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一种鉴别红豆杉种的dna条形码引物对、试剂盒及方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对、试剂盒，试剂盒中含有如下DNA条形码引物对：上游引物Taxus Indel‑F(SEQ ID NO.1)和下游引物Taxus Indel‑R(SEQ ID NO.2)。所述DNA条形码包括中国红豆杉(Taxus chinensis)DNA条形码、南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)DNA条形码、东北红豆杉(Taxus cuspidata)DNA条形码和欧洲红豆杉(Taxus baccata)DNA条形码；中国红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6所示，南方红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，东北红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.9所示，欧洲红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.10所示。该试剂盒及鉴别方法简单易行，结果准确可靠，能有效用于红豆杉属物种识别、保护和相关研究。

Description

一种鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法
技术领域
本发明属于生物学技术领域，是利用短的DNA片段对物种进行识别和鉴定，即DNA条形码(DNA barcoding)技术，具体涉及一种鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。
背景技术
DNA条形码技术是当前国际生物多样性研究的热点，即通过使用短的标准DNA片段，对物种进行快速、准确的识别和鉴定。生物条形码联盟(Consortium for the Barcodeof Life,CBOL)阐述了DNA条形码的优点：(1)不受个体形态特征限制；(2)不受个体发育阶段影响；(3)对于分类学中难以区分的类群,采用DNA条形码可以抛开形态相似的假象,从基因水平上提供分类依据；(4)核苷酸序列组成的数据库可以提供明确的信息，不仅弥补了形态描述的不足，而且可以加快已知物种的识别速度,同时便于新物种的发现,将会使分类学科的发展更加快速和深入；(5)如果设想的条形码扫描仪可以实现，将会减少对传统分类学人力和物力的需求。
DNA条形码技术发明以来，已在动物研究中得到广泛的应用，所采用的标准片段是线粒体COI基因中约650bp的序列片段。然而在植物中，DNA条形码的研究进展相对缓慢，这是因为植物基因组很难找到像动物中COI一样的通用单个片段基因，即便找到“完美”的植物条形码，靠单亲遗传的一个片段来区分杂交种或存在基因渗透的类群也会存在诸多问题。多数研究结果也显示,采用单片段的识别率很低,不能达到条形码的要求，因此筛选植物条形码不能仅关注单个片段,必要时应增加片段。植物中线粒体基因组进化速率较慢，因此条形码片段主要在叶绿体基因组上进行选择，被提议的编码基因片段主要有rpoB、rpoC1、matK、rbcL、UPA，非编码区片段有trnH-psbA、atpF-atpH、psbK-psbI，此外还有核基因ITS片段。目前，植物DNA条形码尚处于对所提议的各片段比较和评价阶段，主要有5种组合方案被提出，但还未获得一致的标准片段。国内外研究认为，理想的DNA条形码应符合以下几个标准：(1)单一位点就能有效鉴别不同物种；(2)在种间有明显的遗传变异和分化,同时种内变异足够小；(3)片段足够短,便于一个反应完成测序工作，且便于DNA提取和PCR扩增；(4)存在保守区域,便于设计通用引物。从生物多样性观点来看，仅靠几个保守的基因片段来识别和鉴别种类繁多的植物物种目前确实面临不小的挑战。但针对物种数量有限的某一科或属，DNA条形码是准确区分不同植物种的利器，在物种识别和保护中应用潜力巨大。
传统植物分类是以植物外部器官的形态特征作为依据，对其进行分类和命名。红豆杉属物种外部形态相近，同时，由于环境因素的影响，不同物种的分辩经常会存在很大困难，非常有必要寻找新的、有效的鉴别条形码和方法。就红豆杉在我国的分布种而言，虽然不同的分类系统所认可的种间关系有所不同，但中国红豆杉、东北红豆杉、西藏红豆杉和南方红豆杉种(变种)的地位得到了不同分类系统的共识，也得到了分子数据的支持。Liu等利用植物DNA通用条形码(rbcL、matK、trnH-psbA、trnL-F和ITS)对红豆杉属物种进行鉴别，trnL-F和ITS单个基因片段和其它三个条形码相互组合能鉴别红豆杉属多个物种，但这些位点的基因片段长度均较长，超过了700bp。对单一位点TrnL-F和ITS来说，它们在鉴别南方红豆杉时，种内存在丰富的遗传变异，并不能将同一物种完全聚为一类，也就是说，这两个位点还没有达到完全鉴别南方红豆杉种的目的。目前，这些条形码和序列都以论文形式公开发表，未申请专利保护。
鉴于红豆杉属物种表型鉴别的困难和资源保护的需求，积极探寻更为理想、有效的DNA条形码和鉴别技术，对红豆杉的保护和研究都具有十分重要的意义。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对、试剂盒及方法。
为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
