CN105189768A - 天然藻油组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了天然藻油组合物及其制备方法。所述组合物能够用于制备高纯度Ω-3二十碳五烯酸(EPA)制剂。

Description

天然藻油组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2013年3月15日提交的美国临时专利申请61/800114的优先权，其内容通过引用以全文形式结合在此。
发明背景
藻类，例如微藻类，是光合作用生物，其能够将光能和二氧化碳转化为包括脂质、碳水化合物和蛋白质的生物质。海藻株能够产生高含量的总脂类(达到干重的30％-70％)(WardOP和SinghA，ProcessBiochem，2005，40(12)：3627-3652)。多种藻类株能够产生Ω-3多不饱和脂肪酸，例如二十碳五烯酸(EPA；C20：5n-3)和二十二碳六烯酸(DHA；C22：6-n3)。例如，微拟球藻(Nannochloropsis)属富含EPA，同时还含有Ω-7脂肪酸：十六碳烯酸(C16：1n-7)，以及Ω-6脂肪酸：花生四烯酸(ARA；C20：4n-6)。藻类正逐渐成为重要营养成分Ω-3多不饱和脂肪酸的重要来源。
不同藻类株的脂肪酸的组成有所不同。例如，据报道，微拟球藻(Nannochloropsissp.)包含26.7％(基于总的脂肪酸重量)的EPA和DHA(HuH和GaoK，BiotechnolLett，2003，25(5)：421-425)，而大洋微拟球藻(Nannochloropsisoceania)含有23.4％的EPA(Pailetal.，AquacInt，2007，15(1)：1-9)，盐微拟球藻(Nannochloropsissalina)含有约28％的EPA(VanWagenenetal.，Energies，2012，5(3)：731-740)。
Ω-3脂肪酸的消耗能够带来多种有益健康的好处，例如预防心血管疾病，增强脑功能，减少如类风湿性关节炎、克罗恩病以及溃疡性结肠炎等炎症症状。例如，仅含EPA配方的被证实具有治疗高甘油三酯血症的作用。因为Ω-3脂肪酸不能由人体重新合成，这些脂肪酸必须来自于农业或水生生物来源。营养和制药工业对藻类提取的仅含Ω-3EPA的组合物有着日益增长的需求。本发明通过提供一种新型天然藻油组合物来解决上述以及其他相关的需求，同时还提供由藻油制造相关脂肪酸组合物以及使用这些组合物的方法。
发明概述
本发明涉及可用以制造营养和药物化合物的天然藻油组合物。
因此，一方面，本发明提供了一种天然藻油组合物，所述组合物可以包含，基于总脂肪酸重量，约30％到约35％的二十碳五烯酸(EPA)，少于约10％的花生四烯酸(ARA)以及少于约0.5％的二十二碳六烯酸(DHA)。在一些实施方案中，基于总的脂肪酸重量，天然藻油中DHA小于约0.1％。在其他实施方案中，组合物基本上不含DHA。
在另一方面，本发明提供了一种天然藻油组合物，其包含：基于总脂肪酸重量，至少约2％的三酰甘油组分(fraction)，其中天然藻油中约7％的二十碳五烯酸(EPA)在三酰甘油组分中，其中天然藻油中约11％的花生四烯酸(ARA)在三酰甘油组分中，并且其中二十二碳六烯酸(DHA)基本上不存在于三酰甘油组分中。
再另一方面，本发明提供了一种天然藻油组合物，其包含：基于总脂肪酸重量，至少约5％的单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分，其中天然藻油中约37％的二十碳五烯酸(EPA)在MGDG组分中，其中天然藻油中约14％的花生四烯酸(ARA)在MGDG组分中，并且其中二十二碳六烯酸(DHA)基本上不存在于MGDG组分中。
天然藻油组合物中EPA与ARA(EPA∶ARA)的比例在约5∶1至约40∶1的范围内。任选地，EPA∶ARA的比例在约6∶1至约30∶1的范围内。
天然藻油包含多种脂质组分，例如磷脂类(例如磷脂酰肌醇类(PIs)、磷脂酰丝氨酸类(PSs)、卵磷脂类(PCs)、磷脂酰甘油类(PG)和磷脂酰乙醇胺类(PE))；半乳糖脂类(例如双半乳糖基二酰甘油类(DGDGs)和单半乳糖基二酰甘油类(MGDGs))；中性醣脂类(例如单酰甘油类(MAGs)、二酰甘油类(DAGs)和三酰甘油类(TAGs))；游离脂肪酸(FFA)，甾醇酯类(例如胆固醇酯类)；极性醣脂类(例如磺基喹诺二酰甘油类(sulfoquinovosyldiacylglycerols)(SQDGs))；和二酰甘油三甲基高丝氨酸类(DGTSs)。
在一些实施方案中，天然藻油中约80％的EPA在极性脂质中，约20％的EPA在中性脂质中。在一些实施方案中，天然藻油中约37％的EPA在单半乳糖基二酰甘油脂质中。在一些实施方案中，天然藻油中约10％的EPA在游离脂肪酸、磷脂酰甘油脂质或双半乳糖基二酰甘油中。
天然藻油可以来自于藻类生物质，例如，在用例如乙醇的有机溶剂提取后。藻类生物质可以包括微拟球藻(Nannochloropsis)。在一些实施方案中，微拟球藻选自由海洋富油微拟球藻(Nannochloropsisgaditana)、颗粒微拟球藻(Nannochloropsisgranulate)、湖微拟球藻(Nannochloropsislimnetica)、大洋微拟球藻(Nannochloropsisoceanica)、眼点微拟球藻(Nannochloropsisoculata)和盐微拟球藻(Nannochloropsissalina)组成的组。
在一些实施方案中，生物质可以是湿生物质。优选实施方案中，藻类生物质是干的藻类生物质。干的藻类生物质可以包含至少约10％的脂质、至少约15％的碳水化合物、至少约25％的蛋白质、至少约3％的水分以及至少约1％的灰分。微拟球藻可以是突变株，例如，T661株，其记载于2013年3月15日提交的美国临时专利申请61/800029和61/800114中。
在一些实施方案中，天然藻油被进一步加工以制备含有约60-99重量％的EPA的Ω-3组合物。在一些情况下，EPA的含量在这种Ω-3组合物中可以高达90-99重量％。
