CN105181825A - 一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法。该检测方法通过优化选择11号峰黄芩苷作为指纹图谱中的内参考峰，确定了茵胆平肝胶囊的共有特征峰3号峰绿原酸、4号峰龙胆苦苷、5号峰芍药苷、6号峰甘草苷、8号峰阿魏酸等的保留时间，能够全面地、快速地检测茵胆平肝胶囊，有利于其全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法。
背景技术
肝炎是流行性较为普遍的传染病，一般分为黄疸型肝炎和慢性肝炎。茵胆平肝胶囊的原料药组成为茵陈、龙胆、黄岑、猪胆粉、栀子、白芍、当归、甘草，功能主治是清热利湿、消黄，临床上用于急性黄疸型肝炎和慢性肝炎的治疗。中国专利文献CN1275381A公开了茵胆平肝胶囊的原料药组成及其制备方法。中国专利文献CN101987121B公开了一种茵胆平肝胶囊的检测方法，即通过HPLC法测定该治疗肝炎的药物组合物中的黄岑苷的含量，还公开了茵陈的TLC鉴别法、猪去氧胆酸的TLC鉴别法、栀子苷和芍药苷的TLC鉴别法、当归的TLC鉴别法等对茵胆平肝胶囊的质量进行控制。
然而，一方面，通过上述单一成分的含量测定或鉴别茵胆平肝胶囊，不能从整体上检测和控制其质量；另一方面，通过单一成分的含量测定联合其他成分的鉴别茵胆平肝胶囊，费时、费力，难以广泛地应用于生产实践。
因此，建立一种能够全面地、快速地检测茵胆平肝胶囊的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。
发明内容
为此，本发明所要解决的是现有的茵胆平肝胶囊的检测方法单一检测指标不能从整体上检测和控制其质量、多个检测指标联合检测费时、费力，难以广泛地应用于生产实践的技术问题，从而提出一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法，所述药物制剂的原料药组成为：茵陈、龙胆、黄岑、猪胆粉、栀子、白芍、当归、甘草；
该检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂5-15重量份，研细，取1-3重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40-60％甲醇溶液40-60体积份，称定重量，加热回流提取20-40分钟，放冷，再称定重量，取40-60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005-0.00015重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为50-60：50-40的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.005-0.015体积份，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱；
当所述重量份的单位为g时，所述体积份的单位为mL。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，该检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂10重量份，研细，取2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50体积份，称定重量，加热回流提取30分钟，放冷，再称定重量，取50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00009重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为55：45的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.010体积份，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：茵陈300-700重量份、龙胆200-600重量份、黄岑50-150重量份、猪胆粉50-150重量份、栀子50-250重量份、白芍50-150重量份、当归50-150重量份、甘草50-150重量份。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：茵陈500重量份、龙胆400重量份、黄岑100重量份、猪胆粉100重量份、栀子150重量份、白芍100重量份、当归100重量份、甘草100重量份；或者
茵陈350重量份、龙胆550重量份、黄岑75重量份、猪胆粉125重量份、栀子75重量份、白芍125重量份、当归75重量份、甘草125重量份；或者
茵陈650重量份、龙胆250重量份、黄岑125重量份、猪胆粉75重量份、栀子225重量份、白芍75重量份、当归125重量份、甘草75重量份；或者
茵陈400重量份、龙胆500重量份、黄岑90重量份、猪胆粉110重量份、栀子130重量份、白芍120重量份、当归80重量份、甘草130重量份。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述药物制剂由以下方法制备：
取猪胆粉加2-6倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加0.5-2.5倍量固体氢氧化钠与3-5倍量水溶解，加热皂化6-16小时，放置过夜，加入4-6倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用4-6倍量的60-80％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取1-4小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用8-12倍量的水煎煮1-3小时，第二次用6-10倍量的水煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15-1.30，放冷后加乙醇使含醇量达60-80％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述药物制剂由以下方法制备：
取猪胆粉加4倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加1.5倍量固体氢氧化钠与4倍量水溶解，加热皂化12小时，放置过夜，加入5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用5倍量的70％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取2.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用10倍量的水煎煮2小时，第二次用8倍量的水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，放冷后加乙醇使含醇量达70％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂；或者
