CN105237620A

CN105237620A - 咪唑并吡啶-6-甲酰-氨基酸苄酯、其合成、活性和应用

Info

Publication number: CN105237620A
Application number: CN201410327857.4A
Authority: CN
Inventors: 彭师奇; 赵明; 王玉记; 吴建辉; 彭玉龙
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2016-01-13

Abstract

本发明公开了下式3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl，公开了它的制备方法，还公开了它的抗炎活性。结果表明，3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl是具有抗炎活性的化合物，具有良好的临床应用前景。

Description

咪唑并吡啶-6-甲酰-氨基酸苄酯、其合成、活性和应用

发明领域

本发明涉及3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl，涉及它的制备，进一步涉及它的抗炎活性。结果表明，3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl是具有抗炎活性的化合物。本发明属于生物医药领域。

背景技术

癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效，低毒，毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。

随着对肿瘤特性和发病本质的认识，发明人曾经公开下式代表的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表甘氨基酸或其它L-氨基酸残基)在1μmol/kg剂量下显示良好的抗肿瘤活性。通过进一步研究发明人认识到，在3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl的6-甲酰基和AA-OBzl基之间插入N^G-NO₂-Arg残基，可以转化为抗炎症活性化合物。炎症是许多疾病的前期病变。通过这种修饰，获得的抗炎症活性的化合物，具有良好的临床应用前景。根据这些认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl。

本发明的第二个内容是提供制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl的合成方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸与N^G-NO₂-Arg-OBzl偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰N^G-NO₂-Arg-OBzl；

(6)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-OBzl在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg；

(7)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg与L-Tyr-OBzl偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl。

本发明的第三个内容是评价3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl对ICR雄性小鼠的抗炎活性。

附图说明

图1.3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl的合成路线.i)HCHO，H₂O，H₂SO₄，65℃；ii)MeOH，SOCl₂，0℃；iii)DMF，NMM，KMnO₄；iv)NaOH，H₂O，0℃；v)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，DMF；vi)NaOH，H₂O，0℃；vii)二环己基碳二亚胺(DCC)，1-羟基苯并三唑(HOBt)，N-甲基吗啉(NMM)，DMF。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(2)

冰浴下将15.0g(96.8mmol)L-组氨酸置于250mL圆底烧瓶中，加入50mL蒸馏水，再逐滴加入3mL浓硫酸，搅拌均匀，完全溶解后加入15mL甲醛溶液(40％)，60℃反应8小时。反应物冷却至室温，用浓氨水在冰浴下调pH至6，有大量无色沉淀析出，过滤。滤饼用水洗并干燥，得到15g(93％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)167[M+H]⁺。

实施例2制备6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)

冰浴下在500mL茄瓶里加100mL甲醇，用恒压漏斗缓慢滴加10mL二氯亚砜，1小时后加入5.0g(30mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(2)，室温反应3天后，TLC显示反应完全，反应混合物减压浓缩，残留物加甲醇溶解并减压浓缩。该操作重复3次得无色泡状固体，再加乙醚抽干重复3次得无色粉末，最后用甲醇/乙醚重结晶得4.2g(55％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)181[M+H]⁺。

实施例3制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(4)

冰浴下在100mL茄瓶里加2g(7.9mmol)6S-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯，加DMF使溶解。向该溶液中滴加1mL三乙胺调pH到8，分三次加入1.5g(9.4mmol)高锰酸钾。反应6小时后，TLC监测反应完毕。反应物减压浓缩至干，得到的黑色固体用1NHCl溶液溶解，冰浴下滴加2NNaOH溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得0.93g(66.4％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)177[M+H]⁺。

实施例4制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸(5)

冰浴下在100mL茄瓶里加3mLNaOH溶液(1.5N)，10min后加入0.93g(5.3mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(4)，反应1小时后TLC显示反应完毕，冰浴下向反应液中滴加2NHCl溶液调pH到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化，得0.56g(65％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)163[M+H]⁺。

实施例5制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-L-N^G-NO₂-Arg-OBzl(6)

称取194mg(1.2mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-羧酸于100mL茄形瓶中，加入20mLDMF。在冰浴和搅拌下依次加入211mg(1.6mmol)HOBt及333mg(1.6mmol)DCC，活化30min。称取676mg(1.4mmol)Tos·N^G-NO₂-Arg-OBzl于25mL小三角瓶中，用DMF溶解后，用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加50mL二氯甲烷溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃水溶液(20mL×3)和饱和NaCl水溶液(20mL×3)各洗3遍，乙酸乙酯层用无水CaCl₂干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇为洗脱剂)，得到的淡黄色固体，经二氯甲烷/石油醚重结晶得200mg(37％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)454[M-H]^-.Mp184-186℃.[α]_D ²⁵＝12.2(c＝0.12，甲醇).¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝13.19(s，1H)，9.04(s，2H)，8.57(s，1H)，8.52(s，1H)，8.26(s，1H)，7.44(m，5H)，5.18(m，2H)，4.63(dd，J＝5Hz，J＝15Hz，1H)，3.16(m，2H)，1.95(m，2H)，1.59(m，2H)。

