CN103703370A - 诊断性肽的检测 - Google Patents

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Abstract

对源自血液的样品中的SOCS-2、α1抗胰蛋白酶、多功能蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖、层粘连蛋白或其他蛋白的瓜氨酸化片段进行检测显示了与类风湿性关节炎或纤维化疾病相关的诊断意义，所述片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点类风湿性关节炎。

Description

诊断性肽的检测
本发明涉及循环中瓜氨酸化(citrullinated)肽的测定，并且本发明对于产生针对多种生理状况和疾病有诊断价值的信息来说是有意义的。
将精氨酸修饰成瓜氨酸是由PAD酶(肽酰基精氨酸脱亚胺酶)的存在促进的翻译后修饰。瓜氨酸的存在和对精氨酸的修饰在RA患者中尤其重要，其原因是，已经发现大量的自身抗体是瓜氨酸特异性的。与常见的RA标志物例如类风湿因子相比，这些抗体具有提高的特异性和敏感性。
尽管没有足够的证据，但是认为针对胶原蛋白和其他蛋白的自身免疫可能与RA的发病相关，因此，跟踪该自身免疫路径(自身抗原)可导致发现该疾病发病机理的更多证据。
瓜氨酸化可以作为降解的标志物，其原因是，在凋亡小体中经常可以发现瓜氨酸化。
尽管在类风湿性关节炎的实验室诊断和监测中，检测针对人瓜氨酸化肽、尤其是环瓜氨酸化肽(抗CCP抗体)的抗体是标准测试，但是很少有研究关注对人血清或血浆中瓜氨酸化蛋白定量的临床应用。
Takizawa和其同事(Takizawa等，2006)研究了人体液中瓜氨酸化自身抗原的存在。在ELISA中采用两种分别针对合成肽R16Cit(EGGGVR*GPRVV)和R252Cit(GNEITR*GGSTS)的单克隆抗体，即cF16.1和cF252.1，所述合成肽来源于纤维蛋白原(R*表示精氨酸被瓜氨酸取代)，所述两种抗体用作ELISA中的包被抗体以检测瓜氨酸化纤维蛋白原。并未报道所述两种单克隆抗体的确切表位特异性。在针对来自类风湿性关节炎患者之滑液的ELISA中检测到阳性信号，但是所有RA(包括对照)血浆样本仍为阴性，Takizawa得出结论认为纤维蛋白原在血液中是非瓜氨酸化的。
之后的另一针对RA患者的研究证实了循环中缺乏瓜氨酸化纤维蛋白原(Van Steendam等，2010)，其报道了含有纤维蛋白原-β和纤连蛋白的循环中免疫复合物，但是其仅仅是非瓜氨酸化的形式。相反，在来自RA患者滑液的免疫复合物中检测到了瓜氨酸化波形蛋白(vimentin)和少量的纤维蛋白原-β。
Chang及其同事(Chang等，2005)报道了在RA患者血浆中存在瓜氨酸化的纤连蛋白。尽管没有对其含量进行定量，但是据报道，与健康对照和患有系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)的患者相比，在RA血浆中所述水平更高。他们采用了夹心式ELISA，其利用结合人纤连蛋白的单克隆抗体(Abcam)作为包被抗体，以及利用抗瓜氨酸兔抗体(Biogenesis)作为检测抗体。并未提供对所述夹心式测定所检测的纤连蛋白分子的表征。然而，检测中采用的抗体无法用于对特定蛋白水解的、瓜氨酸化的纤连蛋白新表位进行定量，这是因为它们既不能与完整的瓜氨酸化纤连蛋白区分开来，也不能与具有在包被抗体所识别的肝素结合域中之表位的瓜氨酸化纤连蛋白片段区分开来。
此外，Zhao及其同事(Zhao等，2008)报道了来自RA血浆的高分子量免疫复合物中瓜氨酸化纤维蛋白原的存在。简单地说，对获得自RA血浆样品的免疫复合物进行分级分离后，采用针对免疫印迹的抗瓜氨酸检测试剂盒(Upstate，Chicago，IL，USA)检测到瓜氨酸化纤维蛋白原的存在。在来自健康对照血浆的对应免疫印迹中缺乏此条带。