取猪胆粉加3倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加0.8倍量固体氢氧化钠与4.5倍量水溶解，加热皂化10小时，放置过夜，加入5.5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用4.5倍量的78％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取1.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用11倍量的水煎煮1.4小时，第二次用9.5倍量的水煎煮1.2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.28，放冷后加乙醇使含醇量达65％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂；或者
取猪胆粉加5.5倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加2.3倍量固体氢氧化钠与3.2倍量水溶解，加热皂化15小时，放置过夜，加入4.5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用5.5倍量的64％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取3.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用8.5倍量的水煎煮2.5小时，第二次用6.3倍量的水煎煮2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18，放冷后加乙醇使含醇量达75％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
所述药学上可接受的辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。
本发明治疗肝炎的药物制剂的相关处方及制备方法详见中国专利文献CN1275381A。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的共有特征峰为：3号峰绿原酸、4号峰龙胆苦苷、5号峰芍药苷、6号峰甘草苷、8号峰阿魏酸和11号峰黄岑苷，各峰号的保留时间分别为：3号峰6.491min、4号峰7.655min、5号峰8.481min、6号峰9.683min、8号峰11.196min、11号峰21.436min。
本发明上述指纹图谱的检测方法中，所述治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的共有特征峰还包括1号峰、2号峰、7号峰、9号峰、10号峰、12号峰、13号峰和14号峰，各峰号的保留时间分别为：1号峰4.687min、2号峰5.893min、7号峰10.526min、9号峰11.708min、10号峰20.215min、12号峰29.279min、13号峰34.097min、14号峰37.245min。
本发明上述检测方法在治疗肝炎的药物制剂的质量检测领域中的用途。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
本发明一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法所得到的治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱，通过优化选择11号峰黄芩苷作为指纹图谱中的内参考峰，确定了茵胆平肝胶囊的共有特征峰3号峰绿原酸、4号峰龙胆苦苷、5号峰芍药苷、6号峰甘草苷、8号峰阿魏酸等的保留时间，能够全面地、快速地检测茵胆平肝胶囊，有利于其全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1是本发明实验例1中不同批次的茵胆平肝胶囊的液相色谱图谱；
图2是本发明实验例1中不同批次的茵胆平肝胶囊的匹配图谱；
图3是本发明实验例1中不同批次的茵胆平肝胶囊产生的对照指纹图谱；
图4是本发明实验例1中专属性实验中的不同批次的茵胆平肝胶囊的匹配图谱；
图5是本发明实验例1中指纹图谱分析中的茵胆平肝胶囊的液相色谱图谱中色谱峰的确认；
图6是本发明实验例2中不同批次的茵胆平肝胶囊的匹配图谱；
图7是本发明实验例2中不同批次的茵胆平肝胶囊产生的对照指纹图谱；
图8是本发明实验例2中专属性实验中的不同批次的茵胆平肝胶囊的匹配图谱。
具体实施方式
实施例1
以下实施例和实验例中所用的茵胆平肝胶囊的原料药组成为：茵陈350g、龙胆550g、黄岑75g、猪胆粉125g、栀子75g、白芍125g、当归75g、甘草125g；
按照以下制备方法进行制备：取猪胆粉加3倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加0.8倍量固体氢氧化钠与4.5倍量水溶解，加热皂化10小时，放置过夜，加入5.5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用4.5倍量的78％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取1.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用11倍量的水煎煮1.4小时，第二次用9.5倍量的水煎煮1.2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.28，放冷后加乙醇使含醇量达65％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成胶囊剂。
实施例2
本实施例茵胆平肝胶囊的指纹图谱的检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂10g，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50mL，称定重量，加热回流提取30分钟，放冷，再称定重量，取50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.00009g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为55：45的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.010mL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例3
本实施例茵胆平肝胶囊的指纹图谱的检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂5g，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40％甲醇溶液40mL，称定重量，加热回流提取20分钟，放冷，再称定重量，取40％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.00005g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为50：50的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.005mL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实施例4