本文还提供制备上述天然藻油组合物的方法。所述方法包括：(a)得到全部藻类生物质；(b)向藻类生物质中加入有机溶剂如醇类(例如乙醇)；(c)从藻类生物质中提取液体，从而得到天然藻油。在所述方法的一些实施方案中，藻类生物质可以是湿生物质。另一些实施方案中，藻类生物质是干的藻类生物质。干的藻类生物质可以包含至少约10％的脂质、至少约15％的碳水化合物、至少约25％的蛋白质、至少约3％的水分以及至少约1％的灰分。藻类生物质可以包含微拟球藻细胞。在一些实施方案中，微拟球藻选自由海洋富油微拟球藻、颗粒微拟球藻、湖微拟球藻、大洋微拟球藻、眼点微拟球藻和盐微拟球藻组成的组。微拟球藻可以是突变株，例如，T661株，其记载于美国临时专利申请61/800029中。在一些实施方案中，基于总的脂肪酸重量，根据上述方法得到的天然藻油具有少于约0.1％的DHA。所述天然藻油可是基本上不含DHA。在一些实施方案中，EPA∶ARA重量比例在约5∶1至约40∶1范围内。任选地，EPA∶ARA重量比例在约6∶1至约30∶1范围内。
在一些实施方案中，天然藻油中约80％的EPA在极性脂质中，约20％的EPA在中性脂质中。在一些实施方案中，天然藻油中约37％的EPA在单半乳糖基二酰甘油脂质中。在一些实施方案中，天然藻油中约10％的EPA在游离脂肪酸、磷脂酰甘油脂质或双半乳糖基二酰甘油脂质中。
基于下面的详细说明和图表，本发明其他目的、特征和益处对本领域技术人员是显而易见的。
附图简述
图1显示了来自于四种微拟球藻株的天然藻油的一个实施例中脂肪酸(例如EPA、ARA和DHA)的含量百分比。
图2说明了来自于四种微拟球藻株的天然藻油的一个实施例中EPA与ARA(EPA∶ARA)的比例。
图3说明了天然藻油的一个实施例中脂肪酸在极性脂质和中性脂质中的分布。
图4说明了天然藻油的一个实施例中EPA和ARA在脂质组分中的分布，具体地，在单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)，游离脂肪酸(FFA)、胆固醇酯/碳氢化合物(CE/HC)、卵磷脂(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磺基喹诺二酰甘油(SQDG)、双半乳糖基二酰甘油(DGDG)、二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)、和单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分中的分布。
图5说明了本文描述的天然藻油的一个示例性实施方案中脂肪酸在极性脂质例如磷酯、二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)、单半乳糖基二酰甘油(MGDG)、双半乳糖基二酰甘油(DGDG)和磺基喹诺二酰甘油(SQDG)中的分布。
发明详述
I.介绍
发明人发现了含有高含量EPA、低含量ARA和基本上不含有DHA的新型天然藻油组合物。同时提供了制造和使用该天然油的方法。
II.定义
术语“天然藻油”是指直接从藻类生物质中提取出来而不经过进一步加工处理的油组合物。其是使用醇类例如乙醇等的有机溶剂提取生物质而得到的油基液体。该天然藻油可以含有游离脂肪酸，包含脂肪酸的脂类，蜡和极性可溶物。脂肪酸分布在中性和极性脂质中，例如单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)，游离脂肪酸(FFA)、卵磷脂(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磺基喹诺二酰甘油(SQDG)、双半乳糖基二酰甘油(DGDG)、二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)、和单半乳糖基二酰甘油(MGDG)。
术语“精油”是指天然藻油经过标准加工(例如精制、漂白和/或除味)得到的油。
术语“藻类”是指海藻细胞或藻。例如，术语“藻类”包含巨藻类(macroalgae)和微藻类(microalgae)。优选地，本发明中的藻类选自微拟球藻属。更优选的实施方案中，微拟球藻是海洋富油微拟球藻、颗粒微拟球藻、湖微拟球藻、大洋微拟球藻、眼点微拟球藻或盐微拟球藻种。
术语“脂类”包括磷脂、游离脂肪酸、脂肪酸脂、三酰甘油、二酰甘油、单酰甘油、溶血磷脂质、肥皂、磷脂、甾醇和甾醇酯、类胡萝卜素、叶黄素(例如氧合类胡萝卜素)、碳氢化合物以及本领域普通技术人员已知的其他脂类。
术语“中性脂类”包括三酰甘油、二酰甘油、单酰甘油、游离脂肪酸和甾醇酯等。
术语“极性脂类”包括磷脂，例如磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、卵磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、极性醣脂类、半乳糖脂等。
术语“二十碳五烯酸”或“EPA”指Ω-3多不饱和酸(以C20：5-n3表示)和其所连接的任何部分(moiety)。其是具有二十个碳原子的链和五个顺式双键的羧酸；第一个双键位于Ω端第三个碳原子处。
术语“二十二碳六烯酸”或“DHA”指Ω-3多不饱和酸(以C22：6-n3表示)和其所连接的任何部分。其是具有二十二个碳原子的链和六个顺式双键的羧酸；第一个双键位于Ω端第三个碳原子处。
术语“花生四烯酸”或“ARA”指Ω-6多不饱和酸(以C20：4-n6表示)和其所连接的任何部分。其是具有二十个碳原子的链和4个顺式双键的羧酸；第一个双键位于Ω端第六个碳原子处。
术语“双相萃取”指包含至少两相的萃取，例如水相和油相。
术语“约”与精确的数值联用时表示所述数值上下10％的浮动，例如术语“约50％”表示范围50±5％。
任何时候描述脂肪酸浓度(百分比)，除非另有所指，所述浓度(百分比)以总脂肪酸重量计算。
在此，除非另有所指，以下术语具有上述含义。
III.实施方案详述
A.天然藻油组合物