Tilleman等(2008)报道了在获得自炎性关节炎(主要是类风湿性关节炎)患者的滑液胞浆蛋白提取物中存在瓜氨酸化波形蛋白的片段。通过质谱，在RA患者的滑液中检测出了瓜氨酸化纤维蛋白原、瓜氨酸化纤连蛋白和瓜氨酸化波形蛋白(Tabushi等，2008)
在其他疾病的患者中也发现了RA中的大部分自身抗体，因此，其具有有限的诊断意义。然而，已经记载了某些(相对地)特异性自身抗原，尤其是携带瓜氨酸化残基的自身抗原，它们包括：瓜氨酸化聚丝蛋白(filaggrin)、瓜氨酸化波形蛋白和环形瓜氨酸化肽(Van Galen等，2005；Schellekenes等，1998)。
Lundgren等(2005)提出瓜氨酸化II型胶原蛋白可能具有显著的致关节炎能力。之后的报道证实了，在RA患者滑液中存在瓜氨酸化三螺旋II型胶原蛋白表位(Uysal等，2009)，认为针对(天然的和瓜氨酸化的)II型胶原蛋白的自身免疫是RA致病的重要因素。采用针对天然II型胶原蛋白的单克隆抗体作为捕获抗体，采用结合瓜氨酸化II型胶原蛋白的单克隆抗体ACC2作为检测抗体，来检测滑液中的瓜氨酸化II型胶原蛋白。后一抗体与瓜氨酸化纤维蛋白原交叉反应(Uysal等，2009)。
有报道称在去除蛋白(deproteinisation)并用高效液相色谱(HPLC)定量之后对循环中瓜氨酸水平进行定量是小肠上皮细胞辐射损伤的生理标志物(Lutgens等，2003)。
我们目前已经确定，采用对以下表位具有特异性的抗体可以检测出血液或其液体组分例如血浆中的瓜氨酸化肽，所述表位为将瓜氨酸的存在与所述肽的末端氨基酸序列相组合。我们假设，当瓜氨酸位于蛋白片段的末端或者接近末端时，蛋白片段优先存留于血液循环中。采用对特定氨基酸序列中的瓜氨酸具有特异性的抗体，可以检测出以所述氨基酸序列所来源的特定蛋白之片段的形式而来的肽。这可能是因为，瓜氨酸化赋予了改变的对由多种蛋白酶所导致的降解的抵抗力。对这些肽的定量可以获得与多种疾病状态相关的诊断信息，在所述疾病状态中，相关蛋白的产生和／或降解发生改变。
因此，本发明提供了一种对包含血液或其液体组分的样品中蛋白的瓜氨酸化片段的测定方法，包括将所述样品与对所述蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力的抗体或其片段接触，所述片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求所述结合位点中同时存在特定末端氨基酸序列和所述瓜氨酸，以及检测所述抗体与所述蛋白质片段的结合。瓜氨酸可以在所述序列的最末端位置，这可是是抗体结合所需的。所述表位的位置可以是N末端或者C末端。优选地，所述抗体所需的氨基酸序列是对所述蛋白质特异性的。
优选地，所述抗体或其片段对波形蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在包含瓜氨酸的末端波形蛋白氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述波形蛋白片段的结合。
优选地，所述抗体或其片段对SOCS-2、α1抗胰蛋白酶、多功能蛋白聚糖(versican)、双糖链蛋白聚糖(biglycan)或层粘连蛋白(laminin)的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，上述片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在包含瓜氨酸的、对所述蛋白具有特异性的末端氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述片段的结合。
或者，所述抗体或其片段对弹性蛋白或V型和VI型胶原蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在含有瓜氨酸的、对所述蛋白具有特异性的末端氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述片段的结合。
