CN105153295A - 标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域,特别涉及标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法。该标志物为翻译后修饰纤维蛋白原。本发明检测的PTM-F是与RA病理相关的自身抗原。在RA患病早期会发生纤维蛋白原的不正常翻译后修饰,因此PTM-F在RA患病早期检出。另外,本发明排除因为自身免疫系统差异导致的诊断结果与RA病情不符的现象。本发明检测的PTM-F在RA患者血清中具有很高的特异性(90%以上)与灵敏度(80%以上),且能反应患者病理信息,具有很高的RA诊断意义。本发明检测的PTM-F蛋白,目标明确,检测时用特异性单抗捕捉目标蛋白,可以很大程度上降低非特异性信号,避免背景信号干扰以及假阳性现象。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,特别涉及标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法。
背景技术
RA,rheumatoidarthritis,类风湿关节炎,是一种常见的慢性且很难治愈的疾病(占世界人口的1%左右),能导致全身关节不可逆性损坏,发病末期能导致残疾(约占1/4患者),使患者丧失工作能力,严重影响患者生活质量,对患者和社会产生巨大的经济压力。据报导,采用生物制剂治疗RA的患者,每年治疗费用将近要9万元左右。早期诊断与早期治疗是缓解RA的关键。目前用于临床RA诊断的方法很多,ACR2010分类标准规定除了关节受累数量和病程外,生物因子如RF,CCP,CRP等的含量与RA紧密相关。但是目前临床采纳的多指标联合诊断(CCP/RF/GPI/AKA等)仍有一部分RA患者,尤其是早期患者不能及时被确诊。
RA是一种自身免疫疾病,在发病过程中许多功能蛋白会发生非正常的翻译后修饰,如括聚丝蛋白(Filaggrin,FLG)、波形蛋白(Vimentin)、α和β纤维蛋白(α/βFibrin)、α-烯醇化酶(α-Enolase)及I型和Ⅱ型胶原多肽(TypeIandtypeⅡcollagenpolypeptide)等会发生不正常翻译后修饰,这些非正常修饰的蛋白能激起体内免疫系统反应产生自身抗体。目前临床使用的RA诊断方法中,大部分为自身抗体的检测,如RF,ACPA,AKA等。其中,ACR2010分类标准推介的RF在RA疾病特异性比较低(低于80%),临床所用的CCP2的特异性可达到90%以上,但其灵敏度仅有70%左右,而在早期RA患者中,CCP灵敏度只有不到50%。由于患者自身免疫系统的差异性以及自身抗体分泌的之后性(相对于自生抗原),自身抗体的检测显然不能完全与RA病情尤其是RA早期的病情相符,自身抗原的检测在自身免疫疾病的诊断方面具有很大的潜力。但是,目前市场上还没有以自身抗原为检测目标的用于RA临床诊断的试剂和方法还没有出现。因此新的更具诊断意义的生物标志物开发成为突破RA诊断方法的关键。
纤维蛋白原,Fibrinogen,是血液中促血凝与血栓形成因子。许多报道在RA患者的体液中存在翻译后修饰的纤维蛋白原(包括糖基化,羰基化,瓜氨酸化以及其他修饰)(PTM-F)。大量的实验数据证明将人工修饰的纤维蛋白原能诱导RA的并情更加严重,暗示了非正常修饰的纤维蛋白原可能与RA的发病机制有关。但是,Takizawa和其同事(Takizawa等,2006)用ELISA法检测瓜氨酸化纤维蛋白原发现,在针对来自类风湿性关节炎患者之滑液的ELISA中检测到阳性信号,但是所有RA(包括对照)血浆样本仍为阴性,Takizawa认为纤维蛋白原在血液中是非瓜氨酸化的。本发明用不同的酶(Glucosyltransferase,PeptidylArginineDeaminase,Carboxydismutase等)处理RA关节滑膜特异性蛋白,并用修饰后蛋白免疫兔子,获得特制的IgG抗体,用于检测RA患者血清样本中的非正常修饰抗原。
RA会导致不可逆关节损坏,早诊断和早治疗是缓解病情的关键。但是,目前临床采纳的多指标联合诊断(CCP/RF/GPI/AKA等)仍有一部分RA患者不能及时被确诊。RF和CCP是2010ACR标准所推荐的诊断因子,其中,RF的特异性比较低(不到80%),而目前临床所用的CCP2的特异性可达到90%以上,但灵敏度为70%左右,在早期RA患者中,CCP灵敏度只有不到50%,RA诊断遇到了瓶颈。
