CN105232501A

CN105232501A - 刺甘草査尔酮的新用途

Info

Publication number: CN105232501A
Application number: CN201510789139.3A
Authority: CN
Inventors: 叶敏; 余四旺; 王永瑞; 季帅; 乔雪; 唐叔南; 李紫薇
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2015-11-17
Filing date: 2015-11-17
Publication date: 2016-01-13
Anticipated expiration: 2035-11-17
Also published as: CN105232501B

Abstract

本发明公开了刺甘草査尔酮的新用途。本发明提供的刺甘草査尔酮、和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种在制备具有如下(1)-(7)中至少一种功能的产品中的应用：(1)激活Nrf2和/或AMPK信号通路；(2)增强Nrf2、抗氧化酶和/或代谢解毒酶的表达；(3)抗衰老；(4)抑制氧化造成的细胞损伤、组织损伤；(5)保护肝损伤；(6)保护化学性肝损伤或保护氧化性肝损伤；(7)用于抗皮肤细胞恶性转化。次甘草查尔酮可从甘草中分离、纯化得到，本发明刺甘草査尔酮的新用途，为刺甘草査尔酮的研发提供了新的思路，并进一步提供了一系列具有上述用途的新产品。

Description

刺甘草査尔酮的新用途

技术领域

本发明涉及刺甘草査尔酮的新用途。

背景技术

Nrf2是II相解毒或抗氧化酶核心调节因子，能保护细胞避免发生氧化损伤。Nrf2的激活可以增强机体抗氧化能力和机体排毒能力。Nrf2激动剂的使用被证明在多种疾病上都能起到不同程度的保护作用。例如，SFN是一种从西兰花、圆白菜中提取的化合物。诸多文献报道了SFN对糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病的保护作用。有研究表明，Nrf2缺失会加重多种疾病的严重程度。例如，相较于对照组，小鼠胰岛β细胞株MIN6β细胞中Nrf2敲除后，过氧化氢带来的各项损伤包括细胞活力、细胞形态及凋亡等生物指标都明显加强。因此，Nrf2激动剂的发现和应用是十分必要的。

Nrf2在决定生物体寿命中发挥重要的作用。衰老是一个不可避免的过程，氧化损伤会加速整个进程。Nrf2激动剂可以激活ARE下游的抗氧化基因转录，减轻细胞的氧化损伤，延缓衰老的进程。目前研究表明二甲双胍可以通过激活Nrf2及AMPK信号通路，延长线虫的寿命。另外，微囊蛋白-1抑制Nrf2信号通路，促进氧化胁迫诱导的细胞衰老。

肝脏是腹腔内最大的实质性器官，担负人体的重要生理功能。许多物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到毒性物质损伤。肝损伤在临床上较为常见，一直是医学科学重点研究的对象之一。引起肝损伤的因素很多，包括药物(化疗药、解热镇痛药、抗病毒药等)，大自然和人类工业生产过程中的化学物质(黄曲霉毒素、四氯化碳、二甲基甲酰胺等)，病毒(甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等)以及酒精等。肝损伤的长期存在往往会导致肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化甚至肝癌。因此，预防和治疗肝损伤是临床上肝病治疗的重要环节之一，是抑制肝纤维化、肝坏死、肝硬化以及肝癌等疾病发生和发展的基础。临床上各种保肝药物种类繁多，但大多价格昂贵，或具有较大的毒副作用，从而使它们的使用受到限制。因此，发现有效的新型保肝药物仍然具有重要的现实意义和良好的应用前景。

刺甘草查尔酮(echinatin)，CAS号为34221-41-5，分子式为C₁₆H₁₄O₄，分子量为270。以前的文献研究表明刺甘草查尔酮具有显著的抗肿瘤活性(Shibata,S.等，StemCell1994,12,44-52；Iwata,S.等，Biol.Pharm.Bull.1995,18,1710-1713)以及治疗牛皮癣的作用[欧洲专利公开号EP0998939(A1)]。

发明内容

本发明的目的是提供刺甘草査尔酮的新用途。

本发明提供的式I所示化合物(刺甘草査尔酮)和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种在制备具有如下(1)-(7)中至少一种功能的产品中的应用：

