CN102475636A - 模拟细胞外基质的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物 - Google Patents
模拟细胞外基质的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102475636A CN102475636A CN2011103851083A CN201110385108A CN102475636A CN 102475636 A CN102475636 A CN 102475636A CN 2011103851083 A CN2011103851083 A CN 2011103851083A CN 201110385108 A CN201110385108 A CN 201110385108A CN 102475636 A CN102475636 A CN 102475636A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cell
- compositions
- weight
- adipose
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/06—Tripeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种作为有效成分而含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物。本发明的组合物由于增进脂肪来源干细胞的干细胞性,由此对美容或整形为目的的脂肪组织的增加有用。因此,本发明的组合物能够增进皮肤饱满感,促进脂肪来源干细胞的再生,并恢复损伤的皮下脂肪的功能,因此能够作为用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物而使用,并且能够作为皮肤外用剂组合物来使用。
Description
技术领域
本发明涉及对细胞外基质进行模拟,使得干细胞的特性得以维持以及增进的干细胞性增进用组合物。
背景技术
皮肤由表皮、真皮以及皮下组织构成,真皮组织中作为三维的支撑体具有含有无机盐类、营养成分,废物等的水溶液和多糖类大分子等的细胞外基质(extracellular matrix:以下称之为ECM)成分。这些在包围细胞的空间内形成网络而维持并支承组织的形态,起到调节细胞间的信号传递以及细胞的生长和分化的重要的作用。
至今为止,被模拟的ECM成分大部分来自于动物。但是,来自动物的成分中,病原体感染等安全性问题渐渐显现,因此具有不在化妆品使用的趋势。
已知占ECM总体的70~80%的主要成分胶原蛋白是长度较长的纤维结构的蛋白质中的一种,对皮肤强度和弹性进行调节,因此与皮老化即弹性减少或皱纹的形成等有密切的关联。但是,目前使用的大部分胶原蛋白为来自动物的原料,是分子量为约30万Da左右的高分子,因此对经皮肤的传达而言,胶原蛋白本身具有吸收的限度。
作为ECM成分之一的透明质酸(hyaluronic acid)能够起到使皮肤内真皮组织的细胞相互结合并传递营养成分的作用,使皮肤能够维持适量的水分。但是,由于透明质酸是分子量在数十万到数百万的高分子,因此由于粘度高而用于化妆品时使用量受限,且具有直接涂抹在皮肤时很难透过皮肤的缺陷。
皮肤为构成人体的器官中最大的器官,占我们身体体积的约16%,面积为1.8m2,厚度为2~4mm,重量为约3kg,由表皮、真皮以及皮下脂肪层构成。这种皮肤与外部环境直接接触而起到使人体免受人体有害微生物之类的多种有害因子和紫外线等外部刺激的影响的重要的保护膜作用,并且是营造全身的代谢所需的生化功能的对生命维持必不可少的器官。尤其,存在于真皮下方的皮下脂肪层由脂肪细胞(adipocyte)的小叶构成,针对外部的热量起到保护皮肤内部的器官以及吸收冲击的缓冲作用,将营养成分以甘油三酸酯(Triglyceride)的形态储存在称之为脂肪体(Lipid droplet)的细胞小器官中,需要时作为能量源来使用。但是,随着年龄的增加,皮肤因自然性因素和各种外部刺激而受到损伤,尤其,真皮中左右弹性的胶原纤维(胶原蛋白)、弹性纤维(弹性蛋白)的活性以及表达降低,从而弹性降低的同时皮下脂肪中的脂肪生成也减少,结果皮肤全面性地无法正常实现各构成细胞的原本的功能。因此,现在广泛使用的方法为脂肪移植手术,它是利用具有郁金香针(tulipneedle)形状的尖部不锋利的针的注射器,采集自身的脂肪而移植到看上去弹性降低的皮肤的各个部位的手术。但是,有报告指出,在脂肪移植手术以后,移植体积的40~60%重新被吸收到体内,皮肤薄且皮下脂肪少的部位上进行的脂肪移植手术中被指出存在能够摸到细胞块等问题,且实际上移植的脂肪的生存率和生存时间无法达到预期而发生需要再次进行移植的情形。
因此,对能够代替存在这些问题的脂肪移植手术且能够增加足够的皮下脂肪层的组合物的要求提高。另外,由于皮肤的基本结构由皮下脂肪组织来维持,且这些皮下脂肪组织起到左右皮肤的体积和强度的作用,因此与以往使用的给皮肤外围层的真皮或表皮赋予弹性的方法相比,增加脂肪组织的体积的方法反而会对维持皮肤的饱满感起到更好的效果。
因此,为了维持以及增进皮肤的饱满感,期待开发出能够增加脂肪组织的体积的组合物。
发明内容
为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种能够使可增加脂肪组织的脂肪来源干细胞的干细胞性增进,并且能够增加皮肤饱满感的组合物。
