CN105230494A - 一种紫叶稠李繁殖方法 - Google Patents

一种紫叶稠李繁殖方法 Download PDF

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Abstract

一种紫叶稠李繁殖方法，它涉及一种紫叶稠李繁殖方法。本发明的方法为：一、外植体选择；二、外植体芽诱导；三、增殖培养；四、生根培养；五、炼苗处理。本发明通过组织培养基中加入Sm元素和Ce元素，提高了紫叶稠李的黄酮、多酚及花色苷的含量，从而为提高紫叶稠李的提取物的产率，提高了紫叶稠李的应用价值。

Description

一种紫叶稠李繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种紫叶稠李繁殖方法。
背景技术
紫叶稠李(Prunusvirginiana)又名加拿大红樱，蔷薇科(Rosaceae)落叶乔木，原产北美，20世纪50年代从美洲稠李(Prunusvirginianavar.schubert)中选育出来，植株高8～14m，树皮灰褐色，小枝光滑树形自然开张，叶片繁茂，叶片长椭圆形至倒卵形，长8～14cm宽5～7cm，缘具粗齿短枝开花，叶腋抽生总状花序，花序长4～6cm，花白色，花期4～6月果实紫红色，味苦，果皮光亮，果期7～9月根系发达，适生性强，喜阳光及温暖湿润的气候环境，在肥沃疏松而排水良好的沙质壤土上生长健壮抗逆性极强，耐寒耐旱耐瘠薄抗病虫害，可耐-40℃的严寒和40℃以上的酷热，适宜长江以北的大部分地区生长属于变色树种，叶色变化四季极为丰富，色彩艳丽，从粉红色嫩绿色淡红一直到紫红色，是目前国内紫叶彩化的唯一乔木树种，有良好的观赏价值和经济效益。
1993年由中科院北京植物园从北美东北部引进，经多年培育而成的优良彩叶树种，后逐步引入黑龙江地区多年的栽培试验表明:该树种有较强的耐寒、耐旱、耐贫瘠能力，具有较高的观赏价值，是北方地区不可多得的观赏彩叶树种。
但是目前，繁殖培育紫叶稠李的方法效果差，并不能有效地对紫叶稠李进行大规模繁殖。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，而提供了一种紫叶稠李繁殖方法。
本发明的一种紫叶稠李繁殖方法，是按照以下步骤进行的：
一、外植体选择：
选取4月末的腋芽作为外植体；首先用清水洗净，用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，取出清水冲洗3～5遍，再用体积百分含量为0.5％的次氯酸钠浸泡10min，再用无菌水冲洗3～5遍；
二、外植体芽诱导：
将步骤一处理后的外植体切成1～2cm的茎段置于外植体芽诱导培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc400～500mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L；
三、增殖培养：
将步骤二诱导组织置于增殖培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，增殖培养基为MS+Sm(NO3)330～45mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L；
四、生根培养：
将步骤三增殖培养的组织，置于生根培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，生根培养基为1/2MS+GA30.3～0.6mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～10mg/L；
五、将步骤四生根后的紫叶稠李在6月末至7月末扦插至扦插床中，进行炼苗；所述的扦插床为底层铺设10～15cm厚的河卵石、10～15cm厚的粗河砂和10～15cm厚的腐殖土，上层将活性炭：蛭石：珍珠岩按质量比为1:2:3的比例铺设；扦插后在温度为25～30℃的条件下，炼苗20～25d，即完成所述的紫叶稠李繁殖方法。
本发明包含以下有益效果:
本发明通过选择稀土元素，配以合理的添加量，使本发明能够达到以下效果：
本发明通过加入Sm(NO3)3能够对紫叶稠李的色素的含量，能够提高紫叶稠李的绿化效果。并且Sm(NO3)3能够提高提高芽的出芽率，平均出芽为10个左右，且在保证出芽率高的同时，能够保证增值效果达到最佳。通过在生根培养基中加入Ce(NO3)3能够提高紫叶稠李的生根率，生根率可达94％。
在外植体芽诱导过程，通过合理的加入Vc并配以Sm元素，增加SOD和POD的活性，降低MDA的的合成速率，减少细胞膜的缩小，增强紫叶稠李有效去除氧自由基的能力，同时加入的Vc能够降低KT诱导褐化的作用。
本发明通过组织培养基中加入Sm元素和Ce元素，能够有效促进细胞的分化的作用，提高愈伤组织的分化能力，而愈伤组织的分化能力又与次生代谢产物的合成有密切的关系，本发明加入Sm元素和Ce元素提高了紫叶稠李的黄酮、多酚及花色苷的含量，从而为提高紫叶稠李的提取物的产率，提高了紫叶稠李的应用价值。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的一种紫叶稠李繁殖方法，是按照以下步骤进行的：
一、外植体选择：
选取4月末的腋芽作为外植体；首先用清水洗净，用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，取出清水冲洗3～5遍，再用体积百分含量为0.5％的次氯酸钠浸泡10min，再用无菌水冲洗3～5遍；
二、外植体芽诱导：
将步骤一处理后的外植体切成1～2cm的茎段置于外植体芽诱导培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc400～500mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L；
三、增殖培养：
将步骤二诱导组织置于增殖培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，增殖培养基为MS+Sm(NO3)330～45mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L；
四、生根培养：
将步骤三增殖培养的组织，置于生根培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，生根培养基为1/2MS+GA30.3～0.6mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～10mg/L；
五、将步骤四生根后的紫叶稠李在6月末至7月末扦插至扦插床中，进行炼苗；所述的扦插床为底层铺设10～15cm厚的河卵石、10～15cm厚的粗河砂和10～15cm厚的腐殖土，上层将活性炭：蛭石：珍珠岩按质量比为1:2:3的比例铺设；扦插后在温度为25～30℃的条件下，炼苗20～25d，即完成所述的紫叶稠李繁殖方法。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc450mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的增殖培养基为MS+Sm(NO3)340mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的生根培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～8mg/L。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中扦繁殖过程是在温室中进行的。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中扦插的深度为2～3cm。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中扦插苗选择步骤四生根培养苗挺拔，株苗相对高的苗进行扦插。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中繁殖过程中空气湿度保持在70％以上。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中繁殖过程中每天温度最高时进行通风处理。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤五中再繁殖20～25d后，进行全日光培养。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式一不同的是：MS培养基中含有蔗糖30g/L及琼脂6g/L，pH为5.8。其它与具体实施方式一相同。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
通过以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例1
1.材料来源
试验材料为黑龙江省帽儿山生长良好、无病虫害的紫叶稠李。
2.外植体选用
取4月末的生长良好、无病虫害的紫叶稠刚刚萌动的枝条，切取带有一个顶芽或侧芽的茎段。
3.外植体的消毒处理
首先用清水洗净，用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，取出清水冲洗3～5遍，再用体积百分含量为0.5％的次氯酸钠浸泡10min，再用无菌水冲洗3～5遍；
4.具体试验
4.1外植体芽诱导：
将外植体切成1～2cm的茎段置于外植体芽诱导培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc400～500mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L；
4.2增殖培养：
将上一步诱导组织置于增殖培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，增殖培养基为MS+Sm(NO3)330～45mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L；
4.3生根培养：
将上一步增殖培养的组织，置于生根培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，生根培养基为1/2MS+GA30.3～0.6mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～10mg/L；
上述培养基中均含有蔗糖30g/L及琼脂6g/L，pH均为5.8。
对以上培养基组分进行不同物质配比的比较分析如下：
表1不同组合对于外植体芽诱导的影响
由表1可知，最优的外植体芽诱导的培养基组分为：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc450mg/L+Sm(NO3)320mg/L。
表2不同组合对于组培增值效果的影响
由表2可知，最优的外增殖培养的培养基组分为：MS+Sm(NO3)340mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L。
表3不同组合对于生根效果的影响
由表3可知，最优的生根培养基组分为：1/2MS+GA30.5mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～8mg/L。
对生根后的紫叶稠李苗进行炼苗处理，处理过程如下：
在6月末至7月末将生根培养后的紫叶稠李苗扦插至扦插床中，在温室中进行炼苗；所述的扦插床为底层铺设10～15cm厚的河卵石、10～15cm厚的粗河砂和10～15cm厚的腐殖土，上层将活性炭：蛭石：珍珠岩按质量比为1:2:3的比例铺设；扦插后在温度为25～30℃，湿度大于70％的条件下，炼苗过程中需要在温度最高时进行通风处理，炼苗20～25d。
结果显示，移植成活率达80％左右，试管苗平均苗高为13.7cm。成活后的紫叶稠李继续栽植后，其苗形美观，色泽深绿，移栽后生长旺盛，有利于市场推广。通过对栽植后的紫叶稠李进行溶剂浸提法提取原花青素，表明提取的原花青素提取率为20.4％。