(1)激活Nrf2和/或AMPK信号通路；

(2)增强Nrf2、抗氧化酶和/或代谢解毒酶的表达；

(3)抑制氧化造成的细胞损伤、组织损伤；

(4)抗衰老；

(5)保护肝损伤；

(6)保护化学性肝损伤或保护氧化性肝损伤；

(7)用于抗皮肤细胞恶性转化。

上述的应用中，所述抗氧化酶具体可为HO-1和/或NQO-1；所述代谢解毒酶具体可为谷胱甘肽；所述表达为mRNA水平和/或蛋白水平，即所述增强Nrf2、抗氧化酶和/或代谢解毒酶的表达为增加mRNA水平和/或蛋白水平。

本发明的另一个目的是提供一种用于上述新用途的以刺甘草査尔酮为活性成分的产品。

本发明提供的一种Nrf2和/或AMPK信号激动剂，其活性成分为式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

本发明提供的一种抗氧化酶和/或代谢解毒酶诱导剂，其活性成分为式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

本发明提供的一种用于抗衰老和/或保护化学性肝损伤产品，其活性成分为式I所示化合物(刺甘草査尔酮)和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

上述的产品中，所述产品可为药品或保健食品。

本发明提供的一种用于抗皮肤细胞恶性转化的产品，其活性成分为式I所示化合物(刺甘草査尔酮)和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

上述的产品中，所述产品可为药品、保健品或皮肤护理剂。

上述的产品为药品时，所述药品包括：

1)式I所示化合物(刺甘草査尔酮)和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种；和

2)药学上可接受的载体。

上述药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备得到。

所述药品的剂型包括但不限于：散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、气雾剂、膏剂或滴剂。

上述的产品为保健食品时，所述保健食品包括：

2)保健食品中可接受的载体。

上述的产品为皮肤护理剂时，所述皮肤护理剂泛指用于皮肤护理的产品，其形式包括但不限于膜、霜、乳、液、水、喷雾等形式。

本发明具有如下有益效果：

(1)刺甘草查尔酮能够剂量依赖性激活Nrf2/ARE萤光素酶报告基因的活性，并且剂量和时间依赖地增加MEFs细胞中Nrf2和p-AMPK蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。同时，刺甘草查尔酮的毒性较低，仅在40μM时表现出轻微的细胞毒性。刺甘草查尔酮在氧化胁迫诱导细胞衰老中起保护作用，但在Nrf2敲除的MEFs细胞中，它的保护作用就消失了。在线虫中，我们也观察到了相同的实验结果。刺甘草查尔酮可以增强线虫对于过氧化氢的抵抗，并延长线虫的寿命，这种保护作用在skn-1(zu135)和aak2(ok524)突变的线虫上也是缺失的。以上结果表明刺甘草查尔酮可用于制备抗衰老药物或保健品。

(2)刺甘草查尔酮在JB6P+中剂量依赖性地升高Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。刺甘草查尔酮可以抑制TPA诱导的皮肤癌转化，并且这个作用是依赖于Nrf2的。以上结果表明刺甘草查尔酮可用于制备抗皮肤细胞恶性转化的药物、保健品或皮肤护理用品。

(3)刺甘草查尔酮能够剂量依赖性地增加HepG2细胞中的Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。在腹腔注射刺甘草查尔酮之后，该化合物能够显著提升小鼠肝脏组织中Nrf2的蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。采用经典的四氯化碳模型，在腹腔注射刺甘草查尔酮之后，该化合物能够显著降低四氯化碳所致肝损伤小鼠血清的ALT和AST水平，增加肝脏组织中的GSH水平，同时，从肝组织病理切片发现治疗组的肝坏死面积相对于模型组显著减小，表明刺甘草查尔酮对于四氯化碳所致的小鼠肝损伤具有明显的治疗作用。以上结果表明刺甘草查尔酮可用于制备化学性肝损伤保护药物或保健品。

