CN105232498A - 五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用，并提供一种以五味子甲素为有效成分的药物组合物。该药物组合物具备显著的降血糖的效果，且作用灵敏度远高于市场一线用药二甲双胍。

Description

五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种预防和治疗糖尿病的药物，特别涉及一种五味子甲素在制备预防和治疗糖尿病药物中的应用。

背景技术

根据国际糖尿病联盟(InternationalDiabetesFederatio，IDF)统计，2014年全球的糖尿病患者有3.87亿，全球发病率为8.3％，估计到2035年，全球糖尿病人数会达到5.92亿。中华医学会糖尿病学分会于2007至2008年在我国部分地区开展的糖尿病流行病学调查显示：我国20岁以上人群糖尿病患病率为9.7％，糖尿病前期的比例为15.5％。糖尿病是一种慢性疾病，伴随着病程的延长，各种代谢紊乱能导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害和功能障碍，由此引发的心脑血管病变、肾功能衰竭、失明、下肢坏疽等成为糖尿病致残致死的主要原因。2014年全球有490万人死于糖尿病。糖尿病不仅给患病个体带来了肉体和精神上的损害并导致寿命的缩短，还给个人、国家带来了沉重的经济负担。预防糖尿病前期向糖尿病转化以及对已诊断患者进行良好的治疗是糖尿病防治指南中最重要的策略。

2型糖尿病占所有糖尿病90％以上，其发病机制有两个基本环节：胰岛素抵抗和胰岛β细胞胰岛素分泌相对不足。胰岛素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰岛素作用的靶器官对正常浓度的胰岛素产生反应不足的病理生理状态。在这种状态下，胰岛β细胞需要分泌更多的胰岛素(高胰岛素血征)来抵抗高血糖。胰岛β细胞不能够产生足够的胰岛素来抵抗越发严重的胰岛素抵抗，最终导致胰岛β细胞衰竭。

2型糖尿病是一种慢性进行性的疾病，绝大部分患者需要终身用药。

五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.或华中五味子SchisandrasphenantheraRehd.etWils.的干燥成熟果实。五味子的功效是敛肺，滋肾，生津，收汗，涩精。中医称糖尿病为消渴症，基本病机为阴津亏耗，燥热偏盛。申请号为201110330663.6的专利文献公开了一种治疗糖尿病的药物，按重量份数计算，包括天花粉、茯苓、熟地、生地、地骨皮、枸杞、麦冬、石膏、山药、白芍、知母、黄连、僵蚕、五味子、太子参、三七、丹参50～70份、北沙参50～70份、粉葛50～70份、肉桂25～35份、红参50～70份、荔枝核50～70份、血竭45～55份以及葫芦巴50～70份；并至少包含黄芪50～70份、玉竹50～70份、黄精50～70份或石斛50～70份中的一种以上。该发明采用对中药配方进行优化的筛选组合，获得一种能适用于大多数糖尿病患者的药物，该药物疗效好，见效快，而且副作用小。很多治疗糖尿病中药方剂中都含有五味子，一些研究表明五味子的提取物有降低血糖的作用，不过五味子中的单体成分抗糖尿病作用未见任何报道。

发明内容

本发明提供了五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用，并提供一种以五味子甲素为有效成分的药物组合物。该药物组合物具备显著降血糖的效果。

五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用。

申请人研究发现五味子甲素可显著改善胰岛素抵抗，增加胰岛素抵抗肝细胞的葡萄糖吸收，其效果显著。五味子甲素能很好地应用于治疗糖尿病，尤其是2型糖尿病和与糖尿病相关的疾病，达到改善糖尿病病情的目的。

