CN105168599A - 一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物及其制备方法，属于医药技术领域，该药物组合物是由以下重量份原料制备而成：厚朴树皮5-8份，了哥王1-3份，甘草8-10份，金银花5-8份，大蒜素1-1.5份，肌醇六磷酸酯0.1-0.2份，柠檬酸单甘脂2-4份。本发明制备的药物组合物能够有效的抑制动物流感病毒感染，毒副作用小，可日常经口摄取，适口性好，发挥药效时间快。本发明提供的制备方法通过加入麦饭石，能够有效减少重金属离子含量，通过不同提取方法及溶剂的结合，最大程度的提取药物中的有效成分同时降低毒副作用。

Description

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物，具体涉及一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

流感病毒是引起急性病毒性呼吸道传染病的主要病原体，具有传染性高、传播迅速、易发生流行等特点，流感病毒的亚型变异速度快，而疫苗的研究和生产速度较慢，使得化学药物和流感病毒疫苗难以发挥其最佳治疗和预防效果，而且，目前又无法有效预测流感爆发的时间和周期。中药具有抑制病毒复制、防止病毒致细胞病变、调节免疫功能等综合功效，且中药制剂毒性小，不易产生抗药性，因此，中药在防治动物流感病毒感染方面具有独特的优势和广阔的发展前景，但现有的中药制剂存在重金属含量超标，防治范围窄等问题。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，能够有效的抑制动物流感病毒感染，毒副作用小，可日常经口摄取，适口性好。

本发明还提供了一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物的制备方法，该制备方法能够有效的减少组合物中的重金属含量。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，是由以下重量份原料制备而成：厚朴树皮5-8份，了哥王1-3份，甘草8-10份，金银花5-8份，大蒜素1-1.5份，肌醇六磷酸酯0.1-0.2份，柠檬酸单甘脂2-4份；

所述厚朴树皮、了哥王、甘草、金银花均以干重计。

进一步的，优化的原料为：厚朴树皮8份，了哥王1.5份，甘草9份，金银花8份，大蒜素1份，肌醇六磷酸酯0.15份，柠檬酸单甘脂3份。

本发明还提供了一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂加入占原料总重（厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂的重量和）8倍的70-75vol%乙醇，然后加入麦饭石块，在25-30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

（2）回流提取40-50min，过滤，将滤渣中加入占滤渣重8倍的乙醇，回流提取1-2h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1.2-1,4，然后加入大蒜素，肌醇六磷酸酯，真空冷冻干燥后粉碎即得制剂。

进一步的，所述麦饭石快加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍。

进一步的，所述制剂为粉剂。

本发明制备过程中，通过不同体积分数的乙醇进行提取，能够减少厚朴树皮中的木兰箭毒碱等成分的溶出，降低组合物的毒副作用。通过原料中适量加入肌醇六磷酸酯，能够部分掩盖大蒜素的刺激性气味，增加组合物的适口性；柠檬酸单甘脂具有良好的乳化性能，能够增强中药中有效成分的溶出，同时，柠檬酸单甘脂摄入后，能够水解成柠檬酸、甘油及硬脂酸，提高动物的新陈代谢，从而对药物起到明显的增效作用。

本发明的有益效果为：

（1）制备的药物组合物能够有效的抑制动物流感病毒感染，毒副作用小，可日常经口摄取，适口性好，发挥药效时间快。

（2）制备过程中通过加入麦饭石，能够有效减少重金属离子含量，通过不同提取方法及溶剂的结合，最大程度的提取药物中的有效成分同时降低毒副作用。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行进一步的阐述，下述说明仅为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

了哥王（Wikstroemiaindica(Linn.)C.A.Mey），本发明所述的了哥王的入药部位为了哥王的根，具有清热解毒，散结逐水等功效。

厚朴树皮为厚朴（M.officinalissubsp.Officinalis或M.officinalissubsp.biloba）的枝皮。

实施例1

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，原料组成为：厚朴树皮8份，了哥王1.5份，甘草9份，金银花8份，大蒜素1份，肌醇六磷酸酯0.1份，柠檬酸单甘脂3份。

制备方法如下：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂加入占原料总重8倍的70vol%乙醇，然后加入麦饭石块，在30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

所述麦饭石快加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍；

（2）回流提取40min，过滤，将滤渣中加入占其重8倍的乙醇，回流提取2h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1.2，然后加入大蒜素，肌醇六磷酸酯，得到药物浸膏，真空冷冻干燥后粉碎即可。

实施例2

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，原料组成为：厚朴树皮5份，了哥王3份，甘草8份，金银花6.5份，大蒜素1.5份，肌醇六磷酸酯0.2份，柠檬酸单甘脂2份。

制备方法如下：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂加入占原料总重8倍的75%乙醇，然后加入麦饭石块，在30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

所述麦饭石快加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍；

（2）回流提取50min，过滤，将滤渣中加入占其重8倍的乙醇，回流提取1h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1,4，然后加入大蒜素，肌醇六磷酸酯，得到药物浸膏，真空冷冻干燥后粉碎即可。

实施例3

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，原料组成为：厚朴树皮6.4份，了哥王1份，甘草9份，金银花5份，大蒜素1.2份，肌醇六磷酸酯0.15份，柠檬酸单甘脂4份。

制备方法如下：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂加入占原料总重8倍的75%乙醇，然后加入麦饭石块，在30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

所述麦饭石块加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍；

（2）回流提取45min，过滤，将滤渣中加入占其重8倍的乙醇，回流提取1.5h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1.3，然后加入大蒜素，肌醇六磷酸酯，得到药物浸膏，真空冷冻干燥后粉碎即可。

对比例1

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，原料组成为：厚朴树皮8份，了哥王1.5份，甘草9份，金银花8份，大蒜素1份。

制备方法如下：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花加入占原料总重8倍的75%乙醇，在30℃下浸泡25min；

（2）回流提取40min，过滤，将滤渣中加入占其重8倍的乙醇，回流提取2h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1.3，然后加入大蒜素，得到药物浸膏干燥后粉碎即可。

对比例2

一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，原料组成同实施例1。

制备方法如下：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花，柠檬酸单甘脂加入占原料总重8倍的75%乙醇，然后加入麦饭石块，在30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

所述麦饭石快加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍；

（2）回流提取2小时40min，过滤，浓缩至相对密度为1.3，然后加入大蒜素、肌醇六磷酸酯，得到药物浸膏干燥后粉碎即可。

效果试验

1、将实施例1及对比例1-2制备的药物组合物中重金属离子浓度及木兰箭毒碱的含量进行测定。

重金属离子浓度：采用原子吸收分光光度计法。

木兰箭毒碱含量：采用高效液相色谱法（同传统的水煎法相比）。

具体结果见表1。

表1

同时，采用本发明提供的方法制备的组合物其有效成分含量较传统的水煎法及对比例2的单一提取法均有明显的提高，分别提高21%及10.21%。

2、体外抑制病毒实验

（1）实验方法：采用血凝试验的方法，测定本发明提供的药物组合物与单独中药提取液抑制流感病毒的效价。

（2）实验材料：甲型流感病毒（H9N2）；

1%鸡红细胞悬液：采3只健康公鸡血，用阿氏液抗凝。用无菌生理盐水，1500转/min下离心洗涤3次，弃上清后，以无菌生理盐水配制成1%悬液，4℃冷藏备用；

100ELD₅₀：将H9N2流感病毒原液作10倍系列对数稀释，取适宜稀释度定量（0.1mL/胚）接种于鸡胚尿囊腔内，由最高稀释度开始接种，每个稀释度接种5胚。将鸡胚放入35℃温箱内孵育48h，观察记录实验鸡胚的死亡数或病变情况，计算各稀释度死亡或出现病变的实验鸡胚的百分率。按Reed-Muench法计算鸡胚半数致死（感染）量（ELD₅₀）。计算公式为：logELD₅₀=高于50％的病毒稀释度的对数+距离比例*稀释系数的对数，制备成100ELD₅₀备用。

（3）处理方式：将实施例1-3制备的药物组合物加入生理盐水制备成浓度为500mg/mL的液体制剂，取药液0.2mL/胚接种于鸡胚内，30min后每胚再注入100ELD₅₀病毒0.2mL，同时设置病毒对照组及利巴韦林注射液组（浓度采用50mg/mL注入），每组均设5胚。

（4）实验结果：将接种好的鸡胚放入33-35℃温箱内孵育48h，记录鸡胚存活情况，具体结果见表2。

表2

其中：与病毒对照相比，*P＜0.01，**P＜0.001。

从表2中可以看出，本发明制备的药物组合物与病毒对照组相比，其血凝效价明显下降，与传统的利巴韦林注射液相比，其对病毒的抑制作用强。

3.将实施例1制备的中药组合物及各单独中药成分对病毒的最小灭杀浓度(a)及最小阻断浓度(b)进行72h细胞病变检测，检测标准如下：

++++：表示出现75%以上细胞病变；+++：表示出现50%以上细胞病变；++：表示出现25%以上细胞病变；+：表示出现小于25%的细胞病变；―：表示无病变。

具体检测结果见表3。

表3

从表3中可以看出，本发明提供的药物组合物对流感病毒的最小灭杀和最小阻断浓度均小于单独中药提取物的作用效果，协同效果显著。

4.体内抗流感病毒感染实验

（1）实验对象：SPF级雌性BALB/c小鼠30只，体重13-15g，随机分为3组，每组10只，S1、S2、S3。

（2）实验材料：H7N9禽流感病毒；实施例2制备的药物组合物，加入生理盐水制成的液体制剂，制剂为46mg/mL，60mg/mL；。

（3）实验方法：将小鼠用浓度为20mg/mL的盐酸氯胺酮注射液肌肉注射麻醉，S1-S2组通过小鼠鼻腔滴入50μL1×10⁶TCID₅₀的病毒原液，对照组小鼠滴入50μL生理盐水，接种后小鼠正常饲养，饮水用高压灭菌水，足量共给，感染前1d开始给药，一天2次，每次1.5g/kg体重，连续给药7d，S1组为本发明实施例2制备的药物组合物组，S2组为病毒对照组，给予等量生理盐水，S3组为生理盐水组。连续观察21d，然后对小鼠死亡数、平均存活天数、生命延长率进行统计分析，具体结果见表4。

表4

其中，生命延长率=给药组平均存活天数-病毒对照组平均存活天数）/病毒对照组平均存活天数×100

5.长期毒性试验

取SPF级100日龄鸡80只，体重在2kg～3kg，雌雄各半，7周长期给药，进行长期毒性试验，结果表明所有试验鸡一般状况、生长发育、血常规、肝、肾功能等指标均未见异常改变，病理组织学及肉眼尸检亦未见病理变化。

6.动物临床实验

（1）济南济阳某养鸡场55日龄海兰白蛋鸡，不同程度的出现精神不振，闭眼沉郁、呆立一隅，严重的出现将头插入翅内或双腿之间，采食量减少，张口呼吸，肿眼种头，出现散发性死亡，经解剖后发现为感染H9N2，将1000只病鸡随机分为3组，分别采用：实施例3制备的药物组合物；对比例1制备的药物组合物；利巴韦林颗粒。均按照0.45g/kg进行投药，添加于基础日粮中，观察临床症状，对死亡率及治愈时间，采食量进行统计，具体结果见表5。

表5

从表5中可以看出，喂食本发明药物组合物的蛋鸡治愈时间快，治愈率高，同时，到产蛋期时，蛋鸡的产蛋量及单蛋重量均比利用利巴韦林治愈的高。

（2）济南平阴某养猪场，100日龄猪出现流鼻涕，食欲不振，腹泻，经检查确诊感染甲型H1N1流感病毒，将150头猪随机分为3组，分别采用：实施例2制备的药物组合物，对比例1制备的药物组合物；盐酸金刚烷胺；均按照0.8g/kg进行投药，天宇基础日粮中，观察临床反应，对死亡率，治愈时间及痊愈后猪的体重进行统计，具体结果见表6。

表6

（3）临沂苍山某水貂养殖场，120日龄激素貂（水貂埋置褪黑激素），出现头部震颤、步态不稳、精神萎靡，后期以尖叫、抽搐后突然死亡为主要特征的疾病，经检查确诊感染甲型H9N2流感病毒，将1500只水貂随机分为3组，分别采用：实施例1制备的药物组合物，对比例2制备的药物组合物；利巴韦林颗粒；均按照0.6g/kg体重进行投药，添于基础日粮中，观察临床反应，对死亡率，治愈时间及采食量进行统计，具体结果见表7。

表7

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种用于防治动物流感病毒感染的药物组合物，其特征在于，是由以下重量份原料制备而成：厚朴树皮5-8份，了哥王1-3份，甘草8-10份，金银花5-8份，大蒜素1-1.5份，肌醇六磷酸酯0.1-0.2份，柠檬酸单甘脂2-4份；

所述厚朴树皮、了哥王、甘草、金银花均以干重计。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述原料为：厚朴树皮8份，了哥王1.5份，甘草9份，金银花8份，大蒜素1份，肌醇六磷酸酯0.15份，柠檬酸单甘脂3份。

3.一种如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将重量份厚朴树皮，了哥王，甘草，金银花及柠檬酸单甘脂加入占原料总重8倍的70-75vol%乙醇，然后加入麦饭石块，在25-30℃下浸泡25min后，取出麦饭石；

（2）回流提取40-50min，过滤，将滤渣中加入占滤渣重8倍的乙醇，回流提取1-2h，过滤，合并两次滤液，浓缩至相对密度为1.2-1,4，然后加入大蒜素、肌醇六磷酸酯，真空冷冻干燥后粉碎即得制剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述麦饭石块加入量为厚朴树皮，了哥王，甘草及金银花总重的5倍。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述制剂为粉剂。