(4)刺甘草查尔酮可以在多种细胞中激活Nrf2信号通路，并且在小鼠体内也能显著提升Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。该化合物还可增加小鼠肝脏的GSH水平，以及在MEFs中显著升高过氧化氢所致的GSH水平降低。以上结果说明刺甘草查尔酮可用于制备Nrf2激动剂及抗氧化和代谢解毒酶诱导剂。

附图说明

图1为刺甘草查尔酮的核磁共振氢谱(¹HNMR)。

图2为刺甘草查尔酮的核磁共振碳谱(¹³CNMR)。

图3为刺甘草查尔酮激活HepG2细胞内Nrf2报告基因活性的实验结果。

图4为刺甘草查尔酮抑制HepG2细胞活力的MTS实验结果。

图5为刺甘草查尔酮激活MEFs细胞中Nrf2信号及下游基因的实验结果。其中图5(A)、图5(B)、图5(C)、图5(D)为qPCR结果，图5(E)、图5(F)为Westernblot结果。

图6为刺甘草查尔酮降低MEFs细胞中H₂O₂诱导的细胞老化指标SA-β-gal升高的实验结果。其中图6(A)为SA-β-gal染色结果，图6(B)为SA-β-gal染色定量结果。

图7为刺甘草查尔酮对于Nrf2敲除MEFs细胞中Nrf2信号及下游基因影响的实验结果。其中图7(A)、图7(B)为qPCR结果，图7(C)为Westernblot结果。

图8为刺甘草查尔酮不能降低Nrf2敲除MEFs细胞中H₂O₂诱导的细胞老化指标SA-β-gal升高的实验结果，其中图8(A)为SA-β-gal染色结果，图8(B)为SA-β-gal染色定量结果。

图9为刺甘草查尔酮升高MEFs细胞中H₂O₂诱导的GSH降低的实验结果，其中图9(A)为野生型MEF中GSH结果，图9(B)为Nrf2敲除MEFs中的结果。

图10为刺甘草查尔酮在激活MEFs细胞中AMPK信号通路，其中图10(A)、图10(B)为浓度时间依赖激活AMPK下游的Westernblot结果，图10(C)为预处理CompoundC后，AMPK及Nrf2下游Westernblot结果。

图11为刺甘草查尔酮延长线虫寿命的实验结果，其中图11(A)为线虫寿命结果，图11(B)为给予过氧化氢后，线虫寿命结果。

图12为刺甘草查尔酮激活JB6P+细胞中Nrf2信号及下游基因的实验结果，其中(A)为qPCR结果，(B)为Westernblot结果。

图13为刺甘草查尔酮抑制JB6P+细胞中TPA诱导的恶性转化。其中A为空载体细胞(mock)中结果，B为Nrf2敲除细胞中结果。

图14为刺甘草查尔酮激活小鼠肝脏组织中Nrf2信号的实验结果。其中(A)为qPCR结果，(B)为Westernblot结果。

图15为刺甘草查尔酮降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平的实验结果。

图16为刺甘草查尔酮增加肝损伤小鼠肝脏组织中GSH水平的实验结果。

图17为肝组织病理切片结果。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、刺甘草查尔酮对Nrf2的激活作用

本实施例中考察了刺甘草查尔酮对HepG2细胞活力及Nrf2/ARE报告基因活性的影响。

一、实验材料和方法

(1)刺甘草查尔酮购自成都曼思特生物科技有限公司，其核磁共振氢谱和核磁共振碳谱如图1和图2所示。人肝癌细胞株HepG2购自美国菌种保藏中心(ATCC)，实验均采用处于对数生长期的细胞。

HepG2细胞采用Lipofectamine2000(LifeTechnologies公司)稳定转染Nrf2萤光素酶报告基因，得到的细胞称之为HepG2C8细胞。将HepG2C8细胞接种于24孔板12小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，6小时后裂解细胞，检测萤光素酶活性，并根据不同组的蛋白浓度对活性进行校正。

(2)HepG2细胞接种于96孔板12小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，继续培养24小时，向每孔加入MTS溶液(美国Promega公司)至终浓度为0.5mg/mL，继续培养2～4个小时，用自动酶标仪于490nm测定各孔吸光度，分析其抑制率。