发明内容
有鉴于此,本发明提供标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法。本发明检测的PTM-F是与RA病理相关的自身抗原。在RA患病早期会发生纤维蛋白原的不正常翻译后修饰,因此PTM-F在RA患病早期检出。另外,本发明排除因为自身免疫系统差异导致的诊断结果与RA病情不符的现象。本发明检测的PTM-F在RA患者血清中具有很高的特异性(90%以上)与灵敏度(80%以上),且能反应患者病理信息,具有很高的RA诊断意义。本发明检测的PTM-F蛋白,目标明确,检测时用特异性单抗捕捉目标蛋白,可以很大程度上降低非特异性信号,避免背景信号干扰以及假阳性现象。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提拱了一种标志物,其为翻译后修饰纤维蛋白原(PTM-F)。
通过对正常人血清,相关疾病患者血清及RA患者血清共821例样本分析,发现在RA患者血清样本中的非正常修饰的纤维蛋白原(PTM-F)的含量要明显高于正常人血清样本,且在其他相关疾病如骨关节炎,系统性红斑狼疮等患者血清中含量和正常人中非常低,表明PTM-F具有很高的RA疾病特异性(95%左右)。并且,采用我们特殊的样品处理方法与设计的ELISA实验参数,通过对57例确诊为RA患者(根据ACR2010RA分类标准打分,不低于6分)的血清样本测定结果统计表明,PTM-F在57例RA患者中有47例呈阳性(根据95%特异性时设定cutoff值),灵敏度高达为82%。我们现有的数据显示,以患者的血清为检测样本,PTM-F在RA患者,尤其是早期RA患者中,有很高的临床诊断价值。本发明即是基于以PTM-F为检测目标开发的RA诊断方法。
虽然RA的致病机理目前研究并不清楚,但有实验证明将瓜氨酸化纤维蛋白原注入动物体类,能加剧RA的病情,由此推测瓜氨酸化纤维蛋白原与RA的发病机制有很大的关联。因此,本发明以PTM-F为检测目标,不仅能高灵敏度确诊RA,还能提供一定的病理信息,以指导临床制定个性化治疗方案。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的标志物所述翻译后修饰纤维蛋白原(PTM-F)的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
所述纤维蛋白原的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示(突出标记部分为潜在的翻译后修饰位点)。SEQIDNo.1所示:
在本发明的一些实施例中,所述翻译后修饰为点选自第5位、第35位、第38位、第42位、第69位、第84位、第114位、第123位、第129位、第135位、第137位、第143位、第160位、第168位、第178位、第181位、第186位、第190位、第216位、第218位、第258位、第263位、第271位、第287位、第308位、第353位、第367位、第394位、第414位、第425位、第426位、第443位、第458位、第459位、第510位、第512位、第547位、第573位、第591位、第621位、第627位、第630位。
在本发明的一些实施例中,所述修饰为瓜氨酸化或氨基甲酰化。
在本发明的一些实施例中,所述翻译后修饰纤维蛋白原为瓜氨酸化纤维蛋白原和/或氨基甲酰化纤维蛋白原。
在本发明的一些具体实施方案中,所述翻译后修饰纤维蛋白原(PTM-F)具体为瓜氨酸化纤维蛋白原和氨基甲酰化纤维蛋白原。
本发明还提供了所述标志物的抗体在制备类风湿关节炎的诊断试剂或诊断工具中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中,所述应用中所述诊断工具为诊断试剂盒。
本发明还提供了一种试剂盒,包括抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体和检测中可接受的试剂。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的所述试剂盒中所述试剂还包括载体、封闭液、洗涤液、样品稀释液、标记抗体、底物、显色液、终止液中的一种或两者以上的混合物。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的所述试剂盒中所述试剂盒在检测类风湿性关节炎中的应用。