为实现上述目的,本发明提供一种作为有效成分而含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物。
另外,本发明提供一种作为有效成分而含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物。
另外,本发明提供一种作为有效成分而含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的用于增进皮肤饱满感的皮肤外用剂组合物。
本发明的组合物中,三肽、低分子量透明质酸、矿物质成分以及维生素等在包围细胞的空间中形成网络而维持并支撑组织的形态,并调节细胞间的信号传递以及细胞的生长和分化,从而增进脂肪来源干细胞的干细胞性,因此对美容或整形为目的的脂肪组织增加有效。因此,本发明的组合物能够增进皮肤饱满感,促进脂肪来源干细胞的再生,恢复损伤的皮下脂肪的功能,从而能够作为用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物而使用,并且能够作为皮肤外用剂组合物来使用。
附图说明
图1是表示为了研究本组合物的细胞毒性,对人的脂肪来源干细胞(human adipose derived stem cells,hADSCs)以0.0001~10%浓度的本发明的ECM模拟组合物进行处理,并利用CCK-8试剂盒来确认细胞毒性程度的结果的图表。liquiderm表示本发明的实施例1的组合物。
图3为通过流式细胞分析而显示脂肪来源干细胞中表达CD29、44的细胞数量变化的图。liquiderm表示本发明的实施例1的组合物。
图4是为了研究本发明的组合物对脂肪来源干细胞的生长因子的表达起到的影响,显示实施了生长因子阵列的结果的图。liquiderm表示本发明的实施例1的组合物。
具体实施方式
以下,详细说明本发明。
本发明提供一种将由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素作为有效成分而含有的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物。上述干细胞性(stemness)是指带有干细胞的自我再生能力和动态平衡,且具有干细胞的活性的状态;干细胞性增进是指维持干细胞性或增加干细胞的活性。
本发明的一实施例中,上述组合物为对细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)进行模拟而成,与来自动物的ECM不同,是由来自于植物或合成物质构成的ECM模拟组合物。
本发明的一实施例中,上述脂肪来源干细胞(Adipose derived stemcell:ADSC)是人脂肪来源干细胞(human adipose derived stem cells,hADSCs)。
本发明的一实施例中,上述组合物使脂肪组织增加而提高皮肤的饱满感。上述组合物促进脂肪来源干细胞分化为脂肪细胞而生成脂肪体(Lipid droplet)。因此,使脂肪组织增加而给特定部位的皮肤提高饱满感。
本发明的一实施例中,上述组合物能够增加作为脂肪来源干细胞标记物的分化群29(Cluster of Differentiation29:以下称之为CD29)、分化群44(Cluster of Differentiation 44:以下称之为CD44)、分化群73(Cluster of Differentiation 73:以下称之为CD73)、分化群90(Clusterof Differentiation 90:以下称之为CD90)或分化群105(Cluster ofDifferentiation 105:以下称之为CD105)的表达量。与阴性对照组比较,CD29、CD44、CD73、CD90或CD105的表达量的增加意味着脂肪来源干细胞的活性的增加。CD29为整合素β1(integrin beta 1)的别称,是脂肪来源干细胞的标记物,CD44通过Wnt信号(signaling)活性而增加脂肪来源干细胞的活性。CD73是5′-核苷酸酶(5`-nucleotidase)的别称,是将核苷酸转化为核苷的酶,是脂肪来源干细胞的标记物,CD90是Thy1的别称,是干细胞的代表性标记物,CD105为内皮糖蛋白(Endoglin)的别称,是TGFb的受体的一部分,是脂肪来源干细胞的标记物。
本发明的一实施例中,上述组合物能够使脂肪来源干细胞的生长因子的表达量增加,具体地,可使干细胞因子(Stem cell factor:以下称之为SCF)的表达量增加。与阴性对照组比较,生长因子的表达量的增加意味着脂肪来源干细胞的活性的增加。
本发明的一实施例中,相对于组合物总重量,上述组合物可含有0.001~3重量%的三肽,0.01~50重量%的低分子量透明质酸,0.001~3重量%的矿物质以及0.001~3重量%的维生素。
相对于组合物总重量,本发明的三肽未达到0.001重量%时,其效果甚微;超过3重量%时,相比含量的增加,其功效增加不大,丧失价格的竞争力。
上述三肽(tripeptide)由3个氨基酸,即甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成,促进胶原蛋白的生成,且分子量低,因此皮肤透过性高。另外,由于上述三肽是通过合成来制备,因此纯度高,且由于不是来自动物的成分,具有不存在病原体感染等安全性问题的优点。