发明人发现有益的天然藻油组合物，其包含约30％至约35％的EPA(基于总脂肪酸重量)，例如，约30％、30.5％、31％、31.5％、32％、32.5％、33％、33.5％、34.5％、35％、35.5％的EPA；少于10％的ARA(基于总脂肪酸重量)，例如0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或小于10％的ARA；小于0.5％的DHA(基于总脂肪酸重量)，例如基于总脂肪酸重量，0％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或小于5％的DHA。DHA的百分比可以小于0.1％，例如0％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或小于0.1％。在一些实施方案中，天然藻油基本上不含DHA，例如基于总脂肪酸重量，0％的DHA。在一些例子中，基本上不含DHA的天然油含有检测不到的量的DHA，如通过例如气液色谱和气相色谱-质谱等的标准方法测量。
天然藻油具有的EPA∶ARA比例可以为约5∶1至约40∶1，例如5∶1、6∶1、7∶1、8∶1、9∶1、10∶1、11∶1、12∶1、13∶1、14∶1、15∶1、16∶1、17∶1、18∶1、19∶1、20∶1、21∶1、22∶1、23∶1、24∶1、25∶1、26∶1、27∶1、28∶1、29∶1、30∶1、31∶1、32∶1、33∶1、34∶1、35∶1、36∶1、37∶1、38∶1、39∶1或40∶1。可选地，EPA∶ARA比例可以为约6∶1至约30∶1，例如6∶1、7∶1、8∶1、9∶1、10∶1、11∶1、12∶1、13∶1、14∶1、15∶1、16∶1、17∶1、18∶1、19∶1、20∶1、21∶1、22∶1、23∶1、24∶1、25∶1、26∶1、27∶1、28∶1、29∶1或30∶1。
此处所述脂肪酸可以在天然藻油的极性脂类和/或中性脂类中发现。例如，EPA可以存在于例如单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)、游离脂肪酸(FFA)、磷脂(PL)、半乳糖脂(GL)、卵磷脂(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磺基喹诺二酰甘油(SQDG)、双半乳糖基二酰甘油(DGDG)、二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)和单半乳糖基二酰甘油(MGDG)的脂类中。ARA可以在例如MAG、DAG、FFA、TAG、PE、SQDG、DGTG和MGDG的脂类中发现。
在一些实施方案中，提供的是天然藻油组合物，所述天然藻油组合物包含基于总脂肪酸含量的重量至少约2％至约10％的三酰甘油组分，例如，至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％的三酰甘油组分。在一些实施方案中，基于总脂肪酸重量，三酰甘油组分至少为约2％。在一些实施方案中，天然藻油中约3％至约10％，例如，约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的二十碳五烯酸(EPA)在三酰甘油组分中。在一些实施方案中，天然藻油中约5％至约15％，例如，约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％的花生四烯酸(ARA)在三酰甘油组分中。在一些实施方案中，天然藻油的三酰甘油组分中基本上不含二十二碳六烯酸(DHA)。此处所述的天然藻油可以提取自微拟球藻等藻类。
在一些实施方案中，提供天然藻油组合物，其包含基于总脂肪酸重量至少约5％的单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分。在一些实施方案中，天然藻油中约30％至约50％，例如，约30％、约31％、约32％、约33％、约34％、约35％、约36％、约37％、约38％、约39％、约40％、约41％、约42％、约43％、约44％、约45％、约46％、约47％、约48％、约49％或约50％的二十碳五烯酸(EPA)在MGDG组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约37％的EPA在MGDG组分中。在一些实施方案中，天然藻油中约10％至约20％，例如约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％的花生四烯酸(ARA)在MGDG组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约14％的ARA在MGDG组分的。在另一些实施方案中，MGDG组分基本上不含二十二碳六烯酸(DHA)，例如约0％的DHA。此处所述的天然藻油可以提取自微拟球藻等藻类。
在一些实施方案中，提供天然藻油组合物，所述天然藻油组合物包含基于总的脂肪酸重量至少约1％的游离脂肪酸(FFA)组分，例如，基于总的脂肪酸重量至少约1％、2％、3％、4％、5％或者更多的游离脂肪酸组分。在一些实施方案中，天然藻油中约5％至约15％，例如约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％的EPA在FFA组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约11％的EPA在FFA组分中。在一些实施方案中，天然藻油中约15％至约25％，例如约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％或约25％的ARA在FFA组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约18％的ARA在FFA组分中。在一些实施方案中，FFA组分中基本上不含有二十二碳六烯酸(DHA)，例如约0％的DHA。此处所述的天然藻油可以提取自微拟球藻等藻类。在一些实例中，微拟球藻是突变株，例如T661株。