本发明提供的所述标志物的检测方法,包括如下步骤:
步骤1:取载体包被所述抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体,与待测样品混合,孵育,获得包含有样品待测液的载体;
步骤2:取载体包被所述抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体,与阴性参考样品混合,孵育,获得包含有阴性参考样品待测液的载体;
步骤3:分别取步骤1制得的包含有样品待测液的载体与步骤2制得的包含有阴性参考样品待测液的载体,洗涤后,分别与标记二抗混合,孵育,洗涤,显色,检测所述待测样品的光吸收值和所述阴性参考样品的光吸收值,获得所述标志物的浓度。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的所述标志物的检测方法步骤3中所述获得所述标志物的浓度=所述待测样品的光吸收值/所述阴性参考样品的光吸收值。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的所述标志物的检测方法中根据所述标志物获得的检测结果为半定量检测结果,用S/N值来表示;
吸光度比值(S/N)=待测样品孔的光吸收值/阴性参考样品孔的光吸收值
在本发明的一些具体实施方案中,本发明提供的所述标志物的检测方法所述标志物检测结果S/N大于3.0为阳性;所述标志物检测结果S/N小于等于3.0为阴性。
除Elisa检测方法外,其他相关的检测方法如胶体金,免疫印迹,乳胶比浊,电化学等以PTM-F为检测目标的检测方法都能完成发明目的。
本发明提拱了一种标志物,其为翻译后修饰纤维蛋白原(PTM-F)。本发明检测的PTM-F是与RA病理相关的自身抗原。在RA患病早期会发生纤维蛋白原的不正常翻译后修饰,因此PTM-F在RA患病早期检出。另外,本发明排除因为自身免疫系统差异导致的诊断结果与RA病情不符的现象。本发明检测的PTM-F在RA患者血清中具有很高的特异性(90%以上)与灵敏度(80%以上),且能反应患者病理信息,具有很高的RA诊断意义。本发明检测的PTM-F蛋白,目标明确,检测时用特异性单抗捕捉目标蛋白,可以很大程度上降低非特异性信号,避免背景信号干扰以及假阳性现象。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示实施例1中PTM-FELISA标准曲线;
图2示实施例2中不同人群PTM-FELISA检测吸光度比值差异比较(图中所示120例正常人,57例类风湿关节炎患者及40例系统性红斑狼疮;直线表示平均值);
图3示PTM-FElisa检测示意图。
具体实施方式
本发明公开了标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明涉及的PTM-F的检测方法及相关ELISA试剂盒,包括抗纤维蛋白原抗体预包被的酶标板、特制的抗PTM抗原抗体,HRP标记或其他标记(如AP等)的IgG抗体以及相关的样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液。
上述特制抗PTM-F抗体(购自abcam)是指采用特殊的几种酶(PAD4和PAD2两种)催化RA关节滑膜特异性蛋白或多肽形成的PTM抗原免疫动物产生的抗PTM抗原的多克隆抗体IgG(抗原表位为瓜氨酸位点);RA关节滑膜特异性蛋白或多肽的选择对于此方法的特异性至关重要;免疫动物产生的抗PTM抗原的多克隆抗体IgG的纯化及去除Fc段,对于此方法的特异性也非常重要。
其中,上述纤维蛋白原抗体预包被的载体是指将纤维蛋白原抗体以包被缓冲液稀释至0.5-10ug/ml,常规包被的酶标板。
其中,上述标记的IgG抗体是指以常规方法经酶标记、化学发光物质标记、荧光素标记或金标记的IgG,其种属来源要求与制备抗PTM抗原抗体的种属来源一致。
技术方案如下:
1)抗体制备