将胶原蛋白用酸进行水解时,产生多种断片而难以切断成三肽,而利用酶来进行分解时,对降低分子量具有限度。因此,本发明以氨基酸作为基础采用逆向合成的方式,因此能够获得均质的三肽。本发明的三肽可采用本领域通常的氨基酸合成方法来制备,该方法无特别限定。
相对于组合物总重量,本发明的低分子量透明质酸可使用0.001~50重量%、优选使用0.01~10重量%。上述低分子量透明质酸(hyaluronic acid)比高分子透明质酸易于皮肤吸收,表现出优秀的皮肤保湿、皱纹改善、伤口治愈以及抗炎效果。本发明的低分子量透明质酸可具有500~10000道尔顿的分子量。这是由于,500道尔顿以下的透明质酸难以制备及分离,超过10000道尔顿时难以透过皮肤而无法体现其效果,且粘度增加而稳定性差。
上述低分子量透明质酸可采用本领域通常方法来制备,其方法无特别限定。具体例子可以举出如下方法将高分子量的透明质酸低分子化:利用高温加热及超声波的方法、利用酸或碱催化剂的方法、利用过硫酸铵等分解催化剂的方法、或使用透明质酸酶的方法等。
相对于组合物总重量,本发明的矿物质成分以0.001~3重量%的量含有。未满0.001重量%时,其效果甚微;超过3重量%时对皮肤的动态平衡有害,因此不优选。
上述矿物质可以为选自氯化镁(magnesium chloride)、氯化钙(calcium chloride)、氯化钾(potassium chloride)、氟化镁(Magnesiumfluoride)、氟化锰(Manganese fluoride)、硫酸锰(Manganese sulfate)、硫酸锌(zinc sulfate)、硫酸镁(magnesium sulfate)以及硫酸铜(coppersulfate)中的一种以上,但并非仅限于此。
上述氯化镁、氯化钙以及氯化钾会参与表皮分化,氟化镁、氟化锰、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁以及硫酸铜等矿物质成分是细胞动态平衡和皮肤保护中所需的。
相对于组合物总重量,本发明的维生素以0.001~3重量%的量含有。未满0.001重量%时,其效果甚微;超过3重量%时会发生变色、变臭等而阻碍组合物的稳定性。
上述维生素可以为选自肌醇、抗坏血酸、泛酸、烟酸、叶酸、硫胺素、核黄素以及其衍生物中的一种以上,但并非仅限于此。
本发明的一实施例提供一种作为有效成分而含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物。
相对于组合物总重量,上述有效成分可含有0.0001~0.1重量%、可优选含有0.0001~0.001重量%。未达到0.0001重量%时,效果甚微;若超过0.1重量%时,存在显示细胞毒性的问题。
上述组合物例如可用于以下目的使用,即通过形成乳房组织而进行的隆胸,微细脂肪移植术、自身脂肪移植术等增进脸部皮肤的饱满感而去除八字型皱纹、眉间皱纹以及维持弹性,但并非仅限于此。
上述组合物可根据药学领域的通常方法来制成适于向患者体内给药的单位给药型制剂来进行给药。符合此目的的剂型优选为作为非口服给药剂型的注射剂或局部给药用制剂等。注射用剂型优选为等渗水溶液或悬浊液。但此时能够将通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或塑形剂一同使用。
这样制备的本发明的制剂可根据通常的方法经非口服,例如向特定部位直接给药。此时,组合物注入利用注射器来实现。上述组合物的1日给药量为1×105到1×107细胞/kg体重、优选为5×105到5×106细胞/kg体重,可分成1次或数次来给药。但是,应理解,有效成分的实际给药量应根据所要分化以及增殖的脂肪细胞的量、给药途径、患者的体重、年龄以及性别等多种相关因素来确定,因此,上述给药量不论是在任何方面上都并非用以对本发明范围进行限定。
本发明的一实施例提供一种作为有效成分含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸(Gly-Pro-Hyp)构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素的用于增进皮肤饱满感的皮肤外用剂组合物。
相对于组合物总重量,上述有效成分可含有0.0001~0.1重量%、可优选含有0.0001~0.001重量%。未达到0.0001重量%时,效果甚微;若超过0.1重量%时,存在显示细胞毒性的问题。
上述皮肤外用剂组合物可以为化妆料组合物或药物组合物。
上述化妆料组合物的剂型没有特别限制,可按需要适当进行选择。例如制备成柔肤水、营养化妆水、按摩霜、精华、营养霜或面膜等剂型,但并非仅限于此。
上述药物组合物可以为洗剂、软膏、凝胶、霜、贴片或喷雾剂等经皮给药型剂型,但并非仅限于此。
就根据各剂型的皮肤外用剂组合物而言,除了上述本发明的组合物之外的其它成分可由本领域技术人员根据其它皮肤外用剂的剂型或使用目的等而毫无难度地进行适当选择并进行配比,此时,与其它原料一同使用时可起到协同效果。
另外,本发明的组合物作为药物组合物来使用时,可进一步含有防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳化促进剂、用于渗透压调节的盐或缓冲剂等药物辅料以及其它治疗上有效的物质,根据通常的方法以多种口服或非口服给药形态进行剂型化。