在一些实施方案中，提供天然藻油组合物，所述天然藻油组合物包含基于总的脂肪酸重量至少约3％的卵磷脂(PC)组分，例如基于总的脂肪酸重量至少约3％、4％、5％、6％、7％或者更多的卵磷脂组分。在一些实施方案中，天然藻油中约5％至约15％，例如约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％的EPA在PC组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约6％的EPA在PC组分中。在一些实施方案中，天然藻油中约10％至约25％，例如约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％或约25％的ARA在PC组分中。在另一些实施方案中，天然藻油中约12％的ARA在PC组分中。在一些实施方案中，PC组分中基本上不含有二十二碳六烯酸(DHA)，例如约0％DHA。此处所述的天然藻油可以提取自微拟球藻等藻类。在一些实例中，微拟球藻是突变株，例如T661株。
在一些实施方案中，天然藻油中一种或多种中性脂类组分例如单酰甘油组分、二酰甘油组分、三酰甘油组分或者游离脂肪酸组分，包含至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％或至少约11％的天然藻油中的EPA。在一些实施方案中，游离脂肪酸组分包含至少约10％的天然藻油中的EPA。在一些实施方案中，单酰甘油组分包含至少约3％的天然藻油中的EPA。在一些实施方案中，二酰甘油组分包含至少约4％的天然藻油中的EPA。在一些实施方案中，三酰甘油组分包含至少约7％的天然藻油中的EPA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种中性脂质组分，例如单酰甘油组分、二酰甘油组分、三酰甘油组分或者游离脂肪酸组分，包含约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约1％至约5％、约5％至约20％、约5％至约15％、约5％至约10％或约10％至约20％的天然藻油中的EPA。
在一些实施方案中，天然藻油中甾醇酯组分例如胆固醇酯不含EPA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，包含至少1％、至少2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％、至少约20％、至少约21％、至少约22％、至少约23％、至少约24％、至少约25％、至少约26％、至少约27％、至少约28％、至少约29％、至少约30％、至少约31％、至少约32％、至少约33％、至少约34％、至少约35％、至少约36％、至少约37％、至少约38％、至少约39％、至少约40％的天然藻油中的EPA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，包含约1％至约40％、约1％至约35％、约1％至约30％、约1％至约20％、约1％至约10％、约5％至约40％、约5％至约35％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％、约10％至约40％、约10％至约35％、约10％至约25％、约10％至约20％、约15％至约40％、约15％至约35％、约15％至约30％、约15％至约25％、约15％至约20％、约20％至约40％的天然藻油中的EPA。在一些实施方案中，至少35％或更多的天然藻油中的EPA在单半乳糖基二酰甘油脂质中。
在另一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，不含有EPA。例如，天然藻油中的EPA不存在于甾醇酯、磷脂酰肌醇和/或磷脂酰丝氨酸脂质中。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种中性脂质成分，例如单酰甘油组分、二酰甘油组分、三酰甘油组分或者游离脂肪酸组分，包含至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％或至少约20％的天然油中的总ARA。在一些实施方案中，游离脂肪酸组分含有至少约16％的天然油中的ARA。在一些实施方案中，单酰甘油组分含有至少约4％的天然油中的ARA。在一些实施方案中，二酰甘油组分含有至少约2％的天然油中的ARA。在一些实施方案中，三酰甘油组分含有至少约10％的天然油中的ARA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种中性脂质成分，例如单酰甘油组分、二酰甘油组分、三酰甘油组分或者游离脂肪酸组分，包含天然油中总ARA的约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约1％至约5％、约5％至约20％、约5％至约15％、约5％至约10％或约10％至约20％。
在一些实施方案中，天然油中的甾醇酮酯组分例如胆固醇酯不含ARA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，包含至少1％、至少2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％或至少约20％的天然藻油中的ARA。在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分不含ARA。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，包含天然油中的总ARA的约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约％至约5％、约5％至约20％、约5％至约15％、约5％至约10％、约10％至约20％、约10％至约15％或约15％至约20％。
在一些实施方案中，天然藻油的一种或多种极性脂质组分，例如卵磷脂组分、磷脂酰甘油组分、磷脂酰乙醇胺组分、磷脂酰肌醇组分、磷脂酰丝氨酸组分、磺基喹诺二酰甘油组分、双半乳糖基二酰甘油组分、二酰甘油三甲基高丝氨酸组分或单半乳糖基二酰甘油组分，不含有ARA。在一些实例中，双半乳糖基二酰甘油、磷脂酰肌醇和/或磷脂酰丝氨酸脂类的脂肪酸成分不含ARA。