二、实验结果

(1)Nrf2是调节体内氧化还原平衡的重要转录因子，其通过抗氧化响应元件(ARE)控制着细胞II相药物代谢酶和抗氧化基因的表达，激活Nrf2信号通路可以减轻各种因素引起的细胞氧化损伤。本实施例采用Nrf2萤光素酶报告基因的方法，测定刺甘草查尔酮的Nrf2激活作用。如图3所示，刺甘草查尔酮可以剂量依赖地激活Nrf2报告基因活性，在20μM时的活性最强，达到6.8倍。

(2)刺甘草查尔酮对HepG2细胞有较弱的细胞毒性，如图4所示，仅在40μM时对HepG2细胞活力产生17％的抑制率。

实施例2、刺甘草查尔酮在制备激活Nrf2和/或AMPK信号通路中的产品、抗氧化酶诱导剂及抗衰老产品中的应用

一、实验材料和方法

(1)MEFs细胞取自怀孕13.5天的C57小鼠胚胎(陈明玉，实验动物科学)。取对数生长期的MEFs细胞接种于6孔板24小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，继续培养6小时或指定时间。弃去上清，细胞用TRIZOL缓冲液(北京全式金生物技术有限公司)裂解以提取总RNA。然后采用qPCR方法检测HO-1和NQO-1的mRNA水平。

(2)MEFs细胞接种于60mm皿24小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，继续培养6小时或指定时间。弃去上清，细胞用RIPA缓冲液(上海碧云天生物技术有限公司)裂解，BCA法测定蛋白浓度。每个样品取20μg蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，然后按常规免疫印迹方法检测Nrf2，HO-1，p-AMPK，p-ACC和NQO-1的蛋白水平。

(3)MEFs细胞接种于6孔板24小时后，给予10μM的刺甘草查尔酮，继续培养6小时后，给予100μM的H₂O₂处理两小时，换为完全培养基继续培养72小时后，用3％的甲醛固定5分钟后，用β-gal溶液(上海杰美基因医药科技有限公司)染色。染色16小时后，在倒置显微镜下拍照，并用Image-ProPlus软件统计。

(4)MEFs细胞接种于60mm皿后，给予10μM的刺甘草查尔酮，继续培养24小时后，给予100μM的H₂O₂处理两小时。将细胞用80μl裂解液裂解，取上清用DNTB法测定GSH的含量。

(5)线虫寿命实验。本实验所用的秀丽隐杆线虫，购自于CGC。将刺甘草查尔酮配置成10mmol的DMSO母液，5-Fu配置成50mmol、25mmol两种浓度的DMSO母液，均置于4℃冰箱保存。实验采用液体培养，在24孔培养皿加入500μL的OP50菌悬液(S缓冲液+OP50)，给药组加入0.5μL药液和0.5μL50mmol的5-Fu，空白组加1μL15mmol的5-Fu。同期化处理线虫，将L4期线虫用M9洗下，于解剖镜下转移至液体培养液中，每组平行操作3份，每份30条。转移当天记为day0，每天探视线虫，并转移至新的培养液中，记录线虫生存、死亡条数。培养温度20℃。对线虫死亡判断标准：无移动及吞咽动作，轻触后仍无任何反应。

(6)同期化处理线虫，将L4期线虫于解剖镜下转移至液体培养液中，每组平行操作3份，每份30条。给予10μM的刺甘草查尔酮处理48小时后，给予3mMH₂O₂处理。

每隔2小时探视线虫，并转移至新的培养液中，记录线虫生存、死亡条数。培养温度20℃。对线虫死亡判断标准：无移动及吞咽动作，轻触后仍无任何反应。

二、实验结果

(1)刺甘草查尔酮对于Nrf2信号通路的影响。如图5所示，刺甘草查尔酮能剂量和时间依赖地增加MEFs细胞中Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。

(2)如图6所示，在MEFs中先给予刺甘草查尔酮能显著降低H₂O₂诱导SA-β-gal染色升高。

(3)如图7所示，在Nrf2^-/--MEFs中刺甘草查尔酮不能时间依赖地增加MEFs细胞中Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平或蛋白水平。