一种治疗糖尿病的药物组合物，包含作为有效成分的五味子甲素。

研究发现，五味子甲素的有效作用浓度为5～20μM。

作为优选，所述药物组合物中，五味子甲素的重量百分比为22～25％。

作为优选，药物组合物包括可药用辅料。药物辅料可以赋予药物一定剂型，有效保证药物有效成分的释放和吸收。

作为优选，所述药物为口服给药的剂型。口服给药方式简便，不直接损伤皮肤或黏膜，减少感染风险。由于糖尿病患者需要长期用药，故口服给药是一种经济安全的方式。

更为优选，所述口服给药的剂型为溶液剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。

本发明具备的有益效果：本发明以五味子甲素为有效成分的药物可有效降低糖尿病患者的血糖水平，且作用灵敏度远高于市场一线用药二甲双胍。

附图说明

图1是5μM五味子甲素对胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞葡萄糖消耗量的影响；

图2是10μM五味子甲素对胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞葡萄糖消耗量的影响；

图3是20μM五味子甲素对胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞葡萄糖消耗量的影响；

其中，显著性检验方法为t检验，*表示P<0.05vs模型组，**表示P<0.01vs模型组，***表示P<0.001vs模型组，##表示P<0.01vs阳性药物二甲双胍。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。

实施例1

5μM的五味子甲素液对胰岛素抵抗肝细胞降糖活性的研究

小鼠胚胎肝细胞BNLCL.2用含10％胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37℃、5％CO₂细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90％时，弃去培养液，加入3mLPBS润洗一次，加入1mL0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液消化约2min，加入三倍量培养液终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取10μL计数，将BNLCL.2细胞接种于96孔板，每孔2万个细胞，并设无细胞空白对照孔。培养24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗一遍，换上无血清无酚红的低糖DMEM培养液，分组加受试药。

设空白对照组(加入正常细胞培养液100μL)，模型组(加入含1μM的胰岛素的细胞培养液100μL)，五味子甲素组(加入含1μM的胰岛素及5μM的五味子甲素的细胞培养液100μL)，二甲双胍组(加入含1μM的胰岛素及1mM的二甲双胍的细胞培养液100μL)。作用24小时后，用葡萄糖氧化酶法测定每孔培养液的葡萄糖含量，即每孔取5μL培养液于另一96孔板中，加入200μL葡萄糖氧化酶测试液，37℃孵育30min，于492nm波长下测定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mmol/L浓度范围内按标准曲线法计算每孔葡萄糖含量。每孔葡萄糖消耗量＝无细胞空白孔培养液葡萄糖含量-每孔培养液葡萄糖含量，每组设3个或3个以上复孔，相同实验重复3次。

葡萄糖含量测定后，原培养孔弃去原培养液，每孔加入含有0.5mg/mLMTT溶液的培养液，于37℃、5％CO₂的条件下孵育4h。弃去上清液，每孔加入100μLDMSO，37℃，振荡10min，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。

结果见图1，五味子甲素5μM，二甲双胍1mM作用于胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞24小时后均可增加葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组比较具有统计学差异。本实验中，阳性药二甲双胍的有效作用浓度为1mM；五味子乙素的有效作用浓度为5μM。

实施例2

10μM的五味子甲素液对胰岛素抵抗肝细胞降糖活性的研究

小鼠胚胎肝细胞BNLCL.2用含10％胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37℃、5％CO₂细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90％时，弃去培养液，加入3mLPBS润洗一次，加入1mL0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液消化约2min，加入三倍量培养液终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取10μL计数，将BNLCL.2细胞接种于96孔板，每孔2万个细胞，并设无细胞空白对照孔。培养24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗一遍，换上无血清无酚红的低糖DMEM培养液，分组加受试药。

设空白对照组(加入正常细胞培养液100μL)，模型组(加入含1μM的胰岛素的细胞培养液100μL)，五味子甲素组(加入含1μM的胰岛素及10μM的五味子甲素的细胞培养液100μL)，二甲双胍组(加入含1μM的胰岛素及1mM的二甲双胍的细胞培养液100μL)。作用24小时后，用葡萄糖氧化酶法测定每孔培养液的葡萄糖含量，即每孔取5μL培养液于另一96孔板中，加入200μL葡萄糖氧化酶测试液，37℃孵育30min，于492nm波长下测定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mmol/L浓度范围内按标准曲线法计算每孔葡萄糖含量。每孔葡萄糖消耗量＝无细胞空白孔培养液葡萄糖含量-每孔培养液葡萄糖含量，每组设3个或3个以上复孔，相同实验重复3次。

