CN105198963B - 虾仁下脚料锌螯合肽 - Google Patents
虾仁下脚料锌螯合肽 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105198963B CN105198963B CN201510399464.9A CN201510399464A CN105198963B CN 105198963 B CN105198963 B CN 105198963B CN 201510399464 A CN201510399464 A CN 201510399464A CN 105198963 B CN105198963 B CN 105198963B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- shrimp meat
- zinc chelating
- peptide
- zinc
- trp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 239000011701 zinc Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 title claims abstract description 30
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 22
- 241000143060 Americamysis bahia Species 0.000 title 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims abstract description 37
- 235000021190 leftovers Nutrition 0.000 claims abstract description 36
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 29
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 abstract description 14
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 abstract description 10
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 abstract description 10
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 abstract description 10
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 abstract description 10
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 abstract description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 abstract description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 abstract description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 abstract description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 abstract 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 8
- 230000010736 Chelating Activity Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 3
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 2
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 2
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 2
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-3-methyloxirane Chemical compound CC1OC1Cl LRWZZZWJMFNZIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLIUBAATANYCOY-GBALPHGKSA-N Thr-Cys-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VLIUBAATANYCOY-GBALPHGKSA-N 0.000 description 1
- NOFFAYIYPAUNRM-HKUYNNGSSA-N Trp-Gly-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N NOFFAYIYPAUNRM-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N aldehydo-N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- AMMWFYKTZVIRFN-UHFFFAOYSA-N sodium 3-hydroxy-4-[(1-hydroxynaphthalen-2-yl)diazenyl]-7-nitronaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound [Na+].C1=CC=CC2=C(O)C(N=NC3=C4C=CC(=CC4=C(C=C3O)S(O)(=O)=O)[N+]([O-])=O)=CC=C21 AMMWFYKTZVIRFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 108010084932 tryptophyl-proline Proteins 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种虾仁下脚料锌螯合肽,具体讲是以虾仁加工下脚料为原料,采用酸法提取胶原蛋白,利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对胶原蛋白进行酶解,采用超滤、大孔树脂柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到锌螯合胶原肽Trp‑Gly‑Phe‑Thr‑Cys‑Trp‑Pro‑Met,ESI/MS检测分子量为1027.20 Da。
