CN105228590A - 以包含生长因子及氨基酸为特征的功能性化妆品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含生长因子(Growth？factors)及氨基酸(Amino？acids)的功能性化妆品组合物，尤其涉及作为生长因子包含表皮生长因子(Epidermal？growth？factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast？growth？factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascular？endothelial？growth？factor)和作为氨基酸包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果的功能性化妆品组合物。本发明的包含三种生长因子及胶原蛋白生物合成氨基酸前驱体的功能性化妆品组合物及包含该组合物的功能性化妆品具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果。

Description

以包含生长因子及氨基酸为特征的功能性化妆品组合物
技术领域
本发明涉及包含生长因子(Growthfactors)及氨基酸(Aminoacids)的功能性化妆品组合物，尤其涉及作为生长因子包含表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)和作为氨基酸包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果的功能性化妆品组合物。
背景技术
一般而言，人的皮肤随着年龄的增加，因承担皮肤屏障功能的脂质层的脂质组成和含量的变化，其功能急剧降低，从而降低皮肤的水分含量，导致皮肤干燥，而且，引起各种皮肤病变。
现代人的过度的疲劳和压力或因环境污染导致的紫外线量的增加和大气污染等生成反应性高的活性氧、自由基及过氧化物，而皮肤受上述物质的影响导致人体成分(蛋白质、核酸、细胞膜脂质等)的氧化或变性，而这成为皮肤老化的主要原因。
尤其是，构成皮肤结合组织的胶原蛋白(collagen)成分等被氧化而丧失其功能，从而使皮肤失去弹力，过度形成皮肤的皱纹，变成老人状皮肤。
因此，为防止及改善皮肤老化，叫元旦被成分的补充是非常重要的，而人们以此为目的进行含有胶原蛋白成分的改善皮肤老化用功能性材料的研究。
另外，生长因子(growthfactor)是结合于位于细胞表面的受体(receptor)而刺激细胞的增殖和分化的蛋白质，因其功能非常多，所以刺激各种细胞的分裂，但在有些时候只作用于特异的细胞类型。生长因子是为细胞增殖的刺激的必需的成分，20年之前已展开研究，而结果表明可调节细胞分化、转移、增殖过程。
在上述生长因子中，表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)等作为改善皮肤老化的功能性材料得到广泛研究。
发明内容
技术课题
本发明的目的在于提供一种包含为皮肤细胞的再生的三种生长因子及胶原蛋白生物合成的氨基酸前驱体的具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果的功能性化妆品组合物及利用上述组合物的功能性化妆品。
技术方案
为达到上述目的，本发明提供一种功能性化妆品组合物，其特征在于：作为生长因子(Growthfactors)包含表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)和作为氨基酸(Aminoacids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)。
较佳地，上述生长因子为人类生长因子。
较佳地，上述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子在组合物中各以0.01～1.0ppm的浓度被包含。
较佳地，上述生长因子被30～200nm大小的纳米微脂囊捕集。
较佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸在组合物中各以1～300ppm的浓度被包含。
较佳地，上述功能性从改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化构成的组中选择。
另外，本发明提供利用本发明的上述化妆品组合物的功能性化妆品。
较佳地，上述化妆品从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、发毛营养剂、眼霜、营养霜、按摩膏、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、粉、精华、精华露及面膜构成的组中选择。
有益效果
本发明的包含三种生长因子及胶原蛋白生物合成氨基酸前驱体的功能性化妆品组合物及包含该组合物的功能性化妆品具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果。
附图说明
图1a为在DMEM培养液中人类成纤维细胞之后的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
图1b为在DMEM培养液中培养发育人类成纤维细胞的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
图1c为在各添加人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子的DMEM培养液中培养发育人类成纤维细胞的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
图2为在各添加本发明的实施例1的人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子的DMEM培养液中培养成纤维细胞并比较调查细胞增殖效果的结果曲线图；
图3为利用ELISA分析法调查在含有人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子和作为胶原蛋白前驱物质的脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的DMEM培养液中人类成纤维细胞的胶原蛋白的合成量的结果曲线图。
具体实施方式
下面，对本发明的进行详细说明。
本发明的发明人在进行关于包含对皮肤细胞再生有积极意义的三种生长因子的化妆品组合物的研究的过程中发现，若在上述组合物中添加作为胶原蛋白生物合成的前驱物质的脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸，则成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成明显增加，以此完成了将其用作功能性化妆品组合物的发明。