本实施例茵胆平肝胶囊的指纹图谱的检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂15g，研细，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液60mL，称定重量，加热回流提取40分钟，放冷，再称定重量，取60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.00015g的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为60：40的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.015mL，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
实验例1
1、仪器与试药
仪器：液相色谱仪：Agilent1200型。
试药：茵胆平肝胶囊，甲醇为色谱纯、水为超纯水，其它试剂为分析纯。
2、实验方法
按照实施例2的方法对20批茵胆平肝胶囊(1201001～1205036)进行实验，所得液相色谱图如图1所示。
利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，经过数据导入，多点校正和数据匹配，以平均数法建立液相色谱对照指纹图谱，得到14个完全匹配的共有峰，如图2、图3所示。
根据峰匹配结果，以峰面积为参数，计算出待测指纹图谱与对照图谱的整体相似度，结果显示相似度在0.917～1.000之间，如表1所示。
表1茵胆平肝胶囊的液相指纹图谱相似度结果
3、专属性实验
另取32批茵胆平肝胶囊样品用于验证以上建立的液相对照指纹图谱的专属性。按照实施例2的方法进行实验，测得液相色谱图，利用“中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件”，经过数据导入，多点校正和数据匹配，以平均数法计算出此32批待测茵胆平肝胶囊液相色谱图谱与对照指纹图谱的整体相似度。实验结果分别见图4、表2、表3、表4、表5和表6。
表2茵胆平肝胶囊的液相指纹图谱相似度结果
表3茵胆平肝胶囊共有峰的保留时间与峰面积
表4茵胆平肝胶囊共有峰的保留时间与峰面积(续)
表5茵胆平肝胶囊共有峰的保留时间与峰面积(续)
表6茵胆平肝胶囊共有峰的保留时间与峰面积(续)
根据32批次茵胆平肝胶囊供试品的实验结果，标定共有14个相对比较稳定的指纹峰。
采用相对保留时间标定指纹峰，并选择11号峰黄芩苷作为内参考峰，利用“中药指纹图谱计算机辅助相似度计算软件”对谱图进行校正匹配，得到14个完全匹配的共有峰，见图4。
32批制剂的共有峰数据匹配结果见表3，其相似度均>0.9，且共有峰的总面积的相对标准偏差为1.64％，表明这20批制剂质量稳定。同时，也反映了所建立的分离分析方法可用于茵胆平肝胶囊的指纹图谱建立和分析。
4、指纹图谱分析
以11号峰黄芩苷为参照峰确定了茵胆平肝胶囊的14个共有峰，并通过运用药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》输入20个批次茵胆平肝胶囊液相色谱图，选择平均数法，时间窗为0.20，自动匹配，并经多点校正后，共标定14共有峰，生成对照指纹图谱，同时得到20个批次茵胆平肝胶囊的指纹图谱。经过对照品定性证实，3号峰为绿原酸，4号峰为龙胆苦苷，5号峰为芍药苷，6号峰为甘草苷，8号峰为阿魏酸，11号峰为黄芩苷，结果如图5所示。
各批样品的指纹图谱与对照指纹图谱之间的相似度，结果32批样品相似度均在0.9以上，相似度可达0.9以上，说明茵胆平肝胶囊中所含有的成分较为一致，整体相似度较好。验证结果表明建立的茵胆平肝胶囊对照指纹图谱专属性好，可用于评价茵胆平肝胶囊质量的一致性和稳定性。
不同批号茵胆平肝胶囊指纹图谱的色谱峰整体上基本一致，表明茵胆平肝胶囊制备工艺稳定，对原料药材的质量控制良好，保证了茵胆平肝胶囊质量的稳定性和一致性，所建立的HPLC指纹图谱可有效地控制茵胆平肝胶囊的质量。
实验例2
1、仪器与试药
本实验例仪器、试药与实验例1相同。
2、实验方法相同
本实验例实验方法与实验例1相同，区别仅在于：不将黄芩苷作为原指纹图谱的共有峰之一、将黄芩苷色谱峰不积分，建立对照指纹图谱，得到13个完全匹配的共有峰。实验结果如图6、图7所示。
根据峰匹配结果，以峰面积为参数，计算出待测指纹图谱与对照图谱的整体相似度。实验结果如表7所示，相似度在0.533～1.000之间。
表7将黄芩苷色谱峰不积分、茵胆平肝胶囊的液相指纹图谱相似度结果
3、专属性实验
本实验例专属性实验的实验步骤与实验例1的实验方法相同，实验结果见图8、表8。
表8将黄芩苷色谱峰不积分、茵胆平肝胶囊的液相指纹图谱相似度结果
本实验例将黄芩苷色谱峰不积分，重新建立茵胆平肝胶囊的液相色谱对照指纹图谱，同样采用32批茵胆平肝胶囊样品与建立的对照指纹图谱比对，由表8可知，相似度达0.626～0.961，RSD％为11.5。
由表2和表8可知，实验例1检测的液相色谱对照指纹图谱，采用32批茵胆平肝胶囊样品与建立的对照指纹图谱比对，相似度在0.915以上；而实验例2检测的液相色谱对照指纹图谱(将黄芩苷色谱峰不积分)，同样采用32批茵胆平肝胶囊样品与建立的对照指纹图谱比对，相似度在0.626～0.961。
因此，实验例1确定的液相色谱对照指纹图谱(含黄芩苷积分)的整体相似度比实验例2确定的液相色谱对照指纹图谱(去掉黄芩苷积分)的整体相似度好。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的检测方法，其特征在于，
所述药物制剂的原料药组成为：茵陈、龙胆、黄岑、猪胆粉、栀子、白芍、当归、甘草；
该检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂5-15重量份，研细，取1-3重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40-60％甲醇溶液40-60体积份，称定重量，加热回流提取20-40分钟，放冷，再称定重量，取40-60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00005-0.00015重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为50-60：50-40的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.005-0.015体积份，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱；
当所述重量份的单位为g时，所述体积份的单位为mL。
2.根据权利要求1所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，
该检测方法包括如下步骤：
(1)取待测药物制剂10重量份，研细，取2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液50体积份，称定重量，加热回流提取30分钟，放冷，再称定重量，取50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
(2)精密称取黄岑苷对照品，加甲醇制成每1体积份含0.00009重量份的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸体积比为55：45的混合溶液为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算不低于3000；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液0.010体积份，注入高效液相色谱仪，测定，分别得供试品溶液和对照品溶液的液相色谱；
(5)利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液和对照品溶液的液相色谱分别经过数据导入，多点校正和数据匹配，即得指纹图谱。
3.根据权利要求1或2所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，
所述药物制剂的原料药组成为：茵陈300-700重量份、龙胆200-600重量份、黄岑50-150重量份、猪胆粉50-150重量份、栀子50-250重量份、白芍50-150重量份、当归50-150重量份、甘草50-150重量份。
4.根据权利要求3所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，
所述药物制剂的原料药组成为：茵陈500重量份、龙胆400重量份、黄岑100重量份、猪胆粉100重量份、栀子150重量份、白芍100重量份、当归100重量份、甘草100重量份；或者
茵陈350重量份、龙胆550重量份、黄岑75重量份、猪胆粉125重量份、栀子75重量份、白芍125重量份、当归75重量份、甘草125重量份；或者
茵陈650重量份、龙胆250重量份、黄岑125重量份、猪胆粉75重量份、栀子225重量份、白芍75重量份、当归125重量份、甘草75重量份；或者
茵陈400重量份、龙胆500重量份、黄岑90重量份、猪胆粉110重量份、栀子130重量份、白芍120重量份、当归80重量份、甘草130重量份。
5.根据权利要求1-4任一项所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
6.根据权利要求1-5任一项所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由以下方法制备：
取猪胆粉加2-6倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加0.5-2.5倍量固体氢氧化钠与3-5倍量水溶解，加热皂化6-16小时，放置过夜，加入4-6倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用4-6倍量的60-80％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取1-4小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用8-12倍量的水煎煮1-3小时，第二次用6-10倍量的水煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15-1.30，放冷后加乙醇使含醇量达60-80％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
7.根据权利要求6所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由以下方法制备：
取猪胆粉加4倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加1.5倍量固体氢氧化钠与4倍量水溶解，加热皂化12小时，放置过夜，加入5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用5倍量的70％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取2.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用10倍量的水煎煮2小时，第二次用8倍量的水煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20，放冷后加乙醇使含醇量达70％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂；或者
取猪胆粉加3倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加0.8倍量固体氢氧化钠与4.5倍量水溶解，加热皂化10小时，放置过夜，加入5.5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用4.5倍量的78％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取1.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用11倍量的水煎煮1.4小时，第二次用9.5倍量的水煎煮1.2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.28，放冷后加乙醇使含醇量达65％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂；或者
取猪胆粉加5.5倍量水溶解，加盐酸并加热至煮沸酸化，放冷，加水析出沉淀，沉淀物加2.3倍量固体氢氧化钠与3.2倍量水溶解，加热皂化15小时，放置过夜，加入4.5倍量盐酸酸化，放冷，析出沉淀，滤过，沉淀物用水冲洗至中性，烘干，粉碎成细粉，得精制猪胆粉；
取当归切片，用5.5倍量的64％乙醇浸渍过夜，强制循环动态提取3.5小时，提取液回收乙醇、并浓缩成稠膏；
取白芍粉碎成细粉，其余五味加水合并煎煮二次，第一次用8.5倍量的水煎煮2.5小时，第二次用6.3倍量的水煎煮2.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18，放冷后加乙醇使含醇量达75％，静置过夜，取上清液回收乙醇并浓缩成稠膏，与当归稠膏合并，加白芍粉、精制猪胆粉，按常规方法加入常规辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
8.根据权利要求2所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的共有特征峰为：3号峰绿原酸、4号峰龙胆苦苷、5号峰芍药苷、6号峰甘草苷、8号峰阿魏酸和11号峰黄岑苷，各峰号的保留时间分别为：3号峰6.491min、4号峰7.655min、5号峰8.481min、6号峰9.683min、8号峰11.196min、11号峰21.436min。
9.根据权利要求8所述的指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述治疗肝炎的药物制剂的指纹图谱的共有特征峰还包括1号峰、2号峰、7号峰、9号峰、10号峰、12号峰、13号峰和14号峰，各峰号的保留时间分别为：1号峰4.687min、2号峰5.893min、7号峰10.526min、9号峰11.708min、10号峰20.215min、12号峰29.279min、13号峰34.097min、14号峰37.245min。
10.权利要求1-9任一项所述的检测方法在治疗肝炎的药物制剂的质量检测领域中的应用。
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