CN105213920A

CN105213920A - 益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用

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Publication number: CN105213920A
Application number: CN201510650426.6A
Authority: CN
Inventors: 康文艺; 王金梅; 朱晓娣; 余琦; 何楠
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2015-10-10
Filing date: 2015-10-10
Publication date: 2016-01-06
Anticipated expiration: 2035-10-10
Also published as: CN105213920B

Abstract

本发明属于中药技术领域，具体涉及益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。该益智叶提取物为其乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃取物。本发明采用了四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠模型，考察其保肝活性。实验结果表明：益智叶乙酸乙酯部位萃取物和正丁醇部位萃取物均能显著的降低肝损伤小鼠血清中MDA含量和GOT活力，并升高SOD活力；且正丁醇部位萃取物对GPT活力也能够显著降低，说明抗脂质过氧化可能是其主要作用机制之一，可用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。

Description

益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。

背景技术

肝脏疾病是影响人类健康的最为常见的疾病之一，从各种途径进入人体的外源性化学物质和人体代谢产生的有毒有害物质最终都在肝内转化或贮留，这些均可引起急性、慢性肝损伤，从而导致肝细胞不同程度凋亡、炎症、纤维化、甚至坏死等病理改变。肝损伤是多种因素如毒物（CCl₄、AP、IC）的中间产物与大分子物质共价结合、缺氧、脂质过氧化、细胞内钙稳态失调和内毒素相互作用的结果，而非单一的作用。

对于肝脏疾病的治疗应包括：去除致病因素、保护肝脏正常结构和功能、纠正各种病理生理的状态，以及改善和缓解临床症状等。目前，对肝脏疾病的防治已为全世界所关注，如何进行有效地预防，不断地开发和寻找疗效肯定、价格低廉的保肝护肝药成为许多医药工作者的普遍共识。从天然植物中筛选出具有保肝护肝的药物现已成为研究热点。

四氯化碳（CCl₄）肝损伤模型是化学性肝损伤的经典模型，能准确反映肝细胞的功能、代谢及形态学变化，具有重复性好等特点，是研究化学性急性肝损伤动物模型中的常用模型。公认的其诱导肝损伤的机制为：四氯化碳（CCl₄）在肝细胞内质网上细胞色素P450的作用下转化为自由基·CCl₃，该自由基可以与细胞内的生物大分子如核酸、蛋白、脂质发生共价结合，影响细胞重要的生理过程（如影响脂质代谢，与DNA的结合等）。在有氧环境下，·CCl₃与氧结合生成活性更强的CCl₃O₂·，后者可引发脂质的过氧化链式反应，破坏多不饱和脂肪酸，尤其在含丰富磷脂的细胞膜和膜样结构如线粒体和内质网上，导致膜通透性的改变，引起细胞内钙环境稳态的紊乱，从而加重细胞损伤。

肝细胞损伤后，主要分布在肝细胞内的谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）就会流入血液，出现血清中的GOT和GPT活性升高的现象，且只要有1%肝细胞坏死，就可使血清中GPT活性升高1倍。因此，血清GOT和GPT常作为急性或活动性肝病中最敏感的检测指标，两者含量可用于肝病的筛查，也可用于判断、评价肝病的临床疗效。MDA是脂质过氧化终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、凋亡、甚至坏死，其含量高低可反应氧化的损伤程度。SOD是细胞内主要清除自由基的抗氧化酶，其可抑制自由基启动脂质过氧化反应，从而保护细胞膜。因此，MDA含量与SOD活性可作为衡量脂质过氧化程度的指标，间接反映机体组织、细胞损伤的程度。通过检测小鼠肝组织匀浆中的SOD活性及MDA含量可反映出药物对肝细胞的保护作用。因此，以血清GPT、GOT、肝组织SOD活性及MDA含量作为指标来探讨药物对肝脏的保护作用是非常有意义的。

益智（AlpiniaoxyphyllaMiq.），系姜科(Zingiberaceae)山姜属（AlpiniaRoxb.）植物，主要分布于我国海南、广东、广西等地。其干燥成熟果实益智（FructusAlpiniaeOxyphyllae），被誉为四大南药之一，具有十分重要的药用价值，且属于药食同源品种，因此具有十分广阔的开发前景。益智果实作为一门传统中药，被历版《中国人民共和国药典》收载，其味辛、性温，归脾、肾经。有温脾止泻，摄唾涎，暖肾，固精缩尿的功能。主治脾寒泄泻，腹中冷痛，口多唾涎，肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊。