因此，本发明提供一种功能性化妆品组合物，其特征在于：作为生长因子(Growthfactors)包含表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)和作为氨基酸(Aminoacids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)。
较佳地，上述三种生长因子为人类生长因子。较佳的具体示例为，上述生长因子可使用从利用加密人类表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)的基因进行转型的大肠菌分离及提纯的生长因子。
较佳地，上述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子在组合物中各以0.01～1.0ppm的浓度被包含。若上述含量低于0.01ppm，则难以获得所希望的效果，而若上述含量高于1.0ppm，则将引起费用问题及因过量使用生长因子导致的人体安全性问题等。
较佳地，上述生长因子被30～200nm大小的纳米微脂囊捕集。本发明的生长因子成分存在皮肤渗透问题及长期放置于室温下是因失活而降低稳定性的问题，而这可通过被纳米微脂囊捕集来解决。较佳的具体示例为，上述纳米微脂囊可以卵磷脂为原料并利用微射流机制造，而本发明的生长因子可各自或一同捕集于卵磷脂粒子内。纳米微脂囊的制造方法是公知的，可采用任意方法。上述纳米微脂囊粒子为30～200nm为宜，若小于30nm，则因皮肤渗透过快而有可能引起皮肤副作用，而若大于200nm，则因难以渗透于皮肤而无法获得使用纳米微脂囊的效果。
较佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸在组合物中各以1～300ppm的浓度被包含。本发明的上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸是用于合成作为细胞外基质成分的胶原蛋白的氨基酸前驱体，与一同包含于组合物中的生长因子一同产生作用而用于细胞的胶原蛋白的合成。
上述功能性是指能改善皮肤状态的功能，例如有改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化等，但非限制。
如在下述实施例中所记载的那样，本发明的上述功能化妆品组合物对成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成具有显著的效果，因此，可用于改善皮肤状态的功能性化妆品中。
因此，本发明提供利用本发明的上述化妆品组合物的功能性化妆品。
上述化妆品从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、发毛营养剂、眼霜、营养霜、按摩膏、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、粉、精华、精华露及面膜构成的组中选择，但非限制。
较佳的具体示例为，本发明的化妆品组合物可制作成本发明所属技术领域熟知的化妆品，而包含于上述换装品的成分除作为有效成分的三种生长因子和胶原蛋白前驱物质之外，还可包括化妆品中通常使用的成分。例如，可包含其他有效成分、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料、香料等通常的辅助剂及载体。
较佳的具体示例为，本发明的化妆品可制作成本领域通常制作的任何剂型，例如溶液、混悬液、乳浊液、膏、凝胶、霜、乳液、粉、香皂、洁面霜、油、粉末粉底、乳浊液粉底、蜡状粉底、喷雾剂等。例如，在本发明的剂型为霜、乳液或凝胶时，可混合适当的油等油状成分、表面活性剂、水、增粘剂、稳定剂等制作成W/O或O/W形式的乳剂完成制作，而这样的制造方法是本领域技术人员熟知的。
下面，通过实验例对本发明进行更详细的说明。
[实施例]
实施例1
在本实施例1中，在细胞培养液中添加人类生长因子(EGF、FGF、VEGF)之后，观察对皮肤成纤维细胞的增殖促进效果。
(1)从人体组织分离成纤维细胞
取人腹部皮肤组织放入经灭菌的10cmbeaker中，并利用相同皮肤(1：1)的磷酸化缓冲溶液(D-PBS)清洗。在Cleanbench中投入20ml的D-PBS，用一只手利用forceps抓住组织并利用手术刀将皮肤组织切割成2mm以下的大小。回收切割的组织和溶液并以20ml为一份放入多个50ml离心分离用conicaltubes。添加相同量的0.15％collagenasetype-1溶液(Invitrogen)并在37℃下反应1-2小时。用D-PBS清洗之后，在400xg下离心分离5分钟。去除上清液。剩在底部的pellet添加10-40ml的D-PBS解开沉淀凝聚的细胞之后，使其通过70-100mmmeshfilterd以去除固体成分。回收的上清液放入10ml的DMEM+10％FBS培养液并在400xg下离心分离5分钟，扔掉上清液，清洗细胞。重复两次上述清洗过程，扔掉上清液，只留下细胞。
(2)培养液的制造
用于本试验的培养液在含有青霉素(100IU/mL)、链霉素(100g/mL)、10％FBS(fetalbovineserum)的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)培养基中作为生长因子各添加0.5PPM的人类表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)用作处理培养液。
(3)人类成纤维细胞的培养
在12-wellplate中国将成纤维细胞分株成每well1x105个之后，放入含有青霉素(100IU/mL)、链霉素(100g/mL)、抗真菌剂、10％FBS(fetalbovineserum)的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium，Gibco)单独培养液基或添加有人类表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)的DMEM培养液中，并在维持37℃的条件下，在包含5％二氧化碳的培养器内培养5天。
(4)人类成纤维细胞的发育效果鉴定
在培养5天之后，去除培养液，添加0.05％trypsin溶液并在培养器内反应5分钟分离细胞，利用离心分离法对其进行2次以上的清洗之后，只回收细胞。细胞数的测量和viability检查，是将0.1ml的细胞浮游液和相同量的0.2％trypanblue(SIGMA)混合之后，利用hemocytometer计算显微镜视野内被染色的细胞和未染色的细胞计算整体细胞中的百分比。