天然藻油可以从新鲜收获的藻类生物质中提取，也可以从在防止酸败的条件下贮存的以前收获的生物质中提取。可以使用已知的方法培养藻类，从培养基中分离藻类生物质，从生物质中提取天然藻油，并分析从生物质中提取的油的脂肪酸分布情况。详细的说明可以在例如Handayaniaetal.，2012，ScientificReports，1(2)：180(doi：10.4172/scientificreports.180)和Adarme-Vegaetal.，MicrobialCellFactories，2012，11：96中找到，上述文献通过引用以全文形式结合。
天然藻油可以得自藻类，包含金藻纲(Chrysophyceae)、隐藻纲(Cryptophyceae)、真绿藻纲(Prasinophyceae)、红藻纲(Rhodophyceae)、黄藻纲(Xanthophyceae)、灰胞藻纲(Glaucophyceae)和真眼点藻纲(Eustignatophyceae)。在一些实施方案中，藻类是微拟球藻属。在优选实施方案中，微拟球藻是海洋富油微拟球藻、颗粒微拟球藻、湖微拟球藻、大洋微拟球藻、眼点微拟球藻或盐微拟球藻。
在一些实施方案中，天然藻油提取自微拟球藻属中叶绿素缺乏的微藻类。叶绿素缺乏的藻细胞与野生型藻细胞相比能够具有灰绿表型。在一些实施方案中，在相同的光照条件下，与野生型藻细胞相比，叶绿素缺乏的藻细胞展示了增加的产率和/或生长至更高的细胞密度。特别地，在标准培养条件下，叶绿素缺乏的藻细胞可以展示旺盛的生长。叶绿素缺乏的表型可以被稳定通过多代不需要选择。
用于得到天然藻油的藻细胞可以是野生型藻细胞或突变细胞。在一些实施方案中，与野生型藻细胞相比，叶绿素缺乏的藻细胞有一个或多个突变。在一些例子中，叶绿素缺乏的藻细胞是T661株的细胞或T661培养的分离体(isolate)。代表性藻株的详细说明可以在例如2013年3月15日提交的美国临时申请61/800029和律师备案编号95844-902546的美国专利申请(2014年3月18日提交，标题为“具有提高的发育和生产的叶绿素缺乏的藻细胞”)中找到，上述每一个文献通过引用以全部内容形式结合在此。
B.培养藻类
可以在一定条件下培养藻类以促进高EPA、低ARA和基本上不含DHA的藻油的累积。例如，脂质的含量和组成可以通过改变例如光强度、光暗循环次数、温度、营养成分含量、营养成分有效性、盐度、pH、培养密度、培养温度和其他环境条件等生长条件来调整。微拟球藻生长条件的描述可以在例如Sukenik，A.“Chapter3：ProductionofeicosapentaenoicacidbythemarineEustigmatophyteNannochloropsis，”ChemicalsfromMicroalgae.，ZviCohen编辑，CRCPress，1999，和Paletal.，ApplMicrobiolBiotechnol，2011，90：1429-1441中找到。开放池等标准培养系统，例如开放跑道池以及光生物反应器，可用于生长藻类。
为制造藻类生物质，可以使用标准方法，例如絮凝、离心和过滤(全量过滤、微滤、超滤、压滤和正切流动过滤)用于藻类除水。例如，阳离子化学絮凝剂如Al2(SO4)3、FeCl3和Fe2(SO4)3可以被用于将收获的藻类絮凝为生物质。
干燥(除水)的藻类生物质可以包含至少约10％的脂质，例如约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或更多的脂质；至少约15％的碳水化合物，例如约15％、16％、17％、185、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％或更多的碳水化合物；至少约25％的蛋白质，例如约25％、26％、27％、28％、29％、20％、21％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％或更多的蛋白质；至少约3％的水分，例如约3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或更多的水；以及至少约5％的灰分，约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或更多的灰分。
可以将藻细胞或生物质在被用于得到组合物之前干燥。标准的干燥藻类生物质的方法包括冻干、空气干燥、喷雾干燥、隧道干燥、真空干燥(冻干)以及类似的工艺。可选地，收获和清洗后的生物质可直接被用于制备组合物而不经过干燥。在一些例子中，将生物质收获并且在进行本文描述的提取方法之前未经清洗。参见，例如美国专利号5130242和6812009，上述文献通过引用以全文形式结合在此。
C.从藻类生物质中制备天然藻油
本发明的藻油可以通过不使藻类脂质的分解方法从藻类生物质中分离得到。例如，生物质藻类细胞可以通过以下方法分解：例如，高压均质、球磨、压出/压榨、声处理、超声、微波辐照、渗压振扰、电磁脉冲、化学溶菌或碾压干燥的藻类细胞，以释放脂质和其他细胞内成分。任选地，可以通过例如离心的方法从藻类细胞碎片中分离油。例如，离心产生油层和含有细胞碎片的水层。
其他可用于从藻类中提取脂肪酸的方法包括但不限于：Bligh和Dyer溶剂提取法、采用离子液体和甲醇混合物的溶剂提取、己烷溶剂提取、乙醇溶剂提取、甲醇溶剂提取、索式抽提、超临界流体/CO2提取和有机溶剂(例如苯、环己胺、己烷、丙酮、氯仿)提取。参见例如Ratledgeetal.“Chapter13：Down-StreamProcessing，Extraction，andPurificationofSingleCellOils，”SingleCellOils，ZviCohen和ColinRatledge编辑，AOCSPress，Champaign，IL，2005。提取方法可以影响从藻类生物质中回收的脂肪酸组合物。例如，可以影响脂肪酸的浓度、量、纯度和种类。
在一些实施方案中，使用乙醇从藻类生物质例如干藻类生物质中提取天然藻油。已经被证实，与其他基于溶剂的方法相比，从藻类中用乙醇提取脂质可以产生相对高的产量。