取健康免疫动物(兔子),用经不同的酶处理的RA关节滑膜特异性蛋白或多肽抗原进行免疫,第一次以抗原加卡介苗和弗氏佐剂研匀,注射动物劲淋巴结或皮下肌肉组织,每二周1次,共免疫4-5次。抗原量根据动物体重增减,免疫最后一次的二周后采血,动物抗人血清用饱和硫酸铵二级沉淀后上离子交换层析柱,得到兔抗PTM蛋白IgG抗体,测定效价,冷冻备用。所述抗体可由市场购买得到(购自abcam)。
2)抗体标记
兔抗人IgG抗体采用常规方法经酶标记、化学发光物质标记或荧光素标记。3)包被抗体聚苯乙烯微孔板制备
取纤维蛋白原抗体,用50-300mM,pH8.5-9.5包被缓冲液稀释到
0.5-10ug/ml,每孔家如能覆盖孔底量的稀释抗体,并于2-8℃条件孵育16-24小时;取出用0.1%-0.5%去污剂(TritonX-100,Toween20等)洗涤4次,然后加入一定浓度(0.5%-5%)的脱脂奶粉(或者BSA,酪蛋白等)室温封闭1-2小时,倒掉封闭液,37℃烘干0.5-3小时,用铝箔袋密封包装。
4)其他应用试剂:
(1)包被缓冲液:PBS,0.01M,PH7.4;
(2)封闭液:脱脂奶粉(或者BSA,酪蛋白等);
(3)稀释液:脱脂奶粉(或者BSA,酪蛋白等);
(4)洗涤液:0.1-0.5%去污剂(TritonX-100,Toween20等)
(5)显色缓冲液:0.05M,pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液;
(6)显色剂:TMB
(7)终止液:硫酸
5)PTM-F诊断试剂盒的具体操作方法:
A.用5%脱脂奶粉稀释血清100倍,滴加100ul的上述样品于ELISA反应板的样品孔中;选取其余孔加入阴性参考品和阳性参考品;
B.将反应板置于室温孵育0.5-1小时,使血清中的总纤维蛋白原与反应板上的抗体交联;
C.用洗涤液洗板4次,每次洗板2min,洗去未交联蛋白;
D.用封闭液稀释的特制抗体(稀释5000-10000倍),加入标记的特制抗PTM抗原抗体孵育(HRP,AP等其它标记),滴加100ul抗体于反应板样品孔中,将平板置于室温孵育1-2h。
E.用洗涤液洗板4次,每次洗板2min,洗去未交联抗人IgG抗体;
F.滴加100ul含显色剂TMB的显色液,室温下显色反应30min;
G.滴加100ul1M硫酸的终止液终止反应;
H.用分光光度计在400-500nm下检测光吸收值,以待测样品吸光度与阴性参考品吸光度的比值代表样品中PSM-F的浓度水平。
其中,步骤D可用以下方式替代:
D1.用脱脂奶粉稀释特制抗PTM抗原抗体(稀释2500-5000倍),其中抗PTM抗原抗体不做标记,滴加50ul抗体于反应板样品孔中,将平板置于室温孵育10min,使抗PTM抗原抗体与反应板上已吸附的PTM-纤维蛋白原结合;
D2.用脱脂奶粉稀释IgG抗体(稀释1000-2500倍),其中IgG抗体采用辣根过氧化物酶标记,滴加50ul抗体于反应板样品孔中,将平板置于室温孵育30分钟-1小时,使IgG抗体与反应板上已吸附的抗PTM抗原抗体结合;
其中,上述标记好的IgG抗体是指以常规方法经酶标记、化学发光物质标记、荧光素标记或金标记的抗人IgG,其种属来源要求与制备抗PTM抗原抗体的种属来源一致。
与现有技术相比,本发明的方案具有如下优点:
1)RA患者血清样本中的PTM-F作为诊断指标。
2)PTM-F可以作为RA病情指示因子。
3)PTM-F可作为炎症指标。
4)通过大量的实验数据统计,证明了80%的RA患者血清中有高于正常人血清的PTM-F,且在系统性红斑狼疮患者中含有量非常少,因此PTM-F在RA患者中具有诊断意义。
5)本发明涉及的PTM-F检测方法,包括抗纤维蛋白原抗体预包被的酶标板、抗多种修饰蛋白的抗体,HRP标记的IgG抗体以及相关的样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液等试剂使用的浓度、时间、顺序为本发明与保护的对象。
6)本发明还可以拓展到以其他与RA病理相关的自身抗原以及其它自身免疫疾病为检测目标的诊断试剂盒。
本发明提供的标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1以RA病人血清不同稀释度下PTM-F检测OD值与PTM-F相对含量做标准曲线
1)血清制备
采用不添加任何抗凝剂的采血管收集正常人、RA患者的新鲜血液,用离心机在3000转离心10min,收集上清液即为血清,置于-20℃~-80℃保存备用。2)PTM-FElisa检测试剂盒准备
