CN102634464A - 耐高温酿酒酵母及其分离培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐高温酿酒酵母及其分离培养方法，通过本发明的分离培养方法获得的酿酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是从浓香型发酵酒醅中分离筛选得到的，已于2011年11月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，菌种编号为：CGMCCNo.5511。本发明的分离培养方法工艺简单，获得的酿酒酵母240耐高温，且发酵性能、产酯能力较好，适应能力强，易培养，提高芝麻香酿酒质量和产量。
Description
技术领域
本发明涉及酿酒酵母及分离培养方法，具体涉及一种耐高温酿酒酵母及其分离培养方法。
背景技术
芝麻香型白酒以粮食为原料，大曲、麸曲等为糖化发酵剂，利用自然界微生物开放式发酵，霉菌、酵母、细菌协同作用，融入酱香堆积工艺优势，形成具有独特风格的白酒。一般芝麻香型白酒麸曲采用细菌、酵母、霉菌等多菌种纯培养后混合应用于酿酒生产，微生物菌种的性能对芝麻香型酒的品质具有重要的影响。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种耐高温酿酒酵母及其分离培养方法，通知该分离培养方法筛选出一种耐高温且发酵性能、产酯能力较好的酵母，提高芝麻香型白酒的质量与产量。
本发明的技术解决方案是：该酿酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是从浓香型发酵酒醅中分离筛选得到的，已于2011年11月29日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，菌种编号为：CGMCC No. 5511。
所述酿酒酵母240的分离培养方法是：取浓香型酿酒窖池中已发酵15-20天的酒醅适量，然后称取酒醅10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度；取10－3、10－4、10－5稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，倒入融化保温的培养基25 mL，摇匀待凝固后放入培养箱于28℃-32℃倒置培养2-3天；其中，培养基由12°BX麦芽汁中加入其质量1%的琼脂粉组成；挑取培养皿内形态规则的菌落，在固体培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，筛选出酿酒酵母，保藏于麦芽汁琼脂斜面备用；经菌种鉴定后，对酿酒酵母进行耐温试验，取一株活力较强酿酒酵母，命名为酿酒酵母240。
本发明获得的菌种与实验室保藏的酵母菌株进行性能对比试验，通过发酵性能对比试验，结果表明该菌株耐温性能较好，在45℃温度下依然能够保持良好的发酵性能，而且具有较好的发酵性能和酯化能力，用该菌种生产的麸曲用于芝麻香型白酒生产对提高自产酒的优质品率及出酒率具有重要的意义。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术解决方案，这些实施例不能理解为是对技术解决方案的限制。
实施例1：依以下步骤分离培养酿酒酵母240
取浓香型酿酒窖池中已发酵15天的酒醅适量，然后称取酒醅10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度；取10－3、10－4、10－5稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，倒入融化保温的培养基25 mL，摇匀待凝固后放入培养箱于28℃倒置培养3天，每个稀释度同时做3个平行；其中，培养基由12°BX麦芽汁中加入其质量1%的琼脂粉组成；挑取培养皿内形态规则的菌落，在固体培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，筛选出酿酒酵母，保藏于麦芽汁琼脂斜面备用；经菌种鉴定后共有3株酿酒酵母，进行耐温试验，获得一株活力较强酿酒酵母，命名为酿酒酵母240。
实施例2：依以下步骤分离培养酿酒酵母240
取浓香型酿酒窖池中已发酵18天的酒醅适量，然后称取酒醅10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度；取10－3、10－4、10－5稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，倒入融化保温的培养基25 mL，摇匀待凝固后放入培养箱于30℃倒置培养2.5天，每个稀释度同时做3个平行；其中，培养基由12°BX麦芽汁中加入其质量1%的琼脂粉组成；挑取培养皿内形态规则的菌落，在固体培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，筛选出酿酒酵母，保藏于麦芽汁琼脂斜面备用；经菌种鉴定后共有3株酿酒酵母，进行耐温试验，获得一株活力较强酿酒酵母，命名为酿酒酵母240。
实施例3：依以下步骤分离培养酿酒酵母240
取浓香型酿酒窖池中已发酵20天的酒醅适量，然后称取酒醅10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度；取10－3、10－4、10－5稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，倒入融化保温的培养基25 mL，摇匀待凝固后放入培养箱于32℃倒置培养2天，每个稀释度同时做3个平行；其中，培养基由12°BX麦芽汁中加入其质量1%的琼脂粉组成；挑取培养皿内形态规则的菌落，在固体培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，筛选出酿酒酵母，保藏于麦芽汁琼脂斜面备用；经菌种鉴定后共有3株酿酒酵母，进行耐温试验后获得一株活力较强酿酒酵母，命名为酿酒酵母240。
实施例4：菌种优化对比试验
将上述实施例1-3获得的酿酒酵母240与实验室保藏的自编号的五株酿酒酵母207、102、JP、NN、AW001进行对比，将酵母菌接入到12°BX 的麦芽汁培养基中，于不同温度25℃、30℃、35℃、40℃、45℃恒温培养，对比酿酒酵母的发酵性能，测定酵母的发酵力、酒精度、总酸和总酯，确定酵母的发酵性能指标。
⑴不同温度下发酵过程CO2失重量对比
表1 25℃发酵
表2 30℃发酵
表3 35℃发酵
表4 40℃发酵
表5 45℃发酵
由表1-5，通过不同温度发酵过程CO2失重量对比数据分析可以得知，酿酒酵母240的耐温性能较好，在45℃温度下依然能够保持良好的发酵性能。
⑵ 不同温度下发酵指标对比
表6 25℃发酵指标
表7 30℃发酵指标
表8 35℃发酵指标
表9 40℃发酵指标
表10 45℃发酵指标
由表6-10，通过不同温度发酵指标对比分析得知，酿酒酵母240不仅具有良好的发酵性能，而且酯化能力也相对较好。
Claims (2)
1.耐高温酿酒酵母，其特征在于：该酿酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是从浓香型发酵酒醅中分离筛选得到的，已于2011年11月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，菌种编号为：CGMCC No. 5511。
2. 耐高温酿酒酵母的分离培养方法，其特征在于分离培养方法包括以下步骤：取浓香型酿酒窖池中已发酵15-20天的酒醅适量，然后称取酒醅10克，于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min获得菌悬液；用无菌吸管吸取菌悬液1.0mL，放入盛有9mL无菌水的试管中，依次用10倍法稀释至不同稀释度；取10－3、10－4、10－5稀释度的样品各1mL加入直径为90mm无菌培养皿中，倒入融化保温的培养基25 mL，摇匀待凝固后放入培养箱于28℃-32℃倒置培养2-3天；其中，培养基由12°BX麦芽汁中加入其质量1%的琼脂粉组成；挑取培养皿内形态规则的菌落，在固体培养基上划线培养，进行多次反复的分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，筛选出酿酒酵母，保藏于麦芽汁琼脂斜面备用；经菌种鉴定后，对酿酒酵母进行耐温试验，取一株活力较强酿酒酵母，命名为酿酒酵母240。
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