在乙醇提取后，提取产物被进一步处理以从脂质中去除水和极性成分。例如，如Fajardoetal.，(Eur.J.LipidSci.Technol.，109(2007)120-126)中描述的，可以对乙醇提取物进行非极性溶剂提取，例如己烷提取，以产生包括己烷相和水醇相的两相提取物。
可以使用分离方法处理提取产物，所述分离方法例如但不限于蒸馏、倾析和离心。例如，可以从含有天然藻油的液体组分中分离湿的固体。可选地，乙醇提取物可以经过分离步骤，例如色谱，以产生富含脂质的组合物。
D.天然藻油加工为脂肪酸乙酯
本文提供的天然藻油可被用作更高效地制造富含例如EPA的脂肪酸的产物的起始物料。例如，可以对本发明的藻油进行本领域公知的多种提纯方法，例如蒸馏或尿素包合，以制造具有更高浓度的EPA(例如约60至约99％的EPA，更优选约90％至约99％的EPA)的更高产物。天然油也可以用于化学反应以制造由油中脂肪酸衍生的化合物，例如EPA的酯和盐。
本文所述的天然藻油可以被进一步加工而将存在于脂质组分中的脂肪酸转化为游离脂肪酸(FFAs)，例如，通过皂化和中和。例如，FFAs可以用合适的溶剂例如庚烷从天然藻油中提取出来。
将天然藻油加工为脂肪酸酯的详细描述在例如美国专利申请号14/025740中找到，所述文献的全部内容通过引用结合在此。简单地说，可以将游离脂肪酸与酸和乙醇混合，酯化反应以形成乙脂。该酯化方法形成包含水层和溶剂层的两相混合物。在一些实施方案中，将反应混合物搅拌和加热到所需反应温度，例如约50℃至约100℃。允许酯化反应进行直到得到所需的转化百分比，例如持续几分钟到约几小时。水相可以在完成转化之前被除去。例如，允许反应在水层去除之后继续进行。这一步能够增加游离脂肪酸到乙脂的转化率。转化完成后，可以通过使用本领域公知的标准方法去除(分离)水层而分离脂肪酸乙脂，所述标准方法例如倾析、离心和萃取。
脂肪酸乙酯可以被加工以去除C12和C14脂肪酸以及任何蜡，从而制造总藻油。示例的总藻油组合物记载于例如美国专利申请号14/025762和14/025756中，上述文献的全部内容通过引用结合在此。
E.制造EPA和POA组合物
本文所述的天然藻油和/或总藻油可以被进一步化学或物理修饰，或用任何已知技术处理。在一些实施方案中，所述方法基于最终产物的需求而选择，所述最终产物例如包含约60％至约99％的EPA的Ω-3EPA组合物。
例如，包含约60％至约99％(基于总脂肪酸含量的干重)的EPA的富含EPA的油可以从总藻油中通过去除C16脂肪酸而分离。在一些实施方案中，藻油被加工(精炼)以制造Ω-3EPA组合物，所述组合物包含约60％至约99％的EPA，例如，60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的EPA。
本文所述的富含EPA的油可以与富含POA的组合物共混，例如记载于例如美国专利申请号14/025766中的那些，其全部内容通过引用结合在此。例如Ω-3/Ω-7油共混组合物可以包括25％(干重)的富含EPA的油和50％(干重)的富含POA的组合物；35％的富含EPA的油和35％的富含POA的组合物；以及50％的富含EPA的油和25％的富含POA的组合物。
示例的藻类脂肪酸组合物，例如Ω-3/Ω-7共混物，记载于例如美国专利申请号14/025762中，其公开内容通过引用以全文形式结合在此。
上述记载的包含约60％至约90％EPA的Ω-3组合物可用于制造多种产品，例如但不限于动物或鱼的饲料、食品添加剂、保健产品、食用产品、化妆品、工业品和药品。这些产品的用途的详细说明可以在例如美国专利申请号14/025772中找到，其内容通过引用以全文形式结合在此。
在一些实施方案中，Ω-3组合物是食物产品。食物产品可以是任何用于非人类动物和人类消费的食品，并且包括固体和液体组合物。食物产品可以是动物或人类食品的添加剂。食品包括单不限于一般食品；液态产品，包括奶、饮料、治疗性饮品和保健饮品；功能性食品；补充品；营养食品；婴幼儿制剂，包括用于早产婴儿的制剂；怀孕或哺乳女性的食品；成人食品；老年食品和；动物食品。
在一些实施方案中，Ω-3组合物是非人类饲料产品。术语“非人类饲料”或“非人类食品”指的是供给非人类动物的任何食物，无论是鱼；经济鱼类；观赏鱼；鱼苗；双壳类；软体动物；甲壳类；贝；虾；虾苗；卤虫；轮虫；咸水虾；滤食动物；两栖动物；爬行动物；或者哺乳动物，例如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、猴子、奶牛、牛、猪、绵羊等。动物饲料包括但不限于水产饲料、家畜饲料包括宠物饲料、动物学动物饲料、工作动物饲料、牲畜饲料和它们的组合。
在一些实施方案中，Ω-3组合物是用于(其肉或产品供人类消费的)任何动物的饲料或补充饲料，例如取自所述任何动物的肉、蛋或奶供人类消费。饲喂这些动物时，营养成分例如EPA会结合到肉、奶、蛋或其他来自这种动物的产品中以增加上述产品中这些营养成分的含量。
在一些实施方案中，Ω-3组合物是药用组合物。合适的药用组合物包括但不限于抗炎组合物、治疗冠心病的药物、治疗动脉硬化的药物、化疗试剂、活性赋形剂、骨质疏松症药物、抗镇定剂、抗惊厥剂、抗幽门杆菌(Helicobacterpylori)剂、治疗神经退行性疾病的药物、治疗肝变性疾病的药物、抗生素、降胆固醇组合物和降三酰甘油组合物。在一些实施方案中，组合物是保健产品。保健产品包括：在医师监督下消费或外用的组合物中的食品；和为了特定的营养需求，基于公认的科学理论，通过医学评价建立的用于特定饮食管理条件的食品。
