、硫酸镁0.2Kg、磷酸氢二钾0.1Kg、碳酸钙0.1Kg、蒸馏水100Kg，混合均匀；

第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的pH至5.0～5.5；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为0.15MPa的条件下110℃灭菌20分钟，即可。

实施例2

第1步、将黄豆粉16Kg、葡萄糖20Kg、羟乙基甲基纤维素12Kg、维生素B13Kg、柠檬酸钠1Kg、乙酸钠0.6Kg、酵母膏0.4Kg、反丁烯二酸0.4Kg、蛋白胨0.6Kg、麦精0.3Kg、干酪素0.4Kg、硫酸镁0.3Kg、磷酸氢二钾0.3Kg、碳酸钙0.3Kg、蒸馏水140Kg，混合均匀；

第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的pH至5.0～5.5；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为0.2MPa的条件下120℃灭菌30分钟，即可。

实施例3

第1步、将黄豆粉12Kg、葡萄糖14Kg、羟乙基甲基纤维素7Kg、维生素B12Kg、柠檬酸钠0.7Kg、乙酸钠0.5Kg、酵母膏0.3Kg、反丁烯二酸0.3Kg、蛋白胨0.4Kg、麦精0.2Kg、干酪素0.3Kg、硫酸镁0.3Kg、磷酸氢二钾0.2Kg、碳酸钙0.2Kg、蒸馏水120Kg，混合均匀；

第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的pH至5.0～5.5；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为0.17MPa的条件下115℃灭菌25分钟，即可。

对照例1

与实施例3的区别在于：未加入干酪素。

第1步、将黄豆粉12Kg、葡萄糖14Kg、羟乙基甲基纤维素7Kg、维生素B12Kg、柠檬酸钠0.7Kg、乙酸钠0.5Kg、酵母膏0.3Kg、反丁烯二酸0.3Kg、蛋白胨0.4Kg、麦精0.2Kg、硫酸镁0.3Kg、磷酸氢二钾0.2Kg、碳酸钙0.2Kg、蒸馏水120Kg，混合均匀；

第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的pH至5.0～5.5；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为0.17MPa的条件下115℃灭菌25分钟，即可。

对照例2

与实施例3的区别在于：未加入反丁烯二酸。

第1步、将黄豆粉12Kg、葡萄糖14Kg、羟乙基甲基纤维素7Kg、维生素B12Kg、柠檬酸钠0.7Kg、乙酸钠0.5Kg、酵母膏0.3Kg、反丁烯二酸0.3Kg、蛋白胨0.4Kg、麦精0.2Kg、干酪素0.3Kg、硫酸镁0.3Kg、磷酸氢二钾0.2Kg、碳酸钙0.2Kg、蒸馏水120Kg，混合均匀；

第2步、采用醋酸调节第1步所得的混合液的pH至5.0～5.5；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，灭菌的方法是将混合液在压力为0.17MPa的条件下115℃灭菌25分钟，即可。

采用如上实施例和对照例制备得到的培养液进行真姬菇的液体培育，方法如下：

将装有无水珍珠岩的塑料瓶加盖后，放入无菌锅内进行灭菌处理，取出后将塑料瓶置入冷却室冷却至摄氏20～22℃；将100ml培养基加入塑料瓶中，随即进行接种，每瓶接种2个1mm²菌块或接种液体菌种5ml，然后移至培养室进行培养，培养时间30天；再将塑料瓶置于栽培室进行培养，经过20天开始采收，前1～5天光照强度为100Lux，后6～20天光照强度为400Lux。

通过如下方法对真姬菇进行多糖的提取和含量的检测：

真姬菇中的多糖的提取方法如下：

准确称取适量真姬菇子实体样品，加入15倍量的蒸馏水，于恒温水浴中浸提，浸提温度是90℃，浸提时间2小时，然后离心分离，重复2次，合并上清液，将上清液浓缩后，缓慢地加入浓缩液3倍体积的无水乙醇，静置24h，离心分离后，将所得沉淀加80%乙醇洗涤后再加水定容，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量后计算多糖得率。

多糖得率的计算公式为：多糖得率=多糖提取量/子实体干重×100%。

苯酚-硫酸法测定多糖方法：

材料与方法

原理：

样品经微沸溶解乙醇醇析分离后，用苯酚-硫酸试剂可与游离的戊寡糖、多糖中的已糖、糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反应，产生橙黄色，在490mm处测定光密度，其光密度与糖含量呈线性关系，并测定其含量。

仪器与试剂：

仪器：722型分光光密度计，离心机，电子分析天平，超声搅拌器。

试剂：浓硫酸A.R级，80%苯酚：称取80.0g苯酚(A.R级)溶于水并加水至100ml；6%苯酚：取6ml苯酚(A.R级)溶于水，加水至100ml，临用配制；葡萄糖标准溶液：称取经105℃烘干2h至恒重的A.R级葡萄糖0.1000g，加水溶解后，加入5ml盐酸，并加水稀释至100ml，此溶液1.0ml相当于1.0mg，再吸取上述溶液10ml，加水稀释100ml配制成1.0ml相当于100μg葡萄糖，

实验方法

样品来源以上实施例和对照例培育得到的真姬菇。

样品的提取准确称取经粉碎的固体样品3-15g定容到100ml，超声波溶解10min，煮沸30min，离心(3000r/min)后，取2.0ml上清液，加8ml无水乙醇醇析24h，残留物重复提取一次。

标准曲线制备的测定准确吸取100μg/ml葡萄糖标准溶液0，0.25，0.50，1.00，1.50，2.00ml(相当于0，25，50，100，150，200μg葡萄糖)，分别置于10ml具塞刻度试管，加入苯酚液1.0ml，混匀且快速加入5.0ml浓硫酸，在沸水浴中放置15min，采用流水冷却后于490nm处比色测吸光度。

多糖含量的测定取样品提取液1.0ml于具塞刻度试管中，加水至10.0ml测定光密度，计算其含量。

计算公式如下：

X=(C×V)/(M×1000)×100%

X—样品多糖含量g/100g

M—样品质量μg

C—标准葡萄糖浓度μg/ml

V—样品体积ml

以上实施例和对照例中制备得到的培养液在进行真姬菇培养后，培养效率和多糖含量如下表所示：

从表中可以看出，实施例3相对于对照例1来说，通过在培养液中加入干酪素可以有效地提高真姬菇的多糖的含量，实施例3相对于对照例2可以看出，通过加入反丁烯二酸可以有效地提高真姬菇的产量，提高生物学效率。

Claims (6)

1.一种用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

第1步、按重量份计，将黄豆粉8～16份、葡萄糖10～20份、纤维素6～12份、维生素1～3份、柠檬酸钠0.5～1份、乙酸钠0.3～0.6份、酵母膏0.2～0.4份、反丁烯二酸0.2～0.4份、蛋白胨0.3～0.6份、麦精0.2～0.3份、干酪素0.2～0.4份、硫酸镁0.2～0.3份、磷酸氢二钾0.1～0.3份、碳酸钙0.1～0.3份、蒸馏水100～140份，混合均匀；

第2步、调节第1步所得的混合液的pH；

第3步、在第2步制备得到的液体再进行灭菌，即可。

2.根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所述的纤维素选自羟乙基甲基纤维素（HEMC）或者甲基纤维素（MC）中的一种或者两种的混合物。

3.根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所述的维生素选自维生素B1、维生素B6或者维生素B12中的一种或者几种的混合物。

4.根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所述的第2步中，采用醋酸对混合液的pH进行调节。

5.根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所述的pH的范围是5.0～5.5。

6.根据权利要求1所述的用于液体培养真姬菇的培养基的制备方法，其特征在于：所述的第3步中，灭菌的方法是将混合液在压力为0.15～0.2MPa的条件下110～120℃灭菌20～30分钟。