近年来，对益智（AlpiniaoxyphyllaMiq.）的研究报道较多，也更系统，其中主要是对益智果实的研究。益智果实的传统功效被我国历代中医药学家熟练地运用于临床，而近年来对其又有了新的进展。现代药理学研究表明，益智果实还具有舒张血管、强心、抗癌、抗过敏、抗氧化、抗衰老、抗溃疡、镇静、镇痛、提高免疫力以及神经保护等多方面药理活性。益智果实中主要成分为倍半萜类、其次为黄酮类、二芳基庚烷类、甾醇及其苷类化合物。

查阅大量文献可发现，对益智的叶子研究报道较少。易美华等研究发现，经提取挥发油后的益智果实及其茎、叶的提取物对猪油脂质均有较强的抗氧化作用；且均对超氧阴离子自由基有清除作用，清除能力依次为：益智的叶、益智的茎、提取挥发油后的益智果实。但目前关于益智叶提取物用于治疗肝损伤方面的研究并未见报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。

基于以上目的，本发明采用以下技术方案：

益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。

具体的，所述益智叶提取物为益智叶的乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃取物。

具体的，所述益智叶提取物是由如下方法制得：取干燥益智叶，剪碎，然后加入到乙醇中（使益智叶完全浸没于乙醇中），加热提取，提取液经浓缩干燥得乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液挥干溶剂，分别得到乙酸乙酯部位萃取物、正丁醇部位萃取物。

上述制备乙醇总浸膏时，加入的乙醇浓度为75V%，加热温度不超过55℃（以55℃为宜），加热提取3次，每次3h。

为证实上述益智叶萃取物的保肝作用，本发明采用了四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型，考查其对肝损伤的预防和/或治疗作用。试验结果表明：益智叶乙酸乙酯部位萃取物及正丁醇部位萃取物均具有一定保肝活性。

附图说明

图1为益智叶不同部位萃取物不同剂量对小鼠血清GPT与GOT活力的影响；

图2为益智叶不同部位萃取物不同剂量对小鼠肝组织中MDA含量的影响；

图3为益智叶不同部位萃取物不同剂量对小鼠肝组织中SOD活力的影响。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1

益智叶的乙酸乙酯部位萃取物是由以下方法获得：取3400g干燥益智叶，剪碎后，加入75V%乙醇（每次加入的乙醇体积均以完全浸没益智叶为准），55℃提取3次，每次3h，过滤，合并滤液，浓缩干燥即得益智叶乙醇总浸膏，得率见表1。将乙醇总浸膏分散于少量水中，用等体积的乙酸乙酯溶剂进行萃取，收集萃取液，挥干溶剂乙酸乙酯，即得乙酸乙酯部位萃取物，得率见表1。

实施例2

益智叶的正丁醇部位萃取物由以下方法获得：取实施例1中乙酸乙酯萃取过后的剩余溶液，再用正丁醇进行萃取，收集萃取液，挥干溶剂正丁醇，即得正丁醇部位萃取物，得率见表1。

表1益智叶不同部位萃取物的得率情况

效果实验：益智叶提取物的保肝护肝试验

1.1实验动物：成年昆明小鼠，雌雄各半，体重20±2g。

1.2主要试剂：谷草转氨酶（GOT，批号20150709）、谷丙转氨酶（GPT，批号20150709）、超氧化物歧化酶（SOD，批号20150717）、丙二醛（MDA，批号20150718）；以上试剂均为南京建成生物工程研究所生产。四氯化碳（分析纯，天津市红岩化学试剂厂，批号20091208）；橄榄油（山东鲁花集团有限公司）；牛清蛋白（北京希凯创新科技有限公司）；考马斯亮蓝G250（上海化学试剂公司分装厂）；联苯双酯（万邦德制药集团股份有限公司，批号A02141113）用0.5%CMC-Na溶液配混悬液做阳性对照。

1.3主要仪器：UV2000型紫外可见分光光度计（尤尼可上海仪器有限公司）；MultiskanGO全波长酶标仪（ThermoElectron）；LRH-150恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；TGL-16高速离心机（江苏金坛市中大仪器厂）。

1.4实验方法：取健康昆明小鼠70只，雌雄各半，4~6周龄，体重20±2g，将小鼠随机分为7组，每组10只。分别为空白组，模型组，联苯双酯组（用作阳性对照），益智叶乙酸乙酯部位萃取物高、低两个剂量组，益智叶正丁醇部位萃取物高、低两个剂量组。除模型组和空白组外，其它组分别每天灌胃相应药物，每天1次，连续8天。