为了口服，Ω-3组合物可以与本领域公知的药学可接受载体结合。所述载体能使本发明的微生物油形成片剂、丸剂、糖衣剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、膏剂和悬浮液等，用于要治疗的受试者经口摄取。在一些实施方案中，剂型是片剂、丸剂或锭。口服用途的药物制剂可以通过以下方法得到：加入固体赋形剂，任选研磨得到的混合物，并在加入合适的辅助试剂(如果需要)后处理颗粒混合物，以得到片剂或糖衣芯。合适的赋形剂包括但不限于：填料，例如糖类，包括但不限于乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；纤维素制剂，例如但不限于玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、凝胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，例如但不限于交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或褐藻酸或其盐例如褐藻酸钠。可用于口服的药物制剂包括但不限于由凝胶制成的推入式(push-fit)胶囊，以及凝胶和增塑剂例如甘油或山梨醇制成的软的、密封的胶囊。在一些实施方案中，剂型是素食剂型，其中所述剂型不是由任何来源于动物的成分形成的，也不含任何来源于动物的成分。在一些实施方案中，素食剂型是素食胶囊。
在一些实施方案中，Ω-3组合物是化妆品。化妆品包括但不限于乳液、面霜、洗剂、面膜、肥皂、洗发水、洗涤剂、面霜、保湿剂、化妆品、浴室用品和分散液体。化妆试剂可以是药用性或非药用性的。
在一些实施方案中，天然藻油和/或Ω-3组合物是工业组合物。在一些实施方案中，组合物是一种或多种工业产品的原料。工业产品包括但不限于聚合物、照相感光物质、清洗剂、工业用油或工业用清洗剂。
IV.实施例
以下实施例被用于解释本发明但不限定于此。
实施例1天然藻油的脂肪酸分布情况
本实施例提供了本发明天然藻油的示例性实施方案。天然藻油由干藻类生物质通过乙醇提取得到。
脂肪酸通过以下方式测量：在甲醇和甲苯的溶液中，以盐酸为催化剂，将所有游离的和酯连接的脂肪酸酯交换为脂肪酸甲酯(FAMEs)。将脂肪酸甲酯用己烷从反应混合物萃取，然后浓缩并用Agilent6890气相色谱分析，该仪器装备有30m×0.25mm×0.25μm毛细管柱，涂布有聚乙二醇固定相(USPG16)。以二十三酸乙酯作为内标进行定量分析。使用AOCSOfficialMethodCe1b-89(通过GLC得到的海洋油的脂肪酸组成)测量脂肪酸乙酯。
未加工的分析脂质提取物通过以下方法从生物质样品制得：用2∶1甲醇∶氯仿(v∶v)提取生物质样品并且用1摩尔氯化钾洗涤得到的提取物，如Bligh&Dyer(CanJBiochemPhysiol，1959，37：911-917)中所记载的。在二氧化硅薄层层析板上进行两种类型的分离。第一种分离中，将1毫克洗涤过的提取物用80∶20∶2(v∶v∶v)的己烷∶二乙醚∶甲酸分离，产生极性脂质组分(PL)连同单酰甘油(MAG)、二酰甘油(DAG)、三酰甘油(TAG)的组分，以及混合的甾醇酯/烃组分(SE/HC)。第二种分离中，将1毫克洗涤过的提取物二维分离。第一次洗脱用70∶30∶2.5(v∶v∶v)的氯仿∶甲醇∶水进行，然后将板干燥，旋转90°，再用80∶9∶12∶2.5(v∶v∶v∶v)的氯仿∶甲醇∶醋酸∶水洗脱。各组分通过与可商购的标准样品共洗脱来鉴定，所述标准样品包括磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、卵磷脂(PC)、磷脂酰甘油(PG)、双半乳糖基三高丝氨酸(DGTS)、双半乳糖基二酰甘油(DGDG)、单半乳糖基二酰甘油(MGDG)、磺基喹诺二酰甘油(SQDG)。在两种情况下，将板在用含有0.05％樱草灵的60∶40(v∶v)的丙酮∶水喷洒后在305nm光下观察。通过以下方法进行定量测量：将每一个点转移到试管中并将吸附到二氧化硅上的脂质直接酯交换成FAMEs，并且按照前述方法将FAMEs定量。
天然藻油通过前述乙醇提取方法提取自四株微拟球藻株。所述株产生的天然藻油包含基于总脂肪酸重量小于5％的花生四烯酸(ARA；20：4n6)(图1)。该天然藻油还包含约31％至约39％的二十碳五烯酸(EPA；20：5n3)并且不含二十二碳六烯酸(DHA；22：6n3)(图1)。EPA∶ARA比例的分析也显示测试的天然油具有范围从约6∶1到约25∶1的比例(图2)。特别地，株1的EPA∶ARA比例是约6∶1；株2的比例是约26∶1；株3的比例是约21∶1，株4的比例是约6∶1。
全部生物质、天然藻油和精油(得自天然油)的脂肪酸分布情况如下表1所示，以mg/g计算。在所有样品中检测到与ARA相比明显更高量的EPA(表1)。在全部生物质、天然藻油和精油中发现没有DHA或明显少量的DHA。
表1、脂肪酸组成
脂肪酸在不同脂质组分中的分布的分析显示，天然藻油中约80％的EPA位于极性脂质中，天然藻油中约20％的EPA在中性脂质中被发现(图3)。对于天然藻油中的ARA，总ARA中的约33％在中性脂质中、约67％在极性脂质中(图3)。
在本发明示例性的天然油中，EPA在天然油中的分布如下：单酰甘油(MAG)组分包含约3.0％的在天然藻油中的EPA；二酰甘油(DAG)包含约4.6％的EPA；游离脂肪酸组分(FFA)包含约10.6％的EPA；并且三酰甘油(TAG)组分包含约7.4％的在该天然油中的EPA。在示例性的天然藻油的极性脂质中的EPA分布如下：该天然油中6.6％的EPA在卵磷脂(PC)组分中；10.1％的EPA在磷脂酰甘油(PG)组分中；1.7％的EPA在磷脂酰乙醇胺(PE)组分中；2.0％的EPA在磺基喹诺二酰甘油(SQDG)组分中；9.7％的EPA在双半乳糖基二酰甘油(DGDG)组分中；6.9％在二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)组分中；以及37.4％的EPA在单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分中。EPA没有在胆固醇酯(CE/HC)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)组分中检测到，参见图4。EPA在天然藻油的极性脂质中的分布显示在图5中。在极性脂质中，MGDG醣脂类含有大部分EPA。