葡萄糖含量测定后，原培养孔弃去原培养液，每孔加入含有0.5mg/mLMTT溶液的培养液，于37℃、5％CO₂的条件下孵育4h。弃去上清液，每孔加入100μLDMSO，37℃，振荡10min，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。

结果见图2，五味子甲素10μM作用于胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞24小时后可增加葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组比较具有统计学差异。此外，10μM五味子甲素的促葡萄糖吸收能力显著优于阳性药物1mM二甲双胍(P<0.01)，并且作用浓度更低。

实施例3

20μM的五味子甲素液对胰岛素抵抗肝细胞降糖活性的研究

小鼠胚胎肝细胞BNLCL.2用含10％胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37℃、5％CO₂细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90％时，弃去培养液，加入3mLPBS润洗一次，加入1mL0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液消化约2min，加入三倍量培养液终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取10μL计数，将BNLCL.2细胞接种于96孔板，每孔2万细胞，并设无细胞空白对照孔。培养24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗一遍，换上无血清无酚红的低糖DMEM培养液，分组加受试药。

设空白对照组(加入正常细胞培养液100μL)，模型组(加入含1μM的胰岛素的细胞培养液100μL)，五味子甲素组(加入含1μM的胰岛素及20μM的五味子甲素的细胞培养液100μL)，二甲双胍组(加入含1μM的胰岛素及1mM的二甲双胍的细胞培养液100μL)。作用24小时后，用葡萄糖氧化酶法测定每孔培养液的葡萄糖含量，即每孔取5μL培养液于另一96孔板中，加入200μL葡萄糖氧化酶测试液，37℃孵育30min，于492nm波长下测定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mmol/L浓度范围内按标准曲线法计算每孔葡萄糖含量。每孔葡萄糖消耗量＝无细胞空白孔培养液葡萄糖含量-每孔培养液葡萄糖含量，每组设3个或3个以上复孔，相同实验重复3次。

葡萄糖含量测定后，原培养孔弃去原培养液，每孔加入含有0.5mg/mLMTT溶液的培养液，于37℃、5％CO₂的条件下孵育4h。弃去上清液，每孔加入100μLDMSO，37℃，振荡10min，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。

结果见图3，五味子甲素20μM作用于胰岛素抵抗的BNLCL.2细胞24小时后可增加葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组比较具有统计学差异。此外，20μM五味子甲素的促葡萄糖吸收能力优于阳性药物1mM二甲双胍(P<0.01)，并且作用浓度更低。

实施例4

五味子甲素片剂制备

制备工艺：将处方中微晶纤维素和低取代甲基纤维素过80目筛，称量处方量的五味子甲素与微晶纤维素和低取代甲基纤维素混合均匀，加入2％羟丙甲基纤维素溶液适量制粒，干燥，整粒，加入处方量的硬脂酸镁混匀，压片，即得1000片。

实施例5

五味子甲素胶囊剂制备

制备工艺：将处方中微晶纤维素和辅料分别过80目筛，称量处方量的五味子甲素与各辅料混合均匀后，加入5％聚乙烯吡咯烷酮水溶液制软材，制粒，干燥，整粒、加入滑石粉，混匀，填装胶囊即得1000粒。

Claims (6)

1.五味子甲素在制备治疗糖尿病药物中的应用。

2.一种治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于，包含作为有效成分的五味子甲素。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中五味子甲素的重量百分比为22～25％。

4.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，还包括可药用辅料。

5.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为口服给药的剂型。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述口服给药的剂型为溶液剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。