CN105145643A - 诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属植物应用领域，涉及一种诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用，所述的诺丽果提取物是将新鲜成熟的诺丽果榨汁后经过滤、离心，得到诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤，滤液浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。在抑菌实验基础上，发现诺丽果提取物在防治植物炭疽病上具有良好的药效，可以用来制备防治植物炭疽病药物，为植物炭疽病的防治提供有效途径，其制备方法简单，成本低。

Description

诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用

技术领域

本发明属植物应用领域，涉及一种植物活性提取物及其应用，具体是一种诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用。

背景技术

植物炭疽病是由病原菌中的一类真菌,即黑盘孢目中的炭疽属(Colletotrichum)真菌的有性世代所引起的病害的统称。该病主要危害叶片和果实，也可危害枝梢，引起叶斑、落叶、果实腐烂和枝梢枯死。该病的主要特点是病部易产生黑色小点，往往呈轮纹状排雷，潮湿条件下溢出粉红色黏孢子团。目前防治植物炭疽病的防治方法主要是化学防治，虽然防治效果较好，但化学防治需要使用大量的化学品，容易引起环境污染。

诺丽果(Morindacitrifolia)又称为萝梨、四季果或印桑椹(Indianmulberry)，是一种草本植物，原产于亚洲、澳大利亚及一些太平洋岛屿，其果被当地人称作“神奇果”，现引种于我国海南省。诺丽果可用来治疗多种疾病，如糖尿病、高血压、心脏不适、疼痛、精神压抑及消化不良等。

诺丽果提取物具有抗氧化、抗炎、增强记忆力、心肌保护、肝细胞辐射损伤保护作用、抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的活性，对真菌白色念珠菌也有抑制活性。如研究发现诺丽果提取物能在幽门螺杆菌侵染过程中能下调炎症因子CagA,IL-8,COX-2和iNOS的表达而具有抗炎症特性(Huang,etal.,2014)；诺丽果乙醇提取物以及氯仿和乙酸乙酯活性部位能显著的增强东莨菪碱诱导的记忆缺失模型鼠的记忆力和脑血流量，并减弱氧化应激压力和降低乙酰胆碱酯酶活性(Pachauri,etal.2012)。Muralidharan等报道诺丽果的乙酰已酯提取物能显著的增加由Aβ25-35诱导的认知缺陷型鼠的短期记忆和长期记忆功能，降低鼠脑中的乙酰胆碱酯酶活性，恢复Aβ诱导降低的超氧岐化酶，谷胱甘肽还原酶，谷胱甘肽过氧化物酶、抗坏血酸水平(Muralidharan,etal.,2010)。此外，诺丽果乙醇提取物还能抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的活性。经检索，诺丽果提取物在防治植物炭疽病上的应用尚无报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用。

本发明所述的诺丽果提取物是将新鲜成熟的诺丽果榨汁后经过滤、离心，得到的上清液为诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤，滤液浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。

一种诺丽果极性部位提取物，是取上述诺丽果提取物加入蒸馏水制成悬浮液，用与悬浮液等体积的石油醚或乙酸乙酯萃取，萃取相进行浓缩得到诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物。

本发明还包括上述诺丽果提取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物在制备防治植物炭疽病药物中的应用。发明人在抑菌试验基础上，发现上述提取物在防治植物炭疽病上具有良好的抑菌效果，可以用来制备防治植物炭疽病药物。

所述防治植物炭疽病药物是将诺丽果提取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物与常规辅料配合，采用现有工艺制得的临床上允许的制剂。

本发明所提供的诺丽果提取物在防治植物炭疽病上具有良好的药效，可以用来开发防治植物炭疽病药物，避免化学合成药物产生的3R问题：抗性(resistance)、再增猖獗(resurgence)和残留(residue)。为植物炭疽病的防治提供一条有效途径，其制备方法简单，成本低。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。

实施例一

将新鲜成熟的诺丽果榨汁后用4层纱布过滤，以4000r/min离心20min，上清液为诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95％乙醇超声波(超声频率40kHz，温度30℃，时间20min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪(水浴温度45℃)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。