Description
技术领域
本发明属于水产品精深加工技术领域,涉及一种离子螯合肽,尤其涉及虾仁下脚料锌螯合肽。
背景技术
我国的虾类资源非常丰富,近年来随着虾仁加工业的迅速发展,产生了大量的加工下脚料,这些下脚料中富含蛋白质、甲壳素以及虾青素等有效物质。经调查发现,我国以虾为主要原料的生产企业在处理虾类加工下脚料时,一部分以极低价格作为废料外售,或者运送到养殖场烘干粉碎作为饲料,还有很多未来得及处理的下脚料由于堆砌一处发霉腐烂,最终直接运往垃圾场。不但造成严重的资源浪费,而且还会引起环境污染。国外对虾加工下脚料的综合利用非常重视,并进行了深入的研究,在理论和实践方面均取得了系列成果,为我国虾仁加工下脚料的回收利用提供了依据。近年来,我国随着对环境保护的加强,虾仁加工下脚料的回收利用成为水产加工企业迫切需要解决的问题。目前我国主要还是用于生产甲壳素,对于蛋白和虾青素的回收利用由于成本高尚实现工业化生产。
经检索,以虾仁加工下脚料制备锌螯合肽未见报道。基于此,本发明根据锌螯合肽和虾仁加工下脚料的研究现状,提供一种具有金属锌螯合活性的多肽,并提供这种锌螯合肽的制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述的技术现状提供一种源于虾仁加工下脚料的虾仁下脚料锌螯合肽,该螯合肽源于天然、对人体安全,且具有锌离子螯合特性。
本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为:一种虾仁下脚料锌螯合肽,其特征在于该胶原肽的氨基酸序列为Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met(WGFTCWPM),ESI/MS检测分子量为1027.20 Da。
该螯合肽的制备方法,包括以下步骤:
1)虾仁加工下脚料蛋白酶解物的制备:将冷冻虾仁加工下脚料(虾头和虾壳)用组织捣碎机粉碎,按照料液比1 g:4~5 mL加入磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L,pH 6.5~7.5),于45~50℃下于超声功率400~500W下超声60~90 min,然后加入中性蛋白酶(酶活力≥5.0×104 U/g),于45~50℃保温2~3 h后,温度升至90~95℃并保持10~15 min;溶液温度降至37~40℃,pH调至 7.5~8.0,加入胰蛋白酶(酶活力≥2.5×104 U/g)保温2~3 h后,温度升至90~95℃并保持10~15 min后,于9 000 ~10 000g离心15~20 min,得上清液,即虾仁加工下脚料蛋白酶解物。
2)虾仁加工下脚料锌螯合肽的制备:将制备的酶解物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理,收集分子量小于3 kDa部分,得超滤酶解液,超滤酶解液按照体积比加入到装有8~10倍NKA-9大孔树脂的层析柱中,用2~3倍柱体积水洗脱除去杂质,然后用3~5倍柱体积的30%和60%乙醇进行洗脱,收集60%乙醇洗脱液,于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物,多肽混合物依次经固定化锌离子层析柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,得到虾仁加工下脚料锌螯合肽。
作为优选,固定化锌离子层析柱层析、凝胶柱层析和RP-HPLC纯化的具体过程为:
固定化锌离子层析柱层析:将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20 mg/mL的溶液,以0.5~1.5 mL/min的流速通过固定化锌离子亲和层析柱,分别用3~5柱体积的水和0.1 mol/L NaCl洗脱,收集0.1 mol/L NaCl洗脱组分,即为亲和层析组分。
凝胶柱层析:将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20 mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-15柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据220 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,具有最高Zn螯合活性的峰为凝胶层析酶解物。
RP-HPLC纯化:将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成45~55 μg/mL的溶液,利用RP-HPLC进行纯化,根据对Zn的螯合活性得1个高Zn螯合肽Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met(WGFTCWPM)。
再优选,固定化锌离子层析柱填料的制备方法为:烧瓶内依次加入液体石蜡140mL,乙酸乙酯40mL,和Triton X-100 8 mL,搅拌30min后,加入100 mL 2%的壳聚糖乙酸溶液(乙酸浓度5%),60 ℃搅拌3 h,缓慢滴加40%的甲醛10 mL,反应30 min,再缓慢滴加50%的戊二醛7 mL,反应90 min。用NaOH调pH至12~13,然后70 ℃下继续搅拌2 h,过滤,分别用水、乙醇清洗,80 ℃干燥至恒重后转移至烧瓶中,依次向烧杯中加入1 mol/L NaOH 150 mL,无水乙醇 150 mL,NaBH4 8g,室温下搅拌,抽滤,水洗至中性,乙醇清洗,干燥至恒重,得交联壳聚糖。转移交联壳聚糖至烧瓶中,加入1 mol/L NaOH 100 mL,搅拌,缓慢滴加环氧氯丙烷47 mL,室温下搅拌 24 h,抽滤,分别用水、乙醇清洗,干燥后转移至烧瓶中,加入1 mol/LNaOH 60 mL,缓慢滴加乙二胺25 mL,65~70℃下保温24 h后,蒸馏水清洗,抽滤,干燥,得到配基螯合壳聚糖。用超纯水悬浮配基螯合壳聚糖,装柱,用两倍柱体积的超纯水平衡,再用5倍柱体积的0.1 mol/L ZnCl2溶液以0.5~1.0 mL/min过柱后,用2~3倍柱体积超纯水清洗,得到壳聚糖锌离子固定化亲和层析填料。
再优选,所述RP-HPLC条件为:进样量8~10 μL;色谱柱为Zorbax C18;流动相:15%乙腈;洗脱速度0.5~0.8 mL/min;紫外检测波长220 nm。
本发明基于多肽与金属离子螯合的理论基础,以及多肽-Zn螯合物的独特功效(可同时补充多肽/氨基酸和Zn),以虾仁加工下脚料为原材料,通过对中性蛋白酶和胰蛋白酶的酶解条件控制,制备具有高Zn螯合活性的多肽。本发明即为补锌保健食品和药物开发提供了一种技术支持,同时也为虾仁加工下脚料的高值化利用提供了一条新思路。