实施例6制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-L-N^G-NO₂-Arg(7)

称取200mg(0.44mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-L-N^G-NO₂-Arg-OBzl于100mL茄瓶中，加甲醇溶液使原料溶解，冰浴搅拌下滴加2NNaOH溶液调pH到11，冰浴下反应3小时，TLC显示反应完毕。冰浴下向反应液中滴加饱和硫酸氢钾溶液调pH到7，反应化合物减压浓缩，残留物用甲醇复溶，滤去不溶物，滤液减压浓缩，得74mg(46％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z)：363[M-H]^-；Mp166-169℃.[α]_D ²⁵＝9.8(c＝0.19，甲醇).¹H-NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ/ppm＝13.14(s，1H)，8.99(s，2H)，8.65(s，2H)，8.54(s，1H)，8.53(s，1H)，8.29(m，2H)，4.60(dd，J＝5Hz，J＝15Hz，1H)，3.10(m，2H)，1.79(m，2H)，1.55(m，2H)。

实施例7制备3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-L-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl(8)

称取61mg(0.17mmol)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-L-N^G-NO₂-Arg于100mL茄形瓶中，加入20mLDMF。在冰浴和搅拌下依次加入27mg(0.2mmol)HOBt及41.3mg(0.2mmol)DCC，活化30min。称取75mg(0.17mmol)Tos·Tyr-OBzl于25mL小三角瓶中，用DMF溶解后，用NMM调pH至7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调反应液pH值至8。室温反应过夜，TLC显示反应完毕，反应混合物减压浓缩至干，残留物加20mL二氯甲烷溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，滤液层依次用饱和NaHCO₃溶液(20mL×3)和饱和NaCl溶液(20mL×3)各洗三遍，有机层用无水CaCl₂干燥，过滤、滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝7∶1)纯化得59.8mg(57.0％)无色固体。ESI-MS(m/z)：616[M-H]^-；Mp：120.1-123.6℃；[α]_D ²⁵＝-3.7(c＝0.23，甲醇)；IR(KBr)：3228，3062，1735，1643，1516，1454，1338，1261，941，740；¹H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ/ppm＝13.14(s，1H)，9.15(s，1H)，8.96(s，1H)，8.67(d，J＝5Hz，1H)，8.60(d，J＝5Hz，1H)，8.53(s，2H)，8.23(s，1H)，7.86(m，2H)，7.30(m，5H)，6.96(m，2H)，6.58(m，2H)，5.04(m，2H)，4.59(m，1H)，4.46(m，1H)，3.12(m，2H)，2.91(m，2H)，1.69(m，2H)，1.54(m，2H)。

实验例1评价化合物8的抗炎活性

1)实验方法

18-22gICR雄性小鼠随机分为空白对照组，阿司匹林阳性药组，化合物8给药组，小鼠使用前静息1天，操作间保持室内温度22℃，每组小鼠10只。一次性给药30分钟后往小白鼠的左耳外廓涂二甲苯(0.03mL)，2小时后将小鼠用乙醚麻醉之后颈椎脱臼处死。将小鼠的左，右耳剪下，用直径7mm的打孔器在两耳的相同位置，取圆形耳片，分别称重，求出两圆耳片的重量差作为肿胀度。肿胀度＝左耳圆片重量-右耳圆片重量。

2)给药方法和剂量

给药方式为灌胃给药。空白对照：含吐温80的生理盐水，给药剂量为0.2mL/20g；阳性对照：阿司匹林，给药剂量为1.11mmol/kg；化合物8的给药剂量为20nmol/kg.

3)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，肿胀度以表示。

4)实验结果列入表1。

结果表明，在20nmol/kg剂量下化合物8治疗小鼠的耳肿胀度明显低于含吐温80的生理盐水治疗小鼠的耳肿胀度。说明化合物8在给药剂量为20nmol/kg下，具有抗炎作用。

表1化合物8的体内抗炎活性评价

n＝10；生理盐水为含吐温80的生理盐水；a)与含吐温80的生理盐水组比p＜0.01。

Claims

1.下式的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl。

2.权利要求1的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl的制备方法，该方法包括：

(7)3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg与L-Tyr-OBzl偶联得到3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl。

3.权利要求1的3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-6-甲酰-N^G-NO₂-Arg-Tyr-OBzl在制备抗炎药物中的应用。