应理解,有效成分的实际给药量应根据症状的严重度、选择的给药途径、对象的年龄、性别、体重以及健康状态等多种相关因素来决定。
通常,有效成分的给药量为0.001mg/kg/日到大约2000mg/kg/日的范围。更优选的给药量为0.5mg/kg/日到2.5mg/kg/日。
根据本发明的增进脂肪来源干细胞的干细胞性的组合物的适用部位包括身体的所有脂肪组织,不限定在特定部位上,例如,可包括脂肪层少的脸部。另外,上述脂肪组织的增加效果有:美容或整形目的的脂肪组织增加效果所致的皮肤饱满感增加效果,但并非限定于此。
以下,通过下述实施例以及实验例来对本发明进行更具体的说明,但这仅仅是用于例示本发明,本发明的范围不被此限定。
[实施例1]
以下述表1的组成来制备了模拟细胞外基质(ECM)的组合物。肌醇、抗坏血酸分别作为维生素B、C来使用,烟酰胺作为维生素B3即烟酸的衍生物来使用。硫酸锌、氯化钾、氯化钙、硫酸镁以及硫酸铜作为矿物质成分来使用。寡聚透明质酸从BIOLAND株式会社购入而使用,三肽从A&PEP株式会社购入而使用。
表1
[实验例1]研究在人脂肪来源干细胞中的细胞毒性
将脂肪来源干细胞在75cm2T-flask中进行传代培养,在CO2培养箱(CO2Incubator)中以37℃,5%CO2的条件下进行培养。一般在第二次或第三次中进行了细胞的传代培养(passage)。
将人脂肪来源干细胞(human adipose derived stem cells,hADSCs)从龙沙公司(Lonza,Inc.Walkersville,MD,USA)购入,并根据龙沙公司的说明书来进行培养。为了研究该组合物的细胞毒性,以0.0001~10%的浓度进行处理,并利用CCK-8试剂盒(Dojindo)确认了细胞毒性程度。从图1的结果可知,在以0.001%的浓度处理时无细胞毒性,且达到了约10%左右的细胞分裂增进效果。
[实验例2]测定对于脂肪来源干细胞标记物基因的表达水平的效果
脂肪来源干细胞的氧化胁迫是用过氧化氢(H2O2)以200uM浓度进行了24小时处理,为了研究脂肪来源干细胞的干细胞性增进效果,将该组合物以0.001%添加到培养基内。去掉脂肪来源干细胞的细胞培养液,用2ml磷酸盐缓冲液(Phosphate Bufiered Saline,PBS)洗涤细胞之后,然后,使用总RNA提取试剂(Trizol reagent,Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)分离了细胞内的RNA。
将分离后的RNA用凯杰公司的RNA试剂盒(QIAGEN RNeasy kt,QIAGEN,Valencia,CA)再次提纯后,使用安捷伦公司的2100型生物分析仪(Agilent 2100BioAnalyzer,Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)确认了RNA的质量(quality)。利用英杰公司的逆转录酶试剂盒(Superscript Reverse Transcriptase(RT)kit,Invitrogen,Carlsbad,CA)从上述RNA合成了eDNA,将此通过实时逆转录聚合酶链反应(realtime-reverse transcription polymerase chain reaction,Q-RT-PCR)进行了定量分析。
脂肪来源干细胞中CD29、44、73、90、105基因的表达图案变化是利用应用生物系统公司的TaqMan基因表达系统(TaqMangeneexpression assay kit,Applied Bosystems,Foster City,CA)(CD29基因引物:Hs00559595_m1,CD44基因引物:Hs01075861_m1,CD73基因引物:Hs01573922_m1,CD90基因引物:Hs00174816_m1,CD105基因引物:Hs00923996_m1)进行了评价,并将其结果显示在图2中。确认了各基因的表达量比阴性对照组增加了约50%左右。这样的增加在统计学上具有显著性,且该统计是利用双侧t检验进行了验证,表示了当p值在0.05以下时具有显著的差异。
[实验例3]通过流式细胞分析的脂肪来源干细胞的测定
将人脂肪来源干细胞以0.25%胰蛋白酶(Trypsin-EDTA)从75cm2Ti瓶中进行分离后,以1500rpm使细胞沉淀5分钟后,去掉培养液后,加入3ml封闭液:封闭缓冲液、2%胎牛血清(Fetal calf serum:FCS)及2%牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin(BSA)KGM-2),使细胞悬浊。
使细胞(约106个细胞)在4℃适应()15分钟后,将附着有FITC(异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate))的CD44抗体(Cat No.560977)(BD Pharmingen,CA,US)和附着有PE-Cy(藻红蛋白-花菁(phycoerythrin-cyanine))的CD29抗体(Cat No.559882)(BDPharmingen,CA,US)各以100∶1加入,在4℃下反应45分钟。另一方面,作为阴性对照组来使用的细胞中将FITC Rat IgG2a,k同种型(isotype)(Cat No.555742)和PE-Cy5mouse IgG1 k同种型(Cat No.555750)也以100∶1加入,在4℃下反应45分钟。