实施例二

将新鲜成熟的诺丽果榨汁后用4层纱布过滤，以5000r/min离心15min，上清液为诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95％乙醇超声波(超声频率40kHz，温度32℃，时间30min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪(水浴温度45℃)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馏水制成悬浮液，用悬浮液等体积的石油醚(沸程60-90℃)萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得到诺丽果石油醚部位提取物。

实施例三

将新鲜成熟的诺丽果榨汁后用4层纱布过滤，以5000r/min离心10min，上清液为诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95％乙醇超声波(超声频率40kHz，温度34℃，时间40min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪(水浴温度45℃)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馏水制成悬浮液，用悬浮液等体积的乙酸乙酯萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得到诺丽果乙酸乙酯部位提取物。

实施例四

将新鲜成熟的诺丽果榨汁后用4层纱布过滤，以5000r/min离心10min，上清液为诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95％乙醇超声波(超声频率40kHz，温度36℃，时间50min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪(水浴温度45℃)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馏水制成悬浮液，依次用悬浮液等体积的正丁醇萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得到诺丽果正丁醇部位提取物。

抑菌实验：

1、诺丽提取物的溶解

将诺丽果乙醇提取物、石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物分别用水、氯仿、体积比为1：1的丙酮和氯仿混合物、丙酮溶解，配制成20mg/ml的溶液。

2、生物自显影法评价诺丽果提取物抑制植物病原真菌活性

实验共选用3株植物病原真菌，分别为兰花尖孢炭疽菌(ColletotrichumacutatumSimmonds)，草莓炭疽病菌(ColletotrichumfragariaeBrooks)，兰花胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)，采用生物自显影法观察薄层板上抑菌圈的大小来评价诺丽果不同提取物对这种三种病菌的抑制活性，菌株的培养及生物自显影法参照Tabanca等报道的方法。分别取浓度为20mg/mL的诺丽果实不同提取物4和8μL，在薄层层析硅胶板上矩阵点样，挥干，紫外杀菌30min；用喷雾器将制备好的菌株悬浮液(每ml含有3.0×10⁵孢子)和0.1％吐温-80均匀喷洒到硅胶板上，再向硅胶板上均匀喷洒菌株悬浮液3倍量的荧光显示剂；(3)将接种了菌株的硅胶板置于30cm×13cm×7.5cm的湿室(相对湿度为100％)中温度为24±1℃的生长箱内进行培育，每天光照12h，光强度为60±5μmol/m^-2/s^-1，培养4d后观察实验结果。实验设置空白对照(CH₃OH)，每个处理均设3个重复，结果取平均值。

3、实验结果

诺丽果提取物抑制兰花和草莓炭疽病菌活性结果(抑菌直径：mm；-表示无活性)

实验结果表明，诺丽果乙醇提取物、石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物对兰花尖孢炭疽菌(ColletotrichumacutatumSimmonds)、草莓炭疽病菌(ColletotrichumfragariaeBrooks)、兰花胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)均具有较好的抑制活性，正丁醇部位提取物则没有抑菌活性，说明诺丽果乙醇提取物、石油醚部位提取物、乙酸乙酯部位提取物在防治植物炭疽病上具有良好的药效，可以用来开发防治植物炭疽病药物，为植物炭疽病的防治提供一条有效途径。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种诺丽果提取物，其特征是将新鲜成熟的诺丽果榨汁后经过滤、离心，得到的上清液为诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤，滤液浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。

2.一种诺丽果极性部位提取物，其特征在于：取权利要求1所述的诺丽果提取物加入蒸馏水制成悬浮液，用悬浮液等体积的石油醚或乙酸乙酯萃取，萃取相进行浓缩得到诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物。

3.权利要求1或2所述的诺丽果提取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物在制备防治植物炭疽病药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述防治植物炭疽病药物是将诺丽果提取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物与常规辅料配合，采用现有工艺制得的临床上允许的制剂。