附图说明
图1是本发明的葡聚糖凝胶G-15层析图。
图2是本发明的葡聚糖凝胶G-15制备酶解物的RP-HPLC分析图。
图3 是本发明的Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met的质谱图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
一种源于虾仁加工下脚料的锌螯合肽及其制备方法,制备工艺流程如下:虾仁加工下脚料-蛋白提取、酶解-酶解物-超滤-大孔树脂纯化-固定化锌离子层析柱层析凝胶过滤层析-RP-HPLC制备-锌螯合肽。
实施例:
1)虾仁加工下脚料蛋白酶解物的制备:将冷冻虾仁加工下脚料(虾头和虾壳)用组织捣碎机粉碎,按照料液比1 g:5 mL加入磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L,pH 7.0),于47℃下于超声功率500W下超声90 min,然后加入中性蛋白酶(酶活力≥5.0×104 U/g),于47℃保温2h后,温度升至95℃并保持10 min;溶液温度降至37℃,pH调至 7.8,加入胰蛋白酶(酶活力≥2.5×104 U/g)保温3 h后,温度升至95℃并保持10min后,于10 000g离心15 min,得上清液,即虾仁加工下脚料蛋白酶解物。
2)虾仁加工下脚料锌螯合肽的制备:将制备的酶解物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理,收集分子量小于3 kDa部分,得超滤酶解液,超滤酶解液按照体积比加入到装有10倍NKA-9大孔树脂的层析柱中,用3倍柱体积水洗脱除去杂质,然后用3倍柱体积的30%和60%乙醇进行洗脱,收集60%乙醇洗脱液,于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物,多肽混合物依次经固定化锌离子层析柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,得到虾仁加工下脚料锌螯合肽。利用氨基酸序列分析和质谱测定其结构,具体过程为:
①固定化锌离子层析柱层析: 将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20mg/mL的溶液,以0.5~1.5 mL/min的流速通过固定化锌离子亲和层析柱,分别用3~5柱体积的水和0.1 mol/L NaCl洗脱,收集0.1 mol/L NaCl洗脱组分,即为亲和层析组分。
②凝胶柱层析:将上述胶原肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10~20 mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据214 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,具有最高Zn螯合活性的峰为凝胶层析酶解物(F3)(图1);
③RP-HPLC纯化:将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成45~55 μg/mL的溶液,利用RP-HPLC进行纯化(所述RP-HPLC条件为:进样量8~10 μL;色谱柱为Zorbax C18;流动相:15%乙腈;洗脱速度0.5~0.8 mL/min;紫外检测波长220 nm),根据对Zn的螯合活性得1个高Zn螯合活性胶原肽(图2)。
④结构检测:Zn螯合胶原肽经检测为单一峰,利用蛋白/多肽序列分析仪测定氨基酸序列为Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met(WGFTCWPM),ESI/MS检测分子量为1027.20Da(图3)。
Zn螯合胶原肽对锌离子的螯合作用采用EDTA 滴定法测定。取螯合物100 mg 于100 mL小烧杯中,加水50 mL,滴入HCl(6 mol/L)数滴。摇匀后在水浴上加热使之完全溶解,冷却后定容至l00 mL,从中吸取l0 mL于三角瓶,平行3 份,加入pH 10的NH3-NH4Cl缓冲液l0mL,铬黑T指示剂适量,然后用0.01 mol/L Na2EDTA 液滴定至蓝色;记录消耗EDTA的毫升数,计算螯合物含锌量。
测定结果表明:纯化得到的Zn螯合胶原肽Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met(WGFTCWPM)对锌离子的螯合能力为83.56 μg/mg,与胶原蛋白酶解产物(30.12 μg/mg)相比其对Zn的螯合能力有了较大提高。
最后,尚需注意的是,以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。
序 列 表
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江海洋学院
<120> 虾仁下脚料锌螯合肽
<130> zjou-2015-wb0704
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
Trp Gly Phe Thr Cys Trp Pro Met
1 5
Claims (1)
1.一种源于虾仁加工下脚料的锌螯合肽,其氨基酸序列为Trp-Gly-Phe-Thr-Cys-Trp-Pro-Met,ESI/MS检测分子量为1027.20Da。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510399464.9A CN105198963B (zh) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | 虾仁下脚料锌螯合肽 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510399464.9A CN105198963B (zh) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | 虾仁下脚料锌螯合肽 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105198963A CN105198963A (zh) | 2015-12-30 |
CN105198963B true CN105198963B (zh) | 2020-08-04 |
Family
ID=54946950