反应结束后用3ml洗涤缓冲液(2%Bovine Serum Albumin(BSA)KGM-2)洗涤2次后,使细胞悬浊。此后用FACSCalibur(BDBioscience,San Jose,CA,U.S)观察脂肪来源干细胞中表达CD29、44的细胞的数量的变化,将其表示于图3、表2中。
表2
阴性对照组 | 组合物处理组 | |
表达CD29的脂肪来源干细胞 | 2558 | 4183 |
表达CD29的脂肪来源干细胞 | 增加% | 85% |
表达CD44的脂肪来源干细胞 | 3112 | 3747 |
表达CD44的脂肪来源干细胞 | 增加% | 52% |
参照图3和表2可确认,相比阴性对照组,CD29增加了85%,CD44增加了42%。
[实验例4]确认脂肪来源干细胞的生长因子的表达
为了研究本发明的组合物对脂肪来源干细胞的生长因子表达造成的影响,实施了生长因子阵列(Growth factor array,Raybio)。
收获以各条件分别进行培养的脂肪来源干细胞的培养液(conditioned medium)而完成了生长因子阵列。用2ml的封闭液在室温处理30分钟之后,将1ml培养液在常温进行了2小时的处理。此后以2ml的洗涤缓冲液每次5分钟洗涤5次后,与结合了生物素(Biotin)的抗生长因子(anti-growth factor)抗体在常温下反应了2小时。进一步以2ml的洗涤缓冲液每次5分钟洗涤5次后,以结合有HRP的链酶亲和素(streptoavidin)2ml进行处理而反应2小时,利用洗涤缓冲液洗涤后,与检测(detection)缓冲液进行反应,用LAS-3000(Fujifilm)仪器进行显像。
根据图4,分析了共41种的生长因子的结果,分析出氧化胁迫导致分泌量减少10%以上,且由本组合物的处理导致增加10%以上的生长因子为干细胞因子(Stem cell factor,SCF)。这样的增加在统计学上具有显著性,且该统计是利用双侧t检验进行了验证,表示了当p值在0.05以下时具有显著的差异。
[剂型例1]柔肤水
利用表3所示的组成,通过通常的制备方法制备了含有上述实施例1的柔肤水剂型。
表3
成分 | 含量(重量%) |
甜菜碱 | 3.0 |
纳托胶 | 3.0 |
纤维素胶 | 0.005 |
乙醇 | 10.0 |
聚氧乙烯氢化蓖麻油 | 0.2 |
醋酸维生素E | 2.0 |
实施例1 | 10 |
防腐剂 | 微量 |
色素 | 微量 |
香料 | 微量 |
纯净水 | 余量 |
[剂型例2]营养化妆水
利用表4所示的组成,通过通常的制备方法制备了含有上述实施例1的营养化妆水剂型。
表4
[剂型例3]霜
利用表5所示的组成,通过通常的制备方法制备了含有上述实施例1的霜剂型。
表5
以上对本发明的特定部分进行了详细叙述,本领域技术人员应知悉这种具体的技术仅仅是优选的实施例而已,这并不会对本发明的范围进行限定。因此,本发明的实质上的范围由权利要求及其等同物来定义。
Claims (15)
1.一种脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物,其中,作为有效成分含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素。
2.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述组合物模拟了细胞外基质。
3.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述脂肪来源干细胞为人脂肪来源干细胞。
4.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述组合物通过增加脂肪组织而使皮肤增进饱满感。
5.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述组合物增加作为脂肪来源干细胞标记物的CD29、CD44、CD73、CD90或CD105表达量。
6.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述组合物增加脂肪来源干细胞的生长因子的表达量。
7.根据权利要求6所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述生长因子为SCF。
8.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,相对于组合物的总重量,所述组合物含有0.001~3重量%的三肽、0.01~50重量%的低分子量透明质酸、0.001~3重量%的矿物质以及0.001~3重量%的维生素。
9.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,低分子量透明质酸具有500~10000道尔顿的分子量。
10.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述矿物质为选自氯化镁、氯化钙、氯化钾、氟化镁、氟化锰、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁以及硫酸铜中的一种以上。