Claims (10)

1.一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：
一、外植体选择：
选取4月末的腋芽作为外植体；首先用清水洗净，用体积百分含量为75％的乙醇浸泡30s，取出清水冲洗3～5遍，再用体积百分含量为0.5％的次氯酸钠浸泡10min，再用无菌水冲洗3～5遍；
二、外植体芽诱导：
将步骤一处理后的外植体切成1～2cm的茎段置于外植体芽诱导培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc400～500mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L；
三、增殖培养：
将步骤二诱导组织置于增殖培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，增殖培养基为MS+Sm(NO3)330～45mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L；
四、生根培养：
将步骤三增殖培养的组织，置于生根培养基中，在温度为20～22℃，光照强度为2300lx，光照12～15h/d，培养30d；其中，生根培养基为1/2MS+GA30.3～0.6mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～10mg/L；
五、将步骤四生根后的紫叶稠李在6月末至7月末扦插至扦插床中，进行炼苗；所述的扦插床为底层铺设10～15cm厚的河卵石、10～15cm厚的粗河砂和10～15cm厚的腐殖土，上层将活性炭：蛭石：珍珠岩按质量比为1:2:3的比例铺设；扦插后在温度为25～30℃的条件下，炼苗20～25d，即完成所述的紫叶稠李繁殖方法。
2.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于所述的外植体芽诱导培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+IBA0.3mg/L+Vc450mg/L+Sm(NO3)320～25mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养基为MS+Sm(NO3)340mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+IBA0.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于所述的生根培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+IBA0.5mg/L+Ce(NO3)35～8mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于步骤五中扦繁殖过程是在温室中进行的。
6.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于步骤五中扦插的深度为2～3cm。
7.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于步骤五中扦插苗选择步骤四生根培养苗挺拔，株苗相对高的苗进行扦插。
8.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于步骤五中繁殖过程中空气湿度保持在70％以上。
9.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于步骤五中繁殖过程中每天温度最高时进行通风处理。
10.根据权利要求1所述的一种紫叶稠李繁殖方法，其特征在于MS培养基中含有蔗糖30g/L及琼脂6g/L，pH为5.8。
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