(4)如图8所示，在Nrf2^-/--MEFs中先给予刺甘草查尔酮不能显著降低H₂O₂诱导SA-β-gal染色升高。

(5)如图9所示，在野生型MEFs中刺甘草查尔酮能显著升高由H₂O₂诱导的GSH降低，但在Nrf2^-/--MEFs中，这种保护作用消失。

(6)如图10所示，刺甘草查尔酮能剂量和时间依赖地升高p-AMPK及下游p-ACC的蛋白水平，并且使用AMPK的抑制剂CompoundC后，刺甘草查尔酮对于p-AMPK，p-ACC及Nrf2和HO1蛋白水平的升高均有所降低。

(7)如图11所示，刺甘草查尔酮处理后能显著延长N2型线虫的寿命，并能在H₂O₂存在下保护线虫，延长生存时间。以上保护作用，在skn-1(zu135)和aak2(ok524)突变的线虫上是缺失的。

以上实验结果说明，刺甘草查尔酮可以通过激活Nrf2和AMPK信号通路，对氧化胁迫诱导的细胞衰老和线虫寿命缩短，发挥其抗衰老及延长寿命的作用。因此，刺甘草查尔酮可用于制备抗衰老的药物或保健品。

实施例3、刺甘草查尔酮在制备抗氧化酶诱导剂、抗皮肤癌细胞转化的产品中的应用

一、实验材料和方法

(1)取对数生长期的JB6P+细胞(美国菌种保藏中心ATCC)接种于6孔板24小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，继续培养72小时。弃去上清，细胞用TRIZOL缓冲液裂解以提取总RNA。然后采用qPCR方法检测Nrf2，HO-1，Gclc和NQO-1的mRNA水平。

(2)JB6P+细胞接种于6孔板24小时后，分别加入指定浓度的刺甘草查尔酮，继续培养72小时。弃去上清，细胞用RIPA缓冲液裂解，BCA法测定蛋白浓度。每个样品取20μg蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，然后按常规免疫印迹方法检测Nrf2，HO-1和NQO-1的蛋白水平。

(3)由shRNA稳定转染JB6P+制备空载体细胞(mock)和Nrf2敲除细胞。在3mLBME培养基中加入0.5％细菌琼脂，10％FBS混匀作为下层支持物，在1mLBME培养基中加入0.33％细菌琼脂和8000个细胞作为上层生长层。上下两层均含有TPA(20ng/ml)或DMSO，以及指定浓度的刺甘草查尔酮。待琼脂凝固后，将培养板放入37℃恒温孵育箱。培养14天后，用倒置显微镜拍照，并用ImageJ软件分析细胞集落数。

二、实验结果

(1)如图12所示，刺甘草查尔酮能剂量和时间依赖地增加JB6P+细胞中Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶HO-1和NQO-1的mRNA水平和蛋白水平。

(2)如图13所示，刺甘草查尔酮能降低空载体细胞(mock)中TPA诱导的恶性转化，但在Nrf2敲除细胞中这种保护作用就消失了。

以上结果显示，刺甘草查尔酮能够抑制TPA诱导的皮肤癌转化，并且这个作用是依赖于Nrf2信号通路的。因此刺甘草查尔酮能够用于制备抗皮肤细胞恶性转化的药物、保健品或皮肤护理用品。

实施例4、刺甘草查尔酮在制备抗氧化酶诱导剂、GSH诱导剂、保护肝损伤的产品中的应用

(1)刺甘草查尔酮对小鼠肝脏组织中Nrf2信号活性的影响

一、实验方法

选取七周龄雄性C57小鼠15只，随机分为三组，分别为空白对照组，刺甘草查尔酮组1(5mg/kg)和刺甘草查尔酮组2(10mg/kg)。刺甘草查尔酮溶解在玉米油里腹腔注射，空白组给予等量的玉米油。连续给药三天，最后一次给药后三小时处理小鼠，麻醉后摘眼球取血，取出肝脏。