所述鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对为：
上游引物Taxus Indel-F：TCC CAG AAT ACT CCT TAT(SEQ ID NO.1)；
下游引物Taxus Indel-R：GTT CTG GCT TCC TCT AGC ATT TCA T(SEQ ID NO.2)。
所述鉴别红豆杉种的DNA条形码试剂盒中含有上述DNA条形码引物对。
其中，所述的红豆杉种包括中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉。所述DNA条形码包括中国红豆杉DNA条形码、南方红豆杉DNA条形码、东北红豆杉DNA条形码和欧洲红豆杉DNA条形码；中国红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6所示，南方红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，东北红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.9所示，欧洲红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.10所示。
所述鉴别红豆杉种的方法包括如下步骤：
(1)提取待测物种的DNA；
(2)用上述引物对对待测物种的DNA进行PCR扩增；
(3)对PCR产物进行测序后，将PCR产物与上述的DNA条形码进行比对来鉴别红豆杉物种。
下面对本发明作进一步说明：
本发明针对红豆杉种有效鉴别的现实需求，同时考虑DNA条形码理想位点的要求，主要发明内容包括：
(1)DNA条形码(Taxus-indel)的序列特征
所发明的DNA条形码源于红豆杉核基因组，是一段长度为212-215bp的单一短序列位点。利用该条形码可对红豆杉属的4主要种，中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉进行有效鉴别。
(2)DNA条形码的引物序列
所发明的DNA条形码分上游引物Taxus Indel-F和下游引物Taxus Indel-R。引物序列分别为：
Taxus Indel-1-F：TCC CAG AAT ACT CCT TAT(SEQ ID NO.1)
Taxus Indel-1-R：GTT CTG GCT TCC TCT AGC ATT TCA T(SEQ ID NO.2)
(3)4个红豆杉种的标准序列
利用该条形码引物，经序列测定，分别构建了红豆杉属4个主要种的标准序列，包括中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉，其中中国红豆杉有4个标准单倍型(Htzh1至Htzh4，分别对应SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6所示序列)、南方红豆杉有2标准个单倍形(Hma1至Hma2，分别对应SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示序列)、东北红豆杉和欧洲红豆杉各有一个标准单倍型，分别为Htc(SEQ ID NO.9所示序列)和Htb(SEQ ID NO.10所示序列)。
(4)鉴别方法
利用上述条形码引物，对待检物种DNA进行PCR扩增，PCR产物测序后通过序列比对来鉴别红豆杉物种。若检测物种的序列长度为215bp(AAT插入)，则该物种为中国红豆杉。若检测物种序列长度为212bp(AAT缺失)，参照不同种的标准序列，通过构建系统进化树对待检测物种进行准确鉴别。
鉴别方法具体如下：
A、待检物种的DNA提取
改良CTAB法或DNA试剂盒都提取到符合质量要求的DNA，DNA纯度要求1.8左右，浓度符合PCR常规要求。
B、PCR扩增
PCR扩增体系共10μl，其中含2×Multiplex master缓冲液5.0μl,2μM的正向、反向引物各1.0μl，5-10ng DNA模板1.0μl，H2O 2.0μl。PCR扩增程序为95C°预变性15min，接着35个循环的94℃变性30s，60℃退火90s，72℃延伸60s，最后在60℃延伸30min，4℃保存。利用ExoSap去除PCR产物中的dNTPs和剩余引物，9.0μl的体系中含6.0μl的ExoSap 100×稀释液、PCR产物3.0μl。混合液37℃温浴60min，80℃灭活20min，4℃保存。
C、PCR产物测序
PCR产物直接测序或克隆测序均可。直接测序方法为：PCR产物用Terminator v3.1 Cycle Sequencing试剂盒(Applied Biosystems)纯化处理。BigDye纯化体系共10μl，其中含5×测序缓冲液2.0μl，BigDye 0.5μl，单引物(F或R)1.0μl，H2O 3.5μl，ExoSap处理后的PCR产物3.0μl。纯化程序为96℃预变性2min，接着25个循环的96℃变性10s，50℃退火5s，最后在60℃延伸4min，4℃保存。BigDye纯化产物再经乙醇纯化后在ABI3100测序仪上双向测序。PCR克隆测序具体参照各公司测序方法或流程。
D、序列处理与比对分析
利用Sequencher 4.10软件(www.genecodes.com)对原始序列进行校对、双向拼接，选取正向引物(F)和反向引物(R)之间的序列片段，利用MEGA5.05软件，以4个红豆杉种的标准序列对参照，对待检物种序列比对分析，建立系统进化树并鉴别该物种。
与现在技术相比，本发明的有益效果为：
(1)符合理想DNA条形码的标准
A.发明的DNA条形码是单一位点标记，不需要多位点组合就可对多个红豆杉物种有效鉴别。
B.发明的DNA条形码片段很短，序列长度仅212-215bp，远低于已有相关DNA条形码。
C.发明的DNA条形码可在红豆杉种间检测到丰富的遗传变异，但种内变异很小，能将不同来源的同一种完全聚为一类。
(2)鉴定结果准确率高
所发明的DNA条形码能准确鉴别我国主要红豆杉属物种，包括中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉，特别是对南方红豆杉的鉴别能力显著优于现有DNA条形码。
(3)实验操作简单
DNA提取、PCR扩增和基因序列测定都是目前分子生物学常用方法，技术成熟，结果可靠，实验操作简单。
总之，本发明提供了一种红豆杉属物种鉴别的DNA条形码(Taxus Indel)、位点引物和鉴定方法。利用一个单一短序列DNA片段就能有效鉴别红豆杉属的4个主要种，包括中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉，该序列片段对南方红豆杉的鉴别能力明显优于其它已DNA条形码。所发明DNA条形码的基因序列长度为212-215bp，通过3碱基(AAT)的插入可快速鉴别出中国红豆杉(215bp,含有AAT)。南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉3个物种的序列长度为212bp(缺失AAT)，利用和对应物种标准基因序列一起构建系统进化树的方法进行鉴别。鉴别方法先利用该条形码引物对待检物种进行PCR扩增，测序序列与本发明提供的红豆杉不同物种标准序列进行比对，根据AAT碱基插入(缺失)和构建的系统进化树来确定待检物种的种类。该鉴别方法简单易行，结果准确可靠，能有效用于红豆杉属物种识别、保护和相关研究。
附图说明
图1为利用Maximum Likelihood(ML)(图1A)、Neighbor-joining(NJ)(图1B)、UPGMA(图1C)和Minimun Evolution(ME)(图1D)4种方法构建的系统进化树；
图2为红豆杉属4个种标准序列175—215bp序列图；通过3碱基AAT的插入(缺失)可鉴别中国红豆杉种；
图3为红豆杉属4个种的标准序列系统树(分别利用4种方法构建)。
具体实施方式
实施例1(实施例中所用引物对及DNA条形码均为上文所描述的引物对及DNA条形码)
从不同群体，植物园采集中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉标本共26份，其中中国红豆杉标本6份，采自湖南舜皇山4份(Tzh1、Tzh3、Tzh4-Tzh5)、河南2份(Tzh2、Tzh6)；南方红豆杉12份标本，采自湖南双牌3份(Spg6-Spg8)、湖南安化2份(ah2、ah4)、湖南莽山3份(ms1-ms2,ms13)、广东连山2份(ls16、ls20)、广东乐昌1份(cq4)、江西分宜1份(jx6)；东北红豆杉6份，采自日本森林综合研究所(Tc1-Tc6)；欧洲红豆杉2份，采自日本森林综合研究所(Tb1-Tb2)。
利用所发明的DNA条形码对这些物种进行鉴定。
具体方法如下：
1.等检物种基因组DNA提取按改良CTAB法；
2.PCR扩增(PCR扩增体系共10μl，其中含2×Multiplex master缓冲液5.0μl,2μM的正向、反向引物各1.0μl，5-10ng DNA模板1.0μl，H2O 2.0μl。PCR扩增程序为95C°预变性15min，接着35个循环的94℃变性30s，60℃退火90s，72℃延伸60s，最后在60℃延伸30min，4℃保存。利用ExoSap去除PCR产物中的dNTPs和剩余引物，9.0μl的体系中含6.0μl的ExoSap100×稀释液、PCR产物3.0μl。混合液37℃温浴60min，80℃灭活20min，4℃保存)；
3.直接测序法对PCR产物测序(直接测序方法为：PCR产物用Terminatorv3.1 Cycle Sequencing试剂盒(Applied Biosystems)纯化处理。BigDye纯化体系共10μl，其中含5×测序缓冲液2.0μl，BigDye 0.5μl，单引物(F或R)1.0μl，H2O 3.5μl，ExoSap处理后的PCR产物3.0μl。纯化程序为96℃预变性2min，接着25个循环的96℃变性10s，50℃退火5s，最后在60℃延伸4min，4℃保存。BigDye纯化产物再经乙醇纯化后在ABI3100测序仪上双向测序。PCR克隆测序具体参照各公司测序方法或流程)；
4.序列比对、系统树构建和barcoding检验利用MEGA5.05软件进行分析；分别利用Maximum Likelihood(ML)、Neighbor-joining(NJ)、UPGMA和Minimun Evolution(ME)4种方法构建系统进化树。
鉴定结果：
4种方法构建的系统进化树基本一致，可将4种不同的红豆杉种清楚地分开，不同物种的barcoding置信检验都超过了80％，有3个物种间达到了100％。4种方法所构建的系统进化树见图1(A—D)。

Claims (6)

1.一种鉴别红豆杉种的DNA条形码引物对，其特征在于，所述引物对为：
上游引物Taxus Indel-F：TCC CAG AAT ACT CCT TAT；
下游引物Taxus Indel-R：GTT CTG GCT TCC TCT AGC ATT TCA T。