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510399464.9A Active CN105198963B (zh) | 2015-07-09 | 2015-07-09 | 虾仁下脚料锌螯合肽 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105198963B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106084000B (zh) * | 2016-04-18 | 2019-06-28 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种单环刺螠内脏蛋白源锌螯合肽 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103073621A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-05-01 | 浙江海洋学院 | 一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 |
CN103992386A (zh) * | 2014-05-22 | 2014-08-20 | 浙江海洋学院 | 一种大黄鱼鱼鳞抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 |
CN104195207A (zh) * | 2014-09-17 | 2014-12-10 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种罗非鱼抗氧化锌元素结合肽的制备方法 |
CN104372054A (zh) * | 2014-10-14 | 2015-02-25 | 中国海洋大学 | 一种鳕鱼皮胶原蛋白源螯合肽及其制备方法 |
CN104628824A (zh) * | 2015-02-09 | 2015-05-20 | 福州大学 | 一种紫菜金属螯合蛋白肽及其制备方法 |
-
2015
- 2015-07-09 CN CN201510399464.9A patent/CN105198963B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103073621A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-05-01 | 浙江海洋学院 | 一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 |
CN103992386A (zh) * | 2014-05-22 | 2014-08-20 | 浙江海洋学院 | 一种大黄鱼鱼鳞抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 |
CN104195207A (zh) * | 2014-09-17 | 2014-12-10 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | 一种罗非鱼抗氧化锌元素结合肽的制备方法 |
CN104372054A (zh) * | 2014-10-14 | 2015-02-25 | 中国海洋大学 | 一种鳕鱼皮胶原蛋白源螯合肽及其制备方法 |
CN104628824A (zh) * | 2015-02-09 | 2015-05-20 | 福州大学 | 一种紫菜金属螯合蛋白肽及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
虾副产物制备的钙肽结合物理化性质研究;李仁伟等;《食品工程》;20130630(第2期);第43-45、64页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN105198963A (zh) | 2015-12-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104710525B (zh) | 一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途 | |
CN104774896B (zh) | 带鱼鱼骨铁螯合胶原肽制备方法 | |
CN108456244B (zh) | 玉米抗氧化活性肽及其制备方法 | |
CN106967169B (zh) | 一种鱼胶原蛋白的提取方法 | |
CN103211080B (zh) | 一种通过鱼鳞制备胶原蛋白粉的方法 | |
CN103039693B (zh) | 改性畜禽血浆蛋白粉的制备方法 | |
CN105192246B (zh) | 虾仁下脚料锌螯合肽的制备方法 | |
CN108530561B (zh) | 一种从肝素生产废弃物中提取高纯硫酸乙酰肝素的方法 | |
CN101586139A (zh) | 微波辅助酶提取鱼鳞胶原蛋白多肽的方法 | |
CN103627768A (zh) | 鱼皮胶原蛋白生物活性小肽及其制备方法 | |
CN109265536A (zh) | 一种钙螯合肽及其制备方法和应用 | |
CN102870954B (zh) | 一种抗氧化肽的制备方法 | |
CN105924495B (zh) | 一种高纯度亚麻籽蛋白的高效制备方法 | |
CN112010989B (zh) | 一种具有抗氧化活性的竹荪菌托多糖的制备方法 | |
CN104610446B (zh) | 一种马面鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及其制备方法 | |
CN105198963B (zh) | 虾仁下脚料锌螯合肽 | |
CN104250286A (zh) | 一种马面鲀鱼皮抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 | |
CN109957045A (zh) | 一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺 | |
CN107177650B (zh) | 一种北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的制备方法 | |
CN106801079A (zh) | 一种双酶分步酶解螃蟹壳制备抗氧化活性肽的方法 | |
CN104928341A (zh) | 一种联合超声波辅助酶解和微生物发酵麸皮制备阿魏酸的工艺 | |
CN104945501B (zh) | 一种带鱼鱼骨铁螯合胶原肽 | |
CN104402970A (zh) | 一种从食用菌多糖提取醇沉上清液中回收蛋白的方法 | |
CN106317259A (zh) | 一种从猪肺中提取肝素钠和蛋白肽粉的联产工艺 | |
CN105596370A (zh) | 一种驼血多肽的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |