CN105238705B - 一种酿酒酵母菌菌株 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种酿酒酵母菌菌株，所述菌株为酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株VvSc001，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11238。所述酿酒酵母菌菌株VvSc001用于葡萄果实的发酵酿酒。本发明的酿酒酵母菌菌株VvSc001具有葡萄果实发酵能力，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。
Description
技术领域
本发明涉及一种酿酒酵母菌菌株，以及所述酿酒酵母菌菌株的用途。
背景技术
近年来，随着设施栽培技术水平的提高，我国南方地区逐步成为葡萄种植的优势区域，同时南方葡萄产业的发展，南方许多地区葡萄酒酿造产业也逐渐兴盛。葡萄酒的产量、质量和发酵生产管理受到葡萄中酵母菌群极大影响，同时酵母菌群对于葡萄酒特色和风格的形成也有重要的作用。我国气候多样化的特点造就了非常丰富的葡萄酒酵母资源。在葡萄种植园区，天然酵母与葡萄相伴而生，逐渐形成其特有的酵母菌群，对特色葡萄酒的酿造起到不可替代的作用。然而，目前对于南方地区葡萄天然酵母菌群的研究还很少而且不系统，这在一定程度上限制了南方特色葡萄酒产业的发展。因此，对南方葡萄产区野生酵母菌的分离筛选研究，对南方葡萄酒产业的发展具有重要的实践意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题，在于提供一种酿酒酵母菌菌株。
本发明是这样实现上述技术问题的：一种酿酒酵母菌菌株，所述菌株为酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株VvSc001，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.11238。
进一步地，所述酿酒酵母菌菌株VvSc001用于葡萄果实的发酵酿酒。
本发明的优点在于：提供了一种新的来源南方葡萄的酿酒酵母菌菌株VvSc001，且该酿酒酵母菌具有葡萄果实发酵能力，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。
具体实施方式
菌株保藏
本发明中的菌株为酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株VvSc001，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.11238。
本发明的酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)菌株VvSc001是从福建省三明市明溪县葡萄园采集的葡萄果实分离并筛选得到的菌株。
1.酿酒酵母菌菌株VvSc001的分离：
(1)葡萄果实自然发酵，将采摘的新鲜葡萄进行自然发酵，于发酵时期(前、中、后三个时期)进行取样，共取15个发酵样品。发酵前期为开始发酵的第7d取样，发酵中期为开始发酵的第15天取样，发酵后期为开始发酵的第25天取样。在恒温箱中28℃下发酵。
(2)在无菌操作下，将取步骤(1)各发酵样品(发酵汁液)5mL分别加入到装有45mL无菌水的三角瓶中,震荡混匀后，再将溶解液分别吸取1mL至装有9mL无菌水的试管，配成10-1浓度，依次稀释，配置成浓度梯度为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的溶液，每个梯度重复3次；
(3)取步骤(2)获得的稀释液100μL至YEPD培养基的平板上，无菌涂布棒涂匀，涂好的平板用塑料袋装好后倒置于28℃恒温箱中培养48h；
(4)将步骤(3)培养获得的菌株重新划线接种于YEPD培养基上，并将YEPD培养基置于28℃恒温箱中培养48h，获得酿酒酵母菌菌株VvSc001。
2.酿酒酵母菌菌株VvSc001的鉴定：
初步鉴定：
将上述中所获得的酿酒酵母菌菌株VvSc001重新划线接种于WL营养琼脂培养基上，并将WL营养琼脂培养基置于28℃恒温箱中培养5d，置于Leica M165FC高级电动荧光体视显微镜下进行镜检观察，观察结果显示：菌落颜色为奶油色带绿色，菌落形态特征为球形突起，表面光滑、不透明、奶油状，为酿酒酵母菌在WL培养基中的典型特征，因此，可初步认定菌株VvSc001为酿酒酵母菌。
进一步鉴定：
A.活化：用接种环将所获得菌株VvSc001划线于YEPD培养基上，并将YEPD培养基置于恒温培养箱中培养48-72h，培养温度为28℃；
B.制备菌液：将步骤A所获得的菌株VvSc001的单菌落接种于20mL的YEPD液体培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，恒温振荡摇床的温度设定28℃、转速设定170rpm/min；
C.基因组DNA的提取：取步骤B所获得的菌液1mL于已灭菌的1.5mL离心管中，并按照TIANamp Yeast DNA Kit提取试剂盒说明书操作以提取菌株VvSc001的基因组DNA；
D.菌株VvSc001的PCR鉴定：采用26S rDNA D1/D2基因序列的特异引物NL1(5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′)和NL4(5′-GGTCCGTGTTTCAAGACGGG-3′)，进行26S rDNAD1/D2基因序列的PCR扩增，其中，PCR反应体系(25μL体系)：
Taq Plus PCR MasterMix 12.5μL，ddw 9.5μL，引物NL1 1μL，引物NL4 1μL，模板DNA 1μL。
PCR扩增程序：95℃预变性5min，94℃变性1min，52℃退火1min，72℃延伸1min20s，35个循环，72℃延伸10min，10℃保存。
PCR反应结束后，采用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应的产物，上样量为8μL，电压为110V，电泳时间50min，并用UVP凝胶成像仪进行检测，确定有条带后送铂尚生物技术有限公司测序检测：测序结果与NCBI数据库比对结果表明，菌株VvSc001同标准菌株Saccharomyces cerevisiae AY048154(JX103177)同源性为100％，即确认该菌株VvSc001为酿酒酵母菌。
3.酿酒酵母菌菌株VvSc001的葡萄果实发酵产酒能力检测：
将上述分离筛选鉴定获得的酿酒酵母菌菌株VvSc001培养离心后获得菌体，并以安琪RV002酵母、VF、德国公司生产的干酵母OFG、法国公司生产的干酵母OFC酵母菌为对照，通过考察其发酵后葡萄酒的酒精度、还原糖、可溶性糖和酸度等指标，初步了解其葡萄酒发酵的能力与其发酵后葡萄酒的特色，结果见表1。
表1酿酒酵母菌菌株VvSc001发酵后葡萄酒的理化指标
从表1可以看出，在相同的发酵条件下，本发明筛选出来的酿酒酵母菌菌株VvSc001与市售的RV002、OFC酵母菌酒精的发酵能力相当，并极显著于市售的VF和OFG酵母；酿酒酵母菌菌株VvSc001发酵后的葡萄酒总糖的含量最低，与市售的RV002相当，并与VF、OFG、OFC有极显著的差异；酿酒酵母菌菌株VvSc001发酵后的葡萄酒还原糖含量最高，与VF、OFC有显著差异，而与RV002、OFG有极显著差异；在葡萄酒的总酸方面，酿酒酵母菌菌株VvSc001总酸较高，与OFC相当，与RV002、VF、OFG差异极显著。以上理化指标初步说明，本发明的酿酒酵母菌菌株VvSc001为较优良的南方葡萄酿酒酵母。
综上所述，酿酒酵母菌菌株VvSc001具有良好的葡萄果实酒精发酵能力，并具有较优良的特性，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。
Claims (2)
1.一种酿酒酵母菌菌株，其特征在于：所述菌株为酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)菌株VvSc001，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11238。
2.如权利要求1所述的酿酒酵母菌菌株，其特征在于：所述酿酒酵母菌菌株VvSc001用于葡萄果实的发酵酿酒。
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