11.根据权利要求1所述的干细胞性增进用组合物,其中,所述维生素为选自肌醇、抗坏血酸、泛酸、烟酸、叶酸、硫胺素、核黄素以及其衍生物中的一种以上。
12.一种用于增进皮肤饱满感的皮肤美容或整形用组合物,其中,作为有效成分含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素。
13.根据权利要求12所述的用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物,其中,相对于组合物总重量,含有0.0001~10重量%的所述有效成分。
14.一种用于增进皮肤饱满感的皮肤外用剂组合物,其中,作为有效成分含有由甘氨酸-脯氨酸-羟基脯氨酸构成的三肽、低分子量透明质酸、矿物质以及维生素。
15.根据权利要求14所述的用于增进皮肤饱满感的皮肤外用剂组合物,其中,相对于组合物总重量,含有0.0001~10重量%的所述有效成分。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020100120373A KR101859499B1 (ko) | 2010-11-30 | 2010-11-30 | 세포외기질을 모사한 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물 |
KR10-2010-0120373 | 2010-11-30 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102475636A true CN102475636A (zh) | 2012-05-30 |
CN102475636B CN102475636B (zh) | 2016-05-18 |
Family
ID=46088494
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201110385108.3A Active CN102475636B (zh) | 2010-11-30 | 2011-11-28 | 模拟细胞外基质的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101859499B1 (zh) |
CN (1) | CN102475636B (zh) |
HK (1) | HK1169959A1 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107468704A (zh) * | 2017-09-14 | 2017-12-15 | 上海市第十人民医院 | 硫酸镁在软组织肿胀疾病中的应用及其含有硫酸镁的眼膜贴 |
CN110279607A (zh) * | 2013-07-31 | 2019-09-27 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 含有生物液体仿流体的皮肤外用剂组合物 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102123268B1 (ko) * | 2019-06-11 | 2020-06-17 | 브렉소젠 주식회사 | 히알루론산을 포함하는 줄기세포 유래 엑소좀 생성 촉진 및 줄기세포능 증가용 조성물 |
CN117384828A (zh) * | 2019-06-10 | 2024-01-12 | 布瑞克斯奥根株式会社 | 用于促进干细胞来源外泌体产生和增加干性的包含透明质酸的组合物 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20080057091A1 (en) * | 2006-07-07 | 2008-03-06 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic use |
CN101277713A (zh) * | 2005-09-29 | 2008-10-01 | 株式会社芳珂 | 用于促进ⅰ型胶原蛋白产生的组合物 |
CN101400787A (zh) * | 2006-01-27 | 2009-04-01 | 株式会社Prostemics | 采用脂肪来源成体干细胞大量制造生长因子的方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030068297A1 (en) * | 2001-08-18 | 2003-04-10 | Deepak Jain | Composition and methods for skin rejuvenation and repair |
-
2010
- 2010-11-30 KR KR1020100120373A patent/KR101859499B1/ko active IP Right Grant
-
2011
- 2011-11-28 CN CN201110385108.3A patent/CN102475636B/zh active Active
-
2012
- 2012-10-30 HK HK12110837.2A patent/HK1169959A1/zh unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101277713A (zh) * | 2005-09-29 | 2008-10-01 | 株式会社芳珂 | 用于促进ⅰ型胶原蛋白产生的组合物 |