所述结合的检测优选是定量的。典型地，将结合的量与对照值相比较，所述对照值的建立是针对健康个体和以纤维化疾病或类风湿性关节炎为特征的个体的群体。
所述方法可以以竞争性测定的形式进行，从而所述样品中的肽与已知浓度的结合试剂竞争结合抗体或抗体片段，所述结合试剂与所述抗体或抗体片段结合。
可在血液或其组份中检测出瓜氨酸化肽水平改变的疾病包括类风湿性关节炎和涉及纤维化的多种疾病，例如肝纤维化、皮肤纤维化和肺纤维化。下表列出了涉及产生特定示例性肽末端序列的相关蛋白、疾病状态和蛋白酶：
表1
Figure BDA0000421685250000051
可以根据本发明被检测出的其他瓜氨酸化肽包括含有以下末端序列的肽：
SEQ ID NO：
波形蛋白 37′TYSLGSAL-CIT-P↓ 9
AlAT 195′DLVKELD-CIT-DT↓ 10
BIGLYCAN 129′IHEKAFSPL-CIT↓ 11
BIGLYCAN 174′VPKGVFSGL-CIT↓ 12
可以靶向的其他序列如下表所列：
表2
SEQ ID NO：
层粘连蛋白 2059′NERALGAIQ-Cit↓2068′ 人 纤维化 13
双糖链蛋白聚糖 97′LQNNDISEL-Cit↓106′ 人、大鼠、小鼠 纤维化 14
双糖链蛋白聚糖 242′QAIELEDLL-Cit↓251′ 人、小鼠 纤维化 15
波形蛋白 295′FADLSEAANR-Cit↓304′ 人、小鼠、大鼠 纤维化、RA、动脉硬化、癌症 16
波形蛋白 146′LGDLYEEEM-Cit↓155′ 人、小鼠、大鼠 纤维化、RA、动脉硬化、癌症 17
可以靶向的其他序列如下表所示：
表3
Figure BDA0000421685250000061
Figure BDA0000421685250000062
可以使用任何已知类型的竞争测定来进行测定，所述竞争测定包括ELISA或RIA形式。
可以用来取代完整抗体的抗体和抗体片段包括单克隆抗体或多克隆抗体或其免疫活性片段(即能够结合相同抗原决定簇)，包括但不限于，Fab、Fab′、和F(ab′)2片段。
本发明进一步提供了特异性结合蛋白质之肽片段的抗体或抗体片段，从而为了特异性结合，所述片段必需具有抗体特异性的N末端或C末端氨基酸序列，其包含至少一个瓜氨酸。所述抗体或抗体片段可以对上述任意的末端氨基酸序列具有特异性。
在附图中：
图1显示了在纤维化肝、皮肤和肺提取物的Western印迹中通过Millipore抗瓜氨酸试剂盒中的抗体检测出的瓜氨酸化蛋白。
图2显示了3种不同纤维化组织中瓜氨酸特异反应性的来自图1之数据的示意性的简单总结。虚线条带表示在健康和病变组织中均检测到分子的存在，实线条带表示带有瓜氨酸残基的疾病特异性(纤维化)片段。
图3显示了实施例2获得的结果，其显示了针对瓜氨酸化波形蛋白肽序列RLRSSVPGV-Cit产生的两种单克隆抗体对选择肽(selectionpeptide)的特异反应性，以及对延长肽(elongated peptide)的一定的交叉反应性。没有检测出与非瓜氨酸化的肽RLRSSVPGV-Cit的结合。
图4显示了来源于波形蛋白的并用NB212ELISA检测的升高的瓜氨酸化肽片段浓度。
具体实施方式
本发明将通过以下实施例作进一步的说明和解释。
实施例1
为检测纤维化组织中瓜氨酸化蛋白的存在，采用来自Upstate的瓜氨酸检测试剂盒，进行了大量的western印迹实验，其中采用了抗经修饰瓜氨酸的抗体。该抗体与包含瓜氨酸的肽反应，而不考虑瓜氨酸所在的氨基酸序列。
分析了三个不同类型的纤维化样品。采用以下方案对来源于经CCl4处理的大鼠的肝组织、来源于经博来霉素处理的小鼠的皮肤和纤维化肺组织进行提取。用液氮对组织进行深度冷冻，在钢研钵中研磨。然后用含有来自ROCHE的蛋白酶抑制剂的0.5M乙酸溶液稀释，在4℃下轻微振摇、过夜。然后对溶液进行超声处理，60％振幅，每3秒5个脉冲。计算浓度，并将溶液存储于-80度。反应性条带代表具有大量不同分子量的瓜氨酸特异反应性。不同组织中具有大量共有的反应条带，而其余条带是病变组织特有的。每个组织有15个病变样品和5个对照样品。图1显示了代表性结果。