包被酶标板;样品稀释液;洗涤液;酶标抗体;显色液(TMB);终止液(1M硫酸)。
3)实验操作步骤
A.将血清样品用样品稀释液稀释10倍、20倍、50倍、100倍、500倍;分别加入反应板的样品孔中,每孔加入体积为100ul;
B.室温(25℃)孵育1小时;
C.每孔加入洗涤液200ul,洗板4次,每次洗板2min;
D.将抗PTM抗原抗体用样品稀释液按1:5000稀释,每孔加入稀释抗体50ul;
E.室温(25℃)孵育10min;
F.将HRP标记的IgG抗体用样品稀释液按1:2500稀释,每孔加入稀释酶标抗体50ul;
G.室温(25℃)孵育40min;
H.每孔加入洗涤液200ul,洗板4次,每次洗板2min;
I.每孔加入显色液100ul;室温(25℃)显色反应30min;
J.每孔加入终止液100ul;
K.用酶标仪在400-500nm下检测各孔的光吸收值(结果见图1及表1)。
表1.PTM-F标准曲线
表1为PTM-F标准曲线的原始数据,由表可知,采用实施例1得到的实验结果表明血清中PTM-F的相对浓度与检测OD值呈高度线性关系,R2值达到0.9965。图1为此表数据做出的标准曲线。
实施例2比较120例正常人,57例RA患者及40例系统性红斑狼疮患者血清中PTM-F的水平
1)血清制备
采用不添加任何抗凝剂的采血管收集正常人、RA患者、系统性红斑狼疮患者的新鲜血液,用离心机在3000转离心10min,收集上清液即为血清,置于-20℃~-80℃保存备用。
2)PTM-FElisa检测试剂盒准备
包被酶标板;样品稀释液;洗涤液;酶标抗体;显色液(TMB);终止液(硫酸)。
3)实验操作步骤
A.将血清样品用样品稀释液稀释10倍;分别加入反应板的样品孔中,每孔加入体积为100ul;
B.室温(25℃)孵育1小时;
C.每孔加入洗涤液200ul,洗板4次,每次洗板2min;
D.将抗PTM抗原抗体用样品稀释液按1:5000稀释,每孔加入稀释抗体50ul;
E.室温(25℃)孵育10min;
F.将HRP标记的IgG抗体用样品稀释液按1:2500稀释,每孔加入稀释酶标抗体50ul;
G.室温(25℃)孵育40min;
H.每孔加入洗涤液200ul,洗板4次,每次洗板2min;
I.每孔加入显色液100ul;室温(25℃)显色反应30min;
J.每孔加入终止液100ul;
K.用酶标仪在400-500nm下检测各孔的光吸收值。
吸光度比值(S/N)=待测样品孔的光吸收值/阴性参考样品孔的光吸收值
对照组:
CCP诊断试剂盒的操作方法:以人工合成的瓜氨酸化多肽包被酶标板,样品血清或血浆经稀释后按每孔100ul加入反应板样品空中,选取其余孔加入标准品或参考品,室温反应1h,经洗涤后加入HRP标记的抗人IgG抗体,室温反应30min,经洗涤后加入TMB底物,室温反应30min,加入终止液终止反应,用分光光度计在450nm和630nm下检测光吸收值,与标准品或参考品比较计算结果。
(结果见图2及表2~表9)。
表2正常样品光吸收值
表3RA患者血清样品光吸收值
表4系统性红斑狼疮患者血清光吸收值
SLE样品编号 | PTM-F(S/N) |
SLE001 | 1.03 |
SLE002 | 1.17 |
SLE003 | 1.19 |
SLE004 | 0.83 |
SLE005 | 0.73 |
SLE006 | 0.88 |
SLE007 | 1.56 |
SLE008 | 1.40 |
SLE009 | 0.83 |
SLE010 | 0.85 |
SLE011 | 0.88 |
SLE012 | 0.69 |
SLE013 | 0.68 |
SLE014 | 0.73 |
SLE015 | 1.12 |
SLE016 | 1.16 |
SLE017 | 0.99 |
SLE018 | 0.76 |
SLE019 | 0.90 |
SLE020 | 0.88 |
SLE021 | 0.86 |
SLE022 | 0.83 |
SLE023 | 1.02 |
SLE024 | 1.05 |
SLE025 | 1.27 |
SLE026 | 1.21 |
SLE027 | 1.15 |
SLE028 | 0.83 |
SLE029 | 1.95 |
SLE030 | 0.98 |
SLE031 | 0.81 |
SLE032 | 1.28 |
SLE033 | 1.38 |
SLE034 | 0.88 |
SLE035 | 0.87 |
SLE036 | 4.88 |
SLE037 | 1.01 |
SLE038 | 0.75 |
SLE039 | 1.80 |
SLE040 | 2.62 |
图2为实施例2的实验结果,表示了正常人、类风湿关节炎和系统性红斑狼疮三种人群中PTM-F水平的分布情况,原始数据见表2、表3和表4,表2为正常人中PTM-F水平的检测结果,表3为类风湿关节炎中PTM-F水平的检测结果,表4为系统性红斑狼疮中PTM-F水平的检测结果。由图可以明显的看到正常人和系统性红斑狼疮中PTM-F水平普遍较低,而类风湿关节炎中PTM-F水平普遍较高。
表5数据分析结果
表5为根据正常人中PTM-F水平检测结果(数据见表2)得出的临界参考值(cutoff值),类风湿关节炎患者样品中PTM-F水平检测结果大于此cutoff值为阳性,检测结果小于等于此cutoff值为阴性。
表6数据分析结果
表6为根据正常人中PTM-F水平检测结果(数据见表2)得出的PTM-F在正常样品中的特异性为97.5%。
表7数据分析结果
表7为根据系统性红斑狼疮(SLE)中PTM-F水平检测结果(数据见表4)得出的PTM-F在SLE中的特异性为97.5%。
表8数据分析结果
表8为根据类风湿关节炎(RA)中PTM-F水平检测结果(数据见表3)得出的PTM-F在RA中的灵敏度为82.5%。
表9数据分析结果
表9为根据类风湿关节炎(RA)中PTM-F水平检测结果和对比例CCP检测结果(数据见表3)得出对比结果。由结果可知CCP检测的灵敏度为43/57*100%=75.4%,PTM-F检测灵敏度为47/53*100%=82.6%。与对照试剂盒相比PTM-F检测灵敏度更高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种标志物,其特征在于,其为翻译后修饰纤维蛋白原。
2.根据权利要求1所述的标志物,其特征在于,所述纤维蛋白原的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示;
所述修饰为瓜氨酸化或氨基甲酰化;
所述翻译后修饰纤维蛋白原为瓜氨酸化纤维蛋白原和/或氨基甲酰化纤维蛋白原。
3.根据权利要求1或2所述的标志物的抗体在制备类风湿关节炎的诊断试剂或诊断工具中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述诊断工具为诊断试剂盒。
5.一种试剂盒,其特征在于,包括抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体和检测中可接受的试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂还包括载体、封闭液、洗涤液、样品稀释液、标记抗体、底物、显色液、终止液中的一种或两者以上的混合物。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒在检测类风湿性关节炎中的应用。
8.一种如权利要求1或2所述的标志物的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1:取载体包被所述抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体,与待测样品混合,孵育,获得包含有样品待测液的载体;
步骤2:取载体包被所述抗翻译后修饰纤维蛋白原抗体,与阴性参考样品混合,孵育,获得包含有阴性参考样品待测液的载体;
步骤3:分别取步骤1制得的包含有样品待测液的载体与步骤2制得的包含有阴性参考样品待测液的载体,洗涤后,分别与标记二抗混合,孵育,洗涤,显色,检测所述待测样品的光吸收值和所述阴性参考样品的光吸收值,获得所述标志物的浓度。
9.根据权利要求8所述的检测方法,其特征在于,步骤3中所述获得所述标志物的浓度=所述待测样品的光吸收值/所述阴性参考样品的光吸收值。
10.一种类风湿性关节炎的检测方法,其特征在于,根据权利要求8或9所述标志物的浓度获得检测结果。
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