图1a至图1c为观察以1x105的数量在培养容器内接种人类成纤维细胞之后(图1a)和在未添加人类生长因子(EGF、FGF、VEGF)的DMEM培养液中培养5天之后(图1b)及在添加人类生长因子的DMEM培养液中培养55天之后(图1c)的细胞的增殖情况的示意图。在添加生长因子的处理组中成纤维细胞增殖62倍，但在未添加生长因子的对照组中增殖55倍，因此，生长因子的添加表现出值得关注的高的细胞生长效率。
实施例2
本实施例2在添加人类生长因子及胶原蛋白前驱物质的DMEM培养液中，观察人类成纤维细胞胶原蛋白(collagen)合成性能。
(1)从人体组织分离成纤维细胞
取人腹部皮肤组织放入经灭菌的10cmbeaker中，并利用相同皮肤(1：1)的磷酸化缓冲溶液(D-PBS)清洗。在Cleanbench中投入20ml的D-PBS，用一只手利用forceps抓住组织并利用手术刀将皮肤组织切割成2mm以下的大小。回收切割的组织和溶液并以20ml为一份放入多个50ml离心分离用conicaltubes。添加相同量的0.15％collagenasetype-1溶液(Invitrogen)并在37℃下反应1-2小时。用D-PBS清洗之后，在400xg下离心分离5分钟。去除上清液。剩在底部的pellet添加10-40ml的D-PBS解开沉淀凝聚的细胞之后，使其通过70-100mmmeshfilterd以去除固体成分。回收的上清液放入10ml的DMEM+10％FBS培养液并在400xg下离心分离5分钟，扔掉上清液，清洗细胞。重复两次上述清洗过程，扔掉上清液，只留下细胞。
(2)培养液的制造
用于本试验的培养液在含有青霉素(100IU/mL)、链霉素(100g/mL)、10％FBS(fetalbovineserum)的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)培养基中作为生长因子各添加0PPM的人类表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)并作为胶原蛋白前驱物质各添加100PPm的脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)用作处理培养液。
(3)人类成纤维细胞的培养
在12-wellplate中国将成纤维细胞分株成每well1x105个之后，放入含有青霉素(100IU/mL)、链霉素(100g/mL)、抗真菌剂、10％FBS(fetalbovineserum)的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium，Gibco)单独培养液基或添加有人类表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)和作为胶原蛋白前驱物质添加有脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的DMEM培养液中，并在维持37℃的条件下，在包含5％二氧化碳的培养器内培养5天。
(4)试验液体内的胶原蛋白量的测量
胶原蛋白量的测量用了ELISA方法(Sircolsolublecollagenassaykit)。即，相1.5mlconicalmicrotubes投入试料1.0ml并投入acidneutralisingreagent100μl。在此，投入isolationandconcentrationreagent200μl进行搅拌。在冰水中反应一夜之后，以12,000rpm离心分离10分钟。去除上清液并添加Sircoldyereagent1.0ml。接着，在450nm下测量ELISAreader。标准液的制造是在向胶原蛋白标准品添加水急性溶解并各稀释成0、10、20、30、40、50μg/ml。
图3为将本实施例2的人类成纤维细胞以1x106的数量接种至75T烧瓶中并培养5天之后，利用ELISA法测量胶原蛋白生成量的结果示意图。胶原蛋白生成量在未添加人类生长因子(EGF、FGF、VEGF)和作为胶原蛋白前驱体的脯氨酸和丝氨酸的培养液(对照组)中为48μg/ml，而在添加人类生长因子(EGF、FGF、VEGF)和作为胶原蛋白前驱体的脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸的培养液(处理组)中为170μg/ml。在培养期间内，在添加生长因子及前驱物质的处理组中增加34倍，而在未添加生长因子及前驱物质的对照组中增加9.6倍，因此，生长因子和前驱物质的添加表现出值得关注的高的胶原蛋白合成能力。
从图2和图3的结果可知，根据本发明的方法获得的功能性化妆品组合物促进成纤维细胞的增殖，增加胶原蛋白的合成，因此，可有效适用于以防皮肤老化及防皱纹等为目的的功能性化妆品中。

Claims (8)

1.一种功能性化妆品组合物，其特征在于：作为生长因子(Growthfactors)包含表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor)和作为氨基酸(Aminoacids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)。
2.根据权利要求1所述的功能性化妆品组合物，其特征在于：上述生长因子为人类生长因子。
3.根据权利要求1所述的功能性化妆品组合物，其特征在于：上述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子在组合物中各以0.01～1.0ppm的浓度被包含。
4.根据权利要求1所述的功能性化妆品组合物，其特征在于：上述生长因子被30～200nm大小的纳米微脂囊捕集。
5.根据权利要求1所述的功能性化妆品组合物，其特征在于：上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸在组合物中各以1～300ppm的浓度被包含。
6.根据权利要求1所述的功能性化妆品组合物，其特征在于：上述功能性从改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化构成的组中选择。
7.一种利用根据权利要求1所述的化妆品组合物的功能性化妆品。
8.根据权利要求7所述的功能性化妆品，其特征在于：上述化妆品从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、发毛营养剂、眼霜、营养霜、按摩膏、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、粉、精华、精华露及面膜构成的组中选择。
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