ARA在该天然油的中性脂质中的分布如下：单酰甘油(MAG)组分包含约5.3％的在天然藻油中的ARA；二酰甘油(DAG)包含约3.7％的ARA；游离脂肪酸组分(FFA)包含约17.7％的ARA；并且三酰甘油(TAG)包含约11.7％的在该天然油中的ARA。在示例性的天然藻油的极性脂质中ARA的分布如下：该天然油中12.6％的ARA在卵磷脂(PC)组分中；13.8％在磷脂酰乙醇胺(PE)组分中；13.7％的ARA在磺基喹诺二酰甘油(SQDG)组分中；6.6％在二酰甘油三甲基高丝氨酸(DGTS)组分中；并且14.8％在单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分中。在天然藻油的胆固醇酯(CE/HC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)和双半乳糖基二酰甘油(DGDG)组分中没有检测到ARA，参见图4。
虽然为便于清楚理解，上述发明通过说明和举例的方式在一些细节上进行了描述，本领域技术人员仍会理解在后附权利要求范围内可以进行一定的改变和修改。此外，本文中提供的每个文献通过引用以其全文形式结合，如同每个文献单独通过引入而结合。

Claims (30)

1.一种天然藻油组合物，包含：基于总脂肪酸重量，
约30％到约35％的二十碳五烯酸(EPA)，
少于约10％的花生四烯酸(ARA)，以及
少于约0.5％的二十二碳六烯酸(DHA)。
2.一种天然藻油组合物，包含：
基于总脂肪酸重量，至少约2％的三酰甘油组分，
其中所述天然藻油中约7％的二十碳五烯酸(EPA)在三酰甘油组分中，
其中所述天然藻油中约11％的花生四烯酸(ARA)在三酰甘油组分中，
并且
其中二十二碳六烯酸(DHA)基本上不存在于三酰甘油组分中。
3.一种天然藻油组合物，包含：
基于总脂肪酸重量，至少约5％的单半乳糖基二酰甘油(MGDG)组分，
其中所述天然藻油中约37％的二十碳五烯酸(EPA)在MGDG组分中，
其中所述天然藻油中约14％的花生四烯酸(ARA)在MGDG组分中，
并且
其中二十二碳六烯酸(DHA)基本上不存在于MGDG组分中。
4.前述任一项权利要求所述的组合物，其中DHA少于约0.1％。
5.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物基本上不含有DHA。
6.前述任一项权利要求所述的组合物，其中EPA∶ARA比例在约5∶1至约40∶1的范围内。
7.前述任一项权利要求所述的组合物，其中EPA∶ARA比例在约6∶1至约30∶1的范围内。
8.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述天然藻油中约80％的EPA在极性脂质中，并且约20％的EPA在中性脂质中。
9.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述天然藻油中约37％的EPA在单半乳糖基二酰甘油脂质中。
10.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述天然藻油中约10％的EPA在游离脂肪酸、磷脂酰甘油脂质或双半乳糖基二酰甘油脂质中。
11.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述藻油来自于藻类生物质。
12.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述藻类生物质是干的藻类生物质。
13.权利要求12所述的组合物，其中所述干的藻类生物质包含至少约10％的脂质、至少约15％的碳水化合物、至少约25％的蛋白质、至少约3％的水分以及至少约1％的灰分。
14.权利要求11所述的组合物，其中所述藻类生物质包含微拟球藻(Nannochloropsis)细胞。
15.权利要求14所述的组合物，其中所述微拟球藻选自由海洋富油微拟球藻(Nannochloropsisgaditana)、颗粒微拟球藻(Nannochloropsisgranulate)、湖微拟球藻(Nannochloropsislimnetica)、大洋微拟球藻(Nannochloropsisoceanica)、眼点微拟球藻(Nannochloropsisoculata)和盐微拟球藻(Nannochloropsissalina)组成的组。
16.权利要求14所述的组合物，其中所述微拟球藻是突变株。
17.前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述天然藻油被进一步加工以制备含有约60-99％的EPA的Ω-3组合物。
18.一种用于制备权利要求1所述的天然藻油组合物的方法，所述方法包括：
(a)得到全部藻类生物质；
(b)向所述藻类生物质中加入乙醇；和
(c)从所述藻类生物质中提取液体，从而得到天然藻油。
19.权利要求18所述的方法，其中所述藻类生物质是干的藻类生物质。
20.权利要求19所述的方法，其中所述干的藻类生物质包含至少约10％的脂质、至少约15％的碳水化合物、至少约25％的蛋白质、至少约3％的水分以及至少约1％的灰分。
21.权利要求18所述的方法，其中所述藻类生物质包含微拟球藻细胞。
22.权利要求18所述的方法，其中微拟球藻选自由海洋富油微拟球藻、颗粒微拟球藻、湖微拟球藻、大洋微拟球藻、眼点微拟球藻和盐微拟球藻组成的组。
23.权利要求21所述的方法，其中微拟球藻是突变株。
24.权利要求18所述的方法，其中所述天然藻油具有基于总脂肪酸重量少于约0.1％的DHA。
25.权利要求18所述的方法，其中所述天然藻油基本上不含DHA。
26.权利要求18所述的方法，其中EPA∶ARA重量比例在约5∶1至约40∶1的范围内。
27.权利要求18所述的方法，其中EPA∶ARA重量比例在约6∶1至约30∶1的范围内。
28.权利要求18所述的方法，其中所述天然藻油中约80％的EPA在极性脂质中，并且约20％的EPA在中性脂质中。
29.权利要求18所述的方法，其中所述天然藻油中约37％的EPA在单半乳糖基二酰甘油脂质中。
30.权利要求18所述的方法，其中所述天然藻油中约10％的EPA在游离脂肪酸、磷脂酰甘油脂质或双半乳糖基二酰甘油脂质中。
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