对图1之数据的示意性简单总结在图2中显示，其指示了所有疾病特异的瓜氨酸化蛋白(实线)和在对照中也存在的蛋白(虚线)，以分析图1的综合结果。
综合的初步结果显示，在疾病组织中显著地存在瓜氨酸化蛋白，其在健康组织中不存在。所述瓜氨酸化蛋白／片段有可能作为所选疾病的生物标志物。
实施例2
采用常规技术制备针对瓜氨酸化波形蛋白序列RLRSSVPGV-Cit的单克隆抗体，用KLH-CGG-RLRSSVPGV-Cit免疫，用生物素-RLRSSVPGV-Cit筛选反应性。之后在下文所述的竞争性ELISA中评价抗体的特异性。
用100μl／孔、25mM的Tris-BTB(BSA，Tween20，和Bronidox)包被缓冲液孵育链霉亲和素蛋白包被的微孔滴定板(Roche)，包被缓冲液中含有5ng／ml Bio-RLRSSVPGV-Cit。在20℃下孵育30分钟并振摇，然后清洗5次，加入20μl／孔的标准品(合成肽RLRSSVPGV-Cit)、质控(QC)样品和经稀释的未知样品。接下来，向每个孔中加入10μl的孵育缓冲液，所述孵育缓冲液中单克隆抗体稀释至120ng／ml，将板在20℃下孵育1小时并振摇。清洗之后，向每孔中加入100ul HRP标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白，将板在20℃下孵育l小时并振摇。之后是5次清洗步骤，然后加入100μl／孔TMB(TMB：Kem-En-Tec cat.4380-100-125)，在20℃下避光孵育15分钟并振摇。最后，在每孔中添加100μl／孔终止液，在450nm用ELISA读板器对样品进行读数，650nm作为参照。
在竞争性测定中评价所选单克隆抗体NB212对所选肽(chosenpeptide)的反应性，所述测定使用与微孔滴定板结合的序列RLRSSVPGV-Cit肽，以及在溶液中的竞争结合所述单克隆抗体的所选肽。结果见图3。可以看出，所述抗体不结合具有末端瓜氨酸残基的随机序列肽(DGVPGKDGP-Cit)，也不结合没有末端瓜氨酸的靶氨基酸序列RLRSSVPGV，而仅仅与延长版本的靶标肽RLRSSVPGV-Cit-L的微弱地结合。因此，该抗体特异性结合同时含有瓜氨酸(在该情况下为末端位置)和波形蛋白氨基酸序列的表位。
实施例3
参见图3，基本上如上所述实施ELISA，但是在一式两份加入孔之前，将人血清样品用10mM PBS-BTB缓冲液预先1：8稀释。
从诊断为肝纤维化的受试者中获得8份血清样品，对这些样品进行ELISA检测，同时将六份来自健康志愿者的样品作为对照。在第二个实验中，将7份来自类风湿性关节炎(RA)患者的血清样品与5个对照样品进行比较。结果见图4。
在肝纤维化受试者和类风湿性关节炎患者中均观察到来源于波形蛋白的循环中瓜氨酸化肽片段(用单克隆抗体NB212检测)显著升高。相反，在健康对照对象的血液中，仅发现相对低水平的这些瓜氨酸化分子。
在该说明书中，除非另外清楚地指出，词“或”是一运算符，当规定的条件之一或者两者均满足时，其为真值，这与要求只有一个条件满足的运算符“异或(exclusive or)”相反。词“包含(comprising)”是指“包括(including)”，而不是“由......组成”。上文提及的所有现有技术的教导均通过引用的方式并入本文。本文中任何之前已经公开的文献不应当认为是承认或者表示它们的教导在澳大利亚或者其他地方在本其公开日构成了公知常识。
参考文献
Takizawa Y，Suzuki A，Sawada T，Ohsaka M，Inoue T，Yamada R，Yamamoto K.Citrullinated fibrinogen detected as a solublecitrullinated aut oantigen in rheumatoid arthritis synovial fluids.Ann Rheum Dis.2006Aug；65(8)：1013-20.Epub2006Jan31.