第8天药后2h，除空白组外，其它组造模（按照0.1mL/10g体重腹腔注射0.4%四氯化碳橄榄油溶液）；禁食不禁水16h后，摘眼球取血，分离血清，0~3℃保存，按照南京建成生物工程研究所生产的试剂盒说明书，测定血清中GPT和GOT酶的活力，结果见表2和图1。快速分离肝脏，制备10%和1%的匀浆液，离心取上清液，0~3℃保存，用考马斯亮蓝法测定10%和1%组织匀浆液的蛋白含量，并测10%肝匀浆中MDA含量和1%肝匀浆中SOD活力，结果见表3和图2、3。

1.5实验结果

表2益智叶萃取物对急性肝损伤小鼠血清GOT和GPT的影响( ` x±s,n=10)

由表2和图1的试验结果可以看出：与空白组相比，模型组的GPT和GOT活力均有极显著的升高（P<0.001），说明肝损伤模型造模成功；其余5个治疗组的这两项指标均有极显著升高（P<0.001）。

治疗组与模型组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组的GPT活力无显著性差异（P>0.05），但GOT活力极显著的降低（P<0.001）；乙酸乙酯部位萃取物低剂量组的GPT活力显著性降低（P<0.05），GOT活力极显著降低（P<0.001）；正丁醇部位萃取物高剂量组的GPT活力无显著性差异（P>0.05），但GOT活力非常显著性的降低（P<0.01）；正丁醇部位萃取物低剂量组的GPT和GOT活力均非常显著性降低（P<0.01）；阳性对照联苯双酯组的GPT活力有极显著的降低（P<0.001），GOT活力显著性降低（P<0.05）。

与阳性对照联苯双酯组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组GPT活力非常显著性升高（P<0.01），GOT活力显著性降低（P<0.05）；乙酸乙酯部位萃取物低剂量组的GPT活力无显著性差异（P>0.05），GOT活力显著性降低（P<0.05）；正丁醇部位萃取物高剂量组的GPT活力非常显著性升高（P<0.01），GOT活力无显著性差异（P>0.05）；正丁醇部位萃取物低剂量组的这两项指标均无显著性差异（P>0.05）。

表3益智叶萃取物对急性肝损伤小鼠MDA和SOD的影响( ` x±s,n=10)

由表3和图2、3的试验结果可以看出：与空白组相比，模型组的MDA含量极显著升高（P<0.001），SOD活力显著降低（P<0.05）；乙酸乙酯部位萃取物低剂量组和正丁醇部位萃取物高剂量组的MDA含量和SOD活力均非常显著的升高（P<0.01）；其它组的这两项指标与空白组比较无显著性差异（P>0.05）。

治疗组与模型组相比，乙酸乙酯部位萃取物高剂量组的MDA含量极显著性降低（P<0.001），SOD活力极其显著性升高（P<0.001）；乙酸乙酯部位萃取物低剂量组和正丁醇部位萃取物高剂量组的MDA含量与模型组比较均无显著性差异（P>0.05），而SOD活力极显著升高（P<0.001）；正丁醇部位萃取物低剂量组的MDA含量极显著性降低（P<0.001），SOD活力显著性升高（P<0.05）；阳性对照联苯双酯组的MDA含量非常显著性降低（P<0.01），但SOD活力无显著性差异（P>0.05）。

与阳性对照联苯双酯组相比，给予样品溶液的四组的MDA含量均无显著性差异（P>0.05），而乙酸乙酯部位萃取物的高、低剂量组和正丁醇部位萃取物的高剂量组的SOD活力均有非常显著性升高（P<0.01）。

综上可以说明：益智叶的乙酸乙酯部位萃取物在口服剂量为400mg/Kg时，可以显著的降低四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中的MDA含量，升高其SOD活力；并可以显著的降低小鼠血清中的GOT活力，但对GPT活力的降低效果不显著。而益智叶的正丁醇部位萃取物在口服剂量为100mg/Kg时，可以显著降低小鼠肝中的MDA含量，升高SOD活力；并可以显著降低小鼠血清中GPT和GOT活力。因此，益智叶乙酸乙酯部位萃取物和正丁醇部位萃取物具有较好的保肝护肝作用，可以用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。

Claims

1.益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用。

2.如权利要求1所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用，其特征在于：所述益智叶提取物为益智叶的乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃取物。

3.如权利要求2所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用，其特征在于：所述益智叶提取物是由如下方法制得：将益智叶加入到乙醇中，加热提取，提取液经浓缩干燥得乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液挥干溶剂，分别得到乙酸乙酯部位萃取物、正丁醇部位萃取物。

4.如权利要求3中所述益智叶提取物在制备预防、治疗肝损伤保健品或药物上的应用，其特征在于：制备乙醇总浸膏时，加入的乙醇浓度为75V%，加热温度不超过55℃，加热提取3次，每次3h。