CN101400787A (zh) * | 2006-01-27 | 2009-04-01 | 株式会社Prostemics | 采用脂肪来源成体干细胞大量制造生长因子的方法 |
US20080057091A1 (en) * | 2006-07-07 | 2008-03-06 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic use |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110279607A (zh) * | 2013-07-31 | 2019-09-27 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 含有生物液体仿流体的皮肤外用剂组合物 |
CN107468704A (zh) * | 2017-09-14 | 2017-12-15 | 上海市第十人民医院 | 硫酸镁在软组织肿胀疾病中的应用及其含有硫酸镁的眼膜贴 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1169959A1 (zh) | 2013-02-15 |
CN102475636B (zh) | 2016-05-18 |
KR101859499B1 (ko) | 2018-05-21 |
KR20120058866A (ko) | 2012-06-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101926741B (zh) | 一种活肤菁华及含有该活肤菁华的护肤品 | |
CN102477411B (zh) | 含有苹果干细胞提取物的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物 | |
US20140186315A1 (en) | Cosmetic composition containing green tea component | |
CN103271837B (zh) | 生物活性化妆品配方及其制作方法 | |
CN110339147A (zh) | 一种皮肤外用组合物及其用途 | |
CN105078873A (zh) | 一种具有紧致美白功效的生物护肤组合物 | |
KR20210003156A (ko) | 장미 열매의 수성 추출물을 포함하는 화장료 조성물 | |
CN103054771A (zh) | 一种超弹锁水面膜精华液及其制备方法 | |
CN108836919B (zh) | 保湿化妆品组合物及其制备方法和应用 | |
CN105228590A (zh) | 以包含生长因子及氨基酸为特征的功能性化妆品组合物 | |
CN102421412B (zh) | 含有日本扁柏多糖的皮肤外用组合物 | |
CN102078266A (zh) | 一种化妆品组合物 | |
CN103385820A (zh) | 一种修护眼霜 | |
CN108379215A (zh) | 一种具有美白肌肤功效的冻干粉组合物和包含该冻干粉组合物的化妆品组合物 | |
KR20150120426A (ko) | 갈조류 추출물, 효모 추출물 및 아스코르브산을 함유하는 화장료 조성물 | |
EP3656850A1 (en) | Mesenchymal-stem-cell induction agent | |
CN102475636A (zh) | 模拟细胞外基质的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用组合物 | |
CN102988193A (zh) | 一种能促进细胞新生及延缓皮肤老化的医学美容多胜肽 | |
KR20100096447A (ko) | 돼지 태반 조직 유래 줄기세포의 배양물 및 그 추출 단백질을 함유한 화장료용 조성물 | |
CN104323966A (zh) | 黄金水疗组合物及其使用方法 | |
CN102477410B (zh) | 含有双歧杆菌提取物的脂肪来源干细胞的干细胞性增进用以及皮肤细胞增殖用组合物 | |
CN101299991A (zh) | 成纤维细胞激活剂及成纤维细胞活化方法、胶原合成促进剂及胶原合成促进方法、以及皮肤老化预防剂及皮肤老化预防方法 | |
CN110151677A (zh) | 基因修饰的间充质干细胞提取物、提取方法及在皮肤紧致和抗衰老方面的应用 | |
WO2022071610A1 (ja) | 皮膚の健康状態を増進及び/又は改善するための組成物及びその製造方法 | |
CN102470091A (zh) | N-十六酰异亮氨酸作为人皮肤“丰盈”剂和/或“丰满”剂的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1169959 Country of ref document: HK |
|
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: GR Ref document number: 1169959 Country of ref document: HK |