(1)每个肝脏样品组织取20mg左右，加入1mL的TRIZOL缓冲液裂解，同实施例2中提取总RNA进行qPCR分析。

(2)每个肝脏样品组织取100mg左右，加入1mL的RIPA缓冲液裂解，同实施例2中提取总蛋白进行westernblot分析。

二、实验结果

如图14所示，刺甘草查尔酮可以剂量依赖性地提高小鼠肝脏组织中HO-1和NQO-1的mRNA水平，同时增加Nrf2和HO-1的蛋白水平。

以上结果显示，刺甘草查尔酮可以显著激活小鼠肝脏组织的Nrf2信号，从而可能抑制因氧化而造成的组织损伤。

(2)刺甘草查尔酮抑制四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤。

一、实验方法

选取七周龄雄性C57小鼠40只，随机分为四组，分别为空白对照组、四氯化碳组、刺甘草查尔酮组1(5mg/kg)和刺甘草查尔酮组2(10mg/kg)。刺甘草查尔酮溶解在玉米油里腹腔注射，空白组和四氯化碳组给予等量的玉米油。连续给药三天后，除空白组外，其余三组在最后一次给药后三小时给予200μL/kg的四氯化碳。24小时后处理小鼠，麻醉后摘眼球取血，离心后得到的血清用于血生化检测。取出小鼠肝脏，用于GSH水平检测和病理切片。

(1)检测小鼠血清的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。

(2)每个肝脏样品组织取100mg左右，加入1mL的PBS缓冲液研磨，得到的上清液采用GSH/GSSG检测试剂盒检测组织中的GSH水平。

(3)取新鲜的肝脏组织，用10％的福尔马林溶液固定，进行HE染色，得到肝脏组织病理切片。

二、实验结果

(1)如图15所示，四氯化碳能够大幅度增加小鼠血清中ALT和AST的水平，表明四氯化碳可以引起小鼠严重的肝损伤。刺甘草查尔酮可以显著降低四氯化碳所致肝损伤小鼠血清的ALT和AST水平，提示该化合物可以抑制四氯化碳引起的小鼠肝损伤。

(2)还原型谷胱甘肽(GSH)是机体内消耗活性氧自由基的主要抗氧化剂。如图16所示，四氯化碳能够大幅度消耗肝脏组织中的GSH，提示四氯化碳是通过氧化应激而造成的肝损伤。刺甘草查尔酮可以有效减少四氯化碳对GSH的消耗，提示该化合物可以抑制四氯化碳所造成的氧化应激，从而减轻肝损伤。

(3)如图17所示的小鼠肝组织病理切片结果，四氯化碳能够造成小鼠肝组织大面积坏死，刺甘草查尔酮可以显著地减少肝组织的坏死面积。

以上结果显示，刺甘草查尔酮能够显著地抑制四氯化碳引起的小鼠肝损伤，因此可用于制备保肝药物或保健品。

Claims

1.式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种在制备具有如下(1)-(7)中至少一种功能的产品中的应用：

(1)激活Nrf2和/或AMPK信号通路；

(2)增强Nrf2、抗氧化酶和/或代谢解毒酶的表达；

(3)抗衰老；

(4)抑制氧化造成的细胞损伤、组织损伤；

(5)保护肝损伤；

(6)保护化学性肝损伤或保护氧化性肝损伤；

(7)用于抗皮肤细胞恶性转化。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述抗氧化酶为HO-1和/或NQO-1；所述代谢解毒酶为谷胱甘肽；所述表达为mRNA水平和/或蛋白水平。

3.一种Nrf2和/或AMPK信号激动剂，其活性成分为权利要求1中所述式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

4.一种抗氧化酶和/或代谢解毒酶诱导剂，其活性成分为权利要求1中所述式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

5.一种用于抗衰老和/或保护化学性肝损伤的产品，其活性成分为权利要求1中所述式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述产品为药品或保健食品。

7.一种用于抗皮肤细胞恶性转化的产品，其活性成分为权利要求1中所述式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于：所述产品为药品、保健品或皮肤护理剂。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的产品，其特征在于：所述产品为药品或保健品；所述产品包括：

1)式I所示化合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种；和

2)药学或保健食品中可接受的载体；

所述药品的剂型为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、气雾剂、膏剂或滴剂。

10.根据权利要求8所述的产品，其特征在于：所述皮肤护理剂的形式为膜、霜、乳、液、水或喷雾。