Chang X，Yamada R，Suzuki A，Kochi Y，Sawads T，Yamamoto KRheumatology(Oxford).2005Nov；44(11)：l374-82.Epub2005Aug16.Citrullination of fibronectin in rheumatoid arthritis synovialtissue.
Van Steendam K，Tilleman K，De Ceuleneer M，De Keyser F，ElewautD，Deforce D.Citrullinated vimentin as an important antigen inimmune complexes from synovial fluid of rheumatoid arthritispatients with antibodies against citrullinated proteins.ArthritisRes Ther.2010；12(4)：R132.Epub2010Jul7.
Tabushi Y，Nakanishi T，Takeuchi T，Nakajima M，Ueda K，Eotani T，Makino S，Shimizu A，Hanafusa T，Takubo T.Detection ofcitrullinated proteins in synovial fluids derived from patientswith rheumatoid arthritis by proteomics-based analysis.Ann ClinBiochem.2008Jul；45(Pt4)：413-7.
Tilleman K，Van Steendam K，CantaertT，De Keyser F，Elewaut D，Deforce D.Synovial detection and autoantibody reactivity ofprocessed citrullinated isoforms of vimentin in inflammetoryarthritides.Rheumatology(Oxford).2008May；47(5)：597-604.
Lundberg K，Nijenhuis s.Vossenaar ER，Palmblad K，van VenrooijWJ，Klareskog L，Zendman AJ，Harris HE.Citrullinated proteinshave increased immunogenicity and arthritogenicity and theirpresence in arthritic joints correlates with disease severity.Arthritis Res Ther.2005；7(3)：R458-67.Epub2005Feb21.
van Gaalen FA，Visser H，Huizinga TW.A comparison of thediagnostic accuracy and prognostic value of the first and secondanti-cyclic citrullinated peptides(CCP1 and CCP2)autoantibodytests for rheumatoid arthritis.Ann Rheum Dis.2005Oct；64(10)：1510-2.Epub2005Mar30.
Lutgens LC，Deutz NE，Gueulette J，Cleutjens JP，Berger MP，Wouters BG，von Meyenfeldt MF，Lambin P.Citrulline：a physiclogicmarker enabling quantitation and monitoring of epithelialradiation-induced small bowel damage.Int J Radiat Oncol BiolPhys.2003Nov15；57(4)：1067-74.
Schellekens GA，de Jong BA，van den Hoogen FH，van de PutteLB，van Venrooij WJ.Citrulline is an essential constituent ofantigenic determinants recognized by rheumatoid arthritiS-specificautoantibodies.J Clin Invest.1998Jan1；101(1)：273-81.
Uysal H，Bockermann R，Nandakumar KS，Sehnert B，Bajtner E，
Figure BDA0000421685250000111
A，serre G，Burkhardt H，Thunnissen MM，Holmdahl R.Structure and pathogenicity of antibodies Specific forcitrullinated collagen type II in experimental arthritis.J ExpMed.2009Feb16；206(2)：449-62.Epub2009Feb9.
Zhao X，Okeke NL，Sharpe O，Batliwalla FM，LeeAT，Ho PP，TomookaBH,Gregersen PK，Robinson WH.Circulating immune complexescontain citrullinated fibrinogen in rheumatoid arthritis.Arthritis Res Ther.2008；10(4)：R94.Epub2008Aug18.PubMed PMID：18710572；
Figure IDA0000421685290000021
Figure IDA0000421685290000031
Figure IDA0000421685290000051
Figure IDA0000421685290000061
Figure IDA0000421685290000071

Claims (10)

1.一种对包含血液或其液体组分的样品中蛋白质的瓜氨酸化片段进行测定的方法，所述方法包括将所述样品与抗体或其片段相接触，所述抗体或其片段对所述蛋白质的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述瓜氨酸化片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求在所述结合位点中同时存在特定的末端氨基酸序列和所述瓜氨酸，以及检测所述抗体与所述蛋白质片段的结合。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或其片段对波形蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述瓜氨酸化片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在含有瓜氨酸的末端波形蛋白氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述波形蛋白片段的结合。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或其片段对SOCS-2、α1抗胰蛋白酶、多功能蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖或层粘连蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述瓜氨酸化片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在包含瓜氨酸的来自所述蛋白质的末端氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述片段的结合。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或其片段对弹性蛋白、V型胶原蛋白或VI型胶原蛋白的瓜氨酸化片段具有特异性结合亲和力，所述瓜氨酸化片段具有包含瓜氨酸的末端抗体结合位点，从而抗体片段的抗体的结合要求存在包含瓜氨酸的来自所述蛋白质的末端氨基酸序列，以及检测所述抗体与所述片段的结合。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体或结合片段对下述结合位点具有特异性结合亲和力，所述结合位点包含下述任一C末端氨基酸序列：
序列 SEQ ID NO： RLRSSVPGVCit↓ 1 RLCitSSVPGVCit↓ 2 CitLCitSSVPGVCit↓ 3 PSGNGGEGTCit↓ 6 RTYSLGSALCit↓ 4 GSALCitPSTSCit↓ 5 LAEFAFSLYCit↓ 7 CGGGLLGVCit↓ 8 TYSLGSAL-Cit-P↓ 9 DLVKELD-Cit-DT↓ 10 IHEKAFSPL-Cit↓ 11 VPKGVFSGL-Cit↓ 12 NERALGAIQ-Cit↓ 13 LQNNDISEL-Cit↓ 14 QAIELEDLL-Cit↓ 15 FADLSEAANR-Cit↓ 16 LGDLYEEEM-Cit↓ 17 ...VLPGA-Cit↓ 18 ...GGVAA-Cit↓ 19
或者下述任一N末端序列：
↓IDGY-Cit-GPPGP.... 20 ↓Cit-RNIDAS.... 21 ↓Q-Cit-GAHGMP.... 22 ↓Cit-VGKMGR.... 23 ↓Y-Cit-GPEGPQ.... 24
6.如前述任一权利要求所述的方法，其中所述结合的检测是定量的。
7.如前述任一权利要求所述的方法，其中将结合的量与对照值相比较，所述对照值是针对健康个体和以纤维化疾病或类风湿性关节炎为特征之个体的群体建立的。
8.如前述任一权利要求所述的方法，其以竞争性测定的形式进行，从而所述样品中的肽与已知浓度的结合试剂竞争结合所述抗体或抗体片段，所述结合试剂结合所述抗体或者抗体片段。
9.特异性结合蛋白质之肽片段的抗体或抗体片段，从而为了特异性结合，要求所述片段具有包含至少一个瓜氨酸的抗体特异性的N末端或C末端氨基酸序列。
10.如权利要求9所述的抗体或抗体片段，其对权利要求5所示的任一末端氨基酸序列具有特异性。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105153295A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 广州市雷德生物科技有限公司 标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法
CN106459198A (zh) * 2014-05-05 2017-02-22 诺维奥斯玛特 类风湿性关节炎的血清学诊断方法
CN110389233A (zh) * 2018-04-18 2019-10-29 山东博创生物科技有限公司 一种用于检测人amh的fn类抗体免疫检测试剂盒

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2538221A3 (en) * 2007-11-05 2013-04-24 Nordic Bioscience A/S Biochemical markers for CVD risk assessment
EP2770327B1 (en) * 2009-03-30 2017-06-14 Nordic Bioscience A/S Fibrosis biomarker assay
CA3161989A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Inova Diagnostics, Inc. Compositions and methods for the diagnosis of rheumatoid arthritis
WO2016092082A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-16 Modiquest B.V. Method for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis
EP3255994B1 (en) * 2015-02-03 2020-04-08 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for assessing and treating arthritis
WO2024057793A1 (ja) * 2022-09-13 2024-03-21 国立大学法人信州大学 癌転移を抑制するシトルリン化ペプチド

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1602426A (zh) * 2001-12-11 2005-03-30 技术科学基金会 从患有类风湿性关节炎的患者中检测自身抗体的方法、肽和检测试剂盒
CN1712964A (zh) * 2005-07-18 2005-12-28 山东省医药生物技术研究中心 类风湿性关节炎特异性抗原性标志物及其应用
CN1712966A (zh) * 2005-07-18 2005-12-28 山东省医药生物技术研究中心 瓜氨酸化纤维连接蛋白的检测方法及相关试剂盒
WO2009007846A2 (en) * 2007-06-15 2009-01-15 Universitetet If Oslo Methods for modifying, isolating, detecting, visualizing, and quantifying citrullinated and/or homocitrullinated peptides, polypeptides and proteins
WO2010115749A2 (en) * 2009-03-30 2010-10-14 Nordic Bioscience A/S Fibrosis biomarker assay
WO2010117694A2 (en) * 2009-03-30 2010-10-14 Prometheus Laboratories Inc. Citrullinated peptides for diagnosing and prognosing rheumatoid arthritis

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999028344A2 (en) * 1997-11-28 1999-06-10 Innogenetics N.V. Synthetic peptides containing citrulline recognized by rheumatoid arthritis sera as tools for diagnosis and treatment
JP2006133177A (ja) * 2004-11-09 2006-05-25 Institute Of Physical & Chemical Research 関節リウマチの診断および治療におけるシトルリン化アンチトロンビン３の利用
EP2008100A4 (en) 2006-04-18 2009-12-16 Univ Leland Stanford Junior ESTABLISHING ANTIBODY PROFILES FOR DETERMINING PATIENT SENSITIVITY TO TREATMENT
JP5305259B2 (ja) * 2007-12-25 2013-10-02 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター 抗シトルリン化ｇｆａｐモノクローナル抗体及びその用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1602426A (zh) * 2001-12-11 2005-03-30 技术科学基金会 从患有类风湿性关节炎的患者中检测自身抗体的方法、肽和检测试剂盒
CN1712964A (zh) * 2005-07-18 2005-12-28 山东省医药生物技术研究中心 类风湿性关节炎特异性抗原性标志物及其应用
CN1712966A (zh) * 2005-07-18 2005-12-28 山东省医药生物技术研究中心 瓜氨酸化纤维连接蛋白的检测方法及相关试剂盒
WO2009007846A2 (en) * 2007-06-15 2009-01-15 Universitetet If Oslo Methods for modifying, isolating, detecting, visualizing, and quantifying citrullinated and/or homocitrullinated peptides, polypeptides and proteins
WO2010115749A2 (en) * 2009-03-30 2010-10-14 Nordic Bioscience A/S Fibrosis biomarker assay
WO2010117694A2 (en) * 2009-03-30 2010-10-14 Prometheus Laboratories Inc. Citrullinated peptides for diagnosing and prognosing rheumatoid arthritis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
潘宇红等: "早期类风湿性关节炎患者血清抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体的水平变化意义", 《检验医学》, vol. 24, no. 11, 30 November 2009 (2009-11-30), pages 819 - 827 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106459198A (zh) * 2014-05-05 2017-02-22 诺维奥斯玛特 类风湿性关节炎的血清学诊断方法
CN105153295A (zh) * 2015-09-16 2015-12-16 广州市雷德生物科技有限公司 标志物及其应用、试剂盒、该标志物的检测方法
CN110389233A (zh) * 2018-04-18 2019-10-29 山东博创生物科技有限公司 一种用于检测人amh的fn类抗体免疫检测试剂盒

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Publication number Publication date
KR20140045435A (ko) 2014-04-16
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