2.一种鉴别红豆杉种的DNA条形码试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的引物对。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的红豆杉种包括中国红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉和欧洲红豆杉。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA条形码包括中国红豆杉DNA条形码、南方红豆杉DNA条形码、东北红豆杉DNA条形码和欧洲红豆杉DNA条形码；中国红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6所示，南方红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，东北红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.9所示，欧洲红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.10所示。
5.用于红豆杉属物种鉴别的标准DNA条形码，其特征在于，所述标准DNA条形码序列长度为212—215bp，包括中国红豆杉DNA条形码、南方红豆杉DNA条形码、东北红豆杉DNA条形码和欧洲红豆杉DNA条形码；中国红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6所示，南方红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.8所示，东北红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.9所示，欧洲红豆杉DNA条形码序列如SEQ ID NO.10所示。
6.一种鉴别红豆杉种的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)提取待测物种的DNA；
(2)用权利要求1中所述的引物对对待测物种的DNA进行PCR扩增；
(3)对PCR产物进行测序后，将PCR产物与权利要求4或5中所述的DNA条形码进行比对来鉴别红豆杉物种。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106047999A (zh) * 2016-05-26 2016-10-26 甘肃农业大学 禾本科七个主要牧草属dna条形码通用序列的筛选方法
CN109486977A (zh) * 2017-09-11 2019-03-19 杭州百迈生物股份有限公司 南方红豆杉的鉴定
CN109486979A (zh) * 2017-09-11 2019-03-19 杭州百迈生物股份有限公司 用于鉴定西藏红豆杉的snp分子标记及应用
CN109811078B (zh) * 2019-04-02 2022-10-25 杭州师范大学 一种东北红豆杉的分子特异性标记引物及其鉴别方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101191144A (zh) * 2006-11-22 2008-06-04 中国科学院大连化学物理研究所 一种鉴定和区分与紫杉烷含量相关的有用红豆杉的方法
CN104099319A (zh) * 2013-04-07 2014-10-15 中国检验检疫科学研究院 南方红豆杉ssr-pcr反应体系及其应用
CN104480211A (zh) * 2014-12-22 2015-04-01 杭州师范大学 鉴别南方红豆杉幼苗的分子特异性标记引物及方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101191144A (zh) * 2006-11-22 2008-06-04 中国科学院大连化学物理研究所 一种鉴定和区分与紫杉烷含量相关的有用红豆杉的方法
CN104099319A (zh) * 2013-04-07 2014-10-15 中国检验检疫科学研究院 南方红豆杉ssr-pcr反应体系及其应用
CN104480211A (zh) * 2014-12-22 2015-04-01 杭州师范大学 鉴别南方红豆杉幼苗的分子特异性标记引物及方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Choosing and Using a Plant DNA Barcode;Hollingsworth PM et al.;《Plosone》;20110526;第6卷(第5期);第1-13页 *
DNA barcoding for the discrimination of Eurasian yews (Taxus L.,Taxaceae) and the discovery of cryptic species;Liu J et al.;《Mol ecol resour》;20100816;第11卷(第1期);摘要，材料和方法，结果，讨论 *
红豆杉分子生物学研究进展;周华等;《植物生理学报》;20140529;第50卷(第4期);第373-381页 *
野生植物种质资源的保存利用与iFlora;杨湘云等;《植物分类与资源学报》;20121220;第34卷